Rendelési információk 04780248 190 (200 teszt) System-ID 07 6912 6 03304671 190 Preciset DAT Plus I CAL 1-6 (6 5 ml) 03304680 190 Preciset DAT Plus II CAL 1-6 (6 5 ml) 03304698 190 C.f.a.s. DAT Qualitative Plus (6 5 ml) 04590856 190 C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical (3 5 ml) 03312968 190 04500873 190 03312976 190 03312950 190 Control Set DAT II (100 ű vizsgálati eljáráshoz) PreciPos DAT Set II (2 10 ml) PreciNeg DAT Set II (2 10 ml) Control Set DAT Clinical (100 ű vizsgálati eljáráshoz) PreciPos DAT Clinical (2 10 ml) PreciNeg DAT Clinical (2 10 ml) Control Set DAT III (200 ű vizsgálati eljáráshoz) PreciPos DAT Set III (2 10 ml) PreciNeg DAT Set III (2 10 ml) Control Set DAT I (300 ű vizsgálati eljáráshoz) PreciPos DAT Set I (2 10 ml) PreciNeg DAT Set I (2 10 ml) Olyan analizátorok, amelyeken a cobas c csomag alkalmazható COBAS INTEGRA 400 plus COBAS INTEGRA 800 Magyar Rendszerinformáció Test BZ1S2, test ID 0 206 szemikvantitatív vizsgálati eljáráshoz, 100 Test BZ2S2, test ID 0 208 szemikvantitatív vizsgálati eljáráshoz, 200 Test BZ3S2, test ID 0 210 szemikvantitatív vizsgálati eljáráshoz, 300 Test BZ1Q2, test ID 0 207 kvalitatív vizsgálati eljáráshoz, 100 Test BZ2Q2, test ID 0 209 kvalitatív vizsgálati eljáráshoz, 200 Test BZ3Q2, test ID 0 211 kvalitatív vizsgálati eljáráshoz, 300 Test BZQ1C, test ID 0 412 kvalitatív vizsgálati eljáráshoz, 100 ; C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical kalibrátort alkalmaz Alkalmazás A Benzodiazepines II () in vitro diagnosztikiai vizsgálati eljárás a benzodiazepinek szemikvantitatív és kvalitatív kimutatására használható humán vizeletből, történt kalibráció esetén COBAS INTEGRA rendszereken 100, 200 és 300 kimutatási koncentráción. A szemikvantitatív vizsgálati eljárással mért eredmények lehetővé teszik, hogy a laboratóriumok a minőség-ellenőrzési programjuk keretében megállapítsák, helyesen működik-e a vizsgálati eljárás. A szemikvantitatív vizsgálati eljárások célja annak a hígítási aránynaknak a meghatározása, amely mellett érdemes valamely megerősítő eljárással (pl. gázkromatográfia-tömegspektrometria - GC/MS - vagy tandemtömegspektrometriával együtt alkalmazott folyadék-kromatográfia - LC/MS/MS) megerősítő mérést végezni. A Benzodiazepines II vizsgálati eljárás csak tájékoztató jellegű analitikai vizsgálati eredményt szolgáltat. Megerősített analitikai eredményt csak egy másik, pontosabb klinikai kémiai eljárás segítségével lehet kapni. A javasolt megerősítő eljárás a GC/MS vagy az LC/MS/MS. 1,2 A kábítószer-ellenőrzési vizsgálati eredmények kiértékelésénél - különösen a tájékoztató jelleggel pozitív eredmények esetén - klinikai megfontolásokra is szükség van, és ki kell kérni a szakemberek véleményét is. Összegzés A benzodiazepinek a központi idegrendszeri (KIR) depresszáns gyógyszerek változatos és széleskörűen alkalmazott csoportja; orvosilag hasznos szorongásoldó, szedatív, hipnotikus, izomlazító és görcsgátló hatásuk van. 1,2,3,4,5 Az egyes benzodiazepin származékok felszívódási sebessége, megoszlása, metabolizmusa és kiválasztódása jelentős mértékben eltérő. A hatásuk, farmakodinamikai sprektumuk és farmakokinetikai tulajdonságaik eltérése változatos kezelések alkalmazásását tesz lehetővé. A rövid- és a hosszútávú hatású benzodiazepinek klinikai jellegzetességei közti különbségek hatékonyságukban, mellékhatásaikban, valamint megvonási és függőségi potenciáljukban jelentkeznek. 3,6,7 A benzodiazepinek kiterjedt és eredményes alkalmazása az utóbbi néhány évtizedben óhatatlanul visszaélésekhez vezetett. A benzodiazepin-túladagolás gyakran társul más osztályba sorolható szerek együttes adagolásával. 