QUANTA Lite TPO ELISA 708725 In Vitro diagnosztikai alkalmazásra CLIA Bonyolultság: magas

QUANTA Lite TPO ELISA 708725 In Vitro diagnosztikai alkalmazásra CLIA Bonyolultság: magas Javasolt alkalmazás QUANTA Lite TPO egy enzimmel kapcsolt immunoszorbens assay (ELISA) a thyreoid peroxidáz (TPO) autoantitestek szemi-kvantitatív kimutatására humán szérumban. A humán peroxidáz ellenes antitestek jelenléte felhasználható a klinikai adatokkal és más laboratóriumi vizsgálatok eredményével együtt az autoimmun thyreoidea betegségek, mint a Hashimoto thyreoiditis és a Graves betegség diagnosztikájában. A teszt összegzése és magyarázata Keringő thyreoidea ellenes autoantitestek kiterjedten felelőssé tehetők az autoimmun thyreoidea betegségek etiológiájában, és mind a thyreoglobulin mind pedig a microsoma antitestek meghatározása rutinszerűen történik a klinikai gyakorlatban. 1,2 Szérum autoantitestek a thyreoidea microsomalis antigén(ek) ellen általában megtalálhatók az autoimmun thyreoidea betegségekben, jelenlétük jól korrelál a Hashimoto thyreoiditisben észlelt hisztológiai eltérésekkel 3. A thyreoidea microsomalis antigének ellen irányuló autoantitestek meghatározása pozitív eredményt ad a krónikus thyreoiditisben szenvedő betegek 70-90%-ában. Ezek az antitestek megtalálhatók a primer hypothyreoidismus esetek 64%-ában, a thyreotoxicosis esetek 50%-ában, az egyszerű golyvás esetek 10%-ában és a thyreoid tumorok 17%-ában. 4 Thyreoglobulin autoantitesteket lehet kimutatni nagy titerrel, főleg autoimmun thyreoiditisben és Graves betegségben. Autoantitesteket találtak thyreoglobulin/kolloid ellen a krónikus thyreoiditises betegek 40-70%-ának szérumában és kisebb százalékban thyreotoxicosisban és nem toxikus golyvás betegekben. 5,6 Egyértelművé vált, hogy a thyreoidea microsomában található fő antigén egy enzim, a thyreoidea peroxidáz, vagy TPO 7. A tisztított TPO felhasználásávak létrehozott tesztek többféle előnnyel rendelkeznek a viszonylag durvább teljes microsoma preparátumokat alkalmazó assay rendszerekkel szemben, mivel ezek a preparátumok thyreoglobulint és más, még nem azonosított antigéneket is tartalmazhatnak. 8 Egy új tanulmány szerint az antitestek hasonló módon reagálnak a rekombináns humán pajzsmirigy peroxidázra és a szövetből tisztított natív TPO-ra (tireoperoxidázara, pajzsmirigy-peroxidázra). 9 A thyreoidea autoantitesteket klasszikusan precipitációs módszerekkel vizsgálták 10, latex fixációs 11 haemagglutinációs 12 és immunfluorescens eljárásokkal 13,14. Az újabb ELISA eljárások nemrégiben kerültek kifejlesztésre. 15-17 Ezek az ELISA módszerek a haemagglutinációnál vagy az immunfluorescenciánál is érzékenyebbnek bizonyultak 15,17 és ugyanakkor sokkal objektívebbek, és nincsenek kitéve az agglutinációt gátló faktorok 18 vagy a heterophil antitestek zavaró hatásának. Az ELISA technika, amit ebben a tesztben alkalmaznak érzékeny, specifikus és objektív. Egyaránt kényelmesen használható nagyobb vagy kisebb számú minta vizsgálatára. A módszer elve Tisztított rekombináns humán TPO antigén van kötve polisztirén mikrotiter lemez mérőedénykéinek falához olyan körülmények között, amelyek az antigén reaktív állapotát képesek megőrizni. Az előhígított kontrollokat és a hígított beteg-mintákat az egyes különálló mélyedésekbe töltjük, ahol a mintában esetleg jelen lévő microsomalis antitestek kikötődnek az edény falához rögzített antigénhez. A nem kötődött mintát mosással eltávolítjuk, és minden egyes mélyedésbe enzimmel kapcsolt anti-humán