NUKLEINSAVAK. DNS (DNA) /dezoxiribonukleinsav/ -sejtplazmában -peptid / fehérje szintézis vezérlése (messenger-, transfer-rns)

Átírás

1 UKLEISAVAK Első elkülönítés: Miescher 189. (gennyből) vízben és híg savban oldhatatlan, de lúgban oldódó, foszfortartalmú anyag Két típus: RS (RA) /ribonukleinsav/ DS (DA) /dezoxiribonukleinsav/ -sejtplazmában -peptid / fehérje szintézis vezérlése (messenger-, transfer-rs) -sejtmagban -genetikai információ tárolása X

2 G A C(5') C(4') C(3') adenilsav guanilsav ' 3' 5' 5' ' 3' Az RS felépítése pgpa (pg-a) X

3 A segment of one DA chain showing how phosphate ester groups link the 3'- and 5'- groups of deoxyribose units. RA has a similar structure with two exceptions: A hydroxyl replaces a hydrogen atom at the ' position of each ribose unit and uracil replaces thymine. X

4 X

5 urin -szintelen tűkristály (op. 1 o C) -savas (pk a : 8,9) és egyben bázikus természetű (pk b : 11,) is rendhagyó számozás -tautoméria: oldatban: 7 = 9 szilárd fázisban: főleg imidazo[4,5-d]pirimidin 9 a d 5 1 b c 4 3 X

6 Lactam form of guanine Lactim form of guanine X

7 Enyhe hidrolízis: (enzimmel, híg lúggal /pl. 1n a, 30 o C, 0 h /, vagy közepes savval /pl. 1n Cl, 100 o C, 1 h /) UKLETIDK (bázis+cukor+foszforsav) nukleotid = nukleozid+foszforsav A foszforsav a DS-ben két, az RS-ben 3 helyen észteresítheti a cukor komponenst. A citidin esetében például: 5' 5' 5' 3' ' 3' ' 3' ' citidin- -foszfát ( -CM) citidin-3 -foszfát (3 -CM) citidin-5 -foszfát (5 -CM) citidilsav X CM = citidin-monofoszfát

8 5 -foszfátok uridilsav timidilsav citidilsav I. irimidin nukleotidok: RS DS -dezoxicitidilsav ' 3' 5' C 3 ' 3' 5' ' 3' 5' ' 3' 5' X

9 adenilsav guanilsav II. urin nukleotidok: RS DS -dezoxiadenilsav -dezoxiguanilsav ' 3' 5' ' 3' 5' ' 3' 5' ' 3' 5' X

10 4' 5' eterocyclic base 1' β--glycosidic linkage 4' 5' ' ' ' 3' ' A nucleotide (a) Adenylic acid (a) General structure of a nucleotide obtained from RA. The heterocyclic base is a purine or pyrimidine. ln nucleotides obtained from DA, the sugar component is -deoxy-d-ribose; that is, the at position is replaced by. The phosphate group of the nucleotide is shown attached at C5 ; it may instead be attached at C3. In DA and RA a phosphodiester linkage joins C5 of one nucleotide to C3 of another. The heterocyclic base is always attached through a b--glycosidic linkage at C1. (b) Adenylic acid, a typical nucleotide. (b)

11 Erélyesebb hidrolízis: (cc. lúg /pl. cc. 3, 175 o C, 3 h /) I. irimidin nukleozidok: RS UKLEZIDK (bázis+cukor) azaz a bázisok -glikozidjai DS citidin dezoxicitidin 3-( -dezoxiβ-d-ribofuranozil)citozin 3-β-D-ribofuranozilcitozin ' ' C 3 uridin timidin ' ' X

12 II. urin nukleozidok: RS DS adenozin ' ' dezoxiadenozin guanozin ' ' dezoxiguanozin X

13 Még erélyesebb hidrolízis: (cc. sav /pl. 7 % perklórsav, 100 o C, 1 h /) 1. Foszforsav :. entózok: (D-Ribóz illetve -dezoxi-d-ribóz) RS 4' 3. Bázisok: RS 5' 1' 4' 3' ' 5' 1' 3' ' DS DS C 3 uracil (U) adenin (A) citozin (C) guanin (G) timin (T) X

14 A nukleotidok szintetikus előállítása: nukleozidok átalakítása foszforsav-észterré C ( 5 C C ) C Cl C 1. + /. / d piridin 3 C C 3 dibenzil-foszfokloridát 3 C C 3 adenilsav

