Fekete-fehér igen-nem

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Fekete-fehér igen-nem"

Kornélia Juhászné
5 évvel ezelőtt
Látták:

1 Fekete-fehér igen-nem Autoimmun betegségek diagnózisához alkalmazott szövettani eljárások és finanszírozásuk. SZTE Bőrgyógyászati és Allergológiai Klinika Szövettani laboratórium Függ Róbertné

Fekete-fehér, igen-nem Autoimmun betegség fogalma Hám-epidermis Irha-dermis Bőralja-subcutis Immunpathológiai kórképek csoportjába tartozó betegségekben,

2 Fekete-fehér, igen-nem Autoimmun betegség fogalma Hám-epidermis Irha-dermis Bőralja-subcutis Immunpathológiai kórképek csoportjába tartozó betegségekben, az immunrendszer a saját antigén struktúrájával szemben olyan immunológiai reakciót indít el, melynek hatására klinikai tünetekkel járó BETEGSÉG lép fel.

3 Klinikánkon leggyakrabban előforduló autoimmun betegségek Pemphigus csoport Pemphigoid csoport Dermatitis herpetiformis Lupus erythematosus csoport Pemphigus Dermatitis herpetiformis Pemphigoid Lupus erythematosus

Az autoimmun betegségek csoportosítása a hólyag elhelyezkedése alapján Hám (epidermis) rétegei: Antitest-mediált hólyagképződés Stratum corneum

4 Az autoimmun betegségek csoportosítása a hólyag elhelyezkedése alapján Hám (epidermis) rétegei: Antitest-mediált hólyagképződés Stratum corneum Stratum lucidum Csak tenyéren, talpon Stratum granulosum Stratum spinosum Stratum basale -basalmembran Bullosus LE DH Epidermolisis bullosa acquisita

fájdalom, mint viszketés gyakori: szájnyálkahártya vagy nemi szervek nyálkahártyáján

5 Pemphigus csoport intraepidermalis hólyag ( hámban) gyulladásmentes alap, petyhüdt falú hólyagok gyorsan elfakadnak, sokszor csak hámfosztott terület marad inkább fájdalom, mint viszketés gyakori: szájnyálkahártya vagy nemi szervek nyálkahártyáján is éves életkor több alcsoport, leggyakoribb: pemphigus vulgaris Pemphigus vulgaris

6 Pemphigoid csoport subepidermalis hólyag ( hám alatt) gyulladásos alap, feszes falú hólyagok szájnyálkahártya tünet ritkább éves életkor nagyon heves, szinte elviselhetetlen viszketés több alcsoport pl.: bullosus pemphigoid Bullosus pemphigoid

7 Dermatitis herpetiformis /DH/ hólyagcsa (vesicula) képződés a basalis membrán alatt a papillák csúcsában lappangó, tünetszegény coeliákiához (lisztérzékenység) társulhat gyakran társul: felszívódási zavar, vérszegénység, más autoimmun kórkép kínzó viszketés csoportosan göbcsék, apró hólyagok, ill. vakarás nyomok, könyökök, térdek, fartájék, lapocka DH

8 Lupus erythematosus /LE/ Krónikus, több szervet érintő autoimmun betegség A betegség lefolyása hullámzó, aktív szakaszában érinthet sok szervet pl.: bőr, vese, erek, szív, idegrendszer. Formái: - szisztémás (SLE), - bőrt érintő chronicus discoid LE (CDLE) - subacut, bőrt érintő (SCLE), - bullosus LE Bullosus LE

9 Szövettani diagnosztikus lépések Punch biopsiás mintavétel

) Víztelenítés (dehidrálás): a szövet víztartalmának

) Paraffin blokk készítés: a vizsgálandó anyag folyékony

) Metszet készítés: a beágyazott anyagból (blokk) fénnyel

10 Formalinban rögzített minta 1.) Fixálás az élő anyag strukturális és kémiai stabilizálása 2.) Víztelenítés (dehidrálás): a szövet víztartalmának vízelvonószerekkel történő kivonása 4.) Paraffin blokk készítés: a vizsgálandó anyag folyékony beágyazószerekkel történő átitatása, kikeményítés 5.) Metszet készítés: a beágyazott anyagból (blokk) fénnyel átvilágítható metszetek 6.) Festések: a szövetelemek fényszórásbeli különbségeinek növelése Fontos: Az előkészítési folyamatok során az elő anyag in vivo állapotának megőrzése, a lehető legkevesebb torzulást előidézve.

Első: hematoxilin-eozin metszet Leggyakoribb

használata (Leica Multistainer ) Leggyakoribb

11 Első: hematoxilin-eozin metszet Leggyakoribb festési eljárás Hematoxilin: liláskék szín DNS sejtmag Eozin: rózsaszín (eozin vörös) citoplazma kollagén izomrostok Festőautomata használata (Leica Multistainer ) Leggyakoribb speciális festések PAS-D Gram Alciánkék-van Gieson Rezorcin fukszin PTAH

3.Sejtfelszíni antigént felismerő antitest

specifikus kimutatása, de a kimutatáshoz a

leginkább az ellenanyag jelölése szolgál -

kibocsátó reakciót DAB - tormaperoxidáz jel

12 Immunhisztokémia 4.Mi az antitesten lévő jelzőmolekulát látjuk 3.Sejtfelszíni antigént felismerő antitest jelzőmolekulával A reakció alapja a fehérjék specifikus kimutatása, de a kimutatáshoz a reakciót láthatóvá kell tenni, erre leginkább az ellenanyag jelölése szolgál - fluoreszcens festék - színes terméket kibocsátó reakciót DAB - tormaperoxidáz jel 2.Sejt, felszínén sok az adott sejtre jellemző molekula 1.Szövet rengeteg sejttípussal

13 Immunfluoreszcencia Egy atom vagy molekula külső sugárzás hatására átmenetileg gerjesztett állapotba kerül, majd alacsonyabb energiájú (nagyobb hullámhosszú) fotont bocsájt ki (emittál). Fluoreszcein izotiocianát (FTC): zöld Rodamin: piros, Immunfluoreszcenciás mikroszkóp Higany lámpa (HBO200) Xenon lámpa (XBO150)(HBO200)

Direkt ImmunFluorszcencia Van-e a beteg bőrében immunglobulin

?? - bőrben antigén-antitest lekötődések -immunhisztokémiai

) alkalmazunk, amely közvetlenül kapcsolódik a kimutatandó

14 Direkt ImmunFluorszcencia Van-e a beteg bőrében immunglobulin mediált autoimmun reakció hol??? - bőrben antigén-antitest lekötődések -immunhisztokémiai festésre csak egy jelölt antitestet (pl. antihuman, FITC Ig.) alkalmazunk, amely közvetlenül kapcsolódik a kimutatandó antigén-antitest lekötődéshez. Előnye: egyszerű és gyors kimutatás. IgG, IgA, IgM, cc3 immunsavók

15 hám hám pemphigus IgG DH IgA pemphigoid LE hám hám C3 IgG

Indireckt ImmunFluorszcencia Van-e a beteg szérumában valamilyen hámban lévő antigén ellen termelődött autoantitest??? Két ellenanyagot alkalmazunk a detektáló rendszerben: 1.

Klinikánkon: nyúl oesophagus, normál bőr, salt split bőr metszeten végezzük ezt a vizsgálatot, pozitív DIF vizsgálat után, a beteg szérumával. 1.

16 Indireckt ImmunFluorszcencia Van-e a beteg szérumában valamilyen hámban lévő antigén ellen termelődött autoantitest??? Két ellenanyagot alkalmazunk a detektáló rendszerben: 1. Antigénre specifikus primer jelöletlen ellenanyag 2. A primer ellenanyaghoz specifikusan kötődő jelölt, másodlagos ellenanyag. Klinikánkon: nyúl oesophagus, normál bőr, salt split bőr metszeten végezzük ezt a vizsgálatot, pozitív DIF vizsgálat után, a beteg szérumával. 1. Antigén struktúra + a beteg savója /ebben van a keringő autoantitest - elsődleges/. Ez az antigén-antitest kötődés még nem látható, mert jelöletlen. 2. Anti humán IgG FITC-eljelölt immunsavóval teszem láthatóvá második lépésben + anti humán IgG FITC jelölt immunsavó &q=immunfluoreszcencia

17 hám IIF: oesophagus BM izom

18 hám IIF: salt spilt skin: BP

19 hám IIF: salt spilt skin: bullosus LE

20 Elisa / szerológiai vizsgálat / ELISA leolvasó A leggyakoribb enzim-szubsztrát rendszerek

21 Fekete-fehér, igen-nem A játék lényege, hogy a címben jelzett négy szót nem szabad kimondani. Választunk egy kérdezőt, aki kérdéseket tesz fel. Ezzel a szöveggel kezdi: Fekete, fehér, igen, nem, Mit vettél a pénzemen? Milyen diagnosztikát szeretnénk? Mennyibe kerülnek ezek a diagnosztikus módszerek?!

22 finanszírozás

23 Fekete-fehér, igen-nem HE festéshez használt anyagok 2018 Neutrális formalin 340Ft/liter Xilol 1 393Ft/liter xilol helyettesítő Ft/ 5 liter Iso-propil alkohol Ft/liter 96%-os alkohol / 20 liter Paraffinok 780Ft/Kg és Ft/ 10 Kg Aceton 1 200Ft/liter Műanyag kazetta 10 Ft/db Tárgylemez 11 Ft/ db Fedőlemez 10 Ft/db Mikrotom kés 487 Ft/db Eosin 2,5 liter Ft Gill s hematoxillin 2,5 liter Ft 1 HE metszet ~ 480 Ft

24 DIF Vizsgálat FITC Fekete-fehér, igen-nem DIF vizsgálat,elisa IgG, IgA, IgM, C3 immunsavók ~ Ft/ 2 ml 1:32 hígítás 2ml immunsavó- 200 eset 379 eset/2018 2x2 ml / immunsavó IIF ~ 4000 Ft/lemez 4000Ft / lemez Ft/ eset ELISA MESEACUP BP180 TEST Nem OEP finanszírozott vizsgálat!!! Ft 48 eset-2 kontroll Ft/ eset

25 Autoimmun betegség diagnosztika anyag költsége HE 480 Ft DIF Ft IIF 4000 Ft ELISA 2622 Ft Össz: Ft Finanszírozás (1 német pont = 1,98 Ft) HE: 4758 pont = 9420 Ft HE mély, sorozat, speciális festések (nincs mindnek külön kódja) DIF: 4x2797= pont = Ft IIF 9996 pont = Ft Elisa = nem finanszírozott Össz: Ft

26 Fekete-fehér, igen-nem SZTE Bőrgyógyászati és Allergológiai Klinika 2018 / metszet Szövettani laboratórium / rutin: 6752 vizsgálat DIF vizsgálat: 356 eset x 4 DIF Immunhisztokémiai vizsgálatok: 6000 Szövettani laboratórium / kutatás: -Paraffin blokk 247 -HE és speciális festés Fagyasztott blokk: 16 -Fagyasztott metszet: 36 -immunhisztokémia: 133 Összesen: metszet metszet (HE mély, sorozat, speciális festések: nincs specifikus finanszírozási kód!!

27 Fekete-fehér, igen-nem Köszönöm a segítséget: Prof. Dr. Husz Sándor Dr. Korom Irma Dr. Varga Erika Dr. Mihályi Lilla Köszönöm a figyelmet

Hasonló dokumentumok

Autoimmun hólyagos betegségek

Autoimmun hólyagos betegségek Kárpáti Sarolta 2016. február 29. Allergo-immunológiai továbbképző tanfolyam A bőr szerkezete Intraepidermalis Subepidermalis Junkcionális A hólyagképződés subcornealis intraepidermális