NATRII HYALURONAS. Nátrium-hialuronát

Átírás

1 Natrii hyaluronas Ph.Hg.VIII. Ph.Eur /2008:1472 NATRII HYALURONAS Nátriu-hialuronát (C 14 H 20 NNaO 11 ) n [ ] DEFINÍCIÓ A nátriu-hialuronát a hialuronsav nátriusója. A hialuronsav D-glükuronsav és N-acetil-D-glükózain diszacharid-egységekből álló glükózainoglükán. Tartalo: 95,0 105,0% (szárított anyagra). Belső viszkozitás: a feliraton egadott érték %-a. ELŐÁLLÍTÁS A nátriu-hialuronát kakastaréjból történő kivonással vagy Streptococcusokból, (Lancefield A és C csoportokból) ferentálással nyerhető. Aennyiben Gra-pozitív baktériuok ferentálásával állítják elő, az eljárásnak bizonyítottan csökkentenie kell vagy ki kell küszöbölnie a sejtfal pirogén, illetve gyulladáskeltő anyagait. SAJÁTSÁGOK Külle: fehér vagy csakne fehér, igen nedvszívó por, illetve rostos halazok.

2 Natrii hyaluronas Ph.Hg.VIII. Ph.Eur Oldékonyság: vízben érsékelten oldódik vagy oldódik; acetonban és vízentes etanolban gyakorlatilag ne oldódik. AZONOSÍTÁS A. Infravörös abszorpciós spektrofotoetria (2.2.24). Összehasonlítás: nátriu-hialuronát Ph..Eur. referenciaspektrual. B. A nátriuion a) pont szerinti azonossági reakcióját elvégezve (2.3.1) az előírt változás észlelhető. VIZSGÁLATOK S oldat. 0,10 g szárított anyagnak egfelelő ennyiségű vizsgálandó anyaghoz R nátriu-klorid 9 g/l töénységű oldatának 30,0 l-ét adjuk, ajd a keveréket rázógépen, oldódásig kíéletesen kevertetjük (kb. 12 óra). Az oldat küllee. Az S oldat tiszta legyen (2.2.1). 600 n-en az S oldat abszorbanciája (2.2.25) legfeljebb 0,01 lehet. ph (2.2.3): 5,0 8,5. A vizsgálandó anyagból R szén-dioxid-entes vízzel szárított anyagra vonatkoztatva 5 g/l töénységű oldatot készítünk. Belső viszkozitás. A nátriu-hialuronát erősen nedvszívó, a beérés során nedvességtől védeni kell. Topítóoldat (0,15 M nátriu-kloridot tartalazó 0,01 M foszfát topítóoldat (ph 7,0)). 0,78 g R nátriu-dihidrogén-foszfát-dihidrátot és 4,50 g R nátriukloridot R vízzel 500,0 l-re oldunk (A-oldat). 1,79 g R dinátriu-hidrogénfoszfát-dodekahidrátot és 4,50 g R nátriu-kloridot R vízzel 500,0 l-re oldunk (B-oldat). Az A- és a B-oldatot ph 7,0 eléréséig elegyítjük. Az elegyet zsugorított üvegszűrőn (4) egszűrjük. Vizsgálati oldat (a). A vizsgálandó anyag 0,200 g-ját ( 0p ) leérjük (MEGJEGYZÉS: ez csak tájékoztató érték, és az a) vizsgálati oldat első viszkozitásérési eredénye alapján pontosítani kell) és 50,0 g ( 0s ) 4 C-os topítóoldattal 24 órán át 4 C-on rázatjuk. Az így nyert oldat 5,00 g-ját ( lp ) 100,0 g ( ls ) 25 C-os topítóoldattal hígítjuk. A hígított oldatot 20 percig rázatjuk, ajd zsugorított üvegszűrőn (100) szűrjük. A szüredék első 10 l-ét elvetjük.

