Klinikai Orvostudományok Doktori Iskola D94. Iskolavezető: Dr. Komoly Sámuel

Átírás

1 Klinikai Orvostudományok Doktori Iskola D94 Iskolavezető: Dr. Komoly Sámuel A Nefrológia programvezető: Dr. Nagy Judit Dr. Nagy Judit II. sz. Belgyógyászati Klinika Kardiovaszkuláris rizikófaktorok és kardiovaszkuláris megbetegedések Nephrológiai Centrum krónikus vesebetegekben A krónikus vesebetegek több mint fele szív- és érrendszeri betegségekben meghal, mielőbb veséiben előrehaladott károsodás alakulna ki. Jelenleg a nephrológia egyik nagy kihívása a szív- és érrendszeri betegségekre való fokozott hajlamú egyének ill. a már kialakult betegségek korai felismerése és megfelelő kezelése krónikus vesebetegekben. A rendkívül sok feladatot tartalmazó témában két résztémát hirdetünk meg: 1. A krónikus vesebetegek (IgANP, polycystas vesebetegek stb.) kardiovaszkuláris rizikóstátusának felmérése non-invazív kardiovaszkuláris vizsgáló módszerek segítségével. 2. A krónikus vesebetegek (IgANP, polycystás vesebetegek stb.) preklinikai kardiális és vaszkuláris (elsősorban arteriosclerosis és atherosclerosis) megbetegedéseinek diagnózisa és prognosztikai faktorai. A Reproduktív endokrinológia programvezető: Dr. Szabó István Dr. Szabó István Szülészeti és Nőgyógyászati Klinika A méhen belüli koraszülött magzat életkilátását javító módszerek (klinikai tanulmány). Amnioinfúzió. Méhen belüli direkt szteroid kezelés Hazánkban a koraszülés gyakorisága 8-9 %, melynek oka %-ban az idő előtti burokrepedés. A legnagyobb problémát az jelenti, amikor a magzatvíz terhességi hét között, de főleg a 28. hét előtt folyik el. Ebben az időben a magzat igen alacsony súlyú, különböző szervei éretlenek és megszületése után lecsökken az életben maradási esélyük. A legfőbb cél, hogy próbáljuk a szülést késleltetni. Abban az esetben, ha magzatvíz minimális és ha a feltételek adottak, akkor a magzatvizet pótolni tudjuk fiziológiás nátriumkloriddal. Ezzel lehetővé válik, hogy a magzat tovább fejlődjön méhen belül és a szülést nem kell megindítani. Eddig ezzel a beavatkozással átlagosan 30 nappal sikerült a terhességet meghosszabbítani. A koraszülött magzatoknál az egyik legnagyobb probléma a tüdő funkcionális éretlensége. Az édesanyának adott szteroid injekció sietteti a magzati tüdő érését, kedvező hatásának eléréséhez azonban óra szükséges. Abban az esetben, ha a szteroid injekció kontraindikált, vagy a kedvező hatás kifejtéséhez nincs elegendő idő, akkor méhen belüli magzat kapja meg intramuscularisan ezt az injekciót. A kedvező hatás kifejtéséhez elegendő pár óra és a megszületett koraszülötteknél a légzési zavarok kisebb mértékben jelentkeznek. A témában jelentkező feladata, a klinikai tanulmány során a kezelésben nem részesült, illetve a kezelést kapottak (amnioinfúzió, direkt magzati szteroid kezelés) eredményeinek összehasonlítása. 1

2 Dr. Gőcze Péter Szülészeti és Nőgyógyászati Klinika A háromdimenziós ultrahangtechnika jelentősége a szülészetnőgyógyászatban Az utóbbi másfél évtizedben az ultrahang-diagnosztika rohamos fejlődésének lehettünk tanúi. A kétdimenziós ultrahangvizsgálat csupán tomografikus síkok ábrázolására képes, foto-realisztikus felületi, illetve áttetsző képek megjelenítése nem lehetséges, a térfogatmérés pontatlan, továbbá nehéz a reprodukálhatóság, a dysmorphologiai értékelés korlátozott. Az 1980-as évek vége óta a háromdimenziós ultrahangtechnika a kutatás fő területévé vált a medicinában, majd az 1990-es évek második felében a szülészet-nőgyógyászatban is. A háromdimenziós vizsgáló módszer a diagnosztikus pontosság és gyorsaság jelentős javulását eredményezte. A szülészetben a térhatású kép segítségével az ébrény és a magzat anatómiai viszonyai pontosabban elemezhetők, számos fejlődési rendellenesség korábban kerülhet felismerésre. A magzati szervvolumetria áramlásvizsgálatokkal kiegészítve normál és kóros szervműködés vizsgálatát teszi lehetővé. Nőgyógyászati diagnosztikában a petefészkek és a méh normál és kóros állapotainak vizsgálatánál a szervvolumetria kiegészíthető egyedi háromdimenziós, térbeli áramlásvizsgálatokkal: colorhistogram-analízis alkalmazásával quantitatív szövet- és szervperfúziós vizsgálatok végezhetők. Az új évezredben a technika fejlődésével megvalósult a háromdimenziós digitális képalkotás és archiválás. A digitális képfeldolgozás birtokában a beteg jelenléte nélkül utólagos kielemzésre, digitális konzultációra nyílik lehetőség. PhD kutatási téma az alábbi célkitűzések köré csoportosul: 1. A háromdimenziós ultrahangtechnika volumetria új módszerének, az extended Imaging VOCAL módszer reprodukálhatósága. 2. Az extended Imaging VOCAL módszer in vitro, illetve in vivo validálása. 3.A VOCAL és az extended Imaging VOCAL volumetria módszerének összehasonlítása. 4. A háromdimenziós ultrahangtechnika volumetria módszerének jelentősége a klinikai gyakorlatban. Dr. Szilágyi András Szülészeti és Nőgyógyászati A polycystas ovarium syndroma (PCOS) etiológiája, diagnosztikája és Klinika kezelése A polycystas ovarium syndroma (PCOS) a fertilis korú nők leggyakoribb endokrinopathiája, etiológiája ennek ellenére még nem teljesen tisztázott. Az utóbbi években előtérbe került a hyperinsulinaemia, insulin rezisztencia etiológiai szerepe, és ennek megfelelően az insulin érzékenységet fokozó szerek terápiás alkalmazása a PCOS kezelésében. A kutatási téma felöleli a PCOS hormonális és klinikai jellemzőinek (vérzészavar, meddőség, obesitas, a petefészkek ultrahang eltérései) összefüggését az insulin rezisztenciával, valamint az eredmények alapján az insulin érzékenységet fokozó szerek klinikai alkalmazásának indikációját. A PCOS betegek insulin rezisztenciája hosszú távú következményeinek (terhességi diabetes, 2-es típusú diabetes, cardiovascularis rizikó) vizsgálata, prevenciója is a kutatási téma részét képezi. Dr. Szilágyi András Szülészeti és Nőgyógyászati Újabb lehetőségek a meddőség kezelésében Klinika A meddőség a gyermeket tervező párok mintegy 5-10%-át érinti. A kezelési lehetőségek a meddőség okától függően szerteágazóak, ugyanakkor egyre újabb módszerek kerülnek kidolgozásra, majd rutin klinikai alkalmazásra. A legjobban fejlődő területeket az ovuláció indukciós módszerek, továbbá a különböző asszisztált reprodukciós technikák ( lombikbébi program ) képezik. A kutatási téma elsősorban klinikai vizsgálatokat jelent az új kezelési protokollok kidolgozása terén, valamint az alkalmazott eljárások eredményességének összehasonlító vizsgálatát. Az asszisztált reproduktív technikák alkalmazása során számos klinikai és laboratóriumi altéma kutatására nyílik lehetőség. A kezelési protokollok, a cyclus monitorizálása, a kiegészítő gyógyszeres kezelések, az in vitro laboratóriumi munka, valamint az újszülöttek nyomon követése, mind nyitott kérdéseket, kutatási lehetőségeket nyújtanak. 2

3 A Molekuláris patológiai és laboratóriumi vizsgálatok jelentősége az orvosi diagnosztikában és terápiában programvezető: Dr. Miseta Attila Dr. Bogár Lajos Anaesthesiológiai és Intenzív A szeptikus kórfolyamat korai diagnosztikai eszközeinek fejlesztése Therápiás Intézet Az intenzív osztályon kezelt betegek egyik legsúlyosabb szövődménye a súlyos szepszis, szeptikus sokk. A kezdeti infekció (légúti, tüdőszöveti, kiválasztó szervrendszeri, érkanül által okozott vagy a műtét helyén keletkező fertőzés) általában antibiotikummal kezelendő. Azonban az infekcióról szinte sohasem lehet elegendő biztonsággal megállapítani azt, hogy mennyire fogja a beteg életét veszélyeztetni. Az eddigi biokémiai vizsgáló módszerek mellett celluláris funkciós monitorozási lehetőségek is megjelentek. Ezek között a leukocyta antiszedimentációs ráta ígéretesnek bizonyult a súlyos infekciók következményeinek előrejelzésében. Dr. Bogár Lajos Anaesthesiológiai és Intenzív A hemoreológiai módszerek alkalmazása az ischaemiás szívbetegség Therápiás Intézet prognosztizálásában Az emberi vér áramlástani szempontból az egyik legkomplexebb folyadék. Az összetettsége miatt az egyszerű vér- és plazmaviszkozitási mérések illetve a vérsejtek deformabilitását és aggregációs tulajdonságait jelző vizsgálatok nem adnak átfogó képet a vér áramlási jelenségeiről. A munkacsoportunk legutóbbi vizsgálatai azt eredményezték, hogy a haematocrit és a vérviszkozitás hányadosának a haematocrit függvényében olyan optimumfüggvénye ábrázolható, amely több éves utánkövetéssel is jól jelzi az ischaemiás szívbetegek cardialis halálozási kockázatát. Emiatt ennek a kvóciensnek a további elemzése feltétlenül indokolt. Dr. Kőszegi Tamás Laboratóriumi Medicina Intézet Növényi kivonatok citoprotektív hatásának in vitro vizsgálata szövettenyészetekben Régóta ismert, hogy a karotinoidok, a flavonoidok, a polifenolok és sok más, elsődlegesen antioxidáns hatással bíró molekula optimális mennyiségű fogyasztása jelentős tényezőnek számít a krónikus degeneratív betegségek (malignus adaganatok, autoimmun kórképek, szív érrendszeri betegségek, stb.) prevenciójában. Az epidemiológiai vizsgálatokból, állatkísérletes modellekből és in vitro kísérletes rendszerekből nyert nagyszámú megfigyelés ellenére a protektív növényi anyagok hatásmechanizmusa nem teljesen ismert. Feltételezhető és modell kísérletekben részben igazolt is, hogy a citoprotekcióban az egyik legjelentősebb tényező az antioxidáns sajátság. Ugyanakkor a jelenség megértését nehezíti, hogy az irodalomban a legtöbb szerző egy izolált molekulát vizsgál, viszont a kedvező hatás kifejtéséhez minden bizonnyal több protektív faktor együttes jelenlétére van szükség. A jelen kutatás részben a már ismert antioxidáns molekulák további jellemzésére, részben több antioxidáns együttes hatásának vizsgálatára fókuszál. A kísérletekhez sejtes modelleket kívánunk használni: kitapadó szövetkultúrákat (pl. fibroblaszt, HepG-2, MDCK, stb.), illetve szuszpenzióban növő limfoid sejteket (pl. Jurkat, K-562). A citoprotekciót szabadgyökös indukció (pl. menadion adása) után mérjük biolumineszcenciás életképesség (ATP/protein) módszerrel, kemilumineszcenciás követéssel és fluoreszcens spektroszkópiás eljárásokkal, ahol a sejteket intracellulárisan az oxidációs fokra érzékeny fluoreszcens festékkel jelöljük. A fluoreszcenciás módszert flow cytométerre is adaptálni kívánjuk. A vizsgálatok további részét képezi a kezelt sejtek fehérje mintázatában bekövetkező változások követése SDS-PAGE módszerrel, kiegészítve kemilumineszcenciás Western blot analízisekkel. 3

4 Dr. Kőszegi Tamás Laboratóriumi Medicina Intézet Savoldékony kismolekulasúlyú szérumfehérjék vizsgálata szisztémás megbetegedésekben Az albuminnál kisebb molekulatömegű szérumfehérjék között sok, biológiailag aktív molekulát találunk (citokinek, akut fázis fehérjék, stb.). Intézetünkben néhány évvel ezelőtt perklórsavas kicsapásos módszert dolgoztunk ki a 67kDa-nál kisebb szérumfehérjék izolálására, mennyiségi mérésére és elektroforetikus szeparálására. Immunoblot vizsgálattal kimutattuk, hogy a perklórsavban oldódó fehérjék közt az alfa-1-glikoprotein jelentős mennyiségben szerepel. Egészséges egyének fehérje mintázatát összehasonlítva szisztémás betegségben szenvedők fehérje mintázatával, jelentős mennyiségi és minőségi különbségeket találtunk. A módszerrel malignus daganatos betegségnél kimutattuk, hogy a kemoterápia során a savoldékony fehérje frakció mennyisége megnő, az elektroforetikus mintázatokban jellegzetes eltéréseket találtunk. A tervezett kutatás célja malignus betegségekben és szepszisben a perklórsavban oldódó szérumfehérjék további jellemzése, betegségre specifikus molekulák vagy molekula mintázatok keresése, a markernek ítélt fehérjék azonosítása. Módszerként nagyfeloldású egy- és kétdimenziós gélelektroforézist, western blot módszert, immunkémiai vizsgálatokat és a PTE Biokémiai és Orvosi Kémiai Intézetével kollaborálva tömegspektrometriás méréseket alkalmazunk. Dr. Kőszegi Tamás Laboratóriumi Medicina Intézet Citokin mérések surface plasmon rezonancia (SPR) technikával szövetkultúra modellben és humán szérum mintákból A citokinek nagy biológiai aktivitást mutató kismolekulasúlyú fehérjék, melyek résztvesznek a humorális és celluláris immunitás szabályozásában, elindítói a gyulladásos válaszreakciónak, szabályozzák a sejtosztódás apoptózis egyensúlyát és még sok más celluláris funkciót. A citokinek a szisztémás keringésben nagyon kis koncentrációban vannak jelen. Féléletidejük rövid és a szervezetet ért behatásokra szintézisük nagyon gyorsan fokozódhat. Különösen igaz ez az un. proinflammatorikus mediátorokra (prokalcitonin, TNF-alfa, interleukin 1, 6, 8), melyek elindítják a szervezet szisztémás válaszát a fertőző ágensek ellen. A fokozott szisztémás válaszreakció önpusztító is lehet, a gyulladás szepszisbe mehet át. A szepszis sikeres kezelésének egyik alapfeltétele a korai felismerés. A proinflammatorikus mediátorok szérum szintje a szisztémás fertőzés során már néhány órán belül drámaian megemelkedik. Mérésükre ma a lumineszcenciás immunoesszék a legelterjedtebbek. A legújabban kifejlesztett SPR technika képes a molekuláris kölcsönhatások (pl. antigén-antitest) közvetlen, nagy érzékenységű folyamatos monitorozására, így alkalmas a citokinek kimutatására is. A jelen kutatásban egy SPR berendezés tesztelése, fejlesztése folyik, melyben a Diagnosticum Zrt. is részt vesz. Kísérleti modellként különböző szövetkultúrák endotoxin kezelésre adott citokin válaszát vizsgáljuk az SPR berendezéssel. A kutatás további részében szisztémás fertőzésben szenvedő betegek szérum mintáiból végzünk citokin meghatározásokat. Az SPR módszert összevetjük a rutin laboratóriumi diagnosztika által használt immunoesszék analitikai teljesítő képességével. Dr. Kőszegi Tamás Laboratóriumi Medicina Intézet Humán szérum aktin, és aktinkötő fehérjék prediktív értékének vizsgálata súlyos katabolikus állapotokban A szervezet egészét érintő szöveti károsodások mértékének megítélése a jelenlegi rutin laboratóriumi diagnosztikában használt paraméterek alapján nem végezhető el kielégítő pontossággal. Ugyanakkor jól ismert, hogy minden sejtünk tartalmaz aktint, mely a citoszkeleton integráns részét képezi. A legújabb irodalmi adatok alapján vált csak ismertté, hogy súlyos szöveti lézió (kiterjedt műtét, trauma, szepszis, ARDS) esetében az elpusztult sejtekből az elsősorban fibrilláris formában lévő aktin G aktinná depolimerizálódva a vérbe kerül. A G aktint scavanger jellegű fehérjék (Gelsolin, D vitamin kötő fehérje) megkötik és a keringésből eliminálják. Amennyiben az aktin kínálat meghaladja a kötő fehérjék kapacitását, a G aktin többlet szabaddá válva megjelenik a plazmában és mennyiségétől függően súlyos többszervi elégtelenséget képes kiváltani. A kutatás célja SDS-poliakrilamid gélelektroforézis + western blot és kvantitatív kemilumineszcenciás detektálás alkalmazásával a keringő aktin- és aktinkötő fehérjék meghatározása a fenti betegcsoportok szérum mintáiból. A vizsgálat monitorozó jellegű, összefüggést keresünk a mért paraméterek és a szisztémás szöveti károsodás közt. Az aktin és a gelsolin meghatározása várhatóan új fehérje markerként lesz alkalmazható a fokozott szöveti károsodás mértékének objektív megítéléséhez. 4

5 B Molekuláris patomorfológia programvezető: Dr. Pajor László Dr. Pajor László Pathológiai Intézet Kombinált in situ pheno- és genotypus analizis alkalmazása a pathomorphologiában Egy mikroszkóposan azonositható phenotypushoz (morphologia és immunphenotypus) nem feltétlenül egy genotypus rendelhető, ami phenotypus szinten fel nem ismerhető heterogenitást jelent. Ilyen azonos phenotipushoz tartozó genetikai heterogenitás gyakran előfordul reaktiv és daganatos sejtek között, mivel a daganatos transzformáció során nem változik meg feltétlenül a phenotipus, de a specifikus genotypus változás ( akvirált genetikai aberráció) csak a tumorsejtre jellemző. Példaként emlithető a pre-b-sejt és a call leukaemiás sejtek u.a. CD10+, CD19+, CD34+ phenotypusa vagy a plasmasejtek és a myeloma sejtek u.a. CD20-, CD38+. CD45-, CD138+ phenotypusa. Biokémiai módszerekkel nem, esetleg csak nagy mennyiségű anyagot igénylő és nem teljesen tiszta populációt adó sejtszortirozást követő molekuláris módszerekkel lehet ezt a genotypus heterogenitást feltárni. Ugyanakkor az immuncytologia / histologia és konzekutiv in situ hybridizáció (ISH) alkalmazásával, relokalizációs mikroszkópos rendszerekben a phenotypus asszociált genotypus egyedüli módon és nagy precizitással vizsgálható és azonositható.a program e fenti módszertannal a genetikai heterogenitás vizsgálatát célozza meg pall-ben és myeloma multiplex-ben komplex flow cytometrias és PCR technologiát is felhasználva és az adatokat a betegség-lefolyással korreláltatva. Tekintettel arra, hogy az ISH-ós jelmintázat automatizált felismerésében döntő jelentősége van a genomikus vs fizikai jeltávolság aránynak, ezen technologia standardizációjának vizsgálata ugyancsak része a programnak. Dr. Pajor László Pathológiai Intézet Hyperdiploid gyermekkori acut lymphoblastos leukaemia cytogenetikájának vizsgálata Az acut lymphoblastos leukaemia (ALL) a leggyakoribb gyermekkori rosszindulatú, daganatos megbetegedés. Az alul- illetve túlzott kezeléseket elkerülő, optimális terápia megválasztását a betegségspecifikus, nem random kromoszómális genetikai aberációk jelenlétén vagy hiányán alapuló nemzetközi osztályozás határozza meg. A betegség két leggyakoribb subtypusa az ETV6/RUNX1 translocatiot hordozó, illetve az közötti modalis kromoszóma számmal bíró hyperdiploid csoport, melyek együttesen az összes gyermekkori ALL kb. 55%-át, a 2-7 éves korban kialakuló betegségek kb. 80%-át teszik ki. A kutatás célja a feltételezhetően in utero kialakuló hyperdiploid ALL korai felismerése és kezelése szempontjából legfontosabb 4 vagy 5 kromoszómális eltérés azonosítása. A nem osztódó, interfázisban lévő sejtmagokon elvégzett, relocalizációs technikát is alkalmazó, automatizáltan kiértékelt fluorescencia in situ hibridizációs vizsgálat (i-fish) a leghatékonyabb módszer az említett számbeli kromószómális elváltozás illetve ennek klonalis fejlődése kimutatásához. A vizsgálatok a Pathologiai Intézetben archivált nagy számú gyermek ALL csontvelő minták vizsgálatán alapszanak. A Keringéspatológiai állapotok vizsgálata in vivó sebészi modelleken és klinikai beteganyagon programvezető: Dr. Rőth Erzsébet Dr. Rőth Erzsébet Sebészeti Oktató és Kutató Intézet Az endogén adaptációt indukáló posztkondicionálás kísérletes és klinikai vizsgálata Az endogén adaptáció indukálásának az utóbbi években egyik legkutatottabb területe az u.n. posztkondicionálás. Ennek lényege, hogy az előzően hipoxiás, iszkémiás szöveteket a teljes reperfúzió megindítása előtt rövid iszkémiás,(10-15 sec.) és reperfúziós (2-3 perc) ciklusok előzik meg. A védő hatás kialakulása az adott célszerv (szív, tüdő, máj, vese) funkcionális és morfológiai vizsgálatával igazolható. Kísérletes munka során altatott nyulakon, illetve 5

6 sertéseken torténik a modell létrehozása, a vizsgálni kívánt szerv kipreparálásával., majd 1-2 órás iszkémiat követően a reperfúzió megindítása elött a posztkondicionáló ciklusok alkalmazásával. Vérminták és szövetminták egyaránt rendelkezésre állnak a biokémiai és molekuláris biológiai kiértékeléshez (flow cytometer, ELISA technika, Western blot). Klinikai kollaboráció kialakítását követően (érsebészet, szívsebészet, transzplantációs sebészet) a betegektől megfelelő protokoll alkalmazásával vérminták gyüjthetők, melyekből az oxidatív stressz paramétereit, az endogén védelem státuszát jelző hősokk fehérjéket és az antioxidáns enzimek fehérjéit lehet meghatározni. Eredményes munka esetén javaslatot lehet tenni az eljárás klinikai alkalmazására. Dr. Rőth Erzsébet Sebészeti Oktató és Kutató Intézet A glutathion-s-transzferáz enzim és gén-polimorfizmusának szerepe az endogén adaptációban és a posztkondicionálás folyamatában kísérletes és klinikai vizsgálatok során Az iszkémiás posztkondicionálással kiváltható védelem a ma ismert leghatékonyabb celluláris endogén védelmi mechanizmus az I/R károsodásokkal szemben. Az elmúlt évtizedben a jelenség vizsgálata a kardiovaszkuláris kutatások egyik kiemelt területévé vált, hatékonyságát és mechanizmusát kísérletes körülmények között számos tanulmány igazolja. A glutathion-s-transzferáz (GST) antioxidáns enzim aktivitása nagyban meghatározza a sejtek oxidatív stresszre adott gyulladásos és adaptív válaszát, valamint fontos szerepet tölt be az iszkémiás posztkondicionálás során. A GST legfőbb szerepe az oxidatív stressz során keletkezett káros termékek redukált glutationnal történő konjugálása, így kevésbé toxicus termék létrehozása. A GST enzim három fő csoportja különböztethető meg, melyek közül a citoszólban jelenlevő GST enzim jelentős szerepet tölt be az oxidatív stresszel szembeni védelem, sejtproliferáció, apoptózis irányításában. A GST családnak mai ismereteink szerint hét alcsoportja különböztethető meg (Mű, Pi, Téta, Alfa, Szigma, Omega és Zéta), melyek genetikai polimorfizmusa összefüggésbe hozható az oxidatív stresszel, gyulladásos folyamatokkal szembeni sejtszintű védekezés károsodásával. A tervezett vizsgálatok egy részében primer szívizom sejttenyészeten tanulmányozható a GST szerepe az oxidatív stresszel és az iszkémia-reperfúzióval szembeni védekezésében, valamint az intracelluláris jelátviteli utak szerepe az iszkémiás posztkondicionálás során. A munka további célkitűzése klinikai beteganyagon az I/R károsodás következtében kialakuló oxidatív és gyulladásos válaszfolyamatok kimutatása és ezek összefüggése a GST polimorfizmusával.ezen folyamatok részletesebb megismerése segíthet új diagnosztikus és terápiás stratégiák kifejlesztésében, melyek javíthatják az IR károsodás kimenetelét, csökkentve a betegek hospitalizációs idejét és annak költségeit. Dr. Rőth Erzsébet Sebészeti Oktató és Kutató Intézet A thrombocyta funkciók (indukált aggregáció és szabadgyök termelés) vizsgálata fiziológiás és patofiziológiás körülmények között, valamint gyógyszerhatások alatt A thrombocyták relative kevéssé tanulmányozott komponensei a keringési rendszernek, pedig a hemosztázis meghatározó elemei.. Aktivációjuk rendkívül gyors, melyben számos, a thrombocyta és az endotél sejt által termelt faktor vesz részt. A hiperaktív thrombocyta számos keringési betegség pathomechanizmusában komoly szerepet játszik. Így a koszorús ér és a perifériás vaszkuláris betegségek kialakulásában, a 2-es típusú diabétesz szövődményeinek létrejöttében, sőt a legújabb adatok szerint az 1-es típusú diabéteszes betegekben is kimutatható a thrombocyta aktiváció. A témával foglalkozó hallgatónak lehetősége lesz vizsgálatait beteganyagon és állatkísérletes modellekben egyaránt elvégezni. Így 2-es típusú diabéteszes betegeken vizsgálható a vérlemezke aggregáció és az inzulin rezisztencia közötti összefüggés a diabétesz különböző stádiumaiban. A vizsgálatok vérlemezke-dús plazmában és teljes vérben egyaránt megtörténnek. Perifériás érbetegségben szenvedő betegeknél a hallgató vizsgálatainak célja a revaszkularizációs műtéti beavatkozások előtt, alatt és után vizsgálni a vérlemezke funkciót, tekintettel a diabétesz szerepére, illetve a műtéti stressz kimutatására. Állatmodellekben dietetikailag létrehozott inzulin rezisztens, illetve inzulin deficiens állapotot lehet vizsgálni. Ennek célja, hogy a betegség kialakulásával párhuzamosan a vérlemezkék aggregábilitását monitorozza, illetve kimutassa, hogy aggregáció-gátló szerek alkalmazásával a folyamat befolyásolható-e. 6

7 Dr. Rőth Erzsébet Sebészeti Oktató és Kutató Intézet Sebészeti és traumatológiai beavatkozások kísérletes és klinikai vizsgálata különös tekintettel az oxidatív stressz és a cytokin egyensúly monitorozására Jól ismert, hogy az elmúlt évtizedben a minimálisan invazív sebészi technikák térhódításával a betegek műtéti megterhelése lényegesen csökkent, gyógyulásuk gyorsabb. Ez a jelenség azonban nemcsak a kisebb műtéti behatolással magyarázható, hanem a szervezet részéről fellépő gyulladásos válaszreakciók intenzitásának csökkenésével is. E mellett számos vizsgálat igazolja, hogy az endogén adaptáció csökkenésével párhuzamosan a műtéti megterhelést követően kialakul az oxidatív stressz állapota, melynek monitorozása humán vérmintákból jól reprodukálhatóan elvégezhető. Klinikai kollaborációban végzett vizsgálatok során a hallgató az operált betegektől meghatározott protokoll szerint gyűjtött vérmintákból sejteket izolálhat (leukocyták, thrombocyták) melyeknek szabadgyök termelése, illetve aggregációs képessége jól tükrözi az oxidatív stressz súlyosságát. E mellett spektrofotometriás, ELISA és flowcytometriás módszerekkel a lipidperoxidáció mértéke, illetve az antioxidáns enzimek mennyisége is meghatározható. Az aktivált sejtek alkalmasak a különböző jelátviteli utak tanulmányozására különös tekintettel a mitogén aktiválta protein kináz család (MAPK), az extracelluláris szignál regulálta kináz (ERK1/2), p38 mitogén aktiválta protein kináz foszforilációs szintjének meghatározására. A molekuláris biológiai módszerekkel kapott eredmények alapján a későbbi terápiás beavatkozásokhoz lehet támpontot nyerni. Dr. Rőth Erzsébet Sebészeti Oktató és Kutató Intézet Modern képalkotó diagnosztikai eljárások kísérletes és klinikai vizsgálata, különös tekintettel a dual source CT alkalmazására A CT, MR és ultrahang diagnosztika lehetőségei a rohamos technikai fejlesztések mentén, és ezek megvalósulását követően egyre újabb perspektívákat nyitottak a betegségek diagnosztikájában. Az új technikák eredménye, hogy nemcsak a vizsgálatok indikációs területe szélesedik folyamatosan, hanem a gyógyításban is egyre eredményesebben használhatók fel. A tervezett vizsgálatok az u.n. dual source CT berendezés diagnosztikai előnyeinek feltárását tűzik ki célul, elsősorban a tüdő és a máj diffúz betegségeiben, valamint a daganatok non-invazív differenciál diagnózisában. Ez a berendezés alkalmas a perifériás artériák állapotának pontos vizsgálatára, az artériákban kialakuló plakkok feltérképezésére. A vizsgálat előnye az alacsony sugárterhelés és a rövidebb mérési idő a korábbi technikákkal szemben. A programot választó hallgatónak alkalma lesz megismerkedni a mágneses navigációs rendszerrel, a legújabb targeting és combo technikák alkalmazásával, mely az intervenciós radiológiai beavatkozások hatékonyságát fokozza.. Dr. Rőth Erzsébet Sebészeti Oktató és Kutató Intézet Szív- és tüdő iszkémiás-reperfúziós károsodásának új aspektusai Az iszkémia-reperfúziós (IR) károoosodás jelensége mindmáig általános probléma a sebészetben. Jelentős kutatási eredmények azt mutatják, hogy a károsodást alapvetően olyan gyulladásos válaszfolyamatok okozzák, melyek az iszkémiás szövet reoxigenálását követően triggerelődnek. Függetlenül attól, hogy eredetileg mely szervben zajlott le az iszkémia-reperfúziós folyamat, a gyulladásos válasz távoli szerveket, szöveteket is károsíthat, mely szisztémás gyulladásos válasz szindrómához (SIRS) vagy akár többszervi elégtelenséghez (MOF) vezethet. Ezen káros folyamatok hátterében jelentős szerepet töltenek be bizonyos metabolikus változások. Bizonyos oxidatív és nitrozativ stressz folyamatok olyan specifikus globális metabolikus válaszokhoz vezetnek, melyeknek profilja mind folyadék, mind gáz fázisban jól meghatározható egy újfajta, úgynevezett metabonomics eljárással. Ezek a metabolikus változások hozzájárulhatnak transzplantációt, illetve revaszkularizációt követő szív- és tüdőkárosodáshoz. Továbbá feltételezzük, hogy az antioxidáns enzim glutathion- S-transzferáz (GST) aktivitása nagyban meghatározza a sejtek oxidatív stresszre adott gyulladásos és adatív válaszát, és így az IR kimenetelét. Célunk, hogy meghatározzuk a szív tüdő és vázizom oxidatív és IR károsodásának globális metabolikus profilját, továbbá a GST rendszer és az intracelluláris jelátviteli utak szerepét IR károsodásban és iszkémiás posztkondicionálás során. Ezen folyamatok részletesebb megismerése segíthet új diagnosztikus és terápiás stratégiák kifejlesztéséhez, melyek javithatják az IR károsodás kimenetelét, így csökkenthetik a betegek hospitalizációs idejét és annak költségeit. 7

8 Dr. Koller Ákos Kórélettani és Gerontológiai A szuperoxid diszmutáz (SOD) és a H2S antioxidáns hatásának in vivo Intézet és in vitro vizsgálata Az oxidatív stressz, illetve annak kivédése számos egészséges és kóros folyamatban szerepet játszik. Az antioxidáns mechanizmusok egyik első és legfontosabb lépése a szuperoxid szabadgyök diszmutálása, így az antioxidáns mechanizmusok méréséhez a SOD aktivitásának a meghatározása standardként szolgál. Mivel az utóbbi időben a számos antioxidáns mechanizmus/szer között a természetesen előforduló kénhidrogénnek is szerepet tulajdonítanak, érdemes a kétféle szer (a SOD és a H2S) hatékonyságát többféle biológiai rendszerben összehasonlítani. In vitro mérések: Izolált érgyűrűkön miográf segítségével, illetve ugyancsak izolált érszakaszokon nyomás-miográf és videomikroszkóp segítségével vizsgáljuk az érfal simaizom kontrakciós erősségét az oxidatív stressz különböző szintjei mellett. A receptor-közvetítette mechanizmusokat receptorbénítókkal vizsgáljuk. A receptorokat immunhisztokémiai módszerekkel határozzuk meg. In vivo mérések: Az alkalmazott oxidáns/antioxidáns és a receptorok működését befolyásoló szereket altatott patkányoknak i.v. adagoljuk, és a vérkeringési paramétereiket monitorozzuk. Dr. Koller Ákos Kórélettani és Gerontológiai Az iszkémia-reperfúzió hatása a kisvénák vazomotor működésére Intézet Az iszkémia-reperfúzió a klinikai és az experimentális gyakorlatban nagyon sokszor előfordul. A károsodások mechanizmusainak a kutatására igen nagy energiát fordítanak világszerte. A kutatások elsősorban a parenchymás szervek/szövetek elváltozásait vizsgálták, sokkal kevesebb figyelem fordult az adott területeket ellátó erek, főképpen a vénák működésváltozásainak a tanulmányozására. Ez utóbbiak szerepe azonban a mikrocirkuláció szabályozásában rendkívül fontos. Ezért ezek kontrakciós mechanizmusainak a szabályozását érdemes vizsgálni. Alkalmazott módszerek: Miográf segítségével különböző érterületek mikrométer átmérőjű kis vénáiból vett érgyűrűknek megmérjük a kontrakciós erejét, illetve változó nyomás mellett az érátmérő változásait detektáljuk videomikroszkóp segítségével. Mind a receptoriális, mind az intracelluláris mechanizmusokat kutatjuk, amelyek a simaizom kontrakciós mechanizmusait szabályozzák. Dr. Menyhei Gábor Sebészeti Tanszék A műtét típusának és az érzéstelenítés módjának hatása a carotis endarteriectomiák eredményeire Számos magas szintű evidenciát nyújtó tanulmány bizonyította a carotis endarteriectomia jótékony hatását és előnyeit a stroke primér és szekundér prevenciójában. Ellentmondó adatok ismertek arról, hogy a műtét típusa (endarteriektomia folttal, folt nélkül, eversiós endarteriectomia) hogyan befolyásolja a műtét eredményességét, a különböző posztoperatív szövődmények arányát, valamint a restenosis gyakoriságát. Intézetünkben az utóbbi években kedvező tapasztalatokat szereztünk a locoregional anaesthesiában végzett carotis reconstructiókkal. A tervezett kísérletes és klinikai vizsgálatok során arra keressük a választ, hogy különböző érzéstelenítési és műtéti típusok mely kombinációjánál érhető el a legjobb klinikai eredmény. Vizsgálni kívánjuk azt is, hogy a műtéti szövődmények arányát hogyan befolyásolja az érzéstelenítés módja a különböző életkorú betegcsoportokban. További tisztázandó kérdés, hogy a műtét alatti carotis-kirekesztés időtartama befolyásolja-e a műtét kimenetelét, szövődményarányát. Ennek a kérdésnek a vizsgálatára intraoperatív oxymetriás méréseket is tervezünk. Prospektív klinikai tanulmánnyal kívánjuk elemezni a műtét típusának késői restenosisra kifejtett hatását. Dr. Wéber György Sebészeti Oktató és Kutató Intézet Transzvaginális NOTES műtéteknél alkalmazható általános és speciális eszközök kifejlesztése Napjaink sebészi szemléletét és gyakorlatát a műtéti megterhelés minél kisebbre való csökkentése jellemzi. E minimál invazív tendencia jegyében a 8

9 medicina szinte valamennyi területén történtek erőfeszítések annak érdekében, hogy a műtéti beavatkozásokat minél kevésbé traumatizáló, gyorsabban, kisebb műtéti heggel gyógyuló és kevesebb szövődmény lehetőségével járó behatolásból végezzék el. A természetes testnyílásokon keresztüli sebészet (Natural Orifice Transluminal Endoscopic Surgery: NOTES) egy új és rohamos fejlődésnek induló irányzat a hasi sebészeti beavatkozások terén, mely az un. metszés nélküli és hegnélküli műtétekkel forradalmasíthatja a sebészetet. Az eljárásoknak a humán gyakorlatban való bevezetése előtt számos kérdéskör tisztázása elengedhetetlen. A programban a szakma igényeinek megfelelően kifejlesztésre kerülő transvaginális NOTES eljárásokhoz (hüvelyen keresztüli történő pl. epehólyageltávolítás, féregnyúlvány eltávolítás) szükséges speciális eszközöket kívánunk létrehozni. Dr. Wéber György Sebészeti Oktató és Kutató Intézet A pre- és posztkondicionálás csökkenti-e a pneumoperitoneum okozta káros szisztémás hatásokat A laparoszkópos technika kevésbé megterhelő a szervezet számára, mint a hagyományos nyitott műtét, ugyanis a műtéti metszés csökkentésével csökken a posztoperatív fájdalom, valamint a csökken a kórházban eltöltött napok száma. Ugyanakkor a laparoszkópos műtéteknél használatos pneumoperitóneum során az intraabdominális nyomás megnövekszik (12-15 Hgmm) ami magasabb, mint a fiziológiás portális nyomás (7-10 Hgmm) és ez a keringés károsodását vonja maga után. A hasi szervek vérellátása lecsökken, így oxigénhiányos állapot jön létre, ez reaktív oxigén származékok és gyulladásos citokinek (TNF-α, IL-6) felszaporodásához vezet, melyek károsíthatják a szervezetet a posztoperatív időszakban. Minél nagyobb az intraabdominális nyomás valamint minél hosszabb ideig tart ez az állapotot annál jobban érvényesül a káros hatás. Kísérleteink célja, hogy megvizsgáljuk, hogy pre- illetve posztkondicionálás alkalmazásával csökkenthető-e ez a káros hatás. Dr. Wéber György Sebészeti Oktató és Kutató Intézet Transzvaginális cholecystectomiát követő májfunkciós és szisztémás változások vizsgálata állatmodellen Az utóbbi években egyre nagyobb szerephez jut az oxidatív stressz és egyéb labor paraméterek vizsgálata a műtéti megterhelés megítélésére, a beteg nyomon követésére, esetlegesen manifesztálódó szövődmények megelőzésére. A műtét által okozott stressz és szabadgyökös reakciók szisztémás válaszokat indukálnak és az egész szervezet szintjén hoznak létre változásokat. A laparoszkópos technika térhódítása nagymértékben köszönhető annak, hogy az indukált sebészi trauma kevésbé intenzív, mint a hagyományos műtéteknél. Kísérleteinkben arra kerestük a választ, hogy milyen mértékű az oxidatív stressz és egyéb laborparaméterek változása az új, NOTES technikával operált esetekben, összehasonlítva a laparoszkópos műtéti technikával, valamint, hogy az eredmények alapján felmérjük, hogy az új műtéti technika valóban kisebb megterhelést jelent-e a kísérleti állatok számára. Dr. Lantos János Sebészeti Oktató és Kutató Intézet Oxidatív stressz, leukocita és trombocita aktiváció vizsgálata égési traumát szenvedett betegek antioxidáns kezelése során Intenzív terápiás kezelést igénylő számos kórképben közös tényező a szervezet szisztémás gyulladásos válaszreakciója, melyet a reaktív szabadgyökök felszaporodása, a fehérvérsejtek, trombociták és endothel sejtek aktiválódása kíséri. A program keretén belül az égési traumát szenvedett betegek antioxidáns terápiájának hatékonysága vizsgálható az oxidatív stressz és leukocita aktiváció nyomon követésével. A jelölt betegektől származó vérmintákban vizsgálhatja a scavenger enzimek aktivitásának változását, a lipidperoxidáció mértékét, az endogén antioxidáns rendszer mennyiségi viszonyait, a teljes vér stimulált gyöktermelését, valamint az izolált trombociták, illetve azok teljes vérben meghatározható aggregációs hajlamát a terápiás beavatkozás során. A program lehetőséget teremt továbbá, a kóros vaszkuláris reakciókért felelős sejtek adhéziós receptorai expressziójának tanulmányozására, valamint a sejtek közti kommunikációban jelentős szereppel bíró pro- és anti-inflammatórikus citokinek plazma 9

10 szintjének mérésére is. A klinikai együttműködésben végzett vizsgálat során lehetőség nyílik továbbá a fenti paraméterek klinikai státusszal és a hagyományos laboratóriumi paraméterekkel történő összehasonlítására. A tervezett vizsgálatok várható elméleti és gyakorlati jelentősége, hogy az égési traumát szenvedett betegek kezelése hatékonyságának nyomon követésével újabb terápiás lehetőségek kerülhetnek kimunkálásra. Dr. Lantos János Sebészeti Oktató és Kutató Intézet Oxidatív stressz, leukocita és trombocita aktiváció vizsgálata akut tüdősérülés szenvedett betegekben Intenzív terápiás kezelést igénylő számos kórképben közös tényező a szervezet szisztémás gyulladásos válaszreakciója, melyet a reaktív szabadgyökök felszaporodása, a fehérvérsejtek, trombociták és endothel sejtek aktiválódása kíséri. A program keretén belül az oxidatív stressz és leukocita aktiváció változása vizsgálható akut tüdősérülést szenvedett betegek kezelése során. A jelölt betegektől származó vérmintákban vizsgálhatja a scavenger enzimek aktivitásának változását, a lipidperoxidáció mértékét, az endogén antioxidáns rendszer mennyiségi viszonyait, a teljes vér stimulált gyöktermelését, valamint az izolált trombociták, illetve azok teljes vérben meghatározható aggregációs hajlamát. A program lehetőséget teremt továbbá, a kóros vaszkuláris reakciókért felelős sejtek adhéziós receptorai expressziójának tanulmányozására, valamint a sejtek közti kommunikációban jelentős szereppel bíró pro- és anti-inflammatórikus citokinek plazma szintjének mérésére is. A klinikai együttműködésben végzett vizsgálatok során lehetőség nyílik a fenti paraméterek klinikai státusszal és a hagyományos laboratóriumi paraméterekkel történő összehasonlítására. A tervezett vizsgálatok várható elméleti és gyakorlati jelentősége, hogy a szervezet oxidatív egyensúlyának, a leukociták, a trombociták aktivált állapotának nyomon követésével olyan adatok nyerhetők, melyek kórjelző értékkel bírhatnak, alkalmasak lehetnek a terápiás beavatkozások hatásosságának megítélésére, újabb terápiás lehetőségek kimunkálására.. Dr. Lantos János Sebészeti Oktató és Kutató Intézet Az immunonutríció hatásának vizsgálata a politraumás betegek immunválaszára az oxidatív stressz, a leukocita és trombocita aktiváció tükrében Intenzív terápiás kezelést igénylő számos kórképben közös tényező a szervezet szisztémás gyulladásos válaszreakciója, melyet a reaktív szabadgyökök felszaporodása, a fehérvérsejtek, trombociták és endothel sejtek aktiválódása kíséri. A program keretén belül a politraumát szenvedett betegek táplálásában egyre elterjedtebben alkalmazott immunerősítő diéták hatékonysága vizsgálható az oxidatív stressz és leukocita aktiváció nyomon követésével. A jelölt betegektől származó vérmintákban vizsgálhatja a scavenger enzimek aktivitásának változását, a lipidperoxidáció mértékét, az endogén antioxidáns rendszer mennyiségi viszonyait, a teljes vér stimulált gyöktermelését, valamint az izolált trombociták, illetve azok teljes vérben meghatározható aggregációs hajlamát a terápiás beavatkozás során. A program lehetőséget teremt továbbá, a kóros vaszkuláris reakciókért felelős sejtek adhéziós receptorai expressziójának tanulmányozására, valamint a sejtek közti kommunikációban jelentős szereppel bíró pro- és anti-inflammatórikus citokinek plazma szintjének mérésére is. A klinikai együttműködésben végzett vizsgálat során lehetőség nyílik a fenti paraméterek klinikai státusszal és a hagyományos laboratóriumi paraméterekkel történő összehasonlítására. A tervezett vizsgálatok várható elméleti és gyakorlati jelentősége, hogy a politraumát szenvedett betegek új típusú táplálásával várhatóan csökkenthető a szepszis, a SIRS és a többszervi elégtelenség előfordulása, valamint újabb adatok nyerhetők a betegek immunfunkcióit javító táplálásának hatásmechanizmusáról is. Dr. Borsiczky Balázs Sebészeti Oktató és Kutató Intézet Az oxidatív stresszre adott válaszreakciók genetikai hátterének vizsgálata sebészeti kórképekben Kétségtelenül igazolódott, hogy a szabadgyökök és reaktív oxigén intermedierek, valamint az ezek eliminálásában szerepet játszó antioxidáns és scavenger enzimek, illetve molekulák közötti egyensúly megbomlása, vagyis az oxidatív stressz folyamata, számos sebészeti kórkép kialakulásával kapcsolatba hozható. Az oxidatív stressz következtében létrejövő sejtkárosodások mértékét többek között az agresszív és defenzív tényezők eredő hatása, valamint ennek 10

11 időbeli fennállása határozza meg. Ebben a vonatkozásban bizonyos direkt antioxidáns hatással bíróenzimek, mint pl. a SOD, CAT, GPx, GR, stb aktivitása, valamint más egyéb, a stressz hatására aktiválódó védőhatású, protein természetű jelátviteli faktorok, pl: GST, NFkB, AKT működése döntő jelentőségű a károsító folyamatok végső kimenetelének szempontjából. Régóta ismert, ezeknek a védőhatású enzimeknek és proteineknek a működőképességét az öröklött genetikai kód, illetve a kódról történő átírást befolyásoló speciális epigenetikai faktorok döntően meghatározzák. E mellett az oxidatív stressz során is számos olyan ágens generálódik, amelyről kiderült, hogy képes lehet közvetlenül a DNS, vagy az annak működésében szerepet játszó fehérjék és lipidek károsodását okozni. A téma feldolgozása során a genetikai kód eltéréseit, illetve az egyes gének aktiválódásának folyamatait kívánjuk vizsgálni azon fehérjék esetében, amelyek feltételezhetően szerepet játszanak olyan szív és érsebészeti, tumor-sebészeti és traumatológiai kórképekben, mint pl. a coronaria betegség, a nyelőcső carcinoma vagy az arthrofibrosis. Így a jelölt feladata például az adott védőfehérje genomikus szintjén feltételezhető deléciók vizsgálata multiplex- PCR reakcióval, SNP analízis DNS microarray teszttel, DNS metiláció keresesése az adott génhez tartozó jelző ágensek segítségével. Dr. Borsiczky Balázs Sebészeti Oktató és Kutató Intézet Izületi sérülésekhez kapcsolódó kórállapotok patobiokémiai hátterének vizsgálata A végtagsérüléseknek számos formája ismert, a felületes bőrsérüléstől, a nemesebb ér- ideg képletek károsodásán át, az izomzat, a csontos váz vagy az izületek sérüléséig. Ez utóbbinak elkerülhetetlen velejárója az intraartikuláris környezet mennyiségi és minőségi megváltozása, amely a sérülés okozta közvetlen szöveti roncsolódáson túl, alapvetően meghatározza a gyógyulás esélyeit. E mikrokörnyezet változásai közül az egyik legbanálisabb az izületi üregben megjeleő vérzés, az akut haemarthros és a következtében kialakuló intraartikuláris stressz, amelynek patomechanizmusa mai napig nem ismert minden részletében. A programban lehetőség nyílik az izületi sérülések esetén feltételezett pathogenetikai faktorok in vitro tanulmányozására, primer chondrocyta kultúrákon elvégezhető modell kísérletek során. In vivo állatkísérletek és humán betegekből vett vér, illetve szövetmintákon elvégzendő klinikai vizsgálatok segítségével új részleteit tárulhatnak fel az akut haemarthros és egyéb végtagsérülésekhez kapcsolódó kóros állapotok patomechanizmusainak. Dr. Ferencz Andrea Sebészeti Oktató és Kutató Intézet A gasztrointestinális rendszer keringéspathológiájának klinikai vonatkozásai és kísérletes vizsgálata A gasztrointestinális rendszerdszerben (GIR) számos ischémia/reperfúzióra (I/R) érzékeny szerv (máj, pancreas, vékonybél, vastagbél) található. A splachnikus terület perfúziós nyomásának csökkenése számos folyamatot generál, melyek során kialakuló mikrocirkuláció zavarok különböző súlyosságú oxidatív stressz kialakulásához vezethetnek. A program széles körű lehetőséget ad arra, hogy kísérletes körülmények között olyan állatmodelleket hozzunk létre, melyekben tanulmányozhatjuk a GIR pathológiás keringésének sejtszintű és molekuláris következményeit. A biokémiai és hisztológiai vizsgálatokon túl a szignáltranszdukciós útvonalak működésének, a transzkripciós faktorok aktivitásának és a védelmi rendszer kiépülésének folyamatát lehet tanulmányozni. Humán vizsgálatok során lehetőség van a betegekből vett szövetminták biokémiai, szövettani és molekuláris biológiai feldolgozására. Továbbá állatkísérletekben alkalom nyílik különböző, a humán gyakorlatban már alkalmazott vagy bevezetés alatt álló gyógyszerek kipróbálására és a GIR-re kifejtett hatásának tanulmányozására. Dr. Ferencz Andrea Sebészeti Oktató és Kutató Intézet A szervtranszplantációt követő premalignus és malignus bőrtumorok kísérletes és klinikai vizsgálata különös tekintettel a oxidatív stressz paratéterekre és jelátviteli utakra A szervátültetések után alkalmazott immunszuppresszív kezelés fokozza a daganatos betegségek kialakulásának rizikóját. A transzplantált betegeknél a bőrtumorok incidenciája közel 8-10-szeresére nő a normál populációban előforduló bőrdaganatokhoz képest. A kutatás során a gondozás alatt álló vese-, hasnyálmirigy-, és vese/hasnyálmirigy kombinált transzplantáción átesett betegek bőrgyógyászati szűrővizsgálatát kívánjuk elvégezni. Vizsgálni kívánjuk a 11

12 betegek perifériás vérmintáiban a különböző oxidatív stressz és gyulladásos paramétereket, az apoptosis mértékét, valamint a szövetminták korszerű hisztopathológiai feldolgozását és a tumormarkek követését. In vitro primer cutan melanoma és ennek metasztatikus nyirokcsomójából sejttenyészeteket kívánunk létrehozni, ahol a sejtek növekedését, invázióját, DNS károsodás mértékét, valamint az apoptózis jelátviteli útjainak (MAP kinázok, PKC, cleaved caspase-3) vizsgálatát tervezzük. B Kísérletes cardiológia programvezető: Dr. Tóth Kálmán Dr. Tóth Kálmán I. sz. Belgyógyászati Klinika Az atherosclerosis folyamatának lassítása PARP-gátlókkal és scavenger molekulákkal A cerebro- és cardiovascularis betegségek közös pathogenetikai alapja az atherosclerosis. Ismert, hogy mind az atherosclerosis kezdeti lépésének számító endothel dysfunctio kialakulásában, mind a folyamat progressziójában központi szerepet játszik az oxidatív sejtkárosodás. A scavenger hatású SODmimeticumok és természetes polyphenolok, illetve az antioxidáns hatású, de a jelátviteli folyamatokra is lényegi hatással bíró PARP-gátlók védő hatását kívánjuk vizsgálni az atherosclerosis kialakulásával szemben állatmodellben. Dr. Tóth Kálmán I. sz. Belgyógyászati Klinika Oxidatív stressz hatása a vér és vérsejtek tulajdonságaira. Az antioxidánsok védő hatásának vizsgálata Számos betegség kialakulásában játszik szerepet az oxidatív károsodás. Ezek a folyamatok a vérsejteket sem kímélik, így ha megfigyeljük a vérsejtek tulajdonságaiban bekövetkező változásokat, következtethetünk az oxidatív stressz mértékére. Legmarkánsabban a vörösvérsejtek deformálhatósága romlik, ezt filtrációval és ektacitometriával számszerűsítjük. Keressük az oxidatív károsodás modellezésére alkalmas egyéb paramétereket is. Ha az oxidációindukciót bizonyos anyagok jelenlétében végezzük, a károsodás részben kivédhető, így a modell segítségével az ilyen anyagok protektív antioxidáns hatását is mérjük. Dr. Tóth Kálmán I. sz. Belgyógyászati Klinika Vörösvérsejt deformabilitás mérése ektacitometriával. Módszertani felvetések A hemoreológia a vér globális áramlási tulajdonságain felül az egyes alkotók egyedi tulajdonságait is vizsgálja. Az ektacitometria a vörösvérsejtek deformabilitásának jellemzésére alkalmas módszer. A mérés során meghatározzuk, hogy különböző, ismert nagyságú nyíróerők mekkora alakváltozást okoznak a sejteknél. Az eredményeket nem csak az intakt sejt fizikai tulajdonságai határozzák meg, hanem a sejtekkel való manipulációk okozta változások és a mérés körülményei is torzíthatják. A kutatás célja, hogy a módszertani csapdákat felderítsük. Olyan méréstechnikai sztenderdeket akarunk felállítani, melyek mellett az eredmények torzulása minimális. Emellett transzformációs eljárásokat is keresünk, melyek segítségével a különböző körülmények közt végzett mérésekből származó eredmények összehasonlíthatóak. Dr. Tóth Kálmán I. sz. Belgyógyászati Klinika Anthracyclin származékok cardiotoxicitásának kivédése PARPgátlókkal és scavenger molekulákkal A doxorubicin akut és rövid idejű adagolásakor fellépő myocardialis károsodásokat tanulmányozzuk, különös tekintettel az oxidatív szívkárosodás 12

13 markereire, a szív funkcionális teljesítményére és az energia metabolizmusra. A kedvezőtlen reakciókat PARP-gátlókkal illetve antioxidáns tulajdonságú vegyületekkel kívánjuk kivédeni, majd a szívminták Western blot analízisével a MAP-kináz rendszer (ERK, JNK, p38-mapk), valamint a PI3K Akt jelátviteli útvonal aktivitását határozzuk meg. Ezek a kísérletek a doxorubicin terápia cardialis mellékhatását mérsékelni képes molekulák kifejlesztését célozzák. Dr. Tóth Kálmán I. sz. Belgyógyászati Klinika PARP-gátlók, SOD-mimeticumok, illetve természetes polyphenolok hatásának vizsgálata kísérletes szívelégtelenség modellekben A gazdaságilag fejlett országokban a szívelégtelenség prevalenciája egyre magasabb és a jelen terápiás lehetőségek mellett is magas a betegség mortalitása. Emiatt intenzív kutatások folynak újabb terápiás célpontok azonosítására. A szívelégtelenség modellezése patkányon különböző módszerekkel lehetséges. A LAD-ligatio regionális, isoproterenol subcutan alkalmazása pedig, diffúz subendocardialis myocardialis infarctust okoz, aminek hatására csökken a szív systoles funkciója. Nyomásterhelés miatt alakul ki szívelégtelenség spontán hypertenzív patkányokon, illetve aortaszűkítő beavatkozások (banding) után, ugyanakkor diffúz szívizom károsodást okozhatnak bizonyos cardiotoxicus vegyületek is, mint például az anthracyclin származékok. Meg kívánjuk határozni tehát, hogy a PARP-gátlók milyen molekuláris mechanizmussal képesek gátolni a krónikus szívelégtelenség progresszióját. Vizsgáljuk továbbá a scavenger hatású SOD-mimeticumok és természetes polyphenolok hatását szívelégtelenség modelleinkben, illetve ezen molekulák hatásmechanizmusát. Dr. Tóth Kálmán I. sz. Belgyógyászati Klinika PARP-gátlók hatásának elemzése cardiomyocyta sejtkultúrában, izolált szívperfúziós és in vivo coronaria ligációs modellen Tanulmányozzuk, hogy egyes poli(adp-ribóz) polimeráz gátló vegyületek milyen molekuláris mechanizmussal képesek a myocardium ischaemiareoxigenizáció okozta károsodását kivédeni. A PARP-gátlók hatását cardiomyocyta sejtkultúrában (hidrogén-peroxid okozta oxidatív stressz), izolált szívperfúziós és in vivo coronaria ligációs modellen (ischaemia-reperfúzió okozta oxidatív stressz) fogjuk elemezni. Vizsgáljuk az így létrehozott oxidatív stressz hatását a myocardium energia metabolizmusára, a szív funkcionális teljesítményére, a kialakuló infarktus nagyságára, a fehérje oxidációra, valamint a lipid peroxidációra. A fenti kísérletek során nyert sejt-, illetve szövetminták Western blot analízisével vizsgálni kívánjuk a MAP-kináz rendszer (ERK, JNK, p38-mapk), valamint a PI3K Akt jelátviteli útvonal aktiválódását és az alkalmazott vegyületek erre gyakorolt hatását. Az ischaemia-reperfúzió által beindított gyulladásos folyamatokkal kapcsolatban az NF-κB, Cox-2, inos enzimek működését és a gyulladásos citokinek felszabadulását vizsgálnánk a gyógyszeres kezelés vonatkozásában. Az intracelluláris jelátviteli folyamatok elemzése az említett oxidatív stressz modellekben a PARP-gátlók hatásmechanizmusának eddig még feltáratlan aspektusait világíthatja meg. Dr. Tóth Kálmán I. sz. Belgyógyászati Klinika Hemoreológiai paraméterek alakulása klinikai betegcsoportokban. Diagnosztikai és prognosztikai megfontolások A vér áramlási tulajdonsága, a vérsejtek jellemzői számos megbetegedés kapcsán eltérnek a normálistól; néha ezek a változások felelnek a tünetek előidézéséért, máskor csak kofaktorai a betegség kialakulásának. A hemoreológiai paraméterek értékes segítséget nyújthatnak a rizikóbecslésben és a differenciáldiagnosztikában. Laboratóriumunkban különböző betegcsoportok hemoreológiai felmérését végezzük (plazma és teljes vér viszkozitás, vörösvérsejt deformabilitás és aggregáció, vérlemezke aggregáció), a kapott eredményeket más klinikai paraméterekkel vetjük össze. Újonnan képzett mutatók, pl. a vér oxigénszállító kapacitását jellemző hematokrit/vérviszkozitás arány használhatóságát is vizsgáljuk. 13