15 A nukleozidok szintetikus előállítása: 1. chloromercury salt -acetylamino purine Ac Ac 8 7 Clg 5' 3' xylene 3 xilol -gcl 1' ' Cl Ac Ac ' Ac Ac ' Ac Ac triacetyl α-d-ribofuranosyl chloride α-chloro β-glucoside adenosine

16 . Bz Bz + Bz C 5 C 5 - C 5 Bz Bz Bz,3,5-tri--benzoyl β-d-ribofuranosylamine β-ethoxy--ethoxy carbonylacrylamide cytidine Bz = benzoyl Bz = benzoil C C 5

17 A nukleotidok fizikai és kémiai tulajdonságai: -magas op. -vízben jó oldódás -színtelen kristályok -a dihidrogénfoszfát csoport miatt erős savak -lúgos hidrolízis során foszfátsó és nukleozid keletkezik -savas hidrolízis során pedig bázis és pentózfoszfát keletkezik adenozin adenin + + a 3 4 adenilsav

18 A nukleozidok fizikai és kémiai tulajdonságai: -magas op.; vízben jó oldódás; színtelen kristályok -lúggal nem, viszont híg savval hidrolizálható a glikozidos kötés nukleozid bázis + cukor (vagy annak származéka) pl. ' 0,01 S o C + 3 C C C C (dezoxi)adenozin adenin ribóz levulinsav (γ-keto-valeriánsav) ' 10% S 4 15 o C + 3 C C C C (dezoxi)citidin citozin furfurol levulinsav (γ-keto-valeriánsav)

19 citidin uridin C cc. 3, cc. S 4 rib adenozin guanozin 3 C 1 5 rib rib = ribofuranozil 1-metiluridin 5-nitrouridin

20 ukleotid koenzimek Adenozin-trifoszfát (AT) Adenozin-monofoszfát (AM) = adenilsav R = Adenozin-difoszfát (AD) R R = Adenozin-trifoszfát (AT) 5' 3' ' R = AD energiatermelõ folyamatok 30 kj / mol (~1 kcal / mol) energiafelhasználó folyamatok AT X

21 Biosynthesis Chemical Synthesis AT AM Adenylate cyclase dicyclohexylcarbodiimide pyrophosphate - Cyclic AM 3',5'-Cyclic adenylic acid (cyclic AM) and its biosynthesis and laboratory synthesis. X

22 Koenzim-A (CoA) Lipmann 194. S R 5' R= : koenzim-a R=acetil : acetilkoenzim-a 3' ' acetilezéseket katalizáló enzim pl. anyagcsere folyamatokban; in vitro az acetil-coa a fehérjék poszt-transzlációs módosításának fontos eszköze, mivel a biológiai hatást módosítani tudja az acetilezés; a fehérjék azido-biotinnal és fém-alkinoáttal rézsók jelenlétében színes [3+] cikloaddíciós terméket adnak, amely diagnosztikai jelentőségű. X

23 CoA S 3 C C C 3 C C S CoA + C piroszőlősav yruvic acid AD + acetil-coa Acetyl CoA AD CoA S C C C C C C Citrate citrát szintáz synthase C C C xalacetic oxálecetsav acid C citromsav Citric acid Krebs-cyclus cycle

24 arden és Young Biológiai oxidálószer: oxidálja (dehidrogénezi) pl. a cukrokat, zsírokat, azaz energiát termel icotinamide Adenine C + C - - C Ribose (a sugar) yrophosphate Ribose icotinamide adenine dinucleotide (AD + )

25 Az oxidáció mechanizmusa: /hidridanion átadás/ R R R AD + R AD oxidálandó molekula AD + termék oxidáció redukció termék AD redukálandó molekula X

26 AD AD R R C 3 yruvic acid Lactate dehydrogenase (regenerates AD + in muscle under anaerobic conditions) C 3 Lactic acid

27 Me R S ox. Me S C + R Me C 50% 50% R = rectus; S = sinister AD + + alkohol dehidrogenáz - R D Me pror C pros red. D Me S + D Me R pror D Me C 50% 50% AD + alkohol dehidrogenáz a b a R királis, akkor a és b hidrogének diasztereotóp viszonyban vannak. Az enzimtől függ, hogy a hidrogén a prokirális AD + melyik oldalán lép be. R AD + R AD - glükóz ox. (AD + és májenzim): csak a b - etanol ox. (AD + és élesztőenzim): csak a a lép be

28 Az RS felépítése C(5') guanilsav 5' C(4') C(3') 3' ' G A adenilsav 5' 3' ' pgpa (pg-a)

29 A segment of one DA chain showing how phosphate ester groups link the 3'- and 5'- groups of deoxyribose units. RA has a similar structure with two exceptions: A hydroxyl replaces a hydrogen atom at the ' position of each ribose unit and uracil replaces thymine.