IgG konjugátumot adunk. A második inkubáció lehetővé teszi az enzimmel jelzett anti-humán IgG számára, hogy a vizsgált mintából származó, az első inkubáció során lekötött antitesthez kapcsolódjon, ha volt ilyen. Miután az enzimmel jelölt anti-humán IgG felesleget mosással eltávolítottuk, a rögzítve maradt enzim aktivitását kromogén szubsztrát hozzáadásával és a kialakult szín intenzitásának mérésével határozzuk meg. A teszt spektrofotometriával értékelhető oly módon, hogy a minta-edényekben kialakult szín intenzitását a kontrollokéhoz hasonlítjuk. 1. Reagensek Polisztirén mikrotiter ELISA lemez, tisztított rekombináns TPO antigénnel (12-1 x 8 mérőhely) bevonva, tartókerettel, szárítóbetétet tartalmazó fóliatasakba csomagolva. 2. ELISA Negatív Kontroll, 1 üveg puffer, tartósító anyagokat és humán szérumot tartalmaz, amelyben nincsenek humán thyreoidea peroxidáz I ellenes antitestek, előhígítva, 1.2mL 3. TPO ELISA Control (TPO pozitív kontroll), 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum thyreoidea peroxidáz antitestekkel, előhígítva, 1.2mL 4. TPO ELISA Kalibrátor A, 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum thyreoidea peroxidáz antitestekkel, előhígítva, 1.2mL 5. TPO ELISA Kalibrátor B, 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum thyreoidea peroxidáz antitestekkel, előhígítva, 1.2mL 6. TPO ELISA Kalibrátor C, 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum thyreoidea peroxidáz antitestekkel, előhígítva, 1.2mL TPO ELISA Kalibrátor D, 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum thyreoidea peroxidáz antitestekkel, előhígítva, 1.2mL 1

7. TPO ELISA Kalibrátor E, 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum thyreoidea peroxidáz antitestekkel, előhígítva, 1.2mL 8. HRP Minta Diluens, 1 üveg rózsaszínű, tartalma: konyhasó TRIS pufferrel, Tween 20, protein stabilizátorok és tartósító anyagok, 50mL 9. HRP Mosó Koncentrátum, 1 üveg 40x-es koncentrátum pirosra színezett, tartalma: konyhasó TRIS pufferrel és Tween 20, 25mL. A hígítási javaslatok a Módszer szakaszban találhatók. 10. HRP IgG Konjugátum, (kecske), anti-humán IgG, 1 üveg kékre színezett, puffert, protein stabilizátorokat és tartósító anyagokat tartalmaz, 10mL 11. TMB Kromogén, 1 üveg, stabilizátorokat tartalmaz, 10mL 12. HRP Stop (leállító) Oldat, 0.344M kénsav, 1 üveg színtelen, 10mL Veszélyforrások 1. FIGYELEM: Ez a termék olyan kémiai anyagot (0.02% chloramphenicol) tartalmaz a mintahígítóban, a kontrollokban és a konjugátumban, amelyet California államban rákkeltőként tartanak nyilván. 2. Az összes humán eredetű anyagot, amelyeket a kontrollok előállítása során felhasználtak ehhez a termékhez, ellenőrizték és negatívnak találták HIV, HBsAg, és HCV ellenes antitestekre nézve az FDA által jóváhagyott módszerekkel. Semmilyen teszt módszer nem tud azonban tökéletes biztonságot nyújtani arra nézve, hogy a termék mentes HIV, HBV, HCV vírusoktól, vagy más fertőző ágensektől. Éppen ezért, a TPO ELISA Pozitív Kontroll, a TPO ELISA kalibrátorok és az ELISA Negatív Kontroll potenciálisan fertőző anyagként kezelendő. 19 3. Nátrium azidot alkalmaztak az oldatok stabilizálására. A nátrium azid méreg, és lenyelve, vagy szemen, bőrön keresztül felszívódva toxikus lehet. A nátrium azid ezen kívül ólom vagy réztartalmú vízvezeték csövekkel reakcióba léphet, robbanásveszélyes fém-azid komplexet képezve. Ha a reagensek maradványait a vízvezeték rendszeren keresztül távolítja el, öblítse a medencét nagy mennyiségű vízzel az azid lerakódás megakadályozása céljából. 