Tipizálási módszerek alkalmazása methicillin-rezisztens Staphylococcus aureus (MRSA) törzsek molekuláris epidemiológiai vizsgálatai során

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Tipizálási módszerek alkalmazása methicillin-rezisztens Staphylococcus aureus (MRSA) törzsek molekuláris epidemiológiai vizsgálatai során"

András Kovács
9 évvel ezelőtt
Látták:

1 Tipizálási módszerek alkalmazása methicillin-rezisztens Staphylococcus aureus (MRSA) törzsek molekuláris epidemiológiai vizsgálatai során Ungvári Erika, Tóth Ákos Magyar Infektológiai és Klinikai Mikrobiológiai Társaság Tudományos Ülése március 12.

vizsgálatai során Ungvári Erika, Tóth Ákos Magyar Infektológiai

2 Az MRSA törzsek epidemiológiai vizsgálata során használt tipizálási módszerek I. FENOTIPIZÁLÁSI MÓDSZEREK Antibiotikum érzékenységi vizsgálatok Fágtipizálás (nemzetközi alap és kiegészítő fágsorozatok) II. GENOTIPIZÁLÁSI MÓDSZEREK Plazmid analizáló módszerek (plazmid profil, plazmid RFLP) Kromoszómális RFLP Hibridizáció-alapú tipizáló technikák (ribotipizálás, Tn554, IS256, meca) PCR-alapú tipizáló technikák (spa, coa PCR-RFLP, RS-PCR, AP-PCR, RAPD,SCCmec (2004) PFGE (pulzáltatott mezejű gélelektroforézis) (2002) Szekvencia-alapú tipizáló eljárások (MLST,spa-tipizálás) (2006)

GENOTIPIZÁLÁSI MÓDSZEREK Plazmid analizáló módszerek (plazmid profil, plazmid RFLP) Kromoszómális RFLP Hibridizáció-alapú tipizáló technikák

3 PFGE Pulzáltatott mezejű gélelektroforézis I. A genomiális DNS izolálása II. Restrikciós emésztés S. aureus (MRSA) esetén SmaI.enzim III. Elektroforézis CHEF-DRII. készülék HARMONY protokoll

4 A PFGE alkalmazási területei I. Lokálisan, kórházi szinten: járványok kivizsgálására D típus D6 altípus A típus A2 altípus

5 II. Regionálisan, országosan: epidémiás klónok azonosítása időbeli, térbeli nyomonkövetésére D PFGE típus (n=122) - EMRSA-15 klón (ST22-MRSA-IV) 2003 óta 11 altípus (D1-D11) 2005 óta egyre gyakoribb!! Leggyakoribb altípusok: D2 (n=46), D6 (n=31) Fágkép: Alap fágkép: 75 MRSA fágkép: 629, gyakran NT Antibiogram: Ox, Da (számos esetben ida), E, Cip Legtöbb altípus: Bács-Kiskun (n=21): D1, D2, D3, D4, D9 Ritka altípusok: Szabolcs-Szatmár-Bereg (n=11): D1 járvány!

! Leggyakoribb altípusok: D2 (n=46), D6 (n=31) Fágkép: Alap fágkép: 75 MRSA fágkép: 629, gyakran NT Antibiogram:

6 SCCmec tipizálás (Staphylococcal Cassette Chromosome mec)

7 SCCmec tipizálás Methicillin rezisztencia kódolása Komplex mobilis genetikai elem ccr gén komplex (cassette chromosome recombinase): ccrab type 1, 2, 3, 4 ccrc mec gén komplex: class A, B és C 5 típus (I-V.) ill. számos altípus

chromosome recombinase): ccrab type 1, 2, 3, 4 ccrc mec

8 spa (S. aureus Protein A gén) tipizálás Frenay et al. 1996, Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. Shopsin et al. 1999, J. Clin. Microbiol. SLST (single locus sequence typing) spa gén polymorph X régiójának szekvencia tipizálása

9 Ridom Staph Type szoftver SZEKVENCIA SZERKESZTÉS Harmsen et al. 2003, J. Clin. Microbiol.

10 Ridom Staph Type szoftver ADATBÁZIS Harmsen et al. 2003, J. Clin. Microbiol.

11 Ridom Staph Type szoftver BURP KLASZTER ANALÍZIS spa-cc002 Harmsen et al. 2003, J. Clin. Microbiol.

12 A nemzeti MRSA PFGE adatbázis bemutatása 2001 és 2008 között 608 törzs PFGE mintázata (PFGE típus/altípus) Izolátumok azonosító és származási adatai : (mintatípus; izolálás helye; izolálás ideje) járványok során izolált törzsek: n=199 hemokultúrából izolált törzsek vizsgálata: n=314 CA-MRSA gyanús törzsek: n=74 (23 PVL+ törzs) hvisa gyanús törzsek: n=21 (4 eset-5 törzs) Egyéb tipizálási eredmények: Antibiogram, fágkép CA-MRSA törzsek és epidémiás klónok reprezentánsai esetén: SCCmec típus, spa-típus, agr-típus, toxingén profil szekvencia típus (ST)

vizsgálata: n=314 CA-MRSA gyanús törzsek: n=74 (23 PVL+ törzs) hvisa gyanús törzsek: n=21 (4 eset-5 törzs) Egyéb tipizálási eredmények:

13 MRSA törzsek PFGE típusainak megoszlása 2001 és 2008 között

14 Az epidémiás PFGE típusok földrajzi megoszlása

15 Az epidémiás PFGE típusok földrajzi megoszlása

16 MRSA törzsek molekuláris tipizálási eredményei ( ) Az MRSA törzsek 83,5%-a 4 típus) tartozott. epidémiás PFGE típusba (A D 3 pandémiás MRSA klón elterjedése mutatható ki hazánkban: (i) New York /Japán (ST5-II) (A/C PFGE típus) (43,8%) (ii) Dél-Német (ST228-I) (B PFGE típus) (19,7%) (iii) EMRSA-15 (ST22-IV) (D PFGE típus) (20%) Míg közötti időszakban a New York/Japán és a DélNémet klón együttes dominanciája volt jellemző, 2006 óta az EMRSA-15 klón előretörése figyelhető meg A New York/Japán és a Dél-Német klón gyakorlatilag az egész ország területén elterjedt. A New York/Japán klón C PFGE típusú törzsei az Észak-alföldi és Észak-magyarországi régiókban, míg az EMRSA-15 klón törzsei az Észak-, és Dél-alföldi régiókban fordulnak elő leggyakrabban.

(iii) EMRSA-15 (ST22-IV) (D PFGE típus) (20%) Míg 2001-2005 közötti időszakban a New York/Japán és a DélNémet klón együttes dominanciája volt jellemző, 2006 óta az EMRSA-15 klón előretörése

17 Köszönetnyilvánítás Hajbel-Vékony Gabriella, technikai asszisztens, OEK, FMEO Torma Andrea, technikai asszisztens, OEK Bakteriológia O. ÁNTSZ hálózatban és a különböző kórházak laboratóriumaiban dolgozó munkatársaknak a törzsek beküldéséért.

Hasonló dokumentumok

Nosocomialis infekciókat okozó baktériumok tipizálásának jelentősége a kórházi járványok felderítésében

Nosocomialis infekciókat okozó baktériumok tipizálásának jelentősége a kórházi járványok felderítésében Pászti Judit OEK Fágtipizálási és molekuláris epidemiológiai osztály Tipizálás - általában Bakteriológiai