30 Bázispárok: C 3 R R -dezoxiadenilsav - timidilsav R R -dezoxiguanilsav - -dezoxicitidilsav C 3 R -dezoxiguanilsav - timidilsav nem létezik R Következtetés: 1. A + G = T + C. A = T és G = C (Chargaff szabályok) X

31 Chargaff pointed out that for all species examined: 1. The total mole percentage of purines is approximately equal to that of the pyrimidines, that is, (%G + %A)/(%C + %T) ~ = l.. The mole percentage of adenine is nearly equal to that of thymine (i.e., %A/% T = ~ l), and the mole percentage of guanine is nearly equal to that of cytosine (i. e., %G/%C = ~ 1).

32

33 cukor foszforatom

34 Antimetabolitok: 1. Fólsav-antagonisták pteridin sárga kristályok (op. 140 o C) 4 X pteridin R p-aminobenzoil X =, R = : fólsav C glutaminsav C C X =, R = C 3 : methotrexate 4 tetrahidrofólsav C fólsav reduktáz enzim bénítás: nem keletkezik fólinsav C 4 C fólinsav C a timin C5-C 3 csoportját valamint az adenin/guanin C- és C-8 atomját adja X

35 Metotrexat

36 fólsav Metotrexat (gátló) C -- tetrahidrofólsav (TFS) (metiléntetrahidrofólsav) Uracil Timin urinszintézis (fólinsav = 10 -formil-tfs) C C -- fólinsav

37 C 7 Ar C Ar fólsav 7,8-dihidrofólsav metiléncsoport Methylengruppe C 7 Ar Ar 7 C 5,,7,8-tetrahidrofólsav 5, 10 -metilén-5,,7,8-tetrahidrofólsav

38 3 C Uracil Timin metiléncsoport Methylengruppe Ar 5, 10 -metilén-5,,7,8- -tetrahidrofolát 5 C C 7,8-dihidrofolát Biológiai körülmények között l. biokémia Ar

39 . irimidin-antagonisták a. Timin-antagonisták C 3 ' 3' 3 C 3 3 -azido-3 dezoxitimidin AZT AIDS b. Uracil-antagonisták R F R = 3' ' 1' 5-fluoruracil TRURACIL 1 -( -furanidil)- 5-fluoruracil FTRAFUR -dezoxiribozil-1-5-fluoruracil FLXURIDI gátolja a timidilát szintázt és beépül az RS-be

40 3. urin-antagonisták 3a. Adenin-antagonisták C C C C S S aszparaginsav - 3 -merkaptopurin: reakcióba lép az aszparaginsavval C C C C aszparaginsav C C C C C C C fumársav + C aszparaginsav - inozinsav adenilsav

41 3b. Guanin-antagonisták 9 9-[(-hidroxietoxi)metil]guanin ACYCLVIR erpes simplex 4. ukleozid-antagonisták nukleozidok módosított cukorrésszel pl. citozin-arabinozid ARA-C aracitidin-trifoszfát (DS-polimeráz gátló)

42 urin urinvázas vegyületek előállítása Mindkét gyűrű kialakításával C purin 9. Csak az egyik gyűrű kialakításával C 3 9 adenin A lehetőségek vizsgálata retroszintézissel A 8 B C- és C-8 a hangyasav oxidációs fokán van

43

44 A út R R 5 red. R amino- 4-amino-5-nitrozó- 4,5-diamino-szárm. purin C Zn ,4,5-triamino-- hidroxipirimidin C /Traube 1910/ guanin B út R C R X

45 urin reakciói 1. Bázicitás Az -3 atomon protonálódik, de egyben gyengén savas tulajdonságú (pk a : 8,9) is.. Alkilezés Az -7 és / vagy az -9 atomon alkileződik a reagenstől függően. 7 9 (C 3 ) S 4 C C C C 3 I 9 C C C 3 7 C C 3 X

46 3. S Ar K foly. 3 Chichibabin-reakció -aminopurin alogénszubsztituensek esetén a halogénatomok lecserélhetők C-, C-, C-8 sorrendben: Cl Cl Cl Cl Cl 8 Cl,,8-triklórpurin a,8-diklór--hidroxipurin 8 3 Cl guanin red. -Cl klórguanin Cl 4 a Cl a - illetve 4-hidroxi származék 1:1 arányban képződik Cl 4 Cl 4 a Cl csak a 4-hidroxi származék képződik Cl a + Cl 4 4 S -Ar reakció csak erélyes körülmények közt kivitelezhető X

47 4. Dimroth-átrendeződés 3 C imino-1-metil-1,-dihidropurin / - 3 C 1 3 C , C 3 -metilaminopurin

48 Természetes származékok 1. úgysav 8. Xantin-származékok 7 xantin R 3 R R 1 R 1,R = C 3, R 3 = : teofillin /Thea chinensis/ R 1,R 3 = C 3, R = : teobromin /Theobroma cacao/ R 1,R,R 3 = C 3 : koffein /Coffea fajok/ 3. urin-bázisok 9 adenin 9 guanin X

49 A nukleotidsorrend meghatározása umán Genom rojekt (UG) MAXAM és GILBERT kémiai szekvenálási módszere lebontással (1977): DS kettős hélix Feldarabolás ún. restrikciós enzimekkel kétszálú DS fragmentumok Láncvégi foszforsavak hasítása enzimmel 3 izotóppal jelölt foszforsavval enzimatikusan újraészteresítik A két szál elválasztása egymástól + Az egyik szálat tartalmazó mintát négyfelé osztják X

50 G és (A) dimetilszulfát + hidrolízis A és (G) C és T csak C C acl + hidrolízis + hidrolízis + hidrolízis Részleges hasítást idéznek elő a megadott reagensekkel a megadott nukleotidoknál. A reagensek a megfelelő bázisokkal reagálva idézik elő a szálhasadást. Így a négy lombikban különböző hosszúságú fragmentumok keletkeznek, majd mind a négy mintát gélelektroforézisnek vetik alá. Gélelektroforézis: géllel töltött csövecske vagy lemez, melyre rárétegzik a gélt. A lemez/cső egyik végén van a minta (ld. VRK), majd a lemezre/csőre egyenfeszültséget kapcsolnak. A polianion oligonukleotidok a + töltésű anód felé vándorolnak, mégpedig annál gyorsabban, minél kisebb a molekulatömegük. A lemezt/csövet a kifejlesztés után valamilyen módszerrel előhívják. 3 GTTCTAGCCT nukleotidsorrend esetén G és (A) A és (G) C és T csak C GTTCTAGCCT GTTCTAGCC GTTCTAGC GTTCTAG GTTCTA GTTCT GTTC GTT GT 3 G X

51 SAGER didezoxi szekvenálási módszere (1979): Alapelve: az enzimkatalizált DS szintézis irányított megszakítása,3 -didezoxi-ribózzal 5 -AGTTCTAGCCTTACGTAC-3 + primer (3 -ATGCATG-5 ) 5 -AGTTCTAGCCTTACGTAC ATGCATG-5 4 részre osztás + DS polimeráz G-reakció dat dct dgt* ddgt dtt G A-reakció dat* ddat dct dgt dtt A T-reakció dat dct dgt dtt* ddtt T C-reakció dat dct* ddct dgt dtt C 5 -AGTTCTAGCCT TACGTAC-3 3 -TCAAGATCGGAATGCATG-5 TCAAGATCGGA CAAGATCGGA AAGATCGGA AGATCGGA GATCGGA ATCGGA TCGGA CGGA GGA GA A X

52 Enzimatikus DS szekvencia analízis (Sanger módszer) 5 3 nukleotidok C peptidek (terminális) Aminosavak 0 féle peptidek (néhány száz aminosav) Szerves bázis 4 féle olinukleotid milliós nagyságrendű: vírusokban kb. 3 ezer mononukleotid E. Coli baktériumban 4,7 millió mononukleotid (4,7 megabázispár) emberi genom 3,5 milliárd mononukleotid (3,5 gigabázispár) X

53 Elve a következő: a vizsgálandó szekvencia (elsődleges szerkezet) ismeretlen, ez a célszekvencia (target sequence, matrica). a megvan a 4 szerves bázis, akkor a DS polimeráz enzim a mononukleotidokat összekapcsolja a target komplementerének megfelelően. De ahhoz, hogy a DS szintézis egyáltalán megindulhasson, kell egy rövid nukleotid szekvencia, a primer, ugyanis a DS polimeráz csak megkezdett láncot tud növelni, láncot nem tud elkezdeni. A primert vagy szintetizáljuk, vagy hidrolízissel nyerjük ki. Ez nem a sejtben, hanem a lombikban megy. : primer, T: target. rövidebb a T-nél, a T kilóg; folytatódik. és T hidrogénhidakkal kapcsolódik egymáshoz. X

54 Ezután a -T egységet 4 kémcsőbe leosztjuk és mindegyik mintához olyan mononukleotidot adunk, amely dd nukleotidot, azaz,3 -didezoxinukleotidot (dd) tartalmaz. De emellett -dezoxi-nukleotid is van (feleslegben) a mintában. A dd hozzáadása azért szükséges, hogy a láncfelépülést leállítsuk abban a láncban, ahová ez a didezoxi nukleotid beépül. Amint ez beépül, a láncszintézis megáll. A dd-ból csak kis mennyiséget adunk hozzá, ha sokat adnánk, akkor minden lánc leállna ott, ahol dd lenne. Tehát d AT+dd AT, d GT+dd GT, stb. van a kémcsövekben; így sok ilyen dd-lánc is fog képződni (és a láncszintézis is tovább fog futni abban a láncban, ahol nincs dd mindezek egy adott kémcsőben együtt mennek végbe, egymás mellett). A képződött láncokat egymástól szét kell választani. Mivel töltéssel rendelkeznek, elektroforézissel szétszedhetjük. A dd építőkő foszforsav egysége 3 * radioaktív izotóppal jelölt az interferogram láthatóvá tétele miatt. A négyféle mintát külön sávban futtatjuk, mivel tudjuk, hogy a sebesség a lánchosszal fordítottan arányos, másrészt, amelyik láncban nincs 3 * izotóp, az nem világít a gélelektroferogramon. oliamid gélen elektromos erőtérben fut a minta. Azért megy lassabban a hosszabb minta (lánc), mert a diffúziós sebesség a relatív molekulatömeggel fordítottan arányos. X

55 A szintetizált szekvencia komplementer szekvenciája tehát az eredeti (target) szekvencia (matrica). Azt tudjuk, hogy melyik kémcsőbe melyik dd-t (dd AT, dd GT, dd CT, dd TT) tettük, valamint azt is, hogy melyik oszlopban melyik dd-t tartalmazó mintát futtatjuk. Adott oszlopokon futtatott láncokban mindig csak adott (egyféle) dd épülhet be (a kémcsövekbe való elkülönítés után midegyik kémcsőbe csak egyfajta dd-t adtunk). Így, ahol a szintetizálandó szekvenciában az adott bázis előfordul, ott lesz: a) egyrészt olyan lánc, amelynek a szintézise az adott nukleotidnál állt le; b) másrészt olyan lánc, amelyiknek nem állt le a szintézise (mert abba a láncba pl. nem dd AT, hanem d AT jutott). X

56 Az a) esetben minden olyan helyen megáll a láncszintézis, ahol az adott dd nukleotidnak kell beépülnie ( az eredeti szekvenciához igazodva). a pl. több helyen van A a láncban, akkor az egyik lánc szintézisénél mondjuk az első A- nál szakad meg a láncfelépülés, egy másik (ugyancsak ugyanebben a kémcsőben menő reakciónál) lánc szintézisénél pedig a második A-nál: ezek a formák statisztikusan kiegyenlítődnek. a az A gélelektroferogram-oszlopban van az első folt (vízszintes világító csík), akkor dd A épült be először. Mivel mind a négy kémcsőben azonos a felépült (felépítendő, szintetizálandó) szerkezet, megnézzük, hogy hol (melyik kémcsőből kitöltött oszlopban) van a következő folt ha ez a T oszlopban van, akkor a sorrend AT (mivel ott csak dd T épülhet be; másrészt a két folt közvetlenül egymás után jön). A kicsit magasabban levő folt azt jelzi, hogy az a lánc ez kicsivel hosszabb, mint az alatta levő. Alacsonyabban levő folt: amelyik legtávolabb jut az elektroferogramon. A radioelektroferogramot automatával hozzák létre, lefényképezik, computerben tárolják. X

57 Ez az elsődleges szerkezet meghatározása volt, tehát az, hogy a nukleotid-egységek milyen sorrendben kapcsolódnak egymáshoz. A másodlagos szerkezet a hélix csavarodása antiparalell (egymással szembeni) irányban. eptidekben 0 betűs abc (0 aminosav jelölése) ukleotidokban 4 betűs abc (4 bázis) Szabályos térszerkezet szabályos tulajdonságok X

58 Az oligonukleotidok előállítása automatizált szilárd fázisú szintézissel B B 1, B, B 3 = bázisok B 3 CG "controlled pore glass" (szilárd fázis) 3 C B 1 DMTr = dimetoxitritil 3C C C 3 3 C B CG DMTr tetrazol I. K A C S L Á S DMTr 3 C B 3 B DMTr 3 C 3 C CG I + B 3 B B 1 B 3 II. XIDÁCIÓ III. DETRITILEZÉS 3 C (ir) -Tetrazolil 3 C B 1 3 C B 1 foszforamidit származék CG CG

59 X

60 X

61 X

62 X

63 Kémiai polinukleotid szintézis (Coronther módszer) Foszfátészter kötés kialakítása a cél. ukleotidok összekapcsolásához legalább bifunkciós vegyületből kell kiindulni és tudnunk kell azt, hogy melyik mononukleotid mely részét akarjuk a másik mononukleotid megfelelő részével kapcsolni. X

64 A lombikban először 3 -höz foszforegységet kapcsolunk, amellyel reaktívvá tesszük, majd ez fog reagálni egy másik egység 5 szabad csoportjával. Védelem: az aminocsoportot szelektíven nem lehet acilezni a hidroxilcsoport mellett, mert az aromás aminocsoport kevéssé nukleofil. Lúggal csak az észterkötés bomlik, mivel a savamid stabilabb az észternél védelem mindkét nukleotidban. 5 csoport védelme: DMT Cl-dal (dimetoxitritil-kloird) piridinben csak a primer csoport reagál, a szekunder nem, mivel előbbi reagenssel szemben reaktívabb. (asonlóan a szénhidrátok reakcióihoz, csak a primer csoport reagál trifenilmetil-kloriddal, azaz tritil-kloriddal.) Másrészt a reagens nagy térkitöltésű, ezért is csak a primer -val lép reakcióba védett (és aktivált) nukleotidban. Így egyik nukleotidban a 3 szabad és az 5 védett de kell egy másik nukleotid, amelyben a 3 a védett és az 5 a szabad. X

65 3 csoport védelme: védett 1 nukleotidban benzoilezéssel. A DMT csoportot az 5 -ról száraz sósavgázzal le lehet szakítani, de csak ebben a nukleotidban kell lehasítani. Az 5 csoport szabad, az összes többi funkciós csoport foglalt az 1 -ben. Lehetne kapcsolni az 3 csoportjával elvileg, de az nem elég reaktív. Ezért reaktívvá kell tenni. 3 csoport reaktívvá tétele védett -ben foszforossavészteramid-kloriddal vagy más csoporttal. X

66 A gének szerepének kutatása Tradicionális módszer: a kísérleti állatokban mesterségesen előidézett mutációval véletlenszerűen módosítanak vagy törölnek géneket, majd megfigyelik a hatást az utód állatokban. robléma: magasabb rendű állatokban (pl. gerincesek) számos nehézségbe ütközik a módszer alkalmazása (pl. kevés a leszármazott, hosszú 1-1 generáció periódusa és a legérdekesebb mutációk gyakran letálisak). Reverz genetika: (új megközelítés) klónozott gén manipulálásával találják ki, hogyan működik a vizsgált gén. A manipuláció egyik módszere esetében olyan oligonukleotidot (kb. 15 bázisból álló nukleinsav ) állítanak elő, mely a vizsgált gén bizonyos részének kiegészítő (komplementer) párja. Ez az ún. antiszenz oligonukleotid, mely tehát képes a vizsgált DS egyik szálának ún. szenz szekvenciájához kapcsolódni. Így módosulhat vagy akár meg is szünhet a gén aktivitása. pl. ha a DS szenz része: A-G-A-C-C-G-T-G-G akkor az antiszenz oligonukleotid: T-C-T-G-G-C-A-C-C Mivel számos vírus és baktérium a saját génjei közül többnek is hasonlóan végzi a regulációját, bizonyos vírusok (pl. IV) kulcsfontosságú génjeinek dezaktíválása ilyetén módon nagy gyógyászati lehetőségeket rejt magában.