RDT EBV IgM teszt EBV VCA és IEA-Zebra antigének ellen termelődött IgM antitestek kimutatása humán szérumban immunfiltrációs technikával

Átírás

1 RDT EBV IgM teszt EBV VA és IEA-Zebra antigének ellen termelődött IgM antitestek kimutatása humán szérumban immunfiltrációs technikával 2015/02 1. FELHASZNÁLÁS A Bio-Rad RDT EBV IgM immunfiltrációs teszt, az EBV VA rekombináns antigének és az IEA-ZEBRA peptid ellen képződött IgM antitestek humán szérumból történő kvalitatív kimutatására szolgál. A Bio-Rad RDT EBV IgM tesztet, egyéb EBV-szerológiai vizsgálatokkal (Bio-Rad RDT EBV IgG teszt) és a klinika anamnézissel együtt lehet használni, segítségként az EBV-fertőzés és a mononukleózis diagnosztizálásához. IN VITRO DIAGNOSZTIKAI ÉLRA HASZNÁLHATÓ. 2. A TESZT ÖSSZEFOGLALÁSA ÉS MAGYARÁZATA Az Epstein-Barr vírust először 1964-ben írták le Burkitt lymphomában szenvedő betegeknél. Ez az egyik legközönségesebb vírus, amelyet az emberi szervezetben találtak. A Herpesviridae családba tartozik, amely egyéb emberi kórokozó vírusokat is magában foglal (Herpes simplex 1, 2, Varicella Zoster vírus (VZV), ytomegalovírus (MV), HHV6, HHV7 és HHV8). Az elsődleges fertőzés után az EBV a szervezetben marad, a beteg egész életére a B-limfocitákban, az orr- és a torok epithel sejtjeiben. A nyál útján terjedő EBV a gyermekek fertőzéséhez vezet, ez azonban gyakran tünetmentes vagy szubklinikus év közötti fiatalokban a fertőzésnek van egy második hulláma. Az esetek 2/3-ban kialakulhat a fertőző mononukleózis (Pfeiffer-féle mirigyláz, csók-betegség ). Ennek klinikai tünetei az étvágytalanság, fáradtság, láz, bőrkiütés, torokgyulladás, garatmandula-gyulladás, lymphangitis, leucocytis, fejfájás, reumás fájdalmak és májkárosodás. Ezek a tünetek a fertőzésnek, a vírus B-limfocitákban lezajló lítikus életciklusának, és az erre következő immunválasznak tulajdoníthatók. Ritka esetekben súlyos komplikációk léphetnek fel, mint például hemolitikus anémia, tüdőgyulladás, neurológiai vagy kardiológiai rendellenességek. A felnőttek több mint 90%-a szeropozitív és vírushordozó, mivel az EBV az egész életen át perzisztál az egyes epithel sejtekben és a B-limfocitákban. Mint más herpeszvírusok esetében, reaktiválás fordulhat elő immunelégtelenséggel küzdő vagy immunszuppressziós kezelés alatt álló betegeknél; itt is emelkedhet a korai EBV antigének ellen termelődött IgG/M/A antitestek titere. Az EVB által megfertőzött B-limfociták immortalizálódnak, korlátlanul tudnak szaporodni. Ez a tulajdonság, amelyet normális esetben az immunrendszer ellenőriz, vagy elfojt, egy sor rosszindulatú betegséghez vezethet: A lymphoproliferatív folyamatok, betegség (pl. AIDS) vagy immunszuppressziós kezelés (polyclonal lymphoma) okozta immunhiánynak vagy a kromoszómaváltozással járó Burkitt lymphomának tudhatók be. További kofaktorok közreműködésével, az EVB nasopharyngealis carcinomát okozhat, amelynek előfordulása nagyon gyakori Kína déli tartományaiban. A vírus lítikus életciklusa alatt a korai szakaszban különböző szabályozó fehérjék ( közvetlen korai antigének - Immediate Early Antigens, IEA; korai antigének - Early Antigens, EA), majd a későbbiekben szerkezeti fehérjék indulnak rohamos képződésnek ( vírus kapszid antigének - Virus apsid Antigens"; VA és membrán fehérjék - Membrane Proteins; MA). A lappangási időszakban csak néhány antigén képződik, közéjük tartoznak az EBNA 1-6 (Epstein-Barr nukleáris antigének). A primer EBV fertőzés egyes eseteiben egy [úgynevezett] heterofil humorális reakció lép fel, amely az IgM típusú ellenanyagok poliklonális stimulációjához vezet. Ezek a heterofil IgM antitestek főként állati sejtek (különösen szarvasmarha) antigénkomponensei ellen termelődnek. Ezek az EBV-fertőzés nem-specifikus jelzői, és másfajta fertőzéseknél is megtalálhatók (pl. MV, toxoplazma). A ZEBRA (BamH1 Z Epstein-Barr replikáció aktivátor, amelyet EB1-nek vagy Zta-nak is neveznek) nevezetű fehérje alapvető szerepet játszik a vírusnak a lappangási időszakából a lítikus ciklusába történő átmenetében. Ez a fehérje egy transzkripciós faktor, amely aktiváló szerepet tölt be a vírus egyes génjeinek transzkripciójában és a vírus szintézisében. A ZEBRA fehérje ellen termelődött antitesteket, azok vizsgálatakor a virális reaktiváció indirekt jelzőjeként azonosították, különösen HIV szeropozitív, csökkent immunitású alanyokban. Az anti ZEBRA antitestek az elsődleges fertőzések alatt nagyon korán jelennek meg, és ezek jelenlétének kimutatása lehetővé teszi a primer EBV-fertőzések rendkívül korai diagnosztizálását. Az EBV-fertőzésre adott humorális válasz gyors. Az EBV különböző virális fehérjéi ellen képződött antitestek korrelálnak a betegség stádiumával. Primer fertőzés esetén az IgM és az IgG típusú antitestek a következő sorrendben jelennek meg: IEA (közvetlen korai antigén), diffúz korai antigén (EA-D), VA (vírus kapszid antigén) és EBNA (nukleáris antigén). Az elsődleges fertőzést az IEA (ZEBRA fehérje), az EA-D és a VA ellenes IgM jelenléte jellemzi, miközben az EBNA ellenes IgG hiányzik. Ugyanakkor előző fertőzésekben vannak tipikusan anti VA IgG és anti EBNA IgG antitestek. Az EBV szerológiai diagnosztikájában, immunfluoreszcens vizsgálatok segítségével, amely a fertőzött EBV-termelő sejteket használja fel, három antigén osztályt különböztetünk meg: EA - korai antigének, VA kapszid/szerkezeti antigének és EBNA nukleáris antigének, amelyek a lappangó időszak alatt jelennek meg. Az immunfluoreszcens vizsgálatot ma már jórészt könnyebben végrehajtható és interpretálható vizsgálatok (ELISA, blot) helyettesíthetik, amelyek rekombináns fehérjét vagy szintetikus peptideket használnak. Az IgM-nek az IEA-ZEBRA antigénre adott reakciója nagyon korán észlelhető és meglehetősen erőteljes, ami lehetővé teszi ezen antitestek korábbi kimutatását, a többi markerhez képest. A detektálás lehetséges akár két héttel a korai antigén (EA) megjelenése előtt, ami lehetővé teszi a betegnél a fertőzés korai felismerését. 1

2 A ZEBRA fehérje és a VA p18 antigén kombinálása lehetővé teszi az elsődleges fertőzés minden stádiumának kimutatását, miközben fokozza a vizsgálat klinikai érzékenységét. 3. AZ ELJÁRÁS ALAPELVEI A Bio-Rad RDT EBV IgM teszt olyan szűrő immunfiltrációs teszt, amely a rekombináns VA p18 antigéneket és a ZEBRA szintetikus peptidet használja az anti EBV IgM kimutatására a humán szérumban. A teszt tartalmaz egy membrános szilárd fázist, amely egy nedvszívó anyagot tartalmazó műanyag reagens kazettában van elhelyezve. A membránt a kazetta elején található vizsgálati ablakon keresztül láthatja a felhasználó. A ZEBRA és a VA p18 antigének a membránra vannak rögzítve: zóna szintjén. Az A fehérje a membránhoz van kötve, mint kontroll: zóna. Ha az előzetesen hígított szérumminta átdiffundált a membránon, a jelenlévő (IgM) anti ZEBRA és anti-va p18 antitest kötődik az antigénhez a zóna szintjén. Ha a Konjugátumot (Anti-human IgM monoklonális egér antitest, kék latexszemcsékkel megjelölve) hozzáadjuk, reakcióba lép a membránon jelenlévő Antigéneken befogott bármely humán IgM antitesttel, és kékre színeződik. A Konjugátum emellett kimutatja a zónában rögzített A fehérjét, amely azt bizonyítja, hogy a reagensek megfelelően működnek. A kazetta úgy lett tervezve, hogy tökéletesen elnyelje a hozzáadott reagensek mennyiségét. 