QUANTA Lite TM Histone In Vitro diagnosztikai alkalmazásra CLIA Bonyolultság: magas

Átírás

1 QUANTA Lite TM Histone In Vitro diagnosztikai alkalmazásra CLIA Bonyolultság: magas Javasolt alkalmazás QUANTA Lite TM Histone egy enzimmel kapcsolt immunoszorbens assay (ELISA) a hiszton antitestek szemi-kvantitatív kimutatására humán szérumban. A hiszton antitestek kimutatása felhasználható a klinikai adatokkal és más laboratóriumi vizsgálatokkal együtt a szisztémás lupus erythematosus (SLE), a gyógyszer-indukált SLE és más kötőszöveti betegségek, mint amilyen a rheumatoid arthritis, dermatomyositis és a Sjogren szindróma diagnosztikájában. A beteg hiszton antitest státuszának meghatározása hasznos lehet az SLE és a gyógyszer-indukált SLE elkülönítése érdekében végzett differenciál diagnosztikai eljárásban. A teszt összegzése és magyarázata Anti-hiszton antitestek megtalálhatók az SLE betegek 18-53%-ában. 1,2 A gyógyszer-indukálta lupusos páciensek megközelítőleg 95%-ában kimutatható a hiszton-autoantitest. Valójában ezek az antitestek a túlsúlyban lévő autoantitestek az ilyen típusú betegekben 1-5 míg idiopathiás SLE esetében a betegek szérumában a hiszton autoantitestek mellett egyéb autoantitestek variációival találkozunk. Az IgG osztályba tartozó hiszton autoantitestek SLE specifikusnak bizonyultak, míg az IgM típusú autoantitestek egészségesekben és néhány más betegségben is megtalálhatók. 1,6,7 Hiszton antitestek kimuatatására különböző módszerek vannak használatban, a legelterjedtebb az indirekt immunfluorescens eljárás. 5 Ez a módszer kissé körülményes, szubjektív, és nem minden hiszton-alcsoportot képes egyforma hatékonysággal detektálni. 8 Az újabb ELISA módszerek, amelyek nagy mértékben tisztított és definiált hiszton-alosztály antigéneket alkalmaznak, az immunfluorescens eljárás hátrányainak nagy részét elkerülik. Az ELISA módszer lehetővé teszi kicsi vagy nagy számú beteg kényelmes vizsgálatát, és lehetővé teszi bármely hiszton-ellenanyag vizsgálatát egy profil formájában, együttesen más specifikus antinuclearis antitestek ELISA vizsgálatával. A módszer elve Tisztított hiszton antigént rögzítenek egy mikrotiter lemez mérőedénykéinek belső falához olyan körülmények között, amelyek az antigén natív állapotát képesek megőrizni. Az előhígított kontrollokat és a hígított beteg-mintákat az egyes különálló mélyedésekbe töltjük, ahol a mintában esetleg jelen lévő hiszton antitestek kikötődnek az edény falához rögzített antigénhez. A nem kötődött mintát mosással eltávolítjuk, és minden egyes mélyedésbe enzimmel kapcsolt anti-humán IgG konjugátumot adunk. A második inkubáció lehetővé teszi az enzimmel jelzett anti-humán IgG számára, hogy a vizsgált mintából származó, az első inkubáció során lekötött antitesthez kapcsolódjon, ha volt ilyen. Miután az enzimmel jelölt anti-humán IgG felesleget mosással eltávolítottuk, a rögzítve maradt enzim aktivitását kromogén szubsztrát hozzáadásával és a kialakult szín intenzitásának mérésével határozzuk meg. A teszt spektrofotometriával értékelhető oly módon, hogy a minta-edényekben kialakult szín intenzitását a kontrollokéhoz hasonlítjuk. Reagensek 1. Polisztirén mikrotiter ELISA lemez, tisztított hiszton antigénnel (12-1 x 8 mérőhely) bevonva, tartókerettel, szárítóbetétet tartalmazó fóliatasakba csomagolva 2. ELISA Negatív Kontroll, 1 üveg puffer, tartósító anyagokat és humán szérumot tartalmaz, amelyben nincsenek humán anti-hiszton antitestek, előhígítva, 1.2mL 3. Histone ELISA Low Positive (Mérsékelten Pozitív Kontroll), 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum anti-hiszton antitestekkel, előhígítva, 1.2mL 4. Histone ELISA High Positive (Erősen Pozitív Kontroll), 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum anti-hiszton antitestekkel, előhígítva, 1.2mL 1

