Kapilláris elektroforézis lehetőségei Szabó Zsófia Országos Gyógyintézeti Központ Immundiagnosztikai Osztály
Elektroforetikus elválasztás alapja: az oldott anyagok elektromos térben különböző sebességgel vándorolnak Kapilláris elektroforézis: az elválasztás puffer oldattal töltött kapillárisban történik Előnyei: -jófelbontás - rövid mérési idő - automatizálható (Gáspár A.: Kapilláris elektroforézis)
Elméleti áttekintés Elektromos térben az oldott anyagok különböző sebességgel vándorolnak, töltésüknek és tömegüknek megfelelően: kis méret, nagy töltés nagy mozgékonyság/gyors
Elméleti áttekintés Elektromos térben az oldott anyagok különböző sebességgel vándorolnak, töltésüknek és tömegüknek megfelelően: kis méret, nagy töltés nagy mozgékonyság/gyors nagy méret, kis töltés kis mozgékonyság/ lassú
elektroozmotikus áramlás (EOF) a kapilláris belső fala negatív szolvatált kationok rendeződnek a felület közelébe szolvatált kationok vándorolnak a negatív elektród felé, a többi részecskét is vonszolják magukkal (Gáspár A.: Kapilláris elektroforézis)
Különböző részecskék vándorlása a kapilláris elektroforézis során: Az áramlás hajtóereje egyenletesen oszlik el, következmény: lapos áramlási profil éles zónák: (az elekroozmotikus áramlás szabályozható, de a rutin laboratóriumban beállított, standard körülményeket alkalmazunk)
Detektálás: OD, λ = 200 nm - tükörkép - β1 és β2 frakció különválik - nagy felbontóképesség/ érzékenység Alfa-2: haptoglobin ceruloplasmin α2 macroglobulin α lipoprotein Béta2 β lipoprotein C3 complement CRP - normál tartomány (%): albumin: 55,8-66,1 alfa-1: 2,9-4,9 alfa-2: 7,1-11,8 béta (1+2): 8,4-13,1 gamma: 11,1-18,8 Albumin Alfa-1: Béta1 α1 antitrypsin transferinhemopexin orosomucoid α1 antichymotrypsin Gamma IgG, IgA, IgM, (IgD, IgE)
Albumin frakció: bisalbuminaemia Alfa-2: haptoglobin ceruloplasmin α2 macroglobulin α lipoprotein Béta2 β lipoprotein C3 complement CRP Albumin Alfa-1: Béta1 α1 antitrypsin transferinhemopexin orosomucoid α1 antichymotrypsin Gamma IgG, IgA, IgM, (IgD, IgE) albumin alfa-1 alfa-2 béta gamma
Alfa-1 és alfa-2 frakció gyulladás Alfa-2: haptoglobin ceruloplasmin α2 macroglobulin α lipoprotein Béta2 β lipoprotein C3 complement CRP Albumin Alfa-1: Béta1 α1 antitrypsin transferinhemopexin orosomucoid α1 antichymotrypsin Gamma IgG, IgA, IgM, (IgD, IgE)
Béta frakció monoclonalis komponens I. Alfa-2: haptoglobin ceruloplasmin α2 macroglobulin α lipoprotein Béta2 β lipoprotein C3 complement CRP Albumin Alfa-1: Béta1 α1 antitrypsin transferinhemopexin orosomucoid α1 antichymotrypsin Gamma IgG, IgA, IgM, (IgD, IgE)
Béta frakció monoclonalis komponens II. albumin alfa-1 alfa-2 béta gamma albumin alfa-1 alfa-2 béta gamma
Béta-gamma híd Alfa-2: haptoglobin ceruloplasmin α2 macroglobulin α lipoprotein Béta2 β lipoprotein C3 complement CRP Albumin Alfa-1: Béta1 α1 antitrypsin transferinhemopexin orosomucoid α1 antichymotrypsin Gamma IgG, IgA, IgM, (IgD, IgE)
Gamma frakció polyclonalis gamma szaporulat Alfa-2: haptoglobin ceruloplasmin α2 macroglobulin α lipoprotein Béta2 β lipoprotein C3 complement CRP Albumin Alfa-1: Béta1 α1 antitrypsin transferinhemopexin orosomucoid α1 antichymotrypsin Gamma IgG, IgA, IgM, (IgD, IgE)
Gamma frakció monoclonalis komponens? kapilláris elfo agaróz gél elfo
Gamma frakció monoclonalis komponens? kapilláris elfo agaróz gél elfo
Gamma frakció: monoclonalis komponens? követés M (monoklonális) komponens gyanú az elfo görbén, negatív immunfixáció (IF): Negatív elfo, negatív IF: M komponens gyanú az elfo-n, halvány homogén csík a IF-n: Homogén csík az elfo-n, homogén csík az IF-n:
Gamma frakció monoclonalis komponens quantitativ meghatározás Teljes kép!
Követés: 3 6 1 4 7 2 5 8
1 Gamma frakció monoclonalis komponens: azonoítás 4 2 5 3
Gamma frakció monoclonalis komponens!!! Monoclonalis szabad könnyűlánc kimutatásának problémája
Előnyök: nagy felbontóképesség M komponens mennyiségi meghatározása M komponens követése gyors, automatizált Kihívások: monoclonalis szabad könnyűlánc kimutatása vizelet elektroforézis
Köszönet Lovasi Lászlóné Barta Beáta