3 Natrii hyaluronas Ph.Hg.VIII. Ph.Eur Vizsgálati oldat (b). Az a) vizsgálati oldat 30,0 g-ját ( 2p ) 10,0 g ( 2s ) 25 C-os topítóoldattal hígítjuk. A hígított oldatot 20 percig rázatjuk, ajd zsugorított üvegszűrőn (100) szűrjük. A szüredék első 10 l-ét elvetjük. Vizsgálati oldat (c). Az a) vizsgálati oldat 20,0 g-ját ( 3p ) 20,0 g ( 3s ) 25 C-os topítóoldattal hígítjuk. A hígított oldatot 20 percig rázatjuk, ajd zsugorított üvegszűrőn (100) szűrjük. A szüredék első 10 l-ét elvetjük. Vizsgálati oldat (d). Az a) vizsgálati oldat 10,0 g-ját ( 4p ) 30,0 g ( 4s ) 25 C-os topítóoldattal hígítjuk. A hígított oldatot 20 percig rázatjuk, ajd zsugorított üvegszűrőn (100) szűrjük. A szüredék első 10 l-ét elvetjük. Meghatározzuk a topítóoldat (t 0 ), valaint a négy vizsgálati oldat átfolyási idejét (t 1, t 2, t 3 és t 4 ) 25,00 ± 0,03 C-on (2.2.9). A éréshez alkalas Ubbelohde féle függőszintes kapilláris viszkoziétert használunk, tölcsér alakú kapillárisvéggel (jellezői: űszerállandó kb. 0,005 2 /s 2, kineatikai viszkozitástartoány /s 2, az R kapilláris belső átérője 0,53, a C göb térfogata 5,6 l, az N cső belső átérője 2,8 3,2 ). Valaennyi érést ugyanazzal a viszkoziéterrel végezzük. Az átfolyási időt háro párhuzaos éréssel állapítjuk eg. A vizsgálat csak abban az esetben értékelhető, ha az egyes érések legfeljebb 0,35%-kal térnek el az átlagtól és ha t 1 értéke t 0 értékének 1,6 1,8-szerese. Ellenkező esetben változtatni kell az 0p töeget, és eg kell isételni a vizsgálatot. A relatív viszkozitások kiszáítása Minthogy a nátriu-hialuronát oldatok és az oldószer sűrűsége csakne egyenlő, az η ri relatív viszkozitások (η r1, η r2, η r3 és η r4 ) kiszáíthatók a egfelelő oldatok t i kifolyási időinek (t 1, t 2, t 3 és t 4 ) és az oldószer t 0 átfolyási idejének arányából, de száításba kell venni a kapillárisra vonatkozó kinetikus energia korrekciós tényezőt (B = s 3 ), az alábbiak szerint: B ti 2 ti ηri = B t0 t 2 0 A koncentrációk kiszáítása Az a) vizsgálati oldatban levő nátriu-hialuronát kg/ 3 -ben kifejezett c 1 koncentrációjának kiszáítása:

4 Natrii hyaluronas Ph.Hg.VIII. Ph.Eur x 100 h 1 1 p c1 = 0 p ρ p + 0s 1 p + 1s ahol x = a Tartali eghatározás pont szerint egállapított százalékos nátriu-hialuronát-tartalo, h = szárítási veszteség (%), ρ 25 = 1005 kg/ 3 (a vizsgálati oldat sűrűsége 25 C-on). A b) vizsgálati oldatban levő nátriu-hialuronát kg/ 3 -ben kifejezett c 2 koncentrációjának kiszáítása: c 2 = c 1 2s 2 p + A c) vizsgálati oldatban levő nátriu-hialuronát kg/ 3 -ben kifejezett c 3 koncentrációjának kiszáítása: c 3 = c 1 3s 3 p 2 p + A d) vizsgálati oldatban levő nátriu-hialuronát kg/ 3 -ben kifejezett c 4 koncentrációjának kiszáítása: A belső viszkozitás kiszáítása c 4 = c 1 4s 4 p + A belső viszkozitást (η) a legkisebb négyzetek elvén alapuló lineáris regressziós analízissel, a Martin egyenlet alkalazásával száítjuk ki: 3 p 4 p ηr 1 log = log [ η] + k [ η] c c A 3 /kg-ban kifejezett belső viszkozitást a tengelyetszet tízes alapú hatványértéke adja eg. Szulfatált glükózainoglükánok. Aennyiben a terék kakastaréjból történő kivonással készült, eg kell felelnie az alábbi követelénynek is.