4. REAGENSEK A készletben található reagensek mennyisége úgy lett kalkulálva, hogy 25 teszt elvégzéséhez legyen elegendő. Minden reagens kizárólag in vitro diagnosztikai célra használható. SORB DIL ONJ WASH ímke A reagens leírása Kiszerelés assette Sample Diluent onjugate Washing Solution Reagenskazetta (használatra kész) Rekombináns VA p18 és ZEBRA szintetikus fehérjék és A fehérje membránon rögzítve Mintahígító (használatra kész) 20% Tween 20 and PBS pufferoldat, 1% szérum bovine albumin, <0,1% nátrium azid, <1,5% Prolin 300 Konjugátum (használatra kész) Kék latexszemcsékkel megjelölt Anti-human IgM monoklonális egér antitest, <0,1% nátrium azid, 1% szérum bovine albumin, <1,5% Prolin 300 Mosóoldat PBS pufferoldat, <0,1% nátrium azid, <1,5% Prolin 300, 10% Tween x 1 kazetta 2 x 21 ml 2 x 21 ml 2 x 21 ml A tárolási feltételeket és a lejárati időt lásd a dobozon. 5. FIGYELMEZTETÉSEK ÉS ÓVINTÉZKEDÉSEK 5.1. Egészségügyi és biztonsági utasítások A mintákkal és reagensekkel való munka során viseljen eldobható laborköpenyt, védőkesztyűt és védőszemüveget. Szájjal pipettázni tilos! Tilos enni, inni vagy dohányozni a minták és a teszt kezelése során. A vér- és szérummintákat potenciálisan fertőzőeknek kell tekinteni. A vizsgálat végzése során a fertőző termékek kezelésére vonatkozó óvintézkedéseket be kell tartani. A vizsgálat és a minták különböző elemeit a potenciálisan fertőző hulladék számára előírt eljárás szerint kell kezelni. Bármely anyagot, beleértve a mosóoldatot is, amely közvetlen érintkezésbe kerül a mintákkal, potenciális fertőzési forrásként kell kezelni. Ügyeljen arra, hogy a minták, illetve a mintákat tartalmazó oldatok ne folyjanak ki. A kiömlött anyagokat 10%-os fertőtlenítőszerrel kell lemosni, és itatóspapírral szárítani. A tisztításhoz használt anyagokat a szennyezett maradékok tárolására szolgáló edénybe kell beledobni. A betegmintákat, valamint a szennyezett anyagokat és termékeket kizárólag dekontamináció után lehet hulladékba helyezni: - áztatás 5%-os végső koncentrációjú nátrium-hipoklorit oldatban 30 percig, - vagy autoklávozás 121 -on minimum 2 órán át.! Ne tegyen nátrium-hipokloritot tartalmazó oldatokat az autoklávba.! A tesztben fellelhető egyes kémiai összetevők kockázati és óvintézkedési ajánlásaihoz tekintse át a címkéken biztosított képjelzést (képjelzéseket) és a használati utasítás végén adott tájékoztatást. A biztonsági adatlap a következő címen érhető el: Az eljárással kapcsolatos óvintézkedések Az eredmények megbízhatósága az alábbi helyes laboratóriumi gyakorlat (GLP) irányelveinek megfelelő betartásától függ: A lejárt reagensek használata tilos! A különböző tételekből származó reagenseket nem szabad összekeverni, illetve egymással kombinálni. 2

3 Felhasználás előtt hagyja, hogy a reagensek szobahőmérsékletre ( ) melegedjenek. Használjon alaposan elmosott és ioncserélt vízzel kiöblített üvegeszközöket, illetve leginkább eldobható eszközöket. Minden mintához külön pipettahegyet kell használni. Ellenőrizze, hogy a pipetták és egyéb eszközök pontosak-e és megfelelően működnek-e. 6. A FELBONTOTT ÉS/VAGY FELOLDOTT REAGENSEK TÁROLÁSA ÉS ELTARTHATÓSÁGA A készletet on kell tárolni. Ha a készletet on -on tartják felbontás előtt, akkor minden alkotórész a készlet külső címkéjén feltüntetett lejárati ideig használható. A kazettát (SORB) a tasakban kell tárolni. A tasakban tárolt kazetta a tasakon jelzett lejárati ideig áll el. A tasakot csak közvetlenül a vizsgálat megkezdése előtt bontsa fel. A fiolákat +2-8 között kell tárolni közvetlenül az egyes használatok után. Szennyeződésektől megóvva a címkén jelzett lejárati ideig őrzi meg minőségét. A REAGENSEKET NEM SZABAD LEFAGYASZTANI 7. MINTÁK A vizsgálat elvégzése közvetlenül a mintavétel és a centrifugálás után javasolt. Ellenkező esetben a szérum 2-8 között maximum 7 napig tárolható. Hosszabb ideig a szérum 20 -on fagyasztva tárolható. A lefagyasztott mintákat szobahőmérsékletűre kell melegíteni, és alaposan homogenizálni a vizsgálat elvégzése előtt. Három fagyasztási//olvadási ciklus nem befolyásolhatja az eredményeket. A minták további fagyasztását és olvasztását el kell kerülni. A minta szállítása esetén az emberi eredetű termékek szállításai szabályzata alapján járjon el. Liofilizátum elkészítése esetén, a vizsgálat megkezdése előtt, javasolt megvárni, míg a minta teljesen feloldódik és a feloldott szérum eléri a szobahőmérsékletet. A mintákat nem szabad melegíteni. 8. A VIZSGÁLAT KIVITELEZÉSÉHEZ SZÜKSÉGES ANYAGOK 8.1. A készlettel szállított anyagok Lásd REAGENSEK, 4. rész 8.2. A méréshez szükséges, de a készletben nem szereplő anyagok Vérvételi harang, Eldobható kémcsövek, entrifuga, Időjelző, Eldobható védőkesztyű, Védőszemüveg, Automata vagy félautomata, állítható vagy fix, egy vagy többcsatornás pipetták a 10 µl-1000 µl és a 1,5 ml kiméréséhez, Nátrium-hipoklorit (fertőtlenítő) és nátrium-bikarbonát, Biológiai hulladéktároló. 9. HASZNÁLATI UTASÍTÁS 9.1. A reagensek előkészítése Minden reagens használatra kész Mintaelőkészítés Javasolt mintatípus: száraz kémcsőbe gyűjtött szérum. A szérumminták kezelése, feldolgozása és tárolása során tartsa be az alábbi ajánlásokat: Mindig a rutin óvintézkedések betartásával vegye le a szérummintákat. entrifugálás előtt hagyja, hogy a minták teljesen megalvadjanak. A csöveket mindig tartsa lezárva. entrifugálás után különítse el a szérumot egy tárolócsőbe, amelyet azután szorosan lezár Eljárás Szigorúan kövesse a mérési eljárást és a helyes laboratóriumi gyakorlat (GLP) előírásait. A felhasználás előtt hagyja, hogy a reagensek szobahőmérsékletre ( ) melegedjenek. 1. Vegye ki a kazettát (SORB) az alumínium tasakból az azonnali felhasználásra. 2. seppentsen 25 µl szérumot az eldobható kémcső aljába, és adjon hozzá 1,5 ml mintahígítót (DIL). Előre és visszafelé pipettázva alaposan keverje össze. 3. Használjon laboratóriumi pipettát, vagy közvetlenül cseppentse a hígított mintát a kémcsőből a kazetta ablakába. Hagyja, hogy a hígított minta teljesen átszűrődjön a kazetta ablakon (körülbelül 15 másodperc) 3

4 4. Óvatos mozdulatokkal alaposan keverje össze a Konjugátum reagensszuszpenziót (ONJ) a vizsgálat előtt. Pipettázzon 1,5 ml konjugátumot (ONJ), és cseppentse teljes egészében a kazetta ablakára. Hagyja, hogy a reagens teljesen átszűrődjön a kazetta ablakon (körülbelül 15 másodperc) 5. Pipettázzon 1,5 ml Mosóoldatot (WASH), és cseppentse teljes egészében a kazetta ablakra. Hagyja, hogy a mosóoldat (WASH) teljesen átszűrődjön a kazetta ablakon (körülbelül 15 másodperc). 