CHO H H H OH H OH OH H CH2OH HC OH HC OH HC OH CH 2

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "CHO H H H OH H OH OH H CH2OH HC OH HC OH HC OH CH 2"

Ottó Mészáros
7 évvel ezelőtt
Látták:

1 4. Előadás ukleozidok, nukleotidok, nukleinsavak

2 Történeti háttér Savas karakterű anyagok a sejtmagból DS a sejtmag fő komponense F. Miescher (Svájc) 1882 Flemming: Chromatin elnevezés Waldeyer: CRM (szín) SZMA (festék láthatóvá tétel) 1930 DS molekulatömege kb ammersten, Caspersson - tisztított növényi vírusban is van Stanley (USA) 1940 első elektronmikroszkópos kép DS pozitívan töltött fehérjék nukleotid összetétel E. Chargaff (USA) 1953 kettős hélix J. Watson, F. Crick (UK) (.d. 1962) 1958 DS polimeráz I enzim (első DS készítő enzim) 1960 RS polimeráz; mrs felfedezése 1964 t RS Ala szekvenálása R. olley (USA) 1966 genetikai kód megfejtése 1968 védett nukleotidok összekapcsolása (A. Todd, Khorana)

3 1970 DS hasító enzim (restrikciós) felfedezése 1973 DS fragmensek beépítése plazmidba E. coli Androméda-törzs 1975 RS kromoszóma szekvenálása; MS2 fág (3 fehérje) 1977 GEETEC 1978 somatostatin: az első emberi hormon, rekombináns technológiával obel-díj: restrikciós enzimek 1979 malignus sejtből származó DS-sel fertőzni lehet egészséges sejtvonalat 1980 obel-díj: DS szekvenálás; rekombináns DS szintézis F. Sanger; W. Gilbert humán inzulin (DS technológia) a piacon (humulin) - első onkogének izolálása, expresszálása, szekvenálása (egy aminosav különbség) 1983 DS a l baktérium fágból ( bázispár) 1984 UMA GEM projekt elfogadása (USA Kongresszus) kb. 3 x 109 bázispár 3 milliárd USD 1 USD/ bázispár 2009 obel-díj.

4 Felosztás ukleotid koenzim ADP, ATP AD FAD Co-A UDP-cukrok RS Mt: plazma vírusok lánchossz:> 3x10 3 DS Mt: sejtmag vírusok lánchossz: > 10 7 E. coli 0,4 % 6 % 1 % db/sejt 1,2x10 7 rrs: 6x trs: 4x10 5 mrs: 10 3

5 A nukleinsavak primer szerkezete Alapkomponensek - szénhidrát-foszfát heterociklusos bázis n 1. Szénhidrát: monoszacharid, aldopentóz β-d-2-dezoxiribóz (DS) 1 C C2 D-2-dezoxiribóz β-d-2-dezoxiribóz 1 β-d-ribóz (RS) C C C C C 2 β-d-ribóz

6 2. Foszforsav(ak) P P R P R2 R1 P P P R P P P P P R P P P monoészter foszfodiészter - lineáris - ciklusos >300 o C metafoszforsav difoszforsav 160 o C foszforsav (ortofoszforsav) trifoszforsav difoszforsav-észter trifoszforsav-észter

7 3. eterociklusos bázis 2 1 3C 1 3 citozin (C) timin R = - C 3 R = - (T) (U) (C) pirimidin 2 1 a 7 e 5 1 b 9 c 3 2 adenin (A) guanin (G) purin (pirimidin(d)imidazol)

8 Keto-enol tautoméria C 3 3C 3C vagy guanin timin Amino-imino tautoméria citozin adenin

9 ukleozidok szénhidrát és heterobázis ( glikozid kötés) 2 3C dezoxicitidin dezoxitimidin 2 2 dezoxiadenozin dezoxiguanozin β--glikozid

10 ukleotidok szénhidrát és foszforsav (3,5 - diészter kötés) P - 5 -foszfát 5 C hidroxi P - 5 C2 3 bázis 1-2 bázis 2 5 -vég P - 5 C2 3 5 C2 észter (primer ) P vég bázis 1 szekunder () bázis 2

11 Ribonukleotidok ionizációs állandói (pk) Bázis Szekunder foszfát Primer foszfát Adenozin - 5 -foszfát (5 -AMP) * 3,8 6,1 0,9 Uridin foszfát (5 -UMP) 9,5 6,4 1,0 Citidin foszfát (5 -CMP) 4,5 6,3 0,8 Guanin foszfát (5 -GMP) 2,4, 9,4 6,1 0,7 5 -AMP (vagy 5 -ramp) jelentése : ribonukleotid. 5 -damp jelentése : deoxiribonukleotid (deoxinukleotid).

12 A polinukleotid lánc primer szerkezete 5 -vég 3C P - timin C2 C2 P - C2 P - C2 P - 3 -vég 2 2 adenin pk = 3,8 pk = 4,5 citozin guanin 2 pk= 2,4 9,4

13 A kettős polinukleotid lánc primer szerkezete

14 ukleinsav térszerkezetek A Z c só (RA) A 72% Et alacsony só koncentráció 50% Et c só Z Minimális só (nem Li 2 +) B igher retained salt 3 M salt 0.7 M MgCl 2 vagy 2.5 M acl Alacsony nedvességű szálakban. C Magas sókoncentráció

15 Francis Crick, James D. Watson, Watson, 1928 Crick, 1916

16 A nukleinsavak térszerkezete A 2-dezoxi-D-ribóz téralkata (a gyűrű síkja fölötti C atom szerint) 0,5 Å c 2 -endo c 3 -endo

17 A β-glikozidkötéshez kapcsolódó konformerek

18 A, B és Z típusú DS jellemzői A B Z élix irány Jobbmenetű Jobbmenetű Balmenetű Bázispár per kanyar 11 10,4 12 (6 dimers) Bázispárok távolsága 2.3 Å 3.4 Å 3.8 Å Menetemelkedés 25,3 Å 35,4 Å 45,6 Å Bázispár dőlésszög Glikozid konformáció Dezoxicitidin Anti Anti Anti Dezoxiguanozin Anti Anti Syn Szénhidrát konformáció Dezoxicitidin C-3 -endo C-2 -endo C-2 -endo Dezoxiguanozin C-3 -endo C-2 -endo C-3 -endo

19 Értelmezés

21 A-DS B-DS

22 A-DS B-DS

23 Z-DS B-DS

24 DS hő-denaturáció

25 A DS-től a kromoszómáig

26 Egy kromoszóma és...

27 Összevetés: DS és RS

28 Az RS

29 mrs másodlagos szerkezete

30 trs másodlagos szerkezete (75-95 nukleotid) trs Ala (olley,.d. 1968)

31 trs térszerkezete Aminosav kapcsolódása A. Rich, A. Klug (1974)

32 trs bioszintézise intron 10 % módosított bázis

33 trs aminosav szintézise (P. Zamencik, M. oogland, 1957) 1. Aminoacil-adenilát (AMP) keletkezése P. Zamencik, M. oogland (1957)

34 2. Aminoacil-tRS keletkezése

35 trs aminosav

36 ukleozid hatóanyagok 2 dezoxiguanozin 2 Acyclovir (acikloguanozin) SV, VZV dezoxiadenozin gancyclovir CMV 3C zidovudine dezoxitimidin

Hasonló dokumentumok

CHO H H H OH H OH OH H CH2OH CHO OH H HC OH HC OH HC OH CH 2 OH

CHO H H H OH H OH OH H CH2OH CHO OH H HC OH HC OH HC OH CH 2 OH 4. Előadás ukleozidok, nukleotidok, nukleinsavak Történeti háttér Savas karakterű anyagok a sejtmagból 1869-71 DS a sejtmag fő komponense nuclein Friedrich Miescher (Svájc, 1844-1895) 1970: FM Insitute