pénz, idő,, tapasztalat cél: jobban vizsgálhat

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "pénz, idő,, tapasztalat cél: jobban vizsgálhat"

Tibor Budai
8 évvel ezelőtt
Látták:

1 Mikrotechnika

2 Mikrotechnika pénz, idő,, tapasztalat cél: jobban vizsgálhat lható,, jobb minőségű preparátum preparálási, festési, si, egyéb b előkész szítési si eljárások vizsgálat előtt Egyszerűbb vizsgálatokhoz Igényesebb vizsgálatokhoz (kaparék, k, nyúzat, kézi metszetek) replika dörzspreparátum derítés foszlatás/macer s/macerálás kiizzítás, stb előkész szítés festés tartósítás s /lefedés/ (sorozatmetszetek) SzM FM FM TEM SEM

3 Replika készítésese felszíni struktúrák k vizsgálata bőrszöveti sejtek mintázata kollodium, celloidin,, lakk, körömlakkk belső felszínek vizsgálata szilikon gumi, műgyantm gyanta a kitölt ltések felülete lete (belső üregek, járatok j vagy egész struktúrák k replikái, i, pl. erezet) feladat fejes káposzta k (Brassica( oleacea var. capitata) belsőközépsőkülső leveleiről l lakk replika készk szítésese normál és fáziskontraszt mikroszkópos vizsgálat

4 Dörzspreparátum készk szítésese (squash/quetschpräparat) feladat Derítés s (clearing( clearing) vöröshagyma (Allium( cepa) ) gyökércs rcsúcsból dörzspreparátum készk szítésese kárminecetsavas festés, s, (orcein festés) s) 45%-os ecetsavas mosás, s, vizsgálat normál l mikroszkóppal pigmentek, tartalék k tápanyagok t eltávol volítása áttetsző minta vizsgálata normál mikroszkóppal hagyományos lúgosl gos-alkoholos derítés 96%-os alkoholos derítés klorálhidr lhidrátos derítés fenolos derítés

5 feladatok A. Hagyományos derítés: több lépésbenl elszíntelen ntelenítés 10% KOH (7) + 70% etanol (3) forralás, dv mosás 3% H 2 O 2 oldat 96% etanol forralás, dv mosás forralás, dv mosás Ismeretlen fűszerkeverf szerkeverék meghatározása derítéssel B. 96% etanolos derítés: pletyka (Tradescantia( sp.) levél (sebzés H 2 O 2 felszabadulás) s) 50mM TrisHCl (ph 6.0) puffer DAB (diamino-benzidin) festés H 2 O 2 kimutatás 96% etanolos derítés forralás 96%-os etanolban dv mosás

6 Igényesebb mikrotechnikai munkák strukturális kutatások citokémiai kutatások hisztokémiai kutatások (immunkémiai miai kutatások) Több idő,, több t költsk ltség, több t szakmai felkész szültség Élő anyag Idő Elváltoz ltozások fixálás kémiai fixálás, krio fixálás víztelenítés infiltráci ció/átitatás beágyaz gyazás ( - zselatin, celloidin) - paraffin - műgyanta metszés (mikrotóm,, kés, k blokk) festés (kézi metszetek is festhetőek!) ek!) tartósítás, s, lefedés

7 Fixált minta beágyaz gyazása paraffinba (műgyant gyantás s hasonló elvek alapján)

8 Paraffinos blokk metszése se (műgyant gyantás hasonlóságok és s különbsk nbségek)

9 Az elkész szült metszetek festése se Deparaffinálás Rehidrálás A festéket tartalmazó oldat víztartalmáig. Festés Differenciálás (Festés-Differenciálás) Dehidratálás A lefedőanyag oldószertartalm szertartalmának megfelelő mértékig. Lefedés s fedőlemezzel Az oldatok festőkádakban vannak, a metszetek lépésekben l az adott festést stől l függf ggő folyamatban és s idő alatt jutnak el a lefedésig. (Automatizálás s lehetséges megfelelő berendezéssel, pl. Leica.. TP 1020)

10 Új j alkalmazások: immunolokalizáci ció, in situ hibridizáci ció feladatok A. szőlő (Vitis vinifera) ) virág g metszése se paraffinos blokkból (mikrotóm,, kések, k blokk előkész szítés) s) metszés metszetek kisimítása sa metszetek rögzr gzülése előkész szített tárgylemezent

11 paraffinos szőlő virág g metszet festése se fényzölddel (lichtgrün,, 96% etanolban ) Menete: (fixálás víztelenítés beágyaz gyazás metszés) s) metszetek paraffin kioldása, átvitel etanolba xilol xilol : absz.. etanol 1:1 absz.. etanol 96% etanol festés 10 perc mosás/differenci s/differenciálás s 96% etanolban (rövid!!!) absz.. etanol (tov( tovább apoláros oldószerbe szerbe) tartósítás/lefed s/lefedés Euparal (ha kanadabalzsam, xilolig kell visszavinni)

12 B. dohány (Nicotiana( tabacum) ) levél l km. paraffinos blokkból (mikrotóm,, kések, k blokk előkész szítés metszés metszetek kisimítása sa metszetek rögzr gzülése) deparaffinálás - rehidratálás festés s DNS festékkel (DAPI, propidium jodid) C. - bab (Phaseolus vulgaris) levél l km. műgyantm gyantás s blokkból félvékony metszet festése se melegítőasztalon festés toluidinkékkel kkel desztillált lt vizes mosás, s, szárítás

Hasonló dokumentumok

FARMAKOBOTANIKA I. FÉLÉV / 1. GYAKORLAT

FARMAKOBOTANIKA I. FÉLÉV / 1. GYAKORLAT MIKROSZKÓPOS TECHNIKÁK, PREPARÁTUM KÉSZÍTÉS Rögzítés nélküli minták vizsgálata Kézi metszetek frissen begyűjtött anyagból hisztokémiai vizsgálatok (keményítő, sejtfalanyagok,