HAEMOKULTÚRA VIZSGÁLATOK JELENTİSÉGE AZ INFEKCIÓZUS KÓRKÉPEK MIKROBIOLÓGIAI DIAGNOSZTIKÁJÁBAN dr.gálffy Zsuzsanna SE ÁOK Transzplantációs és Sebészeti Klinika
A SEPSIS FOGALMA BAKTERIAEMIA:élı baktérium jelenléte a vérben SIRS /Systemic Inflammatory Response Syndrome / testhımérséklet <35 C, vagy > 38 C : pulzusszám > 90/ min: légzészám > 20/ min,vagy hyperventiláció fehérvérsejtszám < 4000/ mm³ vagy 12000/mm³ SEPSIS A SIRS-t mikrobiológiailag igazolt infekció idézi elı MODS Multiple Organ Dysfunction Syndrome
A bakteriaemia különbözı formái folyamatos szakaszos átmeneti áttöréses endodocarditis intravénás eszköz fertızés mintavétel ideje nem fontos mintavétel a hidegrázás kezdetekor /intermittáló obstrukció a fertızött epe és húgyuti rendszerben /. nem steril nyálkahártya felületen végzett manipuláció után pl. urológiai fogászati,gasztroenterológiai adekvát terápia mellett pozitív a HK pl- intraabdominális fertızés, diabetes mellitus
A sepsis etiológiája Antibiotikum éra elıtt: Gram pozitív baktériumok S.pneumoniae,S.pyogenes,S.aureus 1950-1980 Gram -negatív baktériumok 1995- Gram pozitív baktériumok kórházi fertızésekbıl MRSA, Staph.aureus vancomycin rezisztens Enterococcus Napjainkban 40-45 % Gram pozitív baktérium 50-60 % Gram negatív baktérium 3-5 % Gomba 10 % Anaerob 10-20 % polimikróbás
A sepsis patogenezise Valamilyen kórokozó kerül a véráramba baktérium, gomba, protozoon, vírus Vagy a mikroorganizmus felépítésében szerepet játszó anyag kerül a véráramba endotoxin peptidoglikán, candida mannánja
A sepsis patogenezise Nem közvetlenül idézik elı a sepsist, hanem endogén mediátorok fokozott termelését indítják el. tumor nekrózis faktor,-tnf interleukin Il-1,IL-6,IL-8 fagocita aktiváló faktor PAF
DIAGNÓZIS A sepsis korai felismerése és kezelése elengedhetetlenül fontos. 1. mőtét, orvosi beavatkozás 2 beültetett testidegen anyag 3. krónikus alapbetegség / pl. diabetes mellitus hajlamosít S.aureus,S. pneumoniae,e.coli sepsisre, cirrhosis hepatis Gram-negatív bakterialis sepsisre, és S.pneumoniae sepsisre hajlamosít 4. léphiány 5. csökkent védekezıképesség / gyakori a sepsis / 6. vese és epeúti obstrukció E.coli sepsisre hajlamosít 7. decubitus / polimikrobás /
A haemokultúra vétel indikációi 1. Akut bakteriális infekció okozta sepsis 2. Endocarditis 3. Véráramba vezetett idegen eszköz okozta sepsis gyanúja 4. Hirtelen állapotromlás / idısek, csecsemık, alapbetegségben szenvedık/ 5. Bármely ismeretlen eredető lázas állapot / FUO/
Mennyi vért kell venni, hogy biztosan megtaláljuk a kórokozót? Relativ eredmény 1: 10 ml +5 ml 2: 10 ml +10 ml Vér mennyisége ml Átlag baktérium szám 1 ml vérben bakterémia esetén: felnıtt <1 ; újszülött, csecsemı >5
Az optimális vérminta vétele láz esetén bakteriológiai tenyésztésre elhalt baktérium 38 o C élı baktérium gyulladásos sejt 37 o C lázgörbe
HAEMOKULTÚRA vizsgálat / A vér direkt bakteriológiai vizsgálata / Gyorsaság Gram festés Antigén kimutatás S.pneumoniae, S.pyogenes sarjadzó és penész gombák gyors RES vizsgálat PCR vizsgálatok
A haemokultúra vizsgálata /A vér direkt bakteriológiai vizsgálata / A gyorstesztek nem helyettesíthetik a hagyományos tenyésztési vizsgálatokat és a rezisztencia vizsgálatokat sem.csak tájékoztató jellegőek.
AZ EREDMÉNYEK KÖZLÉSE A POZITÍV HK eredményének közlése Gram festés Direkt RES vizsgálata A NEGATÍV eredmény közlése A palackok inkubálásának a végén adjuk ki Általában 5-7 nap
Az eredmények közlése VALÓDI POZITIVITÁS Klinikai szempontból a kórképet okozó baktérium tenyészett ki Bakteriológiai szempontból a palack jelzése pozitív, subkultúra is pozitív
Az eredmények közlése Valódi pozitivitás eldöntése klinikus feladata! Minden baktérium okozhat bakteriaemiat, infekciót. Enterobacteriaceae Nem fermentáló Gram negatív pálca / Pseudomonas sp. / Gram negatív anaerob pálca / Bacteroides sp./ Streptococcus ssp Staphylococcus aureus co-staphylococcus Sarjadzó gomba Penészgomba
HAMIS POZITIVITÁS hamis pozitív izolátum hamis pozitív HK VAK kioltás kontamináns a subkultúra steril / gondolni kell a lassan növı, vagy vmilyen kiegészítıt igénylı baktérium jelenlétére / a HK rendszer nem detektál Vagy ezt nem megvárva oltunk ki MEGFELELİ TÖLTÉS elıírás szerinti mennyiséget Befolyásolja a tenyésztés sikerét
Az eredmények közlése KONTAMINÁNS : A HK kitenyészett baktérium NEM a kórokozó származhat bırflórából, szennyezett tárgyról
KONTAMINÁCIÓ ismételt vérvétellel kiszőrhetı 1 HK több baktérium / de, pl. intraabdominalis folyamatnál lehet / hosszú inkubáció után lesz pozitiv
KONTAMINÁCIÓ MELLETT SZÓL A KLINIKAI KÉPET TEKINTVE: Ha:. nincs sepsis a kitenyészett baktériumra jellemzı primer góc hiányzik Opportunista infekcióra hajlamositó állapot hiányzik nincs idegentest infekció egyéb jeleinek hiánya / pl. procalcitonin, CRP hiánya/
Az eredmények közlése DE: Co- Staphylococcus Gram-pozitív pálca / aerob, anaerob a bır normál flórája, lehet kontamináns / A viridans Streptococcusok, Clostridium spp. Valódi kórokozó lehet. Co-Staphylococcus leggyakrabban izoláljuk!! 6-20 %-ban valódi kórokozó DE : idegen test, Mübillentyü Shunt, Dialízis katéter Intravascularis katéter Valódi kórokozó lehet.
Co-Staphylococcus valódi oka e a bakteriaemiának?? Különbözı idıpontokban levett HK azonos AB 48 órával a vérvétel után azonosítottuk a baktériumot IGEN
A haemokultúra eredményének értékelése A valódi pozitivitás eldöntéséhez a beteg kórtörténete, fizikális vizsgálata, testhıje, teljes- és qualitatív leukocytaszáma, a betegség lefolyásának ismerete kell.
A HAEMOKULTÚRA AUTOMATÁK HASZNÁLATÁNAK ELİNYEI gyorsaság egyszerőség kényelem folyamatos ellenırzés kontamináció csökkenése azonnali pozitivitás jelzés több minta egyidejő vizsgálata
Automata hemokultura rendszer Signal rendszer Hagyományos palackok
BD BACTEC
BacT/ALERT haemokultúra automata rendszer
Honnan vegyünk vért a HK palackba? - vacuténeres vérvételi rendszeren keresztül - perifériás vénából - aerob / anaerob palackba - esetleg gomba palackba - a palackra írt mennyiségő vért veszünk
Honnan NE vegyünk vért a HK palackba! infúzióra, vagy transzfúzióra használt vénából állandó vénakanülön át
BACTEC automata mőködési elve
BD BACTEC PLUS resin A rezin funkciói: Adszorbció révén közömbösíti az antibiotikumokat. A rezin gyöngyök mechanikus lizáló hatást fejtenek ki a vérsejtekre és a fagocitált mikroorganizmusok kiszabadulnak. A baktérium aggregátumok mechanikai desintegrációja
BDBACTEC TM Rezin táptalaj CH CH 2 CH CH 2 CH CH 2 CH CH 2 CH CH 2 SO - 3 H + SO - 3 H + CH CH 2 CH 2 CH CH 2 CH CH 2 Kation-cserélı polimer Nem-ionos polimer A kation-cserélı rezin az ionosan pozitív antibiotikumokat köti meg, mint az aminoglycosidok. A polimer adszorbens az antibiotikumok hidrofób regióit képesek megkötni Spaargaren et al. 1998, JCM;36,3731
BacT/ALERT mőködési elve
A POZITÍVITÁS FELISMERÉSÉRE SZOFTVER ALGORITMUSOK SZOLGÁLNAK akcelerációs algoritmus detektálja a megemelkedı CO2- termelést, ami az organizmus lag fázisból log fázisba való átmenetének idıszakára esik a növekedési algoritmus a folyamatosan emelkedı CO2 termelést detektálja,nı a mikroorganizmus mennyisége a küszöbérték detektálása azon alapszik, hogy az organizmus log fázist követıen egy stacioner fázisba kerül, miközben olyan mennyiségő CO2-t termel, amely meghalad egy bizonyos elıre meghatározott szintet, küszöbértéket
BACTEC BacT / ALERT Fluorescens kolorimetriás aerob aerob anaerob anaerob gomba gomba nincs Gyanta aktív szén Kationos ioncserélı gyanta antibiotikum aminoglikozidokat megköti / vér--lyzozim Polimer abszorbens gyanta transzferrin az antibiotikum hidrofób gammaglobulin részével kapcsolódik peroxidok Késleltetett funkció szobahın tároljuk 24-48 óra nincs
KÖSZÖNÖM A FIGYELMET!