4. A HRP konjugátum egy híg mérgező/korrozív vegyszert tartalmaz, ami nagy mennyiségben elfogyasztva toxikus lehet. Az esetleges vegyi égési sérülés megelőzése érdekében vigyázzon, hogy az anyag bőrre, szembe ne kerülhessen. 5. A TMB Kromogén irritáló anyagot tartalmaz, ami belélegezve, lenyelve, vagy a bőrön keresztül felszívódva veszélyes lehet. A sérülések megelőzése érdekében kerülje az anyag belélegzését, elfogyasztását illetve a bőrre, szembe jutását. 6. A HRP Stop oldat hígított kénsav oldat. Ne tegye ki bázisok, fémek vagy más olyan anyagok hatásának, amelyek savakkal reakcióba lépnek. A kénsav mérgező és maró anyag, lenyelve toxikus lehet. Az esetleges vegyi égési sérülés megelőzése érdekében vigyázzon, hogy az anyag bőrre, szembe ne kerülhessen. 7. Használjon megfelelő személyi védőeszközöket a kitben található reagensekkel végzett műveletek során. 8. A kicsöppenő reagenseket azonnal fel kell takarítani. A hulladékok eltávolítása folyamán tartsa be az összes szövetségi, állami és helyi környezetvédelmi előírást. Az analitikai hibák megelőzését célzó figyelmeztetések 1. Ez a termék in vitro diagnosztikai alkalmazásra készült. 2. A rendszer egyes elemeinek helyettesítése más termékekkel az eredményeket meghamisíthatja. 3. Nem tökéletes vagy hatástalan mosás, és a folyadék elégtelen eltávolítása az ELISA csíkok edénykéiből nem megfelelő reprodukálhatóságot és/vagy magas hátteret okozhat. 4. Ennek a tesztnek az adaptációja automatikus mintakezelési rendszerek és más folyadék-kezelő eszközök használatához, teljes egészében vagy részleteiben, a teszt eredményeinek eltérését okozhatja attól, amit manuális módszerrel nyertek. Minden laboratóriumnak a saját felelőssége az általa alkalmazott automatizált rendszer validálása annak érdekében, hogy az eredmények elfogadható tartományon belül legyenek. 5. A teszt működését változatos tényezők befolyásolhatják. Ilyenek lehetnek a reagensek induló hőmérséklete, a környezeti hőmérséklet, a pipettázási technika pontossága és reprodukálhatósága, a mosás és a folyadékmaradványoknak az ELISA lemez edénykéiből történő eltávolításának az alapossága, az eredmények mérésére használt fotométer, és az assay kivitelezése során alkalmazott inkubációs idők tartama. Nagy gondot kell fordítani a következetességre annak érdekében, hogy a kapott eredmények megbízhatóak és reprodukálhatóak legyenek. 6. Javasoljuk, hogy a vizsgálat kivitelezése során szigorúan kövesse a protokollt. 7. A mikrotiter csíkokat és a szárító betéteket tartalmazó visszazárható tasakok tökéletlen lezárása az antigén degradációját és a teszt precizitásának romlását okozza. 8. A HRP konjugátumnak bizonyos idő-intervallumban két vagy több alkalommal történő használata ugyanabból az üvegből, elfogadhatatlanul alacsony abszorbancia értékeket eredményezhet. Fontos a HRP konjugátum kezelésére vonatkozó előírások pontos betartása az ilyen problémák megelőzése érdekében. 2

9. A HRP konjugátum kémiai szennyeződése következhet be az eszközök és műszerek nem megfelelő tisztítása miatt. Általánosan használt laboratóriumi vegyszerek, mint például a formalin, fehérítő szerek, alkohol vagy detergensek maradványai a HRP konjugátum lebomlását okozzák bizonyos idő után. Kémiai tisztítószerek vagy fertőtlenítő szerek használata után a készülékeket és eszközöket alaposan le kell öblíteni. Tárolási körülmények 1. A kit valamennyi reagensét tárolja 2-8 C között. Nem szabad fagyasztani a terméket. A reagensek az előírásoknak megfelelően kezelve és tárolva a feltüntetett lejárati időn belül stabilak. 2. A fel nem használt, antigénnel bevont mikrotiter csíkokat a szárítóbetéttel együtt biztonságosan vissza kell zárni a fóliatasakba, és 2-8 C között kell tárolni. 3. A hígított mosópuffer 2-8 C között tartva 1 hétig használható. A minta vétele és kezelése Ez az eljárás szérum minták vizsgálatára alkalmas. A vizsgálandó mintákhoz azidot vagy más tartósító anyagokat adni nem ajánlott, mert ezek torzíthatják az eredményeket. Mikrobiológiai szempontból szennyezett, hőkezelt, vagy látható csapadékot, szilárd részecskéket tartalmazó minta nem használható. Kerülje az erősen hemolizált vagy lipémiás minták használatát. Levétel után a szérumot az alvadéktól el kell választani. Az CLSI (korábban NCCLS) Document H18-A2 a minták tárolására a következő körülményeket javasolja: 1) Ne tartsa a mintákat 8 óránál hosszabb ideig szobahőmérsékleten. 2) Ha a vizsgálat nem végezhető el 8 órán belül, tartsa a mintákat hűtve, 2-8 C között. 3) Ha a teszt nem végezhető el 48 órán belül, vagy a minták szállítására van szükség, fagyassza és tárolja a mintákat -20 C-on vagy ennél alacsonyabb hőmérsékleten. A fagyasztott mintákat a kiolvasztás után és vizsgálat előtt alaposan fel kell keverni. A teszt kivitelezése A kitben rendelkezésre álló anyagok 1 TPO ELISA mikrotiter lemez, (12-1 x 8 mérőhely), tartókerettel 1 1.2mL ELISA Negatív Kontroll, előhígítva 1 1.2mL TPO ELISA pozitív kontroll előhígítva 1 1.2mL TPO ELISA Kalibrátor A előhígítva 1 1.2mL TPO ELISA Kalibrátor B előhígítva 1 1.2mL TPO ELISA Kalibrátor C előhígítva 1 1.2mL TPO ELISA Kalibrátor D előhígítva 1 1.2mL TPO ELISA Kalibrátor E előhígítva 1 50mL HRP Minta Diluens 1 25mL HRP Mosó Koncentrátum, 40x es koncentráció 1 10mL HRP IgG Konjugátum, (kecske), anti-humán IgG 1 10mL TMB Kromogén 1 10mL HRP Stop (leállító) Oldat, 0.344M Kénsav További szükséges anyagok a kiten kívül Mikropipetták 5, 100, 200-300, és 500µL beméréséhez Egyszer használatos mikropipetta-hegyek Tesztcsövek a betegek mintáinak hígításához, 4mL térfogattal Desztillált vagy ionmentesített víz 1L-es edény az HRP Mosó Koncentrátum hígításához Mikrotiter lemez leolvasó, ami képes az OD mérésére 450nm-en (és 620nm-en a két hullámhosszon történő leolvasáshoz) 3

Módszer Mielőtt hozzákezd: 1. Várjon, míg a minták és a reagensek elérik a szobahőmérsékletet (20-26 o C) és mindegyiket jól keverje meg. 2. Hígítsa a HRP Mosó Koncentrátumot 1:40 arányban, úgy, hogy a HRP Mosó Koncentrátumos üveg tartalmát 975mL desztillált vagy ionmentesített vízhez adja. Ha nem kerül a teljes lemez egyszerre feldolgozásra, kisebb mennyiséget is lehet hígítani: minden 16 felhasználandó mérőhely számára adjon 2 ml koncentrátumot 78 ml desztillált vagy ionmentesített vízhez. A hígított puffer 1 hétig stabil 2 8 C között tárolva. 3. Készítsen minden egyes beteg-mintából 1:101 arányú hígítást a következő módon: adjon 5µL mintát 500µL HRP minta diluenshez. A hígított mintákat 8 órán belül fel kell használni. NE HÍGÍTSA a TPO ELISA Kontrollt, a TPO ELISA Kalibrátorokat és az ELISA Negatív Kontrollt. 4. Az anti-tpo antitestek jelenlétének vagy hiányának tapasztalati egységben történő meghatározása céljából használjon minden egyes kontroll teszteléséhez két-két mérőhelyet, és a betegek mintának lemérésére egy vagy két mérőhelyet. Javasoljuk a betegek mintáiból is a párhuzamos (duplikált) meghatározásokat. 5. Standard görbe készítése. Az 5 pontos standard görbe pontjainak meghatározásához használja az ELŐHÍGÍTOTT TPO ELISA Kalibrátorokat A-tól E-ig közvetlenül a reagens-üvegből. Az öt pontos standard görbe értékei a következők: Pont A Előhígított TPO ELISA Kalibrátor A 1000.0 B Előhígított TPO ELISA Kalibrátor B 500.0 C Előhígított TPO ELISA Kalibrátor C 250.0 D Előhígított TPO ELISA Kalibrátor D 125.0 E Előhígított TPO ELISA Kalibrátor E 62.5 TPO WHO Egységek A módszer kivitelezése 1. VALAMENNYI REAGENSNEK EL KELL ÉRNIE A SZOBA HŐMÉRSÉKLETÉT (20-26 C) A VIZSGÁLAT MEGKEZDÉSE ELŐTT. Helyezze a szükséges számú mérőedénykét/csíkot a keretbe. A fel nem használt csíkokat haladéktalanul tegye vissza a szárítóbetétet tartalmazó fóliatasakba, és zárja vissza a tasakot biztonságosan, hogy a mérőhelyek minimális ideig legyenek kitéve a párásodás veszélyének. 2. Pipettázzon 100µL-t mind az előhígított TPO ELISA Kontrollból, a TPO ELISA Kalibrátorokból A-tól E-ig, az ELISA Negatív Kontrollból és a hígított beteg-mintákból a mérőedénykékbe. Fedje be a lemezeket, és inkubálja 30 percig szobahőmérsékleten, sima vízszintes felületen. Az inkubációs idő az utolsó minta bemérése után kezdődik. 3. Mosás: Gondosan szívja le minden egyes mérőedényke tartalmát. Adjon 200-300µL hígított HRP Mosó puffert minden egyes mérőhelyhez, majd ezt is szivassa ki. Ismételje az eljárást még kétszer, így végezzen el összesen három mosást. Fordítsa a lemezt nyílásokkal lefelé, és egy nedvszívó felületen finoman ütögetve távolítsa el tökéletesen az utolsó mosás után visszamaradt nedvesség nyomait az edénykékből. Nagyon fontos, hogy az edénykék minden egyes mosási lépés után tökéletesen ki legyenek ürítve. A leszíváskor tartsa be a minta felvitelekor alkalmazott sorrendet. 4. Adjon 100μL HRP IgG Konjugátumot minden egyes mérőhelyhez. A konjugátumot az eredeti reagens üvegből aszeptikus körülmények között és a helyes laboratóriumi eljárásnak megfelelően kell kivenni. Csak annyi konjugátumot vegyen ki az üvegből, amennyire a teszt kivitelezéséhez szüksége van. A POTENCIÁLIS MIKROBIOLÓGIAI ÉS/VAGY KÉMIAI SZENNYEZŐDÉS ELKERÜLÉSE ÉRDEKÉBEN SOHA NE TÖLTSE VISSZA A FEL NEM HASZNÁLT KONJUGÁTUMOT AZ ÜVEGBE. Inkubálja a lemezt 30 percig, mint a 2-ik lépésben. 5. Mosás: Ismételje a 3 lépést. 6. Adjon 100µL TMB kromogént minden egyes edénykébe, és inkubálja sötét helyen 30 percig szobahőmérsékleten. 7. Adjon 100µL HRP Stop oldatot minden mérőhelyre. Tartsa be a HRP Stop oldat adagolása alkalmával ugyanazt a tempót és sorrendet, amit a TMB kromogén bemérésekor használt. Óvatosan ütögesse meg ujjával a lemez oldalát, az edénykék tartalmának alapos összekeverése céljából. 8. Olvassa le minden egyes mérőhely abszorbancia (OD) értékét a reakció leállítását követő egy órán belül, 450 nm-en. Ha bikromatikus leolvasást igényel, referencia hullámhossznak a 620nm használható. 4

Minőség-ellenőrzés 1. A TPO ELISA Pozitív Kontroll, a TPO ELISA Kalibrátorok és az ELISA Negatív Kontroll minden egyes betegminta sorozattal együtt kell fusson, hogy ellenőrizhető legyen, hogy az összes reagens és az eljárás végrehajtása is kifogástalan volt a teszt kivitelezése folyamán. 2. Ne feledje, hogy mivel a TPO ELISA Pozitív Kontroll, a TPO ELISA Kalibrátorok és az ELISA Negatív Kontroll előhígítva kerülnek forgalomba, ezek nem kontrollálják a minta hígításával kapcsolatos előkészítési folyamatot. 3. Kiegészítő kontrollok vizsgálata is végezhető a helyi, állami és/vagy szövetségi rendelkezések, vagy az akkreditációs testületek ajánlásainak vagy elvárásainak megfelelően. Alkalmas kiegészítő kontroll szérum készíthető kevert humán szérum minták szétosztásával, és < -20 C-on történő tárolásával. 4. Annak érdekében, hogy a teszt eredményeit érvényesnek tekinthessük, valamennyi, alább felsorolt kritériumnak teljesülnie kell. Ha ezek közül bármelyik nem teljesül, a tesztet érvénytelennek kell tekinteni, és az eljárást meg kell ismételni. a. Az előhígított TPO ELISA Kalibrátor A abszorbanciája nagyobb kell, hogy legyen, mint az előhígított TPO ELISA Pozitív Kontroll abszorbanciája, és ez nagyobb kell legyen, mint az előhígított ELISA Negatív Kontroll abszorbanciája.b. Az előhígított TPO ELISA Kalibrátor A abszorbanciája 1.0-nél nagyobb kell legyen, míg az előhígított ELISA Negatív Kontroll abszorbanciája nem lehet nagyobb 0.2- nél. c. A TPO ELISA Pozitív Kontroll abszorbanciája több, mint kétszerese kell legyen az ELISA Negatív Kontroll abszorbanciájának, vagy legyen nagyobb, mint 0.25. d. A TPO ELISA Pozitív Kontroll koncentrációja az üveg címkéjén megadott tartományon belül kell legyen. e. A megfelelő QC eljárásokra vonatkozó további információkat az CLSI (korábban NCCLS) Document C24-A3 tartalmazza, ennek tanulmányozása ajánlott. Az eredmények kiszámítása 1. Határozza meg a párhuzamos minták OD értékeinek átlagát. 2. Ábrázolja a minták átlagos abszorbancia (OD) értékeit a standard görbén a megfelelő koncentrációk logaritmusával szemben. Használja az adatokhoz legjobban illeszkedő görbét, vagy a pontok összekötésével keletkező görbének megfelelő illesztési módszert a görbe megrajzolásához. Alternatív megoldásként log/log illesztés is használható. 3. Határozza meg az ismeretlen minták TPO koncentrációját Egység -ben (WHO Unit) az "X" tengelyen, úgy, hogy leolvassa a hozzá tartozó abszorbancia értéket az "Y" tengelyen. A kitben használt kalibrátorok és kontrollok értékeit a WHO-tól beszerezhető WHO referencia standardokhoz viszonyítva állapították meg. (WHO Reference Preparation MRC 66/387). 4. Negatív az eredmény 0-100 egység között. A 100 egységnél nagyobb érték esetén az eredmény pozitív. 5. A mérési határt meghaladó, vagyis az S1 standardénál nagyobb OD értéket mutató mintákat úgy lehet interpretálni, hogy az eredmény > 1000 egység. Alternatív megoldásként a mintát tovább lehet hígítani (pl. 1:2 és 1:4 arányban a HRP minta diluenssel) majd ismételten elvégezni a meghatározást, hogy az OD értéke a tesztnek a kalibrátorok által átfogott detektálási tartományába kerüljön. Alább egy tipikus standard görbe adatai láthatók példaként. Pont Átlag OD Koncentráció (WHO egység) A 1.577 1000.0 B 1.172 500.0 C 0.790 250.0 D 0.472 125.0 E 0.306 62.5 Az eredmények értelmezése Az ELISA assay a kivitelezési technikára nagyon érzékeny módszer, és képes a beteg-populációk között lévő igen kis különbségek érzékelésére. Az alábbi értékek csak tájékoztató jellegűek. Minden laboratóriumban meg kell határozni a saját referencia tartományokat, az aktuálisan használt technikával, kontrollokkal, eszközökkel, és a vizsgált beteg populációra jellemző módon, a helyi eljárási szabályoknak megfelelően. 1. A pozitív eredmény arra utal, hogy a mintában thyreoidea peroxidáz antitestek vannak, és felveti Hashimoto thyreoiditis és/vagy Graves betegség lehetőségét. 2. A negatív eredmény arra utal, hogy a betegnek nincs thyreoidea peroxidáz antitestje, vagy annak koncentrációja a teszt negatív küszöbe alatt van. 3. Javasoljuk, hogy a laboratórium által kiadott értékelés tartalmazza az alábbi meállapítást: Az itt következő eredmény az INOVA QUANTA Lite TPO ELISA használatával keletkezett. Más gyártók tesztjével kapott thyreoidea peroxidáz értékek ettől eltérőek lehetnek, váltakozva nem használhatók. A közölt IgG érték nagyságrendje nem vethető össze egy végpont-titer értékkel. 5

A módszer korlátai 1. Immunkomplexek és más immunglobulin aggregátumok jelenléte a mintában a nem-specifikus kötődés mértékét növelheti, és a teszt téves pozitivitását okozhatja. 2. Nem minden Hashimoto thyreoiditises beteg lesz pozitív microsomalis vagy TPO antitestre. 3. A teszt eredményeit minden esetben a klinikai adatokkal és más szerológiai vizsgálatok eredményével együtt kell értékelni. 4. A teszt működési jellemzői a szérumtól eltérő anyagok vizsgálatára nincsenek kidolgozva. Várható értékek Referencia tartomány Összesen 198 random normál mintát teszteltek. A vizsgált csoportban 104 férfi 20-tól 72 éves korig, és 94, 15-63 éves nő volt. Tizenegy minta, azaz 5.5% volt pozitív. Hat ebből a 11pozitív mintából nőtől, a többi öt férfitól származott. Hét a 11 pozitív normál mintából pozitív lett thyreoidea microsoma antitestre ELISA módszerrel, és/vagy egy másik kereskedelmi TPO ELISA eljárással vizsgálva. A normál férfi populáció átlagértéke 17 egység volt, míg egészséges nőkben ez az érték 36 egységnek adódott. Relatív szenzitivitás és specificitás A QUANTA Lite TPO ELISA alkalmasságát a thyreoid peroxidáz (TPO) autoantitestek detektálására egy másik, kereskedelmi forgalomban lévő TPO ELISA teszttel történt összehasonlítás alapján értékelték. Összesen 88 mintát vizsgáltak. Hatvankilenc minta a referencia laboratóriumba thyreoidea autoantitest vizsgálatra érkezett, emellett további 19 normál mintát is teszteltek. Az eredmények összefoglalása az alábbiakban látható: INOVA TPO + - + 62 7* Relatív Szenzitivitás 90.8% Referens TPO Relatív Specificitás 100.0% - 0 19 Relatív Hatékonyság 92.6% * Ezek közül a minták közül egy a normál populációból származott, négy pedig negatív volt mind az immunfluorescens, mind pedig az anti- thyreoidea microsoma ELISA módszerrel. Egy másik tanulmányban a QUANTA Lite TPO tesztet egy másik, a teljes humán thyreoidea microsoma ellenes autoantitestek detektálására alkalmas ELISA módszerrel hasonlították össze. Az eredmények összefoglalása: INOVA TPO + - + 47 15* Relatív Szenzitivitás 80.5% Microsoma ELISA Relatív Specificitás 92.7% - 17** 200 Relatív Hatékonyság 89.7% * 13 ebből a 15 mintából nagy koncentrációban tartalmazott thyreoglobulin antitestet ** 16 ebböl a 17 mintából a referens TPO ELISA módszerrel is pozitív lett. Egy harmadik tanulmányban a QUANTA Lite TPO ELISA tesztet egy indirekt immunfluorescens eljárással hasonlították össze, amelyikben főemlős thyreoidea metszeteket használnak szubsztrátként. Az eredmények összefoglalása: INOVA TPO + - + 19 0 Relatív Szenzitivitás 100% Indirekt Relatív Specificitás 81.5% Immunfluorescencia - 5* 17 Relatív Hatékonyság 89% * Mind az 5 minta pozitív volt a referencia TPO ELISA módszerrel is. Precizitás és reprodukálhatóság A teszt precizitását és reprodukálhatóságát egy negatív, egy mérsékelten pozitív és egy erősen pozitív mintából, mintánként hat párhuzamos méréssel határozták meg, hat elkülönülő analitikai sorban. Az erősen pozitív minta átlagértéke 815 egység, a mérsékelten pozitív 294 egység, a negatív minta eredménye pedig 53 egység volt. Az egyes mintákra jellemző standard deviáció és variációs koefficiens eredmények a következők: 6

Negatív Erősen pozitív Mérsékelten pozitív SD CV SD CV SD CV Összesített 6.0 11.1% 44.4 5.4% 28.3 9.6% Sorozaton belül 4.6 8.5% 33.5 4.1% 21.4 7.2% Sorozatok között 6.6 12.5% 45.2 5.5% 25.9 8.7% QUANTA Lite a törzskönyvezett védjegye INOVA Diagnostics, Inc. Hivatkozások 1. Davies TF and DeBernardo E. Thyroid autoantibodies and disease. In "Autoimmune Endocrine Disease", TF Davies, ed., Wiley, New York, NY, 1983, p. 127. 2. Wall JR and Kuroki T. Immunologic factors in thyroid disease. Medical Clinics of North America, 69: 913, 1985. 3. Hall R and Evered DC. Autoimmune thyroid disease: thyroiditis. In "Endocrinology", DeGroot LJ, et al., eds., Grune and Stratton, New York, NY, 1979, p. 461. 4. Delespesse G, et al. Thyroid autoimmunity. In Thyroiditis and Thyroid Function, Bastenie PA and Evans AM, eds., Pergamon Press, Oxford, 1972, p. 39. 5. Balfour BM, et al. Fluorescent antibody studies in human thyroiditis: autoantibodies to an antigen of the thyroid colloid distinct from thyroglobulin. Br J Exp Pathol, 43:307, 1961. 6. Tung KSK, et al. Antithyroid antibodies in juvenile lymphocytic thyroiditis. Am J Clin Pathol, 61: 549, 1974. 7. Kotani T, et al. Detection of autoantibodies to thyroid peroxidase in autoimmune thyroid diseases by micro-elisa and immunoblotting. J Clin Endrocrinol Metab, 62: 928, 1986. 8. Feldt-Rasmussen U. Analytical and clinical performance goals for testing autoantibodies to thyroperoxidase, thyroglobulin, and thyrotropin receptor. Clinical Chemistry, 42: 160, 1996. 9. Gut P, et al. Recombinant human thyroid peroxidase produced in insect cells has similar properties to native human thyroid peroxidase. Thyroid. 10:543-50, 2000 10. Doniach D and Roitt IM. Autoimmunity in Hashimoto's disease and its implications. J Clin Endocrinol Metab, 17: 1293, 1957. 11. Philip JR, et al. A latex particle precipitation test in the diagnosis of thyroid disease. J Clin Pathol, 15: 148, 1962. 12. Fulthorpe AJ, et al. A stable sheep cell preparation for detecting thyroglobulin auto-antibodies and its clinical applications. J Clin Pathol, 14: 654, 1961. 13. Holborrow J, et al. Cytoplasmic localization of complement-fixing auto-antigen in human thyroid epithelium. Br J Exp Pathol, 40: 583, 1959. 14. Doniach D. Thyroid autoimmune disease: symposium on thyroid gland. J Clin Pathol, 20: 385, 1966. 15. Ohwovoriole AE, et al. Improved ELISA for thyroid microsomal auto-antibodies, comparison with hemagglutination and immunofluorescent techniques. Int Arch Allergy Appl Immun, 86: 183, 1988. 16. Hoshijima Y, et al. A sensitive enzyme immunoassay for anti-thyroglobulin antibody using Fabhorseradish peroxidase conjugate. J Immunl Methods, 96: 121, 1987. 17. Roman SH, et al. Enzyme-linked immunosorbent microassay and hemagglutination compared for detection of thyroglobulin and thyroid microsomal autoantibodies. Clin Chem, 30: 246, 1984. 18. Wilkin TJ, et al. A passive hemagglutination (TRC) inhibitor in thyrotoxic serum. J Clin Endocrinol, 10: 507, 1979. 19. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories: Centers for Disease Control/National Institutes of Health, Fifth Edition, 2007. 7

A terméket előállítja: INOVA Diagnostics, Inc. 9900 Old Grove Road San Diego, CA 92131 United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : 877-829-4745 Technical Service (Outside the U.S.) : 00+ 1 858-805-7950 support@inovadx.com Forgalmazásra jogosult az EU területén: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert, Germany Tel.: +49-6894-581020 Fax.: +49-6894-581021 www.mt-procons.com 628725HUN November 2010 Revision 3 8