2 5. HRP Minta Diluens, 1 üveg rózsaszínű, tartalma: konyhasó TRIS pufferrel, Tween 20, protein stabilizátorok és tartósító anyagok, 50mL 6. HRP Mosó Koncentrátum, 1 üveg 40x-es koncentrátum pirosra színezett, tartalma: konyhasó TRIS pufferrel és Tween 20, 25mL. A hígítási javaslatok a Módszer szakaszban találhatók. 7. HRP IgG Konjugátum, (kecske), anti-humán IgG, 1 üveg kékre színezett, puffert, protein stabilizátorokat és tartósító anyagokat tartalmaz, 10mL 8. TMB Kromogén, 1 üveg, stabilizátorokat tartalmaz, 10mL 9. HRP Stop (leállító) Oldat, 0.344M kénsav, 1 üveg színtelen, 10mL Veszélyforrások 1. FIGYELEM: Ez a termék olyan kémiai anyagot (0.02% chloramphenicol) tartalmaz a mintahígítóban, a kontrollokban és a konjugátumban, amelyet California államban rákkeltőként tartanak nyilván. 2. Az összes humán eredetű anyagot, amelyeket a kontrollok előállítása során felhasználtak ehhez a termékhez, ellenőrizték és negatívnak találták HIV, HBsAg, és HCV ellenes antitestekre nézve az FDA által jóváhagyott módszerekkel. Semmilyen teszt módszer nem tud azonban tökéletes biztonságot nyújtani arra nézve, hogy a termék mentes HIV, HBV, HCV vírusoktól, vagy más fertőző ágensektől. Éppen ezért, a Histone ELISA Mérsékelten Pozitív Kontroll, a Histone ELISA Erősen Pozitív Kontroll és az ELISA Negatív Kontroll potenciálisan fertőző anyagként kezelendő Nátrium azidot alkalmaztak az oldatok stabilizálására. A nátrium azid méreg, és lenyelve, vagy szemen, bőrön keresztül felszívódva toxikus lehet. A nátrium azid ezen kívül ólom vagy réztartalmú vízvezeték csövekkel reakcióba léphet, robbanásveszélyes fém-azid komplexet képezve. Ha a reagensek maradványait a vízvezeték rendszeren keresztül távolítja el, öblítse a medencét nagy mennyiségű vízzel az azid lerakódás megakadályozása céljából. 4. A HRP konjugátum egy híg mérgező/korrozív vegyszert tartalmaz, ami nagy mennyiségben elfogyasztva toxikus lehet. Az esetleges vegyi égési sérülés megelőzése érdekében vigyázzon, hogy az anyag bőrre, szembe ne kerülhessen. 5. A TMB Kromogén irritáló anyagot tartalmaz, ami belélegezve, lenyelve, vagy a bőrön keresztül felszívódva veszélyes lehet. A sérülések megelőzése érdekében kerülje az anyag belélegzését, elfogyasztását illetve a bőrre, szembe jutását. 6. A HRP Stop oldat hígított kénsav oldat. Ne tegye ki bázisok, fémek vagy más olyan anyagok hatásának, amelyek savakkal reakcióba lépnek. A kénsav mérgező és maró anyag, lenyelve toxikus lehet. Az esetleges vegyi égési sérülés megelőzése érdekében vigyázzon, hogy az anyag bőrre, szembe ne kerülhessen. 7. Használjon megfelelő személyi védőeszközöket a kitben található reagensekkel végzett műveletek során. 8. A kicsöppenő reagenseket azonnal fel kell takarítani. A hulladékok eltávolítása folyamán tartsa be az összes szövetségi, állami és helyi környezetvédelmi előírást. Az analitikai hibák megelőzését célzó figyelmeztetések 1. Ez a termék in vitro diagnosztikai alkalmazásra készült. 