Testfolyadékok fehérjekomponenseinek kimutatása. Dr. Ottó Szabolcs

Átírás

1 Testfolyadékok fehérjekomponenseinek kimutatása Dr. Ottó Szabolcs Országos Onkológiai Intézet

2 Várható normális értékek - testnedvek Testnedv típusa Küllem Mennyiség (ml) Sejtek Glukóz Összfehérje Pleurális lis Tiszta, színtelen vagy világoss gossárga <1000/mm 3 <25% polimorfonukl.. leukocita, 0 vörösvértest Teljes vér v r glukóz szinthez hasonló Peritoneális Tiszta, színtelen vagy világoss gossárga <100 <500 fehérv rvérsejt/mmrsejt/mm 3 <25% polimorfonukl.. leukocita, < vörösvv svértest/mm 3 Perikardiális Tiszta, színtelen vagy világoss gossárga <500 fehérv rvérsejt/mmrsejt/mm 3 <25%polimoronukl. leukocita, 0 vörösvv svértest Szinoviális Tiszta, színtelen vagy világoss gossárga <4 <200 fehérv rvérsejt/mmrsejt/mm 3 <25% polimorfonukl.. leukocita Vér/ r/szinovialálislis folyadék különbség <10 mg/dl 1,0-3,0 g/dl

3 (melléküregi Hydrothorax regi folyadékgy kgyülem felszaporodás) s) 1. Cardialis pangás 2. Rosszindulatú daganatok Pleuralis carcinosis Malignus lymphoma Mesothelioma 3. Gyulladás Tüdőgyulladás Tüdőembolia TBC Visceralis lupus erythematodes Asbestosis 4. Májcirrohosis

4 (hasüregi folyad Ascites folyadékgyülem felszaporodása) sa) 1. Portalis hypertensio Májcirrhosis A májkapu m képleteinek k az összenyomásasa (pl. tumor) Jobb szívf vfél elégtelens gtelenség g (nagyköri pangáson keresztül) 2. A savós s hártya h permeabilitás-fokoz fokozódása A peritoneum carcinosisa 3. Kolloid-osmotikus osmotikus nyomáscs scsökkenés-hypalbumnaemia Májcirrhosis Nehrosis syndroma Exsudativ enteropathia Nagyfokú fehérjehi rjehiányos táplt plálkozás 4. Gyulladás Peritonitis Polyserositis Pancreatitis 5. Chylosus ascites és haemascos

5 A punctios folyadékok elkülönítése Transsudatum Pangásos eredetű,, fehérj rjében szegény, hydrostatikus nyomás fokozódása, vagy onkotikus nyomás-cs csökkenés Exsudatum Gyulladásos vagy tumoros, fehérj rjében gazdag a savós s hártyh rtyák ereinek permeabilitás fokozódása, ill. nyirokér r elzáródás Átmeneti tmeneti folyadékgy kgyülem Pl. kevéss ssé kiterjedt carcinosis,, alacsony fehérjetartalom A sablonos szétv tválasztás s nem mindig indokolt!

6 A punctios folyadékok elkülönítő adatai Transsudatum Exsudatum Szín és átlátszóság Szalmasárga, átlátszó Zavaros is lehet Sűrűség g változhatv Vízszerű Vízszerűtől l a gennyszerűig Fajsúly felett Fehérje (abszolút érték) <30 g/l >30 g/l Punctatum/sz /szérum hányadosh <0,5 >0,5 LDH (abszolút érték) <200 U/l >200 U/l Punctatum/sz /szérum hányadosh Üledék, sejtek <0,6 Kevés s sejtes, ebből l 60-80% mesothel,, a többi t lymphocyta >0,6 Sok granulocyta

7 Differenciál-diagnosztikai összefoglalás Folyadék k megjelenés Koaguabilitás Fehérv rvérsejt/mmrsejt/mm 3 Fajsúly A folyadék és s a teljes szérum fehérje aránya Folyadék és s szérum LD aránya Glükóz Koleszterol mellüregi Koleszterol hasüregi Albumin (szérumfolyad rumfolyadék) Nem fog megalvadni <1000/mm 3 <1,016 <0,5 <0,6 Azonos a szérumszinttel <60 mg/dl (SI: <1,55 mmol/l) <46 mg/dl (SI: <1,19 mmol/l) 1,6±0,5 g/dl Transudatum Tiszta, színtelent ntelentől l sárgs rgáig Homályos, változatos v színek (sárga, zöld, piros) A fibrinogén jelenlétéből l fakadóan an megelvadhat >1000/mm 3 >1,016 >0,5 >0,6 Kevesebb, vagy azonos a szérumszinttel különösen alacsony reumás s eredettel >60 mg/dl (SI: >1,55 mmol/l) >46 mg/dl (SI: >1,19 mmol/l) 0,6±0,4 0,4 g/dl Exsudatum

8 A punctios folyadékok elkülönítése a mindennapokban 1. Rivalta-reakci reakció gyors, de kevéss ssé pontos (100 ml híg h g ecetsav oldathoz /100 ml víz+2 v csepp jégecet/ j néhány ny csepp punctatum) ha fehér r nyomot hagy exsudatum 2. Plasmafehérje meghatároz rozási módszerekm 3. Mikroszkópos vizsgálat 4. Bakteriológiai vizsgálat sterilen vett és s kezelt centrifugálás, üledék k tenyészt sztés, s, állatoltás, kenet - Gram, methylenkék, Ziehl-Neelsen 5. Kémiai és serológiai vizsgálatok

9 A punctios folyadékok kémiai k és serológiai vizsgálata I. 1. Összfehérje meghatároz rozás s (lsd( lsd.. táblt blázat) TBC-ben igen magas (meghaladja a malignus folyamatokét) t) 2. Koleszterin meghatároz rozás 1,16 mmol/l /l-es határért rték Carcinosis tumorsejtek membránj njából, interstitumból (permeabilitás fokozódás) Senisitivitás 90-94% 94% Specificitás 82-89% 89% Benignus kórképekben rendszerint alacsony (néha emelkedett gyulladásban chylosus folyadékban)

10 A punctios folyadékok kémiai k és serológiai vizsgálata II. 3. LDH meghatároz rozás s (lsd( lsd.. táblt blázat) 4. Amiláz meghatároz rozás A punctatum/sz /szérum hányados h >1, határért rték Pancreas érintettsége Pancreatitis Pancreas pseudocyta (tumor, trauma) pancreatogén ascites

11 A punctios folyadékok kémiai k és serológiai vizsgálata III. 5. CEA meghatároz rozás 2,5 ng/ml határért rték Rosszindulatú daganat Sensitivitás 45-57% 57% Specificitás % 6. Fibronectin meghatároz rozás 100 mg/l határért rték Carcinosis Koleszterinhez hasonló érzékenység 7. ANA (antinuclearis( antitest) pozitivitás lupus erythematodes visceralis 8. RF (rheuma( factor) positivitás rheumatoid arthritis

12 A punctios folyadékok laboratóriumi riumi feldolgozása, anyagátv tvétel tel (cytologia( cytologia) Alvadásg sgátló Előzőleg leg heparinnal áth thúzott fecskendő,, vagy 3,8%-os Na-citr citrát a punctatumhoz,, 1:15 Friss anyagot Szövetfoszl vetfoszlányok kiemelése fixálás, beágyaz gyazás s szövettanra Centrifugálás s (2000 ford/perc, 15 perc) Üledék, kenetkész szítés Levegőn áll, majd Fixálás s (95%-os alkohol, 30 perc) Festés Véres punctatum Carnoy-fix fixáló (vvt-k feloldása) (70 ml 95%-os alkohol, 25 ml chlofoform,, 5 ml jégecet) j

13 A punctios folyadékok mikroszkópos vizsgálata I. 1. Sejtszám m meghatározás Bürker-kamra kamra <300/μl l = transsudatum >1000/μl l = exsudatum 2. Cytológiai vizsgálat Sejtösszetétel tel és sejtmorphológia Erősen zavaros közvetlen k kikenés Tisztább centrifugálás Festés HE, Papanicolau (PAS, Giemsa) Leukocytosis akut gyulladás, tumor necrosisa Lymphocytosis- TBC elsősorban sorban vírus cycoplasma rheumatikus betegségek gek rosszindulatú daganat Sok vörösvértest rtest pleuritis-peritonitis peritonitis tuberculosa carcinosis haemorrhagias diathesis

14 A punctios folyadékok mikroszkópos vizsgálata II. Hámsejtek jelenléte atypia jeleinek keresése se a savós s hártyh rtyát t elérő,, illetve azon szétterjed tterjedő daganatos elváltoz ltozás A sejtek egyesével vagy kisebb csoportokban elvesztik kapcsolatukat egymással, lekerekített, megváltozott alak, származ rmazási hely? Tumorsejt Negatív Gyanús Pozitív Papanicolaou 1-5. fokozat P1: normális sejtek P2: van atypusos sejt, de malignitás gyanúja nélkn lkül P3: malignitásra gyanús P4: malignitás alapos gyanúja P5: daganatsejtre pozitív v (biztosan malignus) ) sejtkép P3-nál l a punctatum CEA és s koleszterin vizsgálata

15 A pleuralis folyadék k makroszkópos képe k I. (Gyakorlati példa) p Véres folyadék Vér és pleurális lis folyadék k keveréke vvt/μl festenyezett vvt/μl véres A pleurális lis folyadék haematocrit értéke > periféri riás s vér v haematocrit 50%-a haemothorax Trauma Carcinoma Pulmonalis embolia

16 A pleuralis folyadék k makroszkópos képe II. (gyakorlati példa) p Tejszerű folyadék centrifugálás A felülúsz szó feltisztul empyema A felülúsz szó zavaros 1. Chylosus akut chylothorax ductus sérülés chylomicronos, triglicerid >1g/l thoracicus 2. Chyliform (pseudochylothorax) tüdő-callus,, vagy pleuritis tuberculosa (therápiás ptx után) rheumatoid arthritis

17 Szövődm dményes parapneumoniás folyadékgy kgyülem (gyakorlati példa) p Lege artis empyema,, vagy Szervülésre (callus( callus) ) hajlamos Korai beavatkozás s szüks kséges: Alacsony ph (<7,2) Alacsony cukor (<3 mmol/l, ill. 50 mg/dl) Magas LDH szint (>1000 U/l)

18 Hólyagrák - markerek 1. TPA CEA Ca (vizelet) Grade 1 NMP 22 69% (nuclear matrix protein) Telomerase 65% BTA 13% (bladder tumor antigen)

19 Hólyagrák - markerek 2. Molekuláris genetika p 53 p 21 Ki 67 VEGF vizelet (vascular endoghelial growth factor) CD 44-sejtek 25% felett jobb prognózis (transmembrán sejtfelszíni receptor) (Elhilali et al.. J Urol 161, , 811, Editorial)

20 Székletből l kimutatható genetikus markerek 1. A székletb kletből l kimutatható azonosítása; sa; lehetséges szűrési si módszer. m génmutációk; vastag- és s végbv gbélrákos betegek (APC - 26/46, viszonylag korai stádium, BAT 26-17/18, proximális lis) Izgalmas hírekh rek Vastag- és végbélrák szűrés Specificitás - nagy számú minta (NCI !) Egyik cikk sem számol be elegendő számú,, egészs szségesnek vélt v emberekkel kapcsolatos eredményekr nyekről. l. (Atkin,, W.) (Traverso G. et al. N Engl J Med 346: , 320, Traverso G. et al. Lancet 359: , 404, Wong L. J Natl Cancer Inst 94: , 333, 2002.)

21 Székletből l kimutatható genetikus markerek 2. Vastag- és végbélrák szűrés Faecal DNA testing for colon cancer.. TRIAL WATCH NATURE REVIEWS CANCER 5:673, 2005 An existing panel of DNA biomarkers for colon cancer has a combined sensitivity of 52% and a specificity of 94%, so adding this assay to the panel could improve these parameters.. The authors will therefore begin using the assay in a multicentre trial that is aimed at identifying an optimal panel of biomarkers for colon cancer detection through faecal DNA testing. ORIGINAL RESEARCH PAPER Chen, W.D. et al. Detection in fecal DNA of colon cancer-specific methylation of the nonexpressed vimentin gene. J. Natl Cancer Inst (2005)

22 Vastag- és s végbélrák gbélr - tumormarkerek Tumor eltávol volítás - követéses vizsgálat Képalkotó eljárások (UH, CT) Tumormarker panel (CEA, Ca 19-9, 9, TPS, Ca 72-4) Rejtett bélvb lvérzés s (FOBT) 116 beteg - 3 havonta (első év, ill. 6 havonta) Recidívák CEA 78% TPS 53% Ca % Kombináci ció 88% FOBT+CEA 97% (Griesenberg D et al. Anticancer Res 19, 2443, 1999)

23 Ajánlott forrásmunkák 1. Thomas,, L.: Labor und Diagnose. Behring,, , 1774, , 1793, (1992) 2. Elek, G., Gulyás, M., Molnár, M., Szollár,, L.: CEA and cholesterol helps cytologic diagnosis.. 36 th Ann. Meeting of Hung. Soc. Gastroenterol. Abstr. In Z. Gastroenterol,, 32, 283 (1994) 3. Korszerű orvosi diagnosztika és s terápia. Szerk. Schroeder,, SA. és mtsai. Officina Nova Kiadó,, , 232, , 414, 477 (1990). 4. Diamandis,, EP. et al (ed.).: Tumor Markers. Physiology, Pathobiology, Technology and Clinical Application.. Washington, USA, AACC Press (2002) 5. Jacobs, DS. et al (ed.).: Laboratóriumi riumi vizsgálati kézikk zikönyv 2. Magyar kiadás. Budapest, Lélekben Otthon Kiadó és Oriold Károly (2002). 6. Ottó,, Sz., Ferencz,, A.: Rosszindulatú daganatok Tumormarkerek.. Magyar Onkol,, 48, (2004)