5 Natrii hyaluronas Ph.Hg.VIII. Ph.Eur Perklórsavval, agasabb hőérsékleten végzett űveleteknél egfelelő biztonsági intézkedésekre van szükség. Vizsgálati oldat. 50,0 g szárított anyagnak egfelelő ennyiségű vizsgálandó anyagot egy 150 hosszú, 16 belső átérőjű kécsőbe érünk és 1,0 l R perklórsavban oldunk. Összehasonlító oldat. 0,149 g R vízentes nátriu-szulfátot R vízzel 100,0 l-re oldunk. Az oldat 10,0 l-ét R vízzel 100,0 l-re hígítjuk. A hígított oldat 1,0 l-ét 150 hosszú és 16 belső átérőjű kécsőbe töltjük, ajd elegítőblokkban C-on elpárologtatjuk, és a aradékot 1,0 l R perklórsavban oldjuk. A kécsöveket, üveggyapot-paattal lazán ledugaszolva elegítőblokkban vagy szilikonolaj-fürdőben 180 C-on addig elegítjük, aíg tiszta, színtelen folyadékot ne kapunk (kb. 12 óra). Ezután a kécsöveket kieeljük, és szobahőérsékletre hűtjük. Mindkét kécsőbe R báriu-klorid 33,3 g/l töénységű oldatából 3,0 3,0 l-t töltünk, a kécsöveket lezárjuk, erőteljesen összerázzuk, ajd 30 percig állni hagyjuk. Ezután indegyik kécsövet ég egyszer összerázzuk, és R vizet használva kopenzáló folyadékként, 660 n-en érjük az oldatok abszorbanciáját (2.2.25). A vizsgálati oldat abszorbanciája ne lehet nagyobb, int az összehasonlító oldaté (1%). Nukleinsavak. 260 n-en az S oldat abszorbanciája (2.2.25) legfeljebb 0,5 lehet. Fehérje: legfeljebb 0,3%; parenterális gyógyszerkészítények előállítására szánt anyag esetében legfeljebb 0,1%. Vizsgálati oldat (a). A vizsgálandó anyagból R vízzel szárított anyagra vonatkoztatva kb. 10 g/l töénységű oldatot készítünk. Vizsgálati oldat (b). Az a) vizsgálati oldatból és R vízből térfogatarányú elegyet készítünk. Összehasonlító oldatok. R szarvasarha albuinból R vízzel 0,5 g/l töénységű alapoldatot készítünk. Az alapoldatból öt hígítást készítünk; a hígítások R szarvasarha albuinra vonatkoztatott koncentrációja 5 és 50 μg/l között legyen. Kécsövekbe egyenként 2,5 l R vizet (üres kísérlet), 2,5 l a) vizsgálati oldatot, 2,5 l b) vizsgálati oldatot, illetve 2,5 l összehasonlító oldatot érünk, ajd a kécsövek tartalához 2,5 2,5 l frissen készített R3 réz(ii)- tartarát oldatot elegyítünk. Kb. 10 perc elteltével R víz és frissen készített

6 Natrii hyaluronas Ph.Hg.VIII. Ph.Eur R foszfor-olibdén-volfrásav reagens egyenlő térfogatarányú elegyének 0,50 0,50 l-ét elegyítjük a kécsövek tartalához. 30 perc úlva az üres kísérleti oldattal szeben 750 n-en érjük az oldatok abszorbanciáját (2.2.25). Az öt összehasonlító oldattal nyert kalibrációs görbe segítségével eghatározzuk a vizsgálati oldatok fehérjetartalát. Klorid (2.4.4): legfeljebb 0,5%. 67 g anyagot 100 l R vízben oldunk. Vas: legfeljebb 80 pp. Atoabszorpciós spektroetria (2.2.23, II. ódszer). Vizsgálati oldat. 0,25 g szárított anyagnak egfelelő ennyiségű vizsgálandó anyagot 1 l R töény salétrosavban vízfürdőn elegítéssel oldunk. Az oldatot lehűtjük és R vízzel 10,0 l-re hígítjuk. Összehasonlító oldatok. A vizsgálati oldattal azonos ódon két összehasonlító oldatot készítünk, de 1,0 ill. 2,0 l R vas értékoldatot (10 pp Fe) adva a feloldott vizsgálandó anyaghoz. Fényforrás: vas vájtkatód lápa, 0,2 n-es spektrális sávszélességel. Hulláhossz: 248,3 n. Atoizáció: acetilén levegő lánggal. Szárítási veszteség (2.2.32): legfeljebb 20,0%. 0,500 g anyagot R foszfor(v)- oxid felett, C-on 6 órán keresztül szárítunk. Mikrobiológiai szennyezés. Összes életképes aerob ikroorganizus szá (2.6.12): legfeljebb 10 2 ikroorganizus/g. A vizsgálathoz 1 g vizsgálandó anyagot használunk. Bakteriális endotoxinok (2.6.14). A parenterális gyógyszerkészítények előállítására szánt anyag szennyezettsége abban az esetben, ha a készítény előállítása során ne alkalaznak a bakteriális endotoxinok eltávolítására alkalas eljárást kevesebb legyen, int 0,5 NE/g. Az intraokuláris vagy intraartikuláris gyógyszerkészítények előállítására szánt anyag szennyezettsége abban az esetben, ha a készítény előállítása során ne alkalaznak a bakteriális endotoxinok eltávolítására alkalas eljárást kevesebb legyen, int 0,05 NE/g. TARTALMI MEGHATÁROZÁS

7 Natrii hyaluronas Ph.Hg.VIII. Ph.Eur A glükuronsavtartalat karbazolos reakcióval határozzuk eg az alábbiakban leírt ódon. A-reagens. 0,95 g R dinátriu-tetraborátot 100,0 l R töény kénsavban oldunk. B-reagens. 0,125 g R karbazolt 100,0 l R etanolban oldunk. Vizsgálati oldat. Háro párhuzaos oldatot készítünk. A vizsgálandó anyag 0,170 g-ját R vízzel 100,0 g-ra oldjuk. Az oldat 10,0 g-ját R vízzel 200,0 g-ra egészítjük ki. Összehasonlító alapoldat. R foszfor(v)-oxid felett csökkentett nyoáson töegállandóságig szárított (2.2.32) R D-glükuronsav 0,100 g-ját R vízzel 100,0 g-ra oldjuk. Összehasonlító oldatok. Az összehasonlító alapoldatból öt hígítást készítünk olyan ódon, hogy a hígítások R D-glükuronsavra vonatkoztatott koncentrációja 6,5 65,0 μg/g között legyen. 1-től 25-ig száozott, 25 kécsövet jeges vízbe helyezünk. Az öt összehasonlító oldat indegyikéből hároszor 1,0 l-t érünk az 1-től 15-ig száozott kécsövekbe (összehasonlító kécsövek), a háro vizsgálati oldat indegyikéből hároszor 1,0 l-t érünk a 16-tól 24-ig száozott kécsövekbe (inta kécsövek). A 25. kécsőbe 1,0 l R vizet töltünk (üres kísérlet). Ezután 5,0 5,0 l frissen készített A-reagenst pipettázunk indegyik kécsőbe. A kécsöveket űanyag kupakkal szorosan lezárjuk, és összerázás után pontosan 15 percre vízfürdőre helyezzük, ajd jeges vízben lehűtjük és indegyikbe 0,20 l B-reagenst érünk. Újból lezárjuk a kécsöveket, összerázzuk, és pontosan 15 percre isét vízfürdőre helyezzük. Ezután az oldatokat szobahőérsékletre hűtjük és 530 n-en érjük az abszorbanciákat (2.2.25) az üres oldattal szeben. Az egyes összehasonlító oldatok abszorbanciáinak középértékével készített kalibrációs görbe segítségével eghatározzuk a vizsgálati oldatok D-glükuronsav-koncentrációinak átlagértékét. A nátriu-hialuronát százalékos tartalát az alábbi kifejezésből száítjuk ki: cg ,3 Z cs 100 h 194,1 ahol c g = a D-glükuronsav koncentrációk átlaga a vizsgálati oldatokban (g/g),

8 Natrii hyaluronas Ph.Hg.VIII. Ph.Eur c s = a vizsgálandó anyag koncentrációinak átlaga a vizsgálati oldatokban (g/g), Z = az R D-glükuronsavra egállapított százalékos C 6 H 10 O 7 - tartalo, h = szárítási veszteség, 401,3 = a diszacharid-fragens relatív olekulatöege, 194,1 = a glükuronsav relatív olekulatöege. ELTARTÁS Légentesen záró tartályban, fénytől és nedvességtől védve. Aennyiben az anyag steril, úgy légentesen záró, garanciazáras tartályban. FELIRAT A feliraton fel kell tüntetni: a belső viszkozitást, az anyag eredetét, hogy az anyag ely célra használható, adott esetben, hogy az anyag alkalas parenterális alkalazásra, az intraartikuláris alkalazást kivéve, adott esetben, hogy az anyag alkalas parenterális alkalazásra, beleértve az intraartikuláris alkalazást is, adott esetben, hogy az anyag alkalas intraokuláris alkalazásra.