8,9 Az akut vagy krónikus alkoholfogyasztás és a benzodiazepinek ezzel párhuzamos szedése különféle jelentős toxikológiai kölcsönhatásokhoz vezethet. A végső hatást belső, külső és farmakokinetikai tényezők egyaránt befolyásolhatják. Visszaélés viszonylag alacsony benzodiazepin-adagok és nagydózisú túlhasználat mellett egyaránt előfordulhat; ezért a vizeletből történő gyógyszer/metabolit kimutatáshoz olyan alkalmazására van szükség, amely megfelel a kábítószer-ellenőrzési program követelményeinek. A bevételt követően az 1,4 szubsztituált osztályba sorolt benzodiazepinek (köztük a triazolol-benzodiazepin származékok) - mint különféle szerkezetileg rokon metabolitok - eltérő arányban szívódnak fel, metabolizálódnak és választódnak ki a vizeletbe. A metabolitok változékonysága az egyes gyógyszerek rendkívül eltérő fizio-kémiai tulajdonságaiban és metabolizmus-útjában is megnyilvánul. A metabolizmus teljes hasonlósága kiterjed a szubsztituenseknek az 1,4 szubsztituált benzodiazepinek β gyűrűjéből történő kivételére, a triazolol-benzodiazepinek α hidroxilációjára, a demetilációra, a β gyűrű hármas pozíciójában lévő szénatom hidroxilációjára és a hidroxilált metabolitok konjugációjára, amelyet a vizeletbe - főleg glükuronidként történő - kiválasztás követ. 1,2,3,4,5 A glükuronizált benzodiazepinek enzimatikus hidrolízise fokozhatja azok keresztreaktivitását a benzodiazepin immunkémiai vizsgálati eljárásokkal. 10,11,12,13,14 A vizsgálati eljárás alapelve Az oldatban lévő mikroszemcsék közötti kinetikus kölcsönhatás (KIMS) 11,15, amely a fényáteresztés változásával mérhető. Ha nincs a mintában szer, akkor a szabad antitest megköti a szermikroszemcse konjugátumot, így szemcse-aggregátumok jönnek létre. Ha egy vizeletminta tartalmazza a kérdéses szert, akkor ez versenyzik a szemcsén megkötött szerszármazékkal a szabad antitestért. Ha az antitest a mintában lévő szerhez kötődik, akkor nem tud szemcse-aggregátumot létrehozni, és így abból szemcserács sem képződhet. Minél kevesebb szer van a mintában, annál jobban fejlődik ki az aggregációs folyamat, és nő meg az abszorbancia. Viszont minél nagyobb a mintában a kábítószer koncentráció, annál inkább csökken a mintában az abszorbancia növekedése. A minta szertartalmát a vizsgálati eljárás a szer egy ismert -koncentrációján mért értékkel összehasonlítva határozza meg. A β glükuronidáz enzim jelenléte javítja a Benzodiazepines II vizsgálati eljárás keresztreaktivitását egyes glükuronidos metabolitokkal. 1 / 9
Reagensek - munkaoldatok R1 SR Mikrorészecske reagens Konjugált benzodiazepin-származék mikroszemcsék pufferben és 0.09 -os nátrium-azid. Antitest reagens Benzodiazepinek antitest (poliklonális birka) pufferben β glükuronidáz enzimmel, marha szérumalbuminnal (BSA) és 0.09 -os nátrium-aziddal. Az R1 reagens a B, az SR reagens a C pozíción van. Óvintézkedések és figyelmeztetések Ügyeljenek az Eljárás kézikönyv 1. részében (Bevezetés) ismertetett óvintézkedések és figyelmeztetések betartására. A reagensek kezelése COBAS INTEGRA 400 plus analizátor Mielőtt feltennék az analizátorra, minden gyárilag új (fel nem szúrt) cobas c csomagot a kazettakeverőn 1 percen keresztül keverni kell. Mindegyik használatban lévő cobas c csomagot is ugyanígy meg kell keverni a hét elején (hetente egyszer). COBAS INTEGRA 800 analizátor Felhasználásra kész. A cobas c csomag felszúrása után a készülék 1 percen át, a nap elején végrehajtott karbantartási műveletsor keretében pedig fél percen át automatikusan megkeveri a reagenst. Tárolás és eltarthatóság Felnyitatlanul 2 8 C-on: COBAS INTEGRA 400 plus analizátor A készüléken, 10 15 C-on COBAS INTEGRA 800 analizátor A készüléken 8 C-on A lejárati dátum a cobas c csomagcímkén van feltüntetve 12 hét 12 hét A reagenseket nem szabad lefagyasztani. A már lefagyasztott reagenseket ki kell dobni. Mintagyűjtés és -előkészítés Csak az alábbi mintatípusokat vizsgálták meg, és találták elfogadhatónak. Vizelet: A vizeletmintákat tiszta üveg- vagy műanyag-tárolóedényekbe kell gyűjteni. Friss vizeletmintáknál nincs szükség előkezelésre vagy valamilyen speciális kezelésre, de törekedni kell arra, hogy a pipettázott minták mentesek legyenek a nagyobb törmelékektől. A mintáknak az 5 és 8 közötti normál fiziológiai ph tartományba kell esniük. Adalékanyag vagy tartósítószer alkalmazására nincs szükség. Azt javasoljuk, hogy a vizeletmintákat tárolják 2 8 C on, és az analízisüket a gyűjtést követő 5 napon belül végezzék el. 16 A nagyon zavaros mintákat a vizsgálat előtt le kell centrifugálni. A minták meghamisítása vagy meghígítása hibás eredményt okozhat. Ha felmerül a hamisítás gyanúja, akkor másik mintát kell gyűjteni. A Szövetségi Munkahelyi Drogteszt Programokra Vonatkozó Kötelező Irányelvek (Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs) hatálya alatt gyűjtött mintáknál érvényesség-ellenőrzésre van szükség. 17 Figyelem! A hígított minták csak a GC/MC ill. az LC/MS/MS eljárást előkészítő becslésre használhatók, és nem használhatók betegértékek meghatározására. A meghígított minták alkalmazásával végezni kívánt eljárásokat validálni kell. A gyártó által biztosított anyagok A reagenseket lásd a "Reagensek - munkaoldatok" c. részben. A vizsgálat elvégzése Az optimális vizsgálati teljesítmény elérése érdekében a jelen dokumentumnak az érintett analizátorra vonatkozó előírásai szerint kell eljárni. A vizsgálatra vonatkozó analizátor specifikus előírásokat a megfelelő felhasználói kézikönyv tartalmazza. Vizelet alkalmazások COBAS INTEGRA 400 plus teszt-definíció Szemikvantitatív Kvalitatív Measuring mode Absorbance Absorbance Abs. calculation mode Endpoint Endpoint Reaction mode R1-S-SR R1-S-SR Reaction direction Increase Increase Reaction start SR SR Wavelength A 552 nm 552 nm Test range utóhígítás esetén BZ1S2, BZ2S2 BZ1S2 0-1000 0-5500 BZ1Q2, BZQ1C BZ2S2 0-1000 0-2750 BZ2Q2 BZ3S2 0-3000 0-5750 BZ3Q2 BZ3S2 0-10000 0-30000 Postdilution factor 10 (ajánlott érték)* No Calc. first/last 34/62 34/62 Unit *GC/MC ill. LC/MS/MS analízis esetén alkalmazandó a koncentráció értékelésére. Pipetting parameters BZ1S2, BZ2S2, BZ1Q2, BZ2Q2, BZQ1C Diluent (H 2 O) R1 45 µl 0 µl Sample 7 µl 10 µl SR 100 µl 0 µl Total volume 162 µl BZ3S2, BZ3Q2 Diluent (H 2 O) R1 45 µl 0 µl Sample 2.5 µl 10 µl SR 100 µl 0 µl Total volume 157.5 µl COBAS INTEGRA 800 teszt-definició Szemikvantitatív Kvalitatív Measuring mode Absorbance Absorbance Abs. calculation mode Endpoint Endpoint Reaction mode R1-S-SR R1-S-SR Reaction direction Increase Increase Reaction start SR SR Wavelength A 552 nm 552 nm Test range utóhígítás esetén BZ1S2, BZ2S2 BZ1S2 0-1000 0-5500 BZ1Q2, BZQ1C BZ2S2 0-1000 0-2750 BZ2Q2 BZ3S2 0-3000 0-5750 BZ3Q2 BZ3S2 0-10000 0-30000 Postdilution factor 10 (ajánlott érték)* No Calc. first/last 45/95 45/95 Unit *GC/MC ill. LC/MS/MS analízis esetén alkalmazandó a koncentráció értékelésére. 2 / 9
Pipetting parameters BZ1S2, BZ2S2, BZ1Q2, BZ2Q2,BZQ1C Diluent (H 2 O) R1 45 µl 0 µl Sample 7 µl 10 µl SR 100 µl 0 µl Total volume 162 µl BZ3S2, BZ3Q2 Diluent (H 2 O) R1 45 µl 0 µl Sample 2.5 µl 10 µl SR 100 µl 0 µl Total volume 157.5 µl Kalibráció Kalibrátorok BZ1S2, 0-206; BZ2S2, 0-208 Szemikvantitatív alkalmazások Preciset DAT Plus II kalibrátorok, CAL 1-6 0, 50, 100, 200, 400, 1000 nordiazepam (100-as és 200-as, DATS8, system ID 07 6796 4) BZ3S2, 0 210 Preciset DAT Plus I kalibrátorok, CAL 1-6 0, 150, 300, 600, 1000, 3000 nordiazepam (300-as, DATS2, system ID 07 6764 6) Kvalitatív alkalmazások BZ1Q2, 0-207 Preciset DAT Plus II kalibrátorok, CAL 1 0 vagy ionmentes víz és Preciset DAT Plus II kalibrátorok, CAL 3 100 (100-as, DATQ3, system ID 07 6770 0) Kvalitatív alkalmazások esetén a 100 -es hez az 1000-es érték van hozzárendelve. BZ2Q2, 0-209 Preciset DAT Plus II kalibrátorok, CAL 1 0 vagy ionmentes víz és Preciset DAT Plus II kalibrátorok, CAL 4 200 (200-as, DATQ4, system ID 07 6794 8) Kvalitatív alkalmazások esetén a 200 -es hez az 1000-es érték van hozzárendelve. BZ3Q2, 0-211 Preciset DAT Plus I kalibrátorok, CAL 1 0 vagy ionmentes víz és C.f.a.s. DAT Qualitative Plus 300 (300-as, DATQ1, system ID 07 6744 1) Kvalitatív alkalmazások esetén a 300 -es hez az 1000-es érték van hozzárendelve. Kalibráció módja Kalibráció ismétlése BZQ1C, 0-412 Kalibráció gyakorisága Preciset DAT Plus I vagy II kalibrátorok, CAL 1 0 vagy ionmentes víz és C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical 100 (100-as, DATQ5, system ID 07 6880 4) Kvalitatív alkalmazások esetén a 100 -es hez az 1000-es érték van hozzárendelve. Szemikvantitatív alkalmazások Logit/Log 4 Kvalitatív alkalmazások Lineáris regresszió Ismétlés javasolt COBAS INTEGRA 400 plus analizátor: Új lot esetén, 28 naponta és minőségellenőrzési eljárások után szükség szerint COBAS INTEGRA 800 analizátor: Új lot esetén, 28 naponta és minőségellenőrzési eljárások után szükség szerint A kalibrációs görbét a kalibrátorok segítségével lehet generálni. A kalibrátorokat úgy kell a CAL/QC állványra helyezni, hogy a legmagasabb koncentrációjú az első, a legalacsonyabb koncentrációjú pedig az utolsó helyre kerüljön. Ezt a görbét a COBAS INTEGRA rendszerek a későbbi mérésekhez a memóriájukban tárolják. Visszavezethetőség: Ezt az eljárást egy primer referencia-eljárással (GC/MS) szemben hitelesítették. Minőség-ellenőrzés Minőség-ellenőrzés 100 200 300 Kontrollok sorrendje Control Set DAT II PreciPos DAT Set II (DAT2P, system ID 07 6771 9) PreciNeg DAT Set II (DAT2N, system ID 07 6772 7) vagy Control Set DAT Clinical PreciPos DAT Clinical (DATCP, system ID 07 6879 0) PreciNeg DAT Clinical (DATCN, system ID 07 6878 2) Control Set DAT III PreciPos DAT Set III (DAT3P, system ID 07 6773 5) PreciNeg DAT Set III (DAT3N, system-id 07 6774 3) Control Set DAT I PreciPos DAT Set I (DAT1P, system-id 07 6753 0) PreciNeg DAT Set I (DAT1N, system-id 07 6754 9) A felhasználó határozza meg 3 / 9
Kalibráció utáni kontroll Ajánlott Minőség-ellenőrzésre a "Rendelési információk" c. részben felsorolt kontrollanyagokat lehet alkalmazni. Ezeken kívül más megfelelő kontrollanyagok is alkalmazhatók. A Control Set DAT I, II, III és Clinical kontrollok hatóanyag-koncentrációit a GC/MS eljárással ellenőrizték. A kontrollmérések gyakoriságát és a kontrollmérési határértékeket az adott laboratórium egyedi igényeinek megfelelően kell megállapítani. A mért értékeknek a megadott értékhatárokon belülre kell esniük. Minden laboratóriumnak javító intézkedéseket kell meghatároznia arra az esetre, ha a mért értékek kívül esnek a megadott tartományon. A vonatkozó központi és helyi minőség-ellenőrzési előírásokat és irányelveket kell alkalmazni. A COBAS INTEGRA rendszerek az alábbi jelzésekkel adják ki az eredményeket: Szemikvantitatív eredmény kiadása BZ1S2 (100 ) Nincs hibajelzés Negatív < 100 <TEST RNG Negatív < 0 >TEST RNG Pozitív > 1000 POS 100 Pozitív 100 A fenti értéktartományok a 100 észlelési en alapulnak. BZ2S2 (200 ) Nincs hibajelzés Negatív < 200 <TEST RNG Negatív < 0 >TEST RNG Pozitív > 1000 POS 200 Pozitív 200 A fenti értéktartományok a 200 észlelési en alapulnak. BZ3S2 (300 ) Nincs hibajelzés Negatív < 300 <TEST RNG Negatív < 0 >TEST RNG Pozitív > 3000 POS 300 Pozitív 300 A fenti értéktartományok a 300 észlelési en alapulnak. Kvalitatív eredmény kiadása BZ1Q2, BZQ1C (100 ) Nincs hibajelzés Negatív < 1000 <TEST RNG Negatív < 0 >TEST RNG Pozitív > 5500 POS 1000 Pozitív 1000 A fenti értéktartományok azon alapulnak, hogy a 100 -es hez az 1000-es érték van hozzárendelve. BZ2Q2 (200 ) Nincs hibajelzés Negatív < 1000 <TEST RNG Negatív < 0 >TEST RNG Pozitív > 2750 POS 1000 Pozitív 1000 A fenti értéktartományok azon alapulnak, hogy a 200 -es hez az 1000-es érték van hozzárendelve. BZ3Q2 (300 ) Nincs hibajelzés Negatív < 1000 <TEST RNG Negatív < 0 >TEST RNG Pozitív > 5750 POS 1000 Pozitív 1000 A fenti értéktartományok azon alapulnak, hogy a 300 -es hez az 1000-es érték van hozzárendelve. Szemikvantitatív eredmény kiadása A szemikvantitatív eljárással mért tájékoztató jelleggel pozitív eredmény számértékét a laboratóriumok csak a megerősítő eljárással (pl. GC/MS vagy LC/MS/MS) elvégzendő mérésnél alkalmazandó mintahígítási arány meghatározására használhatják fel. Ezek az értékek azt is lehetővé teszik, hogy a segítségükkel a laboratóriumok minőség-ellenőrzési eljárásokat hozzanak létre, és megállapítsák, helyesen működnek-e a kontrollmérések. Megjegyzés: Az utóhígítási szolgáltatás (1:10 arányú hígítás) alkalmazása esetén a minta túlhígításának elkerülése érdekében a meghígított mintából mért eredménynek el kell érnie az analit 10-szeresének felét. Ha a meghígított mintából mért eredmény kevesebb az analit 10-szeresének felénél, akkor kisebb hígítás alkalmazásával meg kell ismételni a mérést. Az a hígítás adja a legpontosabb értéket, amelynél az eredmény a legközelebb esik az analit hez. A tájékoztató jelleggel pozitív minták becsült koncentrációjának kiszámításához a mért eredményt meg kell szorozni az alkalmazott hígítási tényezővel. Hígításokat csak becslésként lehet alkalmazni a GC/MS ill. az LC/MS/MS eljárás előkészítéséhez. Korlátozások - interferencia A vizsgálati eljárással megvizsgált anyagokra vonatkozó adatokat lásd a jelen dokumentum "Specifikus teljesítmény-adatok" című részében. Előfordulhat, hogy más anyagok és/vagy tényezők (pl. technikai vagy eljárási hibák) is hatással vannak a vizsgálatra, és hibás eredményt okoznak. A vizsgálati eljárással kimutatott tájékoztató jelleggel pozitív eredmény azt jelzi, hogy a vizeletben benzodiazepinek és/vagy azok metabolitjai találhatók. A kábítószer-fogyasztás mértékét a vizsgálati eljárás nem tudja megállapítani. Diagnosztikai célokra az eredményeket mindig a beteg kórtörténetével, klinikai vizsgálataival és egyéb leleteivel együtt kell értelmezni. Küszöbérték 25 és +25 koncentrációban nordiazepamot tartalmazó vizelethez az alábbiakban feltüntetett koncentrációban adtak hozzá interferáló anyagokat. A mintákat COBAS INTEGRA 800 analizátoron vizsgálták, és az alábbi eredményeket kapták. Ugyanezt a kísérletet elvégezték kvalitatív üzemmódban mindegyik re. Az összes negatív és tájékoztató jelleggel pozitív mintán az interferáló anyagok jelenlétében is megfelelően reprodukált eredményt mértek. Vegyület Szemikvantitatív () Vegy. konc. Aceton 1 Aszkorbinsav Konjugált bilirubin Kreatinin 1.5 0.25 mg/ml 5 mg/ml 100 Neg. 77 74 71 78 Poz. 134 125 113 130 200 Neg. 150 149 139 149 Poz. 251 250 226 249 300 Neg. 228 226 216 231 Poz. 393 386 375 383 4 / 9
Etanol 1 Glükóz Hemoglobin Humán szérum albumin Oxálsav 20 mg/ml 1 mg/ml 5 mg/ml 2 mg/ml 0.5 M Karbamid 6 77 79 76 84 75 80 77 130 130 134 137 122 135 132 143 147 151 154 138 152 148 250 251 250 262 226 251 250 227 227 229 230 205 231 227 379 383 387 395 349 376 387 Egy olyan további protokoll szerint is végrehajtottak vizsgálatokat, amelyekben ellenőrzött ( ± 25 ) nordiazepam ű, 1.006 és 1.034 közötti fajsúlyú mintákat vizsgáltak. Akárcsak az egyéb interferenciák esetén, a három vizsgálati semelyikénél sem volt semelyik szélső fajsúly esetén sem téves kontrolljelzés. SZÜKSÉGES TEVÉKENYSÉG Speciális átmosás programozása: Ha COBAS INTEGRA analizátorokon bizonyos vizsgálatok követik egymást, akkor speciális átmosási lépéseket kell alkalmazni. Az extra átmosási ciklusok listájának (Extra wash cycle list) legújabb verzióját és a szükséges teendők ismertetését a CLEAN eljárásleírás tartalmazza. Ahol szükséges, ott az érintett vizsgálatok leletezése előtt speciális átmosás/átszennyezés elkerülés programmozást kell implementálni. Jellemző teljesítményadatok Az alábbiakban a COBAS INTEGRA analizátorokra jellemző teljesítméyadatokat ismertetjük. Az egyes laboratóriumokban kapott értékek ezektől eltérőek is lehetnek. Precizitás Gyűjtött humán vizeletből vett 4 mintából nordiazepam oldat hozzáadásával magas, alacsony, valamint -közeli pozitív és negatív kábítószerkoncentrációjú mintákat állítottak elő. Ezekkel a mintákkal kvalitatív és szemikvantitatív módban egyaránt megvizsgálták a precizitást. Egy CLSI (EP5 A2) precizitás-ellenőrzési protokoll szerint a mintákat mérési sorozatonként 2 méréssel, napi 2 sorozatban 21 napon át, összesen n = 84 alkalommal vizsgálták. COBAS INTEGRA 800 analizátoron az alábbi eredményeket kapták. Kvalitatív - 100 Nátriumklorid Mintakoncentráció Meghatározások száma Neg. # / Poz. # Nordiazepam 0 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 54 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 77 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 123 84 0 Neg / 84 Poz Nordiazepam 189 84 0 Neg / 84 Poz Kvalitatív - 200 Mintakoncentráció Meghatározások száma Neg. # / Poz. # Nordiazepam 0 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 112 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 145 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 240 84 0 Neg / 84 Poz Nordiazepam 420 84 0 Neg / 84 Poz Kvalitatív - 300 Mintakoncentráció Meghatározások száma Neg. # / Poz. # Nordiazepam 0 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 161 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 236 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 375 84 0 Neg / 84 Poz Nordiazepam 608 84 0 Neg / 84 Poz Szemikvantitatív - 100 Mintakonc. Neg. # / Poz. # Ismételhetőség Köztes precizitás Nordiazepam 54 84 / 0 2.2 4.0 3.4 6.4 Nordiazepam 77 84 / 0 2.1 2.7 3.1 4.1 Nordiazepam 123 0 / 84 1.9 1.5 3.4 2.8 Nordiazepam 189 0 / 84 2.1 1.1 4.1 2.2 Szemikvantitatív - 200 Mintakonc. Neg. # / Poz. # Ismételhetőség Köztes precizitás Nordiazepam 112 84 / 0 1.8 1.6 3.2 2.8 Nordiazepam 145 84 / 0 2.0 1.4 3.6 2.5 Nordiazepam 240 0 / 84 2.0 0.8 4.8 2.0 Nordiazepam 420 0 / 84 2.9 0.7 5.7 1.4 Szemikvantitatív - 300 Mintakonc. Neg. # / Poz. # Ismételhetőség Köztes precizitás Nordiazepam 161 84 / 0 3.7 2.3 7.2 4.5 Nordiazepam 236 84 / 0 3.8 1.6 6.8 2.9 Nordiazepam 375 0 / 84 3.7 1.0 6.8 1.8 Nordiazepam 608 0 / 84 3.8 0.6 10.4 1.7 Pontosság Egy klinikai laboratóriumból származó, és ott egy gyógyszerteszt panelen negatívnak bizonyult 103 vizeletmintát kiértékeltek benzodiazepinekre egy COBAS INTEGRA 800 analizátoron. Mind a 103 klinikai minta negatív volt a 100, a 200 és a 300 re. A Benzodiazepines II vizsgálati eljárással kiértékeltek egy klinikai laboratóriumból származó 55 olyan mintát, amelyek ott egy kereskedelemben kapható immunkémiai vizsgálati eljárással tájékoztató jelleggel pozitívnak bizonyultak, és ezt később folyadék-kromatográfiás eljárással összekapcsolt párhuzamos tömegspektrometriás (LC/MS/MS) eljárással végzett vizsgálat is megerősítette. Ezeknek mintáknak a 100 -a pozitívnak bizonyult a 100, a 200 és a 300 ekhez képest. Ezen kívül még minden re meghígítottak 7-7 mintát a benzodiazepin koncentráció kb. 75 100 -os ill. kb. 100 125 -os tartományára. A fent ismertetett pontossági kutatások sorrán kapott közeli tartományba eső eredményeket összehasonlították a hígított pozitív vizeletmintákból mért eredményekkel. 5 / 9
Az LC/MS/MS eljárással mért értékekkel összehasonlítva a Benzodiazepines II vizsgálati eljárás COBAS INTEGRA 800 analizátoron az alábbi eredményeket szolgáltatta. Benzodiazepines II klinikai korreláció ( = 100 ) COBAS INTEGRA 800 analizátor Negatív minták LC/MS/MS értékek () Küszöbérték közeli 75 124-126 623-1874 + 0 0 7 55 103 7 0 0 Benzodiazepines II klinikai korreláció ( = 200 ) COBAS INTEGRA 800 analizátor Negatív minták LC/MS/MS értékek () Küszöbérték közeli 148-150 248-253 623-1874 + 0 0 7 55 103 7 0 0 Benzodiazepines II klinikai korreláció ( = 300 ) COBAS INTEGRA 800 analizátor Negatív minták LC/MS/MS értékek () Küszöbérték közeli 223-226 366-382 623-1874 + 0 0 7 55 103 7 0 0 Analitikai specifitás Különféle benzodiazepinekre és benzodiazepin metabolitokra a COBAS INTEGRA Benzodiazepines II vizsgálati eljárás specificitását oly módon határozták meg. hogy minden feltüntetett anyag esetén inhibíciós görbét generáltak, és meghatározták azt a hozzávetőleges mennyiségüket, amelynek vizsgálati reaktivitása a 100, a 200 és a 300 es nordiazepam vizsgálati vizsgálati reaktivitásával. Vegyület a) Kb. 100 Dezklór-etizolam 76 132 Flubromazepam 79 127 3-OH-Flubromazepam 120 83 Pirazolam 81 123 Klonazolam 86 116 Diklazepam 100 100 Flubromazolam 101 99 Etizolam 121 82 Meklonazepam 160 63 Nifoxipam 184 54 Bentazepam 190 53 Esztazolam 92 109 Fenazepam 98 102 Bromazepam 107 93 Alprazolam 108 93 α-hidroxi-alprazolam 104 96 4-Hidroxi-alprazolam 129 78 Nitrazepam 114 88 7-Amino-nitrazepam 84 120 Vegyület a) Kb. 100 7-Acetamido-nitrazepam 26180 0.38 Delorazepam 121 83 Demoxepam 122 82 Klorazepát 123 81 Triazolam 123 81 α-hidroxi-triazolam 138 73 Oxazepam 128 78 Oxazepam glükuronid 244 41 Flunitrazepam 136 74 Dezmetil-flunitrazepam 115 87 7-Amino-flunitrazepam 124 80 Brotiazolam 138 72 Klobazám 139 72 Lormetazepam 141 71 Diazepam 142 71 Nordiazepam 96 105 Temazepam 143 70 Temazepam-glükuronid 393 25 Prazepam 152 66 Klonazepam 155 65 7-Amino-klonazepam 130 77 Pinazepam 159 63 Flurazepam 159 63 Dezalkil-flurazepam 104 96 Hidroxi-etil-flurazepam 123 81 Didezetil-flurazepam 138 73 Lorazepam 169 59 Lorazepam-glükuronid 289 35 Klór-diazepoxid 174 58 Dezmetilklór-diazepoxid 146 68 Norklór-diazepoxid 163 62 Halazepam 176 57 Midazolam 181 55 α-hidroxi-midazolam 117 85 Dezmetil-medazepam 225 45 Nimetazepam 1099 9 Oxaprozin 2773 4 Zolpidem 125000 0.08 a) A listán behúzva felsorolt vegyületek az előttük szereplő szerek metabolitjai. Vegyület b) Kb. 200 Pirazolam 171 117 Dezklór-etizolam 172 116 Flubromazepam 177 113 6 / 9
Vegyület b) Kb. 200 3-OH-Flubromazepam 274 73 Klonazolam 188 106 Diklazepam 215 93 Flubromazolam 210 95 Etizolam 239 84 Meklonazepam 467 43 Nifoxipam 543 37 Bentazepam 508 39 Esztazolam 199 100 Fenazepam 219 91 Alprazolam 231 86 α-hidroxi-alprazolam 228 88 4-Hidroxi-alprazolam 299 67 Bromazepam 239 84 Delorazepam 254 79 Triazolam 266 75 α-hidroxi-triazolam 276 72 Klorazepát 271 74 Diazepam 284 70 Nordiazepam 209 96 Oxazepam 290 69 Oxazepam glükuronid 593 34 Brotiazolam 290 69 Nitrazepam 305 66 7-Amino-nitrazepam 186 107 7-Acetamido-nitrazepam 87903 0.23 Demoxepam 316 63 Lormetazepam 318 63 Flunitrazepam 320 62 Dezmetil-flunitrazepam 281 71 7-Amino-flunitrazepam 293 68 Klobazám 324 62 Flurazepam 330 61 Dezalkil-flurazepam 238 84 Hidroxi-etil-flurazepam 260 77 Didezetil-flurazepam 306 65 Midazolam 347 58 α-hidroxi-midazolam 255 78 Temazepam 350 57 Temazepam-glükuronid 894 22 Halazepam 355 56 Klonazepam 367 55 7-Amino-klonazepam 303 66 Pinazepam 393 51 Lorazepam 398 50 Lorazepam-glükuronid 695 29 Vegyület b) Kb. 200 Klór-diazepoxid 475 42 Dezmetilklór-diazepoxid 393 51 Norklór-diazepoxid 446 45 Prazepam 532 38 Dezmetil-medazepam 628 32 Nimetazepam 2431 8 Oxaprozin 10595 2 Zolpidem 250000 0.08 b) A listán behúzva felsorolt vegyületek az előttük szereplő szerek metabolitjai. Vegyület c) Kb. 300 Dezklór-etizolam 228 132 Flubromazepam 246 122 3-OH-Flubromazepam 386 78 Klonazolam 259 116 Pirazolam 273 110 Diklazepam 298 101 Flubromazolam 304 99 Etizolam 362 83 Meklonazepam 509 59 Nifoxipam 601 50 Bentazepam 614 49 Esztazolam 306 98 Bromazepam 325 92 Fenazepam 325 92 Alprazolam 354 85 α-hidroxi-alprazolam 343 87 4-Hidroxi-alprazolam 394 76 Demoxepam 378 79 Delorazepam 382 79 Nitrazepam 386 78 7-Amino-nitrazepam 269 111 7-Acetamido-nitrazepam 72581 0.41 Triazolam 392 77 α-hidroxi-triazolam 405 74 Klorazepát 404 74 Oxazepam 405 74 Oxazepam glükuronid 719 42 Diazepam 405 74 Nordiazepam 304 99 Lormetazepam 429 70 Klobazám 441 68 Flunitrazepam 450 67 Dezmetil-flunitrazepam 372 81 7 / 9
Vegyület c) Kb. 300 7-Amino-flunitrazepam 408 74 Brotiazolam 450 67 Temazepam 469 64 Temazepam-glükuronid 1186 25 Flurazepam 494 61 Dezalkil-flurazepam 344 87 Hidroxi-etil-flurazepam 389 77 Didezetil-flurazepam 456 66 Klonazepam 508 59 7-Amino-klonazepam 390 77 Pinazepam 554 54 Halazepam 562 53 Klór-diazepoxid 563 53 Dezmetilklór-diazepoxid 494 61 Norklór-diazepoxid 535 56 Midazolam 577 52 α-hidroxi-midazolam 405 74 Lorazepam 587 51 Lorazepam-glükuronid 874 34 Prazepam 635 47 Dezmetil-medazepam 713 42 Nimetazepam 3435 9 Oxaprozin 8911 3 Zolpidem 200000 0.15 c) A listán behúzva felsorolt vegyületek az előttük szereplő szerek metabolitjai. Sok benzodiazepin jórészt glükoronidált konjugátumként jelenik meg a vizeletben. A glükoronidált metabolitok a kiindulási anyagnál több vagy kevesebb kereszt-reaktivitást is mutathatnak. A β glükuronidáz enzim jelenléte javítja a COBAS INTEGRA Benzodiazepines II vizsgálati eljárás keresztreaktivitását egyes glükuronid-metabolitokkal. Hatóanyag-interferencia Az alábbi vegyületek végkoncentrációját gyűjtött és kiadagolt normál humán vizelet segítségével 100000 -re állították be. Ezen vegyületek egyike sem mutatott a vizsgálati eljárással 100 és 200 esetén 0.06, 300 esetén 0.09 feletti keresztreaktivitást. Acetaminofen Acetil-szalicilsav Amitriptilin Amobarbitál d-amfetamin l-amfetamin Ampicillin Aszkorbinsav Aszpartam Atropin Benzokain Benzoil-ekgonin (kokain metabolit) Imipramin Izoproterenol Ketamin Lidokain L MDA MDMA Melanin Meperidin Metadon d-metamfetamin l-metamfetamin Metakvalon Benzfetamin Buspiron Butabarbitál Koffein Kalcium-hipoklorit Kannabidiol Captopril Klorokin Klór-fenir-amin Klór-promazin Kokain Kodein Dezipramin HCl Dextro-metorfán Dextropropoxifen Digoxin Difen-hidramin Difenil-hidantoin Doxepin Ekgonin Ekgonin-metilészter Enalapril d -Efedrin l -Efedrin Epinefrin Eritromicin Esztriol Fenoprofen Flumazenil Furoszemid Gentizinsav Glutetimid Guajakol glicerin-éter Hidroklór-tiazid Hidroxiindol-ecetsav Hidroxiindol-karboxilsav Ibuprofen Metil-fenidát Metiprilon Morfin-szulfát Naloxon Naltrexon Naproxen Niacinamid Nikotin Norethindron l-nor-pszeudoefedrin Omeprazol Penicillin G Pentazocin Pentobarbitál Fenciklidin Fenobarbitál Fenotiazin Fenilbutazon d,l-fenil-propanolamin Prokain Prometazin d-pszeudo-efedrin Kinidin Kinin Szekobarbitál Szulindak Tetraciklin Δ 9 THC-9-karboxilsav Tetra-hidrozolin Tioridazin Tolmetin Trifluoperazin Trimipramin Tiramin Verapamil Zomepirac A készülékparaméterek beállításának a jelen leírásban előírttól eltérő értékre történő módosításához a laboratórium jóváhagyása szükséges. Irodalomjegyzék 1 Karch SB, ed. Drug Abuse Handbook. Boca Raton, FL: CRC Press LLC 1998. 2 Salamone SJ, ed. Benzodiazepines and GHB: Detection and Pharmacology. Totowa, NJ: Humana Press 2001. 3 Hardman JG, Limbird LE, Gilman A, eds. Goodman and Gilman s The Pharmacological Basis of Therapeutics. 10th ed. New York, NY: McGraw Hill Pub Co. 2001. 4 Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man. 7th ed. Foster City, CA: Biomedical Publications 2004. 5 Laurijssens BE, Greenblatt DJ. Pharmacokinetic-pharmacodynamic relationships for benzodiazepines. Clin Pharmacokinet 1996;30:52-76. 8 / 9
6 Hallfors DD, Saxe L. The dependence potential of short half-life benzodiazepines: a meta-analysis. Am J Public Health 1993;83:1300-1304. 7 Chouinard G. Issues in the clinical use of benzodiazepines: potency, withdrawal, and rebound. J Clin Psychiatry 2004:65(5);7-12. 8 Abernethy DR, Greenblatt DJ, Ochs HR, et al. Benzodiazepine drugdrug interactions commonly occurring in clinical practice. Curr Med Res Opin 1984;8:80-93. 9 Tanaka E. Toxicological interactions between alcohol and benzodiazepines. J Toxicol Clin Toxicol 2002;40:69-75. 10 Dou C, Bournique JS, Zinda MK, et al. Comparison of the Rates of Hydrolysis of Lorazepam-Glucuronide, Oxazepam-Glucuronide and Temazepam-Glucuronide Catalyzed by E. Coli β-d-glucuronidase Using the OnLine Benzodiazepine Screening Immunoassay on the Roche/Hitachi 917 Analyzer. J of Forensic Science 2001;46(2):335-340. 11 Beck O, Lin Z, Brodin K, et al. The online screening technique for urinary benzodiazepines: comparison with EMIT, FPIA, and GC-MS. J Anal Toxicology 1997;21(7):554-557. 12 Salamone SJ, Honasoge S, Brenner C, et al. Flunitrazepam excretion patterns using the Abuscreen OnTrak and OnLine immunoassays: comparison with GC-MS. J Anal Toxicol 1997;21:341-345. 13 Klette KL, Wiegand RF, Horn CK, et al. Urine benzodiazepine screening using Roche Online KIMS immunoassay with betaglucuronidase hydrolysis and confirmation by gas chromatographymass spectrometry. J Anal Toxicol 2005;29:193-200. 14 Valentine JL, Middleton R, Sparks C. Identification of urinary benzodiazepines and their metabolites: comparison of automated HPLC and GC-MS after immunoassay screening of clinical specimens. J Anal Toxicol 1996;20(6):416-424. 15 Armbruster DA, Schwarzhoff RH, Hubster EC, et al. Enzyme immunoassay, kinetic microparticle immunoassay, radioimmunoassay, and fluorescence polarization immunoassay compared for drugs-ofabuse screening. Clin Chem 1993;39:2137-2146. 16 Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline. 2nd ed. (C52-A2). Clinical and Laboratory Standards Institute 2007;27:33. 17 Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. Fed Regist 2008 Nov 25;73:71858-71907. Ebben az eljárásleírásban a decimális számértékek egész- és törtrésze közötti határ jelölésére decimális szeparátorként mindig tizedespontot (és nem tizedesvesszőt) használunk. A számjegyeket nem választjuk el hármasával. Szimbólumok Az ISO 15223 1 szabványban feltüntetetteken kívül a Roche Diagnostics az alábbi szimbólumokat és jelöléseket alkalmazza: GTIN A csomag tartalma Elkészítés ill. keverés utáni térfogat Globális kereskedelmi áruazonosító szám A bővítéseket, törléseket és változtatásokat a lap szélén függőleges vonalak jelzik. 2016, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com 9 / 9