Phenoxymethylpenicillinum kalicum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.1-1 01/2008:0149 javított 6.1 PHENOXYMETHYLPENICILLINUM KALICUM Fenoximetilpenicillin-kálium C 16 H 17 KN 2 O 5 S M r 388,5 [132-98-9] DEFINÍCIÓ A (2S,5R,6R)-3,3-dimetil-7-oxo-6-[(fenoxiacetil)amino]-4-tia-1- azabiciklo[3.2.0]heptán-2-karbonsav káliumsója. A Penicillium notatum egyes törzsei vagy ezekkel rokon mikroorganizmusok által termelt anyag, amely megfelelő prekurzort tartalmazó táptalajon történő tenyésztés útján vagy más módon állítható elő. Tartalom: fenoximetilpenicillin-kálium és 4-hidroxifenoximetilpenicillinkálium együttesen 95,0102,0% (vízmentes anyagra). SAJÁTSÁGOK Küllem: fehér vagy csaknem fehér kristályos por. Oldékonyság: vízben bőségesen oldódik; etanolban (96%) gyakorlatilag nem oldódik. AZONOSÍTÁS Első azonosítás: A, D. Második azonosítás: B, C, D. A. Infravörös abszorpciós spektrofotometria (2.2.24). Összehasonlítás: CRS fenoximetilpenicillin-káliummal.
Phenoxymethylpenicillinum kalicum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.1-2 B. Vékonyréteg-kromatográfia (2.2.27). Vizsgálati oldat. 25 mg vizsgálandó anyagot 5 ml R vízben oldunk. Összehasonlító oldat (a). 25 mg CRS fenoximetilpenicillin-káliumot 5 ml R vízben oldunk. Összehasonlító oldat (b). 25 mg CRS benzilpenicillin-káliumot és 25 mg CRS fenoximetilpenicillin-káliumot 5 ml R vízben oldunk. Lemez: R VRK szilanizált szilikagél lemez. Kifejlesztőszer: R aceton (30 térfogatrész) és R ammónium-acetát előzetesen R tömény ecetsavval ph 5,0-re beállított 154 g/l töménységű oldatának (70 térfogatrész) elegye. Felvitel: 1 µl. Kifejlesztés: 15 cm-es fronttávolságig. Szárítás: levegőn. Előhívás: a lemezt a foltok megjelenéséig jód-gőztérbe helyezzük, majd a kromatogramokat nappali fényben értékeljük. Rendszeralkalmasság: b) összehasonlító oldat: a kromatogramon két, egymástól jól elkülönülő folt látható. Értékelés: a vizsgálati oldat kromatogramjának főfoltja helyét, színét és méretét tekintve egyezzék meg az a) összehasonlító oldat kromatogramjának főfoltjával. C. Kb. 2 mg anyagot egy kb. 150 mm hosszú és 15 mm átmérőjű kémcsőbe mérünk. Az anyagot 0,05 ml R vízzel megnedvesítjük, majd 2 ml R kénsav formaldehidreagenst adunk hozzá. A kémcső tartalmát óvatosan rázogatva az oldat vörösesbarnára színeződik. A kémcsövet ezután 1 percre vízfürdőbe helyezzük; sötét vörösesbarna színeződés keletkezik. D. A káliumion a) pont szerinti azonossági reakcióját elvégezve (2.3.1) az előírt változás észlelhető. VIZSGÁLATOK ph (2.2.3): 5,57,5. A vizsgálathoz 50 mg anyagot R szén-dioxid-mentes vízzel 10 ml-re oldunk. Fajlagos optikai forgatóképesség (2.2.7): +215 és +230 között (vízmentes anyagra). 0,250 g anyagot R szén-dioxid-mentes vízzel 25,0 ml-re oldunk. Rokon vegyületek. Folyadékkromatográfia (2.2.29).
Phenoxymethylpenicillinum kalicum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.1-3 Oldószerelegy. R 0,2 M kálium-dihidrogén-foszfátoldat 250 ml-éhez 500 ml R vizet elegyítünk, majd az oldat ph-ját R nátrium-hidroxid 8,4 g/l töménységű oldatával 6,5-re állítjuk be. Az oldatot R vízzel 1000 ml-re hígítjuk. Vizsgálati oldat (a). 50,0 mg vizsgálandó anyagot az oldószereleggyel 50,0 mlre oldunk. Vizsgálati oldat (b). Az oldatot közvetlenül a felhasználás előtt készítjük. 80,0 mg vizsgálandó anyagot az oldószereleggyel 20,0 ml-re oldunk. Összehasonlító oldat (a). 50,0 mg CRS fenoximetilpenicillin-káliumot az oldószereleggyel 50,0 ml-re oldunk. Összehasonlító oldat (b). 4,0 mg CRS 4-hidroxifenoximetilpenicillin-káliumot az oldószereleggyel 10,0 ml-re oldunk. Ezen oldat 5,0 ml-ét az oldószereleggyel 100,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (c). 10 mg CRS fenoximetilpenicillin-káliumot és 10 mg CRS benzilpenicillin-nátriumot (A-szennyező) az oldószereleggyel 50 ml-re oldunk. Összehasonlító oldat (d). 1,0 ml a) összehasonlító oldatot az oldószereleggyel 20 ml-re hígítunk. Ezen oldat 1,0 ml-ét az oldószereleggyel 50 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (e). 1,0 ml a) összehasonlító oldatot az oldószereleggyel 25,0 ml-re hígítunk. Oszlop: méretei: l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm, állófázis: R kromatográfiás célra szánt oktadecilszililezett szilikagél (5 µm). Mozgófázis: A-mozgófázis. R foszfáttompítóoldat (ph 3,5) R metanol R víz (10+30+60 V/V), B-mozgófázis. R foszfáttompítóoldat (ph 3,5) R víz R metanol (10+35+55 V/V), Idő (perc) A-mozgófázis (%V/V) B-mozgófázis (%V/V) 0 - t R 60 40 t R (t R + 20) 60 0 40 100 (t R + 20) (t R + 35) 0 100 (t R + 35) (t R + 50) 0 60 100 40 t R = a fenoximetilpenicillin retenciós ideje, a d) összehasonlító oldattal meghatározva Amennyiben a mozgófázis összetételén a szükséges felbontás elérése érdekében változtatni kell, a zéró időpillanatban alkalmazott mozgófázis
Phenoxymethylpenicillinum kalicum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.1-4 össszetételét kell megváltoztatni a grádiens és a tartalmi meghatározás esetében. Áramlási sebesség: 1,0 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 254 nm-en. Injektálás: 20 µl, a c), d) és e) összehasonlító oldatból, a kromatografálás során izokratikus elúciót alkalmazunk, a kezdeti mozgófázis-összetétellel; 20 µl a b) vizsgálati oldatból, a kromatografálás során a Mozgófázis pontban leírt elúciós grádienst használjuk; az oldószerelegyet üres oldatként injektáljuk, a kromatografálás során a Mozgófázis pontban leírt elúciós grádienst használjuk. Rendszeralkalmasság: csúcsfelbontás: legalább 6,0, az A-szennyező és a fenoximetilpenicillin csúcsok között, a c) összehasonlító oldat kromatogramján; szükség esetén módosítjuk az A- és B-mozgófázis arányát, jel/zaj viszony: legalább 3, a d) összehasonlító oldat kromatogramján látható főcsúcsra vonatkoztatva, tömegmegoszlási arány: 5,07,0, a fenoximetilpenicillinre (második csúcs) vonatkozóan, a c) összehasonlító oldat kromatogramján. Követelmények: szennyezők egyenként: csúcsterületük nem lehet nagyobb, mint az e) összehasonlító oldat kromatogramján látható főcsúcs területe (1%), elhanyagolási határ: a 4-hidroxifenoximetilpenicillinnek megfelelő csúcsot nem vesszük figyelembe. 4-Hidroxifenoximetilpenicillin-kálium. Folyadékkromatográfia (2.2.29), a Rokon vegyületek pontban előírt módon, a következő módosításokkal. Mozgófázis: az A- és B-mozgófázis keverékének eredeti összetétele, szükség esetén módosítva. Injektálás: az a) vizsgálati oldatból és a b) összehasonlító oldatból. Követelmény: 4-hidroxifenoximetilpenicillin-kálium: legfeljebb 4,0%, vízmentes anyagra vonatkoztatva. A százalékos tartalom kiszámításához amennyiben szükséges figyelembe vesszük a CRS-hez mellékelt korrekciós faktort. Víztartalom (2.5.12): legfeljebb 1,0%. Az anyag 1,000 g-ját vizsgáljuk. TARTALMI MEGHATÁROZÁS
Phenoxymethylpenicillinum kalicum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.1-5 Folyadékkromatográfia (2.2.29), a Rokon vegyületek pontban előírt módon, a következő módosításokkal. Mozgófázis: az A- és B-mozgófázis keverékének eredeti összetétele, szükség esetén módosítva. Injektálás: az a) vizsgálati oldatból és a b) összehasonlító oldatból. Rendszeralkalmasság: a) összehasonlító oldat: ismételhetőség: a csúcsterület relatív szórása legfeljebb 1,0%, az oldatot 6- szor injektálva. Kiszámítjuk a fenoximetilpenicillin-kálium és a 4-hidroxifenoximetilpenicillinkálium százalékos mennyiségét. SZENNYEZŐK A. benzilpenicillin, B. fenoxiecetsav, C. (2S,5R,6R)-6-amino-3,3-dimetil-7-oxo-4-tia-1-azabiciklo[3.2.0]heptán-2- karbonsav (6-aminopenicillánsav), D. (2S,5R,6R)-3,3-dimetil-7-oxo-6-[[2-(4-hidroxifenoxi)acetil]amino]-4-tia-1- azabiciklo[3.2.0]heptán-2-karbonsav (4-hidroxifenoximetilpenicillin),
Phenoxymethylpenicillinum kalicum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.1-6 E. R = CO 2 H: (4S)-2-[karboxi-[(fenoxiacetil)amino]metil]-5,5- dimetiltiazolidin-4-karbonsav (a fenoximetilpenicillin penicillosavai), F. R = H: (2RS,4S)-5,5-dimetil-2-[[(fenoxiacetil)amino]metil]tiazolidin-4- karbonsav (a fenoximetilpenicillin penillosavai).