PREANALITIKAI ELVÁRÁSOK AZ ORVOSI LABORATÓRIUMOKBAN. Dr. Bekő Gabriella Uzsoki Kórház, Központi Laboratórium

Átírás

1 PREANALITIKAI ELVÁRÁSOK AZ ORVOSI LABORATÓRIUMOKBAN Dr. Bekő Gabriella Uzsoki Kórház, Központi Laboratórium

2 A laboratóriumi tevékenység három szakaszra bontható: Preanalitikai szakasz - laboratóriumon kívüli - laboratóriumon belüli Analitikai szakasz Posztanalitikai szakasz

3 Preanalitikai folyamatok Laboratóriumon kívül - vizsgálat kiválasztása, kérése - beteg előkészítése, azonosítása - mintavétel - mintaszállítás Laboratóriumon belül - minta átvétele és azonosítása - minta előkészítése - minta minőségének ellenőrzése - minta tárolása

4 A beteg előkészítése 12 órás táplálékmegvonás (bizonyos vizsgálatokhoz étrendi előírások betartása pl. glükóz terhelés, zsíranyagcsere vizsgálat) DE bő folyadékfogyasztás (víz, cukor nélküli tea! ) élvezeti szerek kerülése (dohányzás!) gyógyszerek fizikai aktivitás

5 Mintavétel - Testhelyzet -Függőleges pozícióban hemokoncentráció ( a vérsejtek és a fehérjék koncentrálódnak, mert a folyadék átjut az erekből a környező szövetekben) -Fekvő pozícióban hemodílúció Egészséges egyénekben a mért értékek akár 10-20%-kal alacsonyabbak fekvő helyzetben, mint függőlegesben, ödémásokban ez az arány még nagyobb lehet. Annak érdekében, hogy összehasonlítható eredményeket kapjunk, a vérmintákat adott betegtől mindig ugyanabban a testhelyzetben vegyük le. Mintavétel - Testhelyzet

6 Mintavétel Vérvételi technika Vérvétel helye: valamely perifériás véna, többnyire a vena cubitalis.

7 Vérvétellel kapcsolatos rendszabályok Mintavétel 1. A vénát punctió előtt lehetőleg rövid ideig pangassuk ( erős pangás miatt a vvt-k lysise következik be, az izmok anaerob glikolízise miatt megnő a szérum laktát- és piruváttartalma ) 2. El kell kerülni a vvt-k mechanikai károsodását (a vér erőteljes szívása, a vér szakszerűtlen kinyomása a vérvételi csövekbe, vagy a minták erőteljes rázása hemolyzis okoz.) 3. A mintát az antikoagulánssal gondosan össze kell keverni ( ha az alvadásgátló nem oszlik el egyenletesen részleges alvadékképződés következik be) Antikoguláns oldatok használatakor a térfogatok igen pontos kimérésére is szükség van. 4. Funkcionális vizsgálatok során a mintavételi időpontokat szigorúan be kell tartani ( glükóztolerancia- teszt, clearence-vizsgálatok )

8 Mintavétel Vérvételi technika Jelöljük a csövet, még a vérvétel előtt! Kompresszió ne tartson tovább 1-2 percnél, és csak az éppen szükséges erejű legyen. 3 percnél tovább tartó leszorítás esetén a következő változások figyelhetők meg: PI, APTI és TI megrövidül, AT, fibrinogén-szint kb. 10%-kal növekszik. A vér zavartalanul, örvénylést okozó megtörés nélkül és rövid idő alatt jusson a csőbe. - Túl gyors áramlás esetén a trombociták/vörösvértestek károsodhatnak, hemolízis jöhet létre - Túl lassú áramlás esetén pedig a vérminta alvadása beindul, akár látható formában alvadékképződéssel, akár láthatatlanul, az alvadási faktorok aktivációjával. Vérvétel ne kanülből történjen! Ilyen esetben a mintavétel a másik kar vénájából történjen, vagy a kanül fiziológiás sóval történő átmosását és az első ml vér leengedését követően.

9 Mintavétel Vérvételi eszközök Vérvétel helyes sorrendje: Hemokultúra Natív minta Citrátos minta EDTA-s minta Egyéb Abban az esetben, ha csak koagulációs tesztek végzésére van szükség, a citrátos minta előtt EDTA-s vér vétele történjen, ugyanis a szúrás után nyert első mintában levő szöveti tromboplasztin téves eredményeket okozhat. Bármely (indokolatlanul) kóros eredmény esetén, új mintavételből javasolt a vizsgálatot megismételni.

10 Mintavétel Figyelni kell a helyes citrát:vér arányra (1:9). Ha a vérmennyiség kevesebb a kelleténél, a plazma magas citrátkoncentrációja megnyúlt alvadási időket (főként APTI) okoz, a nagymértékű kalciummegkötés miatt. A jelenleg használatos vákuumos csövekben a vákuum biztosítja a megfelelő citrát:vér arány elérését. A fenti aránytól kb. 10%-os eltérés még elfogadható. Az alvadásgátlót tartalmazó csöveket, a levételt követően, azonnal többször, finoman össze kell forgatni ( átbillenteni 180 ⁰, legalább 4x ), de sohasem rázni.

11 Mintaszállítás Álló helyzetű, lezárt csövekben történjen Kerülendő a minták rázatása (hemolízis, alvadás aktiváció) Centrifugálatlan minták szállítása ⁰C-on történjen Sínekkel ellátott szállítóegység Pneumatikus cső Mintaszállítás

12 Minta előkészítése, kezelése Minden emberi vérmintát potenciálisan fertőzőnek kell tekinteni és úgy is kell kezelni!

13 Minta előkészítése, kezelése Meg kell várni a teljes alvadást natív cső esetén (30 perc) Centrifugálás időtartama natív cső esetén 1800 rpm, 10 perc Plazma szeparálás esetén 3000 rpm, perc Túl hamar történő centrifugálás: fibrinszál kiválás, hemolizált minta

14 Minta előkészítése hemosztázis vizsgálatokhoz A véralvadás vizsgálatára használt mintavételi csövek antikoagulánsként 3,2%-os Na-citrát oldatot tartalmaznak. A citrátos vérmintából centrifugálás által jutunk citrátos plazmához. Trombocitadús plazma (PRP) (Plt>10 G/l): 2000 rpm, 4 perc centrifugálással nyerjük, trombocitafunkciós mérésekhez használjuk. Trombocitaszegény plazma (PPP) (Plt<10 G/l): 3000 rpm, perc centrifugálással kapjuk, a rutin hemosztázis-vizsgálatokhoz ezt használjuk. Trombocitamentes plazma (PFP): 4000 rpm, 20 perc centrifugálással nyerjük, és a PPP-hez hasonlóan használhatjuk. Különösen alkalmas olyan tesztekhez, ahol a vérlemezkék zavarhatják a meghatározást (trombocita faktorok, heparin monitorozás, LA, egyéb antifoszfolipid antitestek, fibrinolízis elemei). Felhasználásig fagyasztva tárolandó.

15 Minta minőségének ellenőrzése Minden mintát érkezés/centrifugálás után vizuálisan ellenőrizni kell. Vizsgálatnak nem megfelelő vérvételi csőbe történt a mintavétel. Alvadékos minta (mikroalvadék! ) Nem megfelelő citrát:vér arány

16 Minta minőségi eltérései Eltérés 1. Hemolízis Látható hemolízis: (vörösvérsejtek 0,5%-a hemolizált) szabad hemoglobinszint> 0,30-0,50 g/l Mérésre alkalmatlan minták 40 70% hemolizált Következmény - intracelluláris analitok szérumszintje nő - fotometriás mérést zavarja a hemoglobin - kémiai reakciókat zavarja a hemolízis - az alvadási idő megrövidülését eredményezi

17 Minta minőségi eltérései Eltérés 2. Hyperlