Interferáló tényezők hatása a laboratóriumi eredmények értelmezésére Valczer Erzsébet Szegedi Tudományegyetem Szent-Györgyi Albert Klinikai Központ Laboratóriumi Medicina Intézet 2011. január 27. A laboratórium feladata A diagnosztikai megbízhatóság érdekében a laboratórium megbízható leleteket adjon ki, megbízható (pontos, torzítatlan) eredményeket szolgáltasson a gyógyító orvos számára. Interferáló tényezők Analitikai interferencia: a vizsgálandó mintában olyan anyag van jelen, amely a meghatározandó komponens mérésére zavaró hatással van, a meghatározás (általában koncentráció vagy aktivitás mérés) során az eredmény értékét pozitív vagy negatív irányban változtatja meg. pl. gyógyszerek, adalékanyagok, mátrix hatás Endogén interferáló tényezők pl. lipidek, hemolízis, bilirubin, paraproteinek Észlelés a laboratóriumi preanalitikai fázisban a minta színe alapján a beküldőtől származó információ alapján az analitikai fázisban a mérőműszer jelzi az interferenciát a mérőműszer méri az interferáló tényező szintjét a mérési eredmény interferáló tényezőjelenlétére utal a laboratóriumi posztanalitikai fázisban a LIR jelzi az interferenciát az eredmények validálásakor klinikai képbe nem illőeredmény esetén a beküldőtől származó információ alapján a laboratóriumi preanalitikai fázisban minden mintát érkezés után vizuálisan ellenőrizzünk a minta állapotát dokumentáljuk az informatikai rendszerben új mintát kérünk, nem végezzük el a vizsgálatot, ha a zavaró hatás miatt klinikailag releváns eltérés várható az eredményekben 1
a laboratóriumi analitikai fázisban az interferáló tényező által nem érintett vizsgálatokat végezzük el az interferáló tényező által érintett vizsgálatokat előkezelés után vagy más vizsgálati módszer alkalmazásával végezzük el a vizsgálatkéréseket elvégezzük, a mérőműszer jelzi az interferenciát a vizsgálatkéréseket elvégezzük, a mérőműszer minden mintában méri az interferáló tényező szintjét a laboratóriumi posztanalitikai fázisban a minta állapotát tüntessük fel a leleten ha az interferenciát nem tudjuk kiküszöbölni, eredményt nem tudunk kiadni, ennek ténye megjegyzésként kerüljön rá a leletre az előkezelés ténye a leleten jelenjen meg más vizsgálati módszer alkalmazását tüntessük fel a leleten az interferencia által érintett vizsgálatokat jelezzük a leleten APTI megnyúlást okoz: Intrinsic faktorok hiánya, csökkent vagy kóros volta Alvadási faktorok ellen termelődött inhibítorok Lupus anticoaguláns vagy foszfolipid ellenes antitestek Súlyos K-vitamin hiány Syncumar terápia Heparin hatás Rossz vér : citrát arány Gyógyszerek Antikoaguláns terápia monitorizálása I10H0: Magasvérnyomás-betegség (elsődleges) Syncumar 33,7 3,26 89,7 I8020: Az alsó végtagok mélyvénáinak gyulladása és Clexan 18,1 1,47 47,6 I21000: Heveny elülső fali transmuralis szívizom elhalás Heparin 16,7 1,42 > 180 LMWH 14,3 1,16 38,2 K9220: Gastrointestinális vérzés k.m.n. Aspirin 17,9 1,55 70,7 Hemolízis Heparin terápia vagy heparin kontamináció? Adalékanyagok PREANALITIKAI HIBA KIZÁRÁSA TROMBIN IDŐ MÉRÉSE POLYBRÉNES TROMBIN IDŐ MÉRÉSE Hematológia: az automatizált mérés korlátai Kálium-EDTA alvadásgátló anyagot tartalmazó mintából végezzük a méréseket Az adalékanyag hatására thrombocyta aggregátumok alakulnak ki a mintában a vizsgált személyek kb. 0,1%-nál A hematológiai automata által kiadott, Coulter-elven mért thrombocyta szám a valódi értékhez képest kisebb lesz Az EDTA hatásának igazolása vagy kizárása: vérkenet mikroszkópos vizsgálata, thrombocyta szám meghatározása nátrium-citrát alvadásgátló anyagot tartalmazó mintából is 2
EDTA-indukált pseudothrombocytopenia Probléma van a laborban az ion méréssel? V iz s g á la t L I R e lő z m é n y 2 0 0 8.0 8. 0 1. E lfo g a d h a tó k a z e r e d m é n y e k? V a lid á lt eredm ények Ö s s zb i lir u b in (µ m o l/ l) 1 1,2 1 4,0 1 7,2 G O T ( U /l) 2 9 2 8 3 6 G P T ( U /l) 2 9 2 9 3 1 Thrombocyta szám: 49 Giga/L Előző thrombocyta szám: 114 Giga/L G G T ( U /l) 3 0 2 1 2 7 K a rb a m id (m m o l/l) 8,3 7,2 7,1 K r ea t in in ( µ m o l/l) 8 9 7 8 8 3 A lb u m in (g /l) 4 9 3 9 4 5 K á lc iu m ( m m o l/l) - 0,5 2,2 2 G lü k ó z ( m m o l/l) 6,6 5,8 5,7 N á tr iu m ( m m o l/l) 1 4 4 2 1 7 1 4 1 K á l iu m ( m m o l/l) 4,1 37,5 4,2 Lehetséges magyarázatok Nátrium-fluorid Kálium-oxalát Nátrium-heparin Kálium-EDTA Nátrium-citrát Vizsgálat LIR előzmény 2008.08.01. Elfogadhatók az eredmények? Validált eredmények Glükóz (mmol/l) 6,6 5,8 5,7 Nátrium (mmol/l) 144 217 141 Kálium (mmol/l) 4,1 37,5 4,2 Kálcium (mmol/l) - 0,5 2,22 Nátrium-fluorid / kálium-oxalát adalékanyagot tartalmazó csőből mintát töltöttek át a szérumos csőbe (szürke kupakosból a sárga/piros kupakosba) Készülékre lehívott on-line munkalista esetén rossz pozícióba tették be a nátrium-fluorid / kálium-oxalát adalékanyagot tartalmazó szürke kupakos csövet Mintaátvételekor a fluoridos és a szérum mintának megfelelő bárkódos cimkéket egymással felcserélve ragasztották fel a mintavételi csövekre Sz. J. 74 éves férfi Syncumart szed, háziorvosa rendszeresen küldi ellenőrzésre, jól beállított a terápia. Kémiai, hematológiai, vizelet eredményei korábban nem voltak, kezelőorvosa ezért megkéri ezeket a vizsgálatokat is a laboratóriumtól. Jelenlegi eredményei többnyire referencia tartományon belüliek, triglicerid kissé emelkedett. Klinikai képbe nem illő eredmények Kálium: 31,6 mmol/l Kálcium: < 0,05 mmol/l Alkalikus foszfatáz: < 1 U/l Mi történt? K 2 -EDTA-s csőből mintát töltöttek át a szérumos csőbe. A labor ismétlést javasol. Endogén interferáló tényezők Lipémia Vizuális megfigyelés: a szérumban, plazmában szabad szemmel látható, ha a triglicerid koncentráció > 3,4 mmol/l Műszer: abszorbancia mérés a turbiditás mértékének megítélésére λ>600 nm-nél Spektrofotometriás vizsgálatok: fényszórás, abszorpció; lángfotometria, indirekt meghatározások: térfogat-kihasználás hatás; inhomogenitás; fizikai-kémiai mechanizmus: lipofil összetevők kivonása a reakcióból A lipémia okozta interferencia kiküszöbölése: Vérvétel előtti étrendi előírások betartása Lipoproteinek kivonása a szérumból, plazmából előkezeléssel (centrifugálás, extrakció, precipitáció) 3
Hemolízis Vizuális megfigyelés: a szérumban, plazmában szabad szemmel látható, ha a szabad hemoglobin koncentráció > 300 mg/l Műszer: spektrofotometriás, bikromatikus mérés Az extracelluláris térben megemelkedik pl. a kálium, LDH koncentrációja az intracelluláris térből kiáramló komponensek miatt; interferencia az alkalmazott analitikai módszerrel Ahemolízis okozta interferencia kiküszöbölése: Mintavételi eljárás standardizálása Mintavételt végzők rendszeres képzése Alkalmazott vizsgálati módszer módosítása Más vizsgálati módszer alkalmazása Vizsgálatok elvégzése a minta előkezelése után Icterus Vizuális megfigyelés: nem elég érzékeny módszer a bilirubinémia felismerésére Műszer: abszorbancia mérés 450-505 nm között Spektrális interferencia 400-540 nm között Kémiai interferencia pl. peroxidáz katalizált reakciókban Az icterus okozta interferencia kiküszöbölése: Spektrális interferencia kiküszöbölése vak méréssel Kémiai interferencia kiküszöbölhető néhány metodika esetén Vizsgálatok elvégzése a minta előkezelése után Hemoglobin mérés Módszer: SLS hemoglobin komplex formájában fotometriásan Mérési hullámhossz: 555 nm Mért paraméter: Hemoglobin Számított paraméterek: MCH átlagos vörösvérsejt hemoglobin tartalon Hemoglobin mérést zavaró tényezők miatt a hemoglobin, MCH és MCHC eredmény nem adható ki. MCHC átlagos vörösvérsejt hemoglobin koncentráció Szérum index táblázat 4
A Sürgősségi Betegállátó Osztályról érkezett szérum minta centrifugálás után szemmel láthatóan erősen hemolizált. Az automata általmért szérum indexek: I index: 13 H index: 205 L index: 10 Kiadjuk az eredményeket? Új mintát kérjünk? Szérum indexek alkalmazása Automatikusan mérhető minden szérum minta esetén Minimális minta és reagens igény A szérum index táblázat alkalmazásával lehetővé válik az interferáló tényezők objektív megítélése Az eredményeket validáló diplomások egységesen dönthetnek arról, hogy kiadható-e az eredmény vagy sem Az eredmények megbízhatóak a gyógyító orvos számára az interferáló tényezők esetén is Köszönöm a figyelmet! 5