OMEGA-3-SAVAKBAN GAZDAG ZSÍROS OLAJOK ZSÍRSAVÖSSZETÉTELE

Átírás

1 Oega-3-savakban gazdag zsíros olajok Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.6-0/200: OMEG-3-SVKBN GZDG ZSÍROS OLJOK ZSÍRSVÖSSZETÉTELE eghatározás alkalazható EPS- és DHS-tartalo kvantitatív eghatározására oega-3-savat tartalazó halolajterékekben, különböző koncentrációk esetében. ódszer ind trigliceridekre, ind etil-észterekre alkalazható; az eredényeket trigliceridekben vagy etil-észterekben egyaránt egadhatjuk, az adott esetnek egfelelően. EPS ÉS DHS Gázkroatográfia (2.2.28). űveleteket a lehető leggyorsabban, bolást előidéző fénytől védve, oxidálószerek, oxidációt katalizáló szerek (pl. réz, vas) és levegő kizárásával végezzük. vizsgálandó anyagban az (all-z)-ejkoza-5,8,,4,7-pentaénsav (EPS; 20:5 n-3) és az (all-z)-dokoza-4,7,0,3,6,9-hexaénsav (DHS; 22:6 n-3) etil-, illetve etilésztereit határozzuk eg. Belső standard. R etil-trikozanoát. Vizsgálati oldat (a).. vizsgálandó intának a táblázatból leolvasható ennyiségét, kb. 70,0 g belső standarddal együtt, R butil-hidroxitoluol R trietilpentánnal készített oldatával (50 g/l) 0,0 l-re oldjuk táblázat EPS + DHS együttes ennyisége egközelítőleg (%) beérendő inta ennyisége (g) ,4 0, , ,25 Etil-észterek esetében az így készített oldat további előkészítés nélkül vizsgálható; trigliceridek esetében azonban előbb a B. pont szerinti előkészítés is szükséges. B. z. pont szerint készített oldat 2,0 l-ét kvarccsőbe érjük és az oldószert R nitrogén lassú áraoltatásával elűzzük. aradékhoz,5 l-t érünk R nátriu-hidroxid R etanollal készített oldatából (20 g/l). légteret

2 Oega-3-savakban gazdag zsíros olajok Ph.Hg.VIII. Ph.Eur egtöltjük R nitrogénnel, a kécsövet teflonbevonatú kupakkal szorosan lezárjuk és iután tartalát összekevertük 7 percre vízfürdőre helyezzük. Lehűlés után 2 l R etanolos bór-triklorid oldatot adunk az oldathoz, isét egtöltjük a légteret R nitrogénnel, és a kupakot szorosan visszahelyezzük. Ezután a kécsövet iután tartalát összekevertük 30 percre vízfürdőre helyezzük, ajd C-ra lehűtjük, l R trietilpentánt adunk hozzá, lezárjuk és legalább 30 ásodpercig erőteljesen rázogatjuk, ajd késedele nélkül 5 l R telített nátriu-klorid oldatot öntünk hozzá, isét egtöltjük a légteret R nitrogénnel, és lezárva, legalább 5 ásodpercig erőteljesen rázogatjuk. felső fázist áteeljük egy ásik kécsőbe. etanolos fázist ég egyszer összerázzuk l R trietilpentánnal, az egyesített trietilpentános kivonatokat 2 l R vízzel ossuk, ajd R vízentes nátriu-szulfáttal szárítjuk. Valaennyi intából 3 oldatot készítünk. Vizsgálati oldat (b). vizsgálandó inta 0,300 g-ját R butil-hidroxitoluol R trietilpentánnal készített oldatával (50 g/l) 0,0 l-re oldjuk. továbbiakban az a) vizsgálati oldatra leírtak szerint járunk el. Összehasonlító oldat (a ). kb. 70,0 g belső standardot és 90,0 g CRS ejkozapentaénsav-etil-észtert R butil-hidroxitoluol R trietilpentánnal készített oldatával (50 g/l) 0,0 l-re oldunk. Összehasonlító oldat (a 2 ). 60,0 g CRS dokozahexaénsav-etil-észtert, kb. 70,0 g belső standardot és 90,0 g CRS ejkozapentaénsav-etil-észtert R butilhidroxitoluol R trietilpentánnal készített oldatával (50 g/l) 0,0 l-re oldunk. Ha etil-észtereket vizsgálunk, akkor a továbbiakban az a) vizsgálati oldat. pontja szerint járunk el az a ) és a 2 ) referenciaoldat esetében egyaránt. Trigliceridek vizsgálata esetén az a) vizsgálati oldat B. pontjában leírtak szerint folytatjuk a vizsgálatot, olyódon, hogy inden egyes intából 3 oldatot készítünk. Összehasonlító oldat (b). R etil-palitát, R etil-sztearát, R etil-arachinát és R etil-behenát 0,3 0,3 g-jainak keverékét 0 l-es érőlobikban R butilhidroxitoluol R trietilpentánnal készített oldatával (50 g/l) 0,0 l-re oldjuk. Összehasonlító oldat (c). Egy kb. 55,0 g R dokozahexaénsav-etil-észterből és 5,0 g R tetrakoz-5-énsav-etil-észterből álló intát 0 l-es érőlobikban R butil-hidroxitoluol R trietilpentánnal készített oldatával (50 g/l) 0,0 l-re oldunk. Oszlop: anyaga: kvarc, éretei: l = legalább 25, Ø = 0,25, állófázis: kéiailag kötött R akrogol (filvastagsága 0,2 μ). Vivőgáz: R kroatográfiás célra szánt hidrogén vagy R kroatográfiás célra szánt héliu. Áralási sebesség: l/perc;

3 Oega-3-savakban gazdag zsíros olajok Ph.Hg.VIII. Ph.Eur Mintaára-elosztási arány: :200, vagy intaára elosztás nélkül hőérsékletszabályozással. Ilyenkor a inta-oldatokat injektálás előtt R butilhidroxitoluol R trietilpentánnal készített, 50 g/l töénységű oldatával kétszázszorosára kell hígítani. Hőérséklet: Idő (perc) Hőérséklet ( C) Oszlop ,7 25, Injektor 250 Detektor 270 Detektálás: lángionizáció. Injektálás: 2 μl. Rendszeralkalasság: a b) összehasonlító oldat kroatograján a százalékos csúcsterületnek a következő sorrendben kell növekednie: etil-palitát, etil-sztearát, etil-arachinát, etil-behenát; a etil-palitát és a etil-behenát csúcsterületei között a százalékos különbség kisebb legyen, int 2% területegység. csúcsfelbontás: legalább,2, a c) összehasonlító oldat kroatograján látható dokozahexaénsav-etil-észter és tetrakoz-5-énsav-etil-észter között. az a) vizsgálati oldat kroatograján a etil-trikozanoátnak, valaint a henejkozapentaénsav etil- ill. etil-észterének (C2:5) egfelelő csúcsok ha utóbbiak jelen vannak a b) vizsgálati oldat kroatograjával összehasonlítva jól különüljenek el egyástól (különben korrekciós faktort kell alkalazni). z EPS és a DHS százalékos ennyiségét a referenciaanyagokra egadott értékek figyelebevételével a következő összefüggés alapján száoljuk ki: 3 x 3 x, r x, r C 00 2 ahol

4 Oega-3-savakban gazdag zsíros olajok Ph.Hg.VIII. Ph.Eur = a belső standard töege az a) vizsgálati oldatban, illigraban, 2 = x,3 = x,3 = a inta töege az a) vizsgálati oldatban, illigraban, a belső standard töege az a ) összehasonlító oldatban (EPSeghatározás), ill. az a 2 ) összehasonlító oldatban (DHS-eghatározás), illigraban, a CRS ejkozapentaénsav-etil-észter, ill. a CRS dokozahexaénsav-etil-észter töege az a) összehasonlító oldatban, illigraban, x = az ejkozapentaénsav-észter, ill. a dokozahexaénsav-észter csúcsterülete az a) vizsgálati oldat kroatograján, x,r = az ejkozapentaénsav-észter csúcsterülete az a ) összehasonlító oldat kroatograján, ill. a dokozahexaénsav-észter csúcsterülete az a 2 ) összehasonlító oldat kroatograján. = a belső standard csúcsterülete az a) vizsgálati oldat kroatograján, x,3 = C = a belső standard csúcsterülete az a) összehasonlító oldat kroatograján, konverziós faktor az etil-észterek és a trigliceridek között, etil-észterekre C =,00, EPS-re C = 0,954, DHS-re C = 0,957. ÖSSZES OMEG-3-SV z EPS és a DHS tartali eghatározása alapján a következő összefüggés segítségével és a kroatograokon egjelenő csúcsokat azonosítva kiszáoljuk az összes oega-3-sav százalékos ennyiségét: EPS + DHS + n 3 ( ) EPS + DHS EPS + DHS, ahol EPS = az EPS százalékos ennyisége, DHS = a DHS százalékos ennyisége, n-3 = a C8:3 n-3, a C8:4 n-3, a C20:4 n-3, a C2:5 n-3 és a C22:5 n-3 észtereknek egfelelő csúcsterületek összege a b) vizsgálati oldat kroatograján, EPS = az EPS-észternek egfelelő csúcsterület a b) vizsgálati oldat kroatograján,

5 Oega-3-savakban gazdag zsíros olajok Ph.Hg.VIII. Ph.Eur DHS = a DHS-észternek egfelelő csúcsterület a b) vizsgálati oldat kroatograján.