6. Amint a Mosóoldat teljesen átszűrődött a kazetta ablakán, olvassa le az eredményeket 20 percen belül. 10. MINŐSÉGELLENŐRZÉS A vizsgálat belső ellenőrző eljárást tartalmaz (kontrollsáv). Ez biztosítja a reagensek megfelelő működését. Ha a három reagens bármelyike nem szűrődik, vagy rendkívül lassan szűrődik (> 1 perc), továbbá ha a mosás után a membránon a háttér erőteljesen kék marad, ez az eszköz bizonytalanságának jelzője. Ebben az esetben az eredményeket érvényteleneknek kell tekinteni, és a mintát újra kell vizsgálni. Javasolt a pozitív és negatív kontrollok vizsgálata a következő körülmények között: Új gyártási tétel használatakor. Új szállítmány első készletének megnyitásakor. Amikor a műveletet új személy végzi Az előállított reagensek minőségügyi rendszerünk előírásainak megfelelően készültek a nyersanyagok bevételezésétől kezdve a végtermék forgalomba kerüléséig. Minden egyes tétel minőségellenőrző vizsgálatokon esett át, és kizárólag a meghatározott jóváhagyási feltételeknek való megfelelés után kerül piacra. Az egyes tételek előállítása és ellenőrzése során készült jegyzőkönyveket a Bio-Rad őrzi. 11. AZ EREDMÉNYEK KIÉRTÉKELÉSE A sáv jelenlétét akkor kell figyelembe venni, amikor világoskék sáv jelenik meg a membránon. Ha a sáv halvány vagy homályos, javasolt a vizsgálat megismétlése egy újabb mintán. POZITÍV: Anti EBV IgM pozitív (ZEBRA és/vagy VA p18) A kék sáv jelenléte (kisebb intenzitás esetén is) és kék kontrollsáv. A ZEBRA és/vagy a VA p18 IgM antitestek jelenléte elsődleges EBV-fertőzést vagy reaktiválódást jelez. NEGATÍV: Anti VA p18 és anti IEA-ZEBRA IgM negatív. A kék sáv hiánya és a kék sáv jelenléte. Az anti ZEBRA és az anti VA p18 IgM antitestek hiányoznak, ami szeronegatív reakcióra utal vagy elsődleges fertőzés nagyon korai stádiumát jelezheti. ÉRVÉNYTELEN: A kontrollsáv hiánya A helytelen eljárás az érvénytelen eredmények leggyakoribb oka. A vizsgálatot meg kell ismételni egy új kazettával. Sötétkék háttér Erős kék háttér jelenhet meg a membránon, ha az egyik szűrőlépés 1 percnél hosszabb ideig tart. Ebben az esetben a vizsgálat érvénytelen. Végezzen el egy második vizsgálatot egy, a készletben található második fiolakészlettel. 12. AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI Az EBV-fertőzés kizárólag a klinikai és a biológiai adatok együttes mérlegelése alapján diagnosztizálható. 1. A Bio-Rad RDT EBV IgM teszt az EBV VA p18 és a ZEBRA antigének ellen termelődött IgM szűrésére szolgál a szérumban. A vizsgálat kizárólag in vitro diagnosztikai célra használható. A Bio-Rad RDT EBV IgM teszt nem teszi lehetővé az anti VA p18 és az anti ZEBRA IgM antitestek antitestek mennyiségi kimutatását, sem az antitestszint monitorozását a betegben. 4

5 2. A Bio-Rad RDT EBV IgM teszt kimutatja az anti VA p18 és/vagy az anti ZEBRA IgM antitestek jelenlétét a szérumban, de nem használható az elsődleges EBV-fertőzés diagnosztizálásának egyetlen kritériumaként. A negatív Bio-Rad RDT EBV IgM teszt eredmény nem zárhatja ki teljesen a korai EBV elsődleges fertőzést. 3. Mint minden in vitro diagnosztikai vizsgálat esetében, az eredményt az orvos az összes egyéb elérhető klinikai és biológiai adatok (főként EBV IgG és heterofil antitestek) alapján értelmezze. Két páros szérum vizsgálata is segíthet a pontos eredmény elérésében. 4. Az ellenőrzés csak a próbareagensek helyes működését értékeli, de nem biztosítja, hogy a szérumot hozzáadták. 5. A csökkent immunitású betegek eredményeit óvatosan kell kezelni. 6. A Bio-Rad RDT EBV IgM teszt csak szérummal használható. Teljes vér- és plazma validálás nem történt meg TELJESÍTMÉNYJELLEMZŐK Relatív specificitás és érzékenység A Bio-Rad RDT EBV IgM teszt relatív teljesítményjellemzőjét 158 olyan véradótól származó mintán értékelték ki, amelyek vizsgálatára egyéb kereskedelmi forgalomban lévő VA IgM tesztet használtak. A következő eredmények születtek: VA IgM Bio-Rad RDT EBV IgM teszt Kereskedelmi forgalomban lévő EIA VA IgM teszt Összes minta Pozitív Negatív Pozitív Negatív Összes minta A számításba nem kerültek bele a kétes eredmények. Összes VA IgG egyezés: 94,3% (149/158). 1. A Bio-Rad RDT EBV IgM teszt relatív specificitását a kereskedelmi forgalomban lévő tesztekkel kapott negatív eredményekkel összehasonlítva határozták meg. VA IgM relatív specificitás: 94,9% (87,5% - 98,6%). A négy eltérő eredményt Immunoblot IgM teszttel vizsgálták meg; egynél negatív eredményt erősítettek meg, háromnál pozitivat. A Bio-Rad RDT EBV IgM teszt specificitását ezért újradefiniálták 98,7%-nál (92,9% 100,0%). 2. A Bio-Rad RDT EBV IgM teszt relatív érzékenységét a kereskedelmi forgalomban lévő tesztekkel kapott eredményekkel összehasonlítva határozták meg. VA IgM relatív érzékenység: 93,7% (85,9% - 97,9%). Elégtelen mintamennyiség miatt az eltérő eredmények egyikét sem vizsgálták meg harmadik módszerrel Pontosság 1. Ismételhetőség A Bio-Rad RDT EBV IgM tesztnek kiértékelték az ismételhetőségét, négy szérumot vizsgálva (egy negatív, egy gyengén pozitív, egy pozitív és egy erősen pozitív) 30 alkalommal egy tételben. Nem figyeltek meg a minta állapotában változást, ami 100%-os ismételhetőséget mutat. 2. Reprodukálhatóság A Bio-Rad RDT EBV IgM tesztnek kiértékelték a reprodukálhatóságát, négy szérumot vizsgálva (egy negatív, egy gyengén pozitív, egy pozitív és egy erősen pozitív) négy alkalommal három különböző tételen. Nem figyeltek meg a minta állapotában változást, ami 100%-os reprodukálhatóságot mutat. 5

6 13.3. Keresztreakciók Potenciálisan keresztreakciót mutató pategének elleni IgM antitestet tartalmazó szérumokat vizsgáltak meg Bio-Rad RDT EBV IgM teszttel. A következő eredményeket figyelték meg: Kórtan Összes szérum száma Pozitív eredmények a Bio-Rad RDT EBV IgM próbával Lupus 6 0 Rheumatoid Polyarthritis 6 1 Hepatitis A 11 3 Hepatitis B 5 0 Hepatitis 5 0 Hepatitis E 3 0 HIV MV HSV 6 2 VZV 6 1 Parvovírus B Bárányhimlő 4 0 Rubeóla 4 0 Mumpsz 3 0 Dengue-vírus 3 0 hikungunya-vírus 3 0 IgM álpozitív eredmény egyéb kereskedelmi forgalomban lévő automatizált teszt használata esetén 2 0 Összesen potenciálisan keresztreakciót mutató patogénnel vizsgált szérumból 23 volt IgM pozitív a Bio-Rad RDT EBV IgM teszttel, 11 betegnél elsődleges MV fertőzés, 4 esetben elsődleges Parvovirus B19 fertőzés és 3 esetben pedig akut Hepatitis A fertőzés igazolódott. 15. BIBLIOGRÁFIAI HIVATKOZÁSOK 1. Brousset, P. et al. Epstein-Barr virus (EBV) replicative gene expression in tumour cells of AIDS-related non Hodgkins lymphoma in relation to D4 cell number and antibody titres to EBV, AIDS, vol. 8, 1994, pp han, K.H. et al. Development and evaluation of an Epstein-Barr Virus (EBV) Immunoglobulin M enzyme-linked immunosorbent assay based on the 18-kilodalton matrix protein for diagnosis of primary EBV infection, Journal of clinical microbiology, vol 36, 1998, pp heng, Hwez-ming et al. Epstein-Barr Virus Nuclear antigen 1 linear epitopes that are reactive with immunoglobulin A (IgA) or IgG in sera from nasopharyngeal carcinoma patients or from healthy donors. Journal of clinical microbiology, vol. 29, N 10, Oct. 1991, pp heng, Hwee-Ming. Linear epitopes of the replication-activator protein of Epstein-Barr virus recongised by specific serum IgG in nasopharyngeal carcinoma. ancer immunol immunother, vol. 40, 1995, pp Epstein, M.A., B.B. Achong, and Y.M. Barr Virus particles in ultured Lymphoblasts from Burkitt s Lymphoma. In: Lancet 1: Epstein, M.A., Y.M. Barr, and B.G. Achong Studies with Burkitt s Lymphoma. In: Wistar Inst. Sympos. Monogr.4: Gorgievski-Hrisoho, M., et al.. Serodiagnosis of Infectious Mononucleosis by using recombinant Epstein-Barr Virus Antigens and Enzyme-linked immunosorbent assay technology. J. lin. Microbiol. 28, (1990) 8. Hinderer, W et al. Serodiagnosis of Epstein-Barr virus infection by using recombinant viral capsid antigen fragments and autologous gene fusion Journal of clinical microbiology, vol. 37, 1999, pp Ho, D. W., P. R. Field, and A. L. unningham Rapid diagnosis of acute Epstein-Barr virus infection by an indirect enzyme-linked immunosorbent assay for specific immunoglobulin M (IgM) antibody without rheumatoid factor and specific IgG interference. J. lin. Microbiol. 27(5): Jilg, W. et al., Diagnostic significance of antibodies to the Epstein-Barr virus-specific membrane antigen gp 250. J. Infect. Dis. 152, (1985) 11. Joab, I. et al. Detection of anti Epstein-Barr virus trans-activator (ZEBRA) antibodies in sera from patients with human immunodeficiency virus. JID, vol. 163, Jan. 1991, pp Joab, I. et al. Detection of anti Epstein-Barr virus trans-activator (ZEBRA) antibodies in sera from patients with nasopharyngeal carcinoma. J. ancer, vol. 48, 1991, pp Lee,.L. and Davidson, L Spot test for infectious mononucleosis. Annual Meeting ASP and AP. 14. Marechal, V. et al. enzyme-linked immunosorbent assay for antibodies to ZEBRA, an Epstein-Barr trans-activator. Research in virology, vol. 144, N 5, 1993, pp Matheson, B. A., S. M. hisholm, and D. O. Ho-Yen Assessment of rapid ELISA test for detection of Epstein-Barr virus infection. J. lin. Pathol. 43: Mathew, A et al., A high incidence of serum IgG antibodies to the Epstein-Barr virus replication activator in nasopharyngeal carcinoma, ancer Immunology Immunotherapy, vol. 38, 1994, pp

7 17. Mikaelian, I et al. The DNA-binding domain of the two BZIP transcription factors, the Epstein-Barr virus switch gene product EBI and Jun, is a bipartite nuclear targeting sequence. Journal of virology, Feb. 1993, pp Miller, G., The switch between latency and replication of Epstein-Barr virus, The Journal of infectious diseases, vol. 161, 1990, pp Niedobitek, G., et. al Epstein-Barr virus (EBV) infection in infectious mononucleosis: virus latency, replication and phenotype of EBV-infected cells. J. Pathol. 182: Tedeschi, R. et al. the disease associations of the antibody response against the Epstein-Barr virus transactivator protein ZEBRA can be separated into different epitopes. Journal of General Virology, vol. 76, 1995, pp Thorley-Lawson, D.A Immunological responses to Epstein-Barr virus infection and the pathogenesis of EBVinduced diseases. Biochimica et Biophysica Acta. 948: Van Grunsven, Wout M.J., et al. Gene mapping and expression of two immunodominant Epstein-Barr virus capsid proteins, Journal of virology, vol. 67, 1993, pp

8 Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré Marnes-la-oquette France Tel. : +33 (0) Fax : +33 (0) /02 8