2. A rendszer egyes elemeinek helyettesítése más termékekkel az eredményeket meghamisíthatja. 3. Nem tökéletes vagy hatástalan mosás, és a folyadék elégtelen eltávolítása az ELISA csíkok edénykéiből nem megfelelő reprodukálhatóságot és/vagy magas hátteret okozhat. 4. Ennek a tesztnek az adaptációja automatikus mintakezelési rendszerek és más folyadékkezelő eszközök használatához, teljes egészében vagy részleteiben, a teszt eredményeinek eltérését okozhatja attól, amit manuális módszerrel nyertek. Minden laboratóriumnak a saját felelőssége az általa alkalmazott automatizált rendszer validálása annak érdekében, hogy az eredmények elfogadható tartományon belül legyenek. 2

3 5. A teszt működését változatos tényezők befolyásolhatják. Ilyenek lehetnek a reagensek induló hőmérséklete, a környezeti hőmérséklet, a pipettázási technika pontossága és reprodukálhatósága, a mosás és a folyadék-maradványoknak az ELISA lemez edénykéiből történő eltávolításának az alapossága, az eredmények mérésére használt fotométer, és az assay kivitelezése során alkalmazott inkubációs idők tartama. Nagy gondot kell fordítani a következetességre annak érdekében, hogy a kapott eredmények megbízhatóak és reprodukálhatóak legyenek. 6. Javasoljuk, hogy a vizsgálat kivitelezése során szigorúan kövesse a protokollt. 7. A mikrotiter csíkokat és a szárító betéteket tartalmazó visszazárható tasakok tökéletlen lezárása az antigén degradációját és a teszt precizitásának romlását okozza. 8. A HRP konjugátumnak bizonyos idő-intervallumban két vagy több alkalommal történő használata ugyanabból az üvegből, elfogadhatatlanul alacsony abszorbancia értékeket eredményezhet. Fontos a HRP konjugátum kezelésére vonatkozó előírások pontos betartása az ilyen problémák megelőzése érdekében. 9. A HRP konjugátum kémiai szennyeződése következhet be az eszközök és műszerek nem megfelelő tisztítása miatt. Általánosan használt laboratóriumi vegyszerek, mint például a formalin, fehérítő szerek, alkohol vagy detergensek maradványai a HRP konjugátum lebomlását okozzák bizonyos idő után. Kémiai tisztítószerek vagy fertőtlenítő szerek használata után a készülékeket és eszközöket alaposan le kell öblíteni. Tárolási körülmények 1. A kit valamennyi reagensét tárolja 2-8 C között. Nem szabad fagyasztani a terméket. A reagensek az előírásoknak megfelelően kezelve és tárolva a feltüntetett lejárati időn belül stabilak. 2. A fel nem használt, antigénnel bevont mikrotiter csíkokat a szárítóbetéttel együtt biztonságosan vissza kell zárni a fóliatasakba, és 2-8 C között kell tárolni. 3. A hígított mosópuffer 2-8 C között tartva 1 hétig használható. A minta vétele és kezelése Ez az eljárás szérum minták vizsgálatára alkalmas. A vizsgálandó mintákhoz azidot vagy más tartósító anyagokat adni nem ajánlott, mert ezek torzíthatják az eredményeket. Mikrobiológiai szempontból szennyezett, hőkezelt, vagy látható csapadékot, szilárd részecskéket tartalmazó minta nem használható. Kerülje az erősen hemolizált vagy lipémiás minták használatát. Levétel után a szérumot az alvadéktól el kell választani. Az NCCLS Document H18-A3 a minták tárolására a következő körülményeket javasolja: 1) Ne tartsa a mintákat 8 óránál hosszabb ideig szobahőmérsékleten. 2) Ha a vizsgálat nem végezhető el 8 órán belül, tartsa a mintákat hűtve, 2-8 C között. 3) Ha a teszt nem végezhető el 48 órán belül, vagy a minták szállítására van szükség, fagyassza és tárolja a mintákat -20 C-on vagy ennél alacsonyabb hőmérsékleten. A fagyasztott mintákat a kiolvasztás után és vizsgálat előtt alaposan fel kell keverni. A teszt kivitelezése A kitben rendelkezésre álló anyagok 1 Histone ELISA mikrotiter lemez, (12-1 x 8 mérőhely), tartókerettel 1 1.2mL ELISA Negatív Kontroll, előhígítva 1 1.2mL Histone ELISA Mérsékelten Pozitív Kontroll előhígítva 1 1.2mL Histone ELISA Erősen Pozitív Kontroll előhígítva 1 50mL HRP Minta Diluens 1 25mL HRP Mosó Koncentrátum, 40x es koncentráció 1 10mL HRP IgG Konjugátum, (kecske), anti-humán IgG 1 10mL TMB Kromogén 1 10mL HRP Stop (leállító) Oldat, 0.344M Kénsav 3

4 További szükséges anyagok a kiten kívül Mikropipetták 5, 100, , és 500µL beméréséhez Egyszer használatos mikropipetta-hegyek Tesztcsövek a betegek mintáinak hígításához, 4mL térfogattal Desztillált vagy ionmentesített víz 1L-es edény az HRP Mosó Koncentrátum hígításához Mikrotiter lemez leolvasó, ami képes az OD mérésére 450nm-en (és 620nm-en a két hullámhosszon történő leolvasáshoz) Módszer Mielőtt hozzákezd: 1. Várjon, míg a minták és a reagensek elérik a szobahőmérsékletet (20-26 o C) és mindegyiket jól keverje meg. 2. Hígítsa a HRP Mosó Koncentrátumot 1:40 arányban, úgy, hogy a HRP Mosó Koncentrátumos üveg tartalmát 975mL desztillált vagy ionmentesített vízhez adja. Ha nem kerül a teljes lemez egyszerre feldolgozásra, kisebb mennyiséget is lehet hígítani: minden 16 felhasználandó mérőhely számára adjon 2 ml koncentrátumot 78 ml desztillált vagy ionmentesített vízhez. A hígított puffer 1 hétig stabil 2 8 C között tárolva. 3. Készítsen minden egyes beteg-mintából 1:101 arányú hígítást a következő módon: adjon 5µL mintát 500µL HRP minta diluenshez. A hígított mintákat 8 órán belül fel kell használni. NE HÍGÍTSA a Histone ELISA Mérsékelten Pozitív, a Histone ELISA Erősen Pozitív és az ELISA Negatív Kontrollt. 4. Az anti-hiszton antitestek jelenlétének vagy hiányának tapasztalati egységben történő meghatározása céljából használjon minden egyes kontroll teszteléséhez két-két mérőhelyet, és a betegek mintának lemérésére egy vagy két mérőhelyet. Javasoljuk a betegek mintáiból is a párhuzamos (duplikált) meghatározásokat. A módszer kivitelezése 1. VALAMENNYI REAGENSNEK EL KELL ÉRNIE A SZOBA HŐMÉRSÉKLETÉT (20-26 C) A VIZSGÁLAT MEGKEZDÉSE ELŐTT. Helyezze a szükséges számú mérőedénykét/csíkot a keretbe. A fel nem használt csíkokat haladéktalanul tegye vissza a szárítóbetétet tartalmazó fóliatasakba, és zárja vissza a tasakot biztonságosan, hogy a mérőhelyek minimális ideig legyenek kitéve a párásodás veszélyének. 2. Pipettázzon 100µL-t az előhígított Histone ELISA Mérsékelten Pozitív, a Histone ELISA Erősen Pozitív kontrollokból, az ELISA Negatív Kontrollból és a hígított beteg-mintákból a mérőedénykékbe. Fedje be a lemezeket, és inkubálja 30 percig szobahőmérsékleten, sima vízszintes felületen. Az inkubációs idő az utolsó minta bemérése után kezdődik. 3. Mosás: Gondosan szívja le minden egyes mérőedényke tartalmát. Adjon µL hígított HRP Mosó puffert minden egyes mérőhelyhez, majd ezt is szivassa ki. Ismételje az eljárást még kétszer, így végezzen el összesen három mosást. Fordítsa a lemezt nyílásokkal lefelé, és egy nedvszívó felületen finoman ütögetve távolítsa el tökéletesen az utolsó mosás után visszamaradt nedvesség nyomait az edénykékből. Nagyon fontos, hogy az edénykék minden egyes mosási lépés után tökéletesen ki legyenek ürítve. A leszíváskor tartsa be a minta felvitelekor alkalmazott sorrendet. 4. Adjon 100μL HRP IgG Konjugátumot minden egyes mérőhelyhez. A konjugátumot az eredeti reagens üvegből aszeptikus körülmények között és a helyes laboratóriumi eljárásnak megfelelően kell kivenni. Csak annyi konjugátumot vegyen ki az üvegből, amennyire a teszt kivitelezéséhez szüksége van. A POTENCIÁLIS MIKROBIOLÓGIAI ÉS/VAGY KÉMIAI SZENNYEZŐDÉS ELKERÜLÉSE ÉRDEKÉBEN SOHA NE TÖLTSE VISSZA A FEL NEM HASZNÁLT KONJUGÁTUMOT AZ ÜVEGBE. Inkubálja a lemezt 30 percig, mint a 2-ik lépésben. 4

5 5. Mosás: Ismételje a 3 lépést. 6. Adjon 100µL TMB kromogént minden egyes edénykébe, és inkubálja sötét helyen 30 percig szobahőmérsékleten. 7. Adjon 100µL HRP Stop oldatot minden mérőhelyre. Tartsa be a HRP Stop oldat adagolása alkalmával ugyanazt a tempót és sorrendet, amit a TMB kromogén bemérésekor használt. Óvatosan ütögesse meg ujjával a lemez oldalát, az edénykék tartalmának alapos összekeverése céljából. 8. Olvassa le minden egyes mérőhely abszorbancia (OD) értékét a reakció leállítását követő egy órán belül, 450 nm-en. Ha bikromatikus leolvasást igényel, referencia hullámhossznak a 620nm használható. Minőség-ellenőrzés 1. A Histone ELISA Mérsékelten Pozitív Kontroll, a Histone ELISA Erősen Pozitív Kontroll és az ELISA Negatív Kontroll minden egyes beteg-minta sorozattal együtt kell fusson, hogy ellenőrizhető legyen, hogy az összes reagens és az eljárás végrehajtása is kifogástalan volt a teszt kivitelezése folyamán. 2. Ne feledje, hogy mivel a Histone ELISA Mérsékelten Pozitív Kontroll, a Histone ELISA Erősen Pozitív Kontroll és az ELISA Negatív Kontroll előhígítva kerülnek forgalomba, ezek nem kontrollálják a minta hígításával kapcsolatos előkészítési folyamatot. 3. Kiegészítő kontrollok vizsgálata is végezhető a helyi, állami és/vagy szövetségi rendelkezések, vagy az akkreditációs testületek ajánlásainak vagy elvárásainak megfelelően. Alkalmas kiegészítő kontroll szérum készíthető kevert humán szérum minták szétosztásával, és < -20 C-on történő tárolásával. 4. Annak érdekében, hogy a teszt eredményeit érvényesnek tekinthessük, valamennyi, alább felsorolt kritériumnak teljesülnie kell. Ha ezek közül bármelyik nem teljesül, a tesztet érvénytelennek kell tekinteni, és az eljárást meg kell ismételni. a. Az előhígított Histone ELISA Erősen Pozitív Kontroll abszorbanciája nagyobb kell, hogy legyen, mint az előhígított Histone ELISA Mérsékelten Pozitív Kontroll abszorbanciája, és ez nagyobb kell legyen, mint az előhígított ELISA Negatív Kontroll abszorbanciája. b. Az előhígított Histone ELISA Erősen Pozitív Kontroll abszorbanciája 1.0-nél nagyobb kell legyen, míg az előhígított ELISA Negatív Kontroll abszorbanciája nem lehet nagyobb 0.2-nél. c. A Histone ELISA Mérsékelten Pozitív Kontroll abszorbanciája több, mint kétszerese kell legyen az ELISA Negatív Kontroll abszorbanciájának, vagy legyen nagyobb, mint d. Az ELISA Negatív Kontroll és a Histone ELISA Erősen Pozitív Kontroll a reagens minőségének jelentősebb eltérését kontrollálja. A Histone ELISA Erősen Pozitív Kontroll használata nem garantálja a precizitást az assay küszöb (cutoff) koncentrációja közelében. e. A megfelelő QC eljárásokra vonatkozó további információkat az NCCLS Document C24-A3 tartalmazza, ennek tanulmányozása ajánlott. Az eredmények kiszámítása Először határozza meg a párhuzamos minták OD értékeinek átlagát. Ezután kiszámítható az egyes minták reaktivitása úgy, hogy a minta OD átlagát elosztja a Histone ELISA Mérsékelten Pozitív Kontroll OD átlagával. Az eredményt megszorozza a Histone ELISA Mérsékelten Pozitív Kontroll címkéjén található egységek mérőszámával. 5

6 Minta OD Minta éretéke = x Histone ELISA Mérs. Pozitív Kontroll Histone ELISA Mérs.Poz.Kontroll OD (egység) (egység) A reaktivitás és a mintában lévő antitestek mennyisége között nem-lineáris kapcsolat van. Miközben a beteg antitest koncentrációjának növekedése és csökkenése a reaktivitás ezzel összefüggő növekedésében és csökkenésében mutatkozik meg, a változás nem lesz arányos (azaz, például a koncentráció kétszeresére nő, de a reaktivitás nem lesz kétszeres). Ha a beteg antitest koncentrációjának ennél pontosabb meghatározására van szükség, a beteg mintájának sorozatos hígítását kell tesztelni, és azt az utolsó hígítást tekintjük a beteg antitest titer értékének, ami még a tesztben pozitív eredményt adott. Az eredmények értelmezése Az ELISA assay a kivitelezési technikára nagyon érzékeny módszer, és képes a beteg-populációk között lévő igen kis különbségek érzékelésére. Az alábbi értékek csak tájékoztató jellegűek. Minden laboratóriumban meg kell határozni a saját referencia tartományokat, az aktuálisan használt technikával, kontrollokkal, eszközökkel, és a vizsgált beteg populációra jellemző módon, a helyi eljárási szabályoknak megfelelően. A mintákat az alábbi táblázat segítségével besorolhatjuk a negatív, gyengén pozitív, mérsékelten pozitív vagy erősen pozitív csoportba. Egység Negatív <1.0 Gyengén pozitív Mérsékelten pozitív Erősen pozitív > A pozitív eredmény arra utal, hogy a mintában Hiszton antitestek vannak, és felveti szisztémás lupus erythematosus (SLE), gyógyszer-indukálta SLE vagy rokon kötőszöveti betegség, mint a rheumatoid arthritis, dermatomyositis vagy Sjogren szindróma lehetőségét. 2. A negatív eredmény arra utal, hogy a betegnek nincs Hiszton antitestje, vagy annak koncentrációja a teszt negatív küszöbe alatt van. 3. Javasoljuk, hogy a laboratórium által kiadott értékelés tartalmazza az alábbi meállapítást: Az itt következő eredmény az INOVA QUANTA Lite TM Histone ELISA használatával keletkezett. Más gyártók tesztjével kapott anti-hiszton értékek ettől eltérőek lehetnek, váltakozva nem használhatók. A közölt IgG érték nagyságrendje nem vethető össze egy végpont-titer értékkel. A módszer korlátai 1. Immunkomplexek és más immunglobulin aggregátumok jelenléte a mintában a nemspecifikus kötődés mértékét növelheti, és a teszt téves pozitivitását okozhatja. 2. Nem minden SLE vagy gyógyszer-indukálta lupusos beteg lesz pozitív hiszton antitestre. 3. A teszt eredményeit minden esetben a klinikai adatokkal és más szerológiai vizsgálatok eredményével együtt kell értékelni. 4. A teszt működési jellemzői a szérumtól eltérő anyagok vizsgálatára nincsenek kidolgozva. 6

7 Várható értékek A QUANTA Lite TM Histone ELISA teszt alkalmasságát a hiszton antitestek detektálására egy kereskedelmi ELISA teszttel összehasonlítva értékelték. A másik ELISA teszt eredményeit a gyártó által mellékelt útbaigazítás alapján határozták meg. Referencia tartomány Százhat válogatás nélküli szérum mintát teszteltek a QUANTA Lite TM Histone ELISA kittel. Ezek között a minták között csak kettőben volt az arány egyenlő, vagy nagyobb, mint 1.0 (ennél az ELISA tesztnél a pozitivitás határa). Egy ezek közül a minták közül a referencia módszerrel is pozitív volt anti-hiszton antitestre, és két különböző indirekt immunfluorescens eljárással szintén pozitív volt, így ezt a mintát a normál populációból ki kellett emelni. A másik minta a referencia módszerrel negatív volt anti-hiszton antitestekre nézve és szintén negatív eredményt adott két különböző indirekt immunfluorescens vizsgálatban, így ez a minta benne maradt a normál populációban. Ez a téves pozitívnak tűnő minta 1.11 arányt adott, ami éppen meghaladja a pozitív küszöbértéket. A vizsgált populáció átlagértéke 0.16 volt, a standard deviáció A referencia tartomány a normál populációra 0.04-től 1.11-ig terjed. Ez a vizsgálat azt mutatja, hogy az átlagos normál minta értéke a küszöbérték alatt van 6.5 standard deviáció értékkel. Relatív szenzitivitás és specificitás Az assay relatív szenzitivitásának és specificitásának meghatározása céljából 42 mintát, ami anti-hiszton antitest meghatározásra érkezett, együtt vizsgálták az INOVA és egy másik ELISA módszerrel. A 42 mintából 14 volt pozitív és 28 negatív mindkét módszerrel. Nem volt láthatóan téves pozitív vagy téves negatív minta a referencia módszerrel összehasonlítva. INOVA Relatív Szenzitivitás 100% Referencia Módszer Relatív Specificitás 100% Relatív Hatékonyság 100% Precizitás és reprodukálhatóság Az assay precizitását és reprodukálhatóságát egy negatív, egy gyengén pozitív és egy erősen pozitív mintából végzett hat paralell méréssel tesztelték, négy különálló analitikai sorozatban. Az erősen pozitív minta átlagos értéke 3.42, a gyenge pozitív mintáé 1.34 és a negatív mintáé 0.28 volt. Az egyes mintákra jellemző standard deviációk és variációs együtthatók összefoglalását tartalmazza az alábbi táblázat: Negatív Erősen Pozitív Gyengén Pozitív SD CV SD CV SD CV Összesen % % % Sorozaton belül % % % Sorozatok között % % % Hivatkozások 1. Rubin RL, et. al.: Specificity of antihistone antibodies in systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum 25: 779, Klajman A, et. al.: The prevalence of antibodies to histone induced by procainamide in old people, in cancer patients and in rheumatoid like disease. Clin Immunol Immunopathol 27: 1, Biundo JJ and Cummings NA: Biochemical, hematologic and immunologic tests, Rheumatic Disease, 7

8 Diagnosis and Management. Edited by AW Katz, Philadelphia, JB Lippincott, p.265, Epstein A and Barland P: The diagnostic value of antihistone antibodies in drug-induced lupus erythematosus. Arthritis Rheum 28: 158, Fritzler MJ and Tan EM: Antibodies to histones in drug-induced and idiopathic lupus erythematosus. J Clin Invest 62: 560, Krippner H, et. al.: Antibodies to histones of the IgG and IgM class in systemic lupus erythematosus. Clin Exp Immunol 58: 49, Gockel S and Binder WL: Immunoglobulin class specificity of antihistone. Arthritis Rheum (suppl) 28: 558, Portanova JP, et. al.: Reactivity of anti-histone antibodies induced by procainamide and hydralazine. Clin Immunol Immunopathol 25: 67, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories: Centers for Disease Control/National Institutes of Health, Fifth Edition, A terméket előállítja: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Forgalmazásra jogosult az EU területén: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: Technical Service HUN February 2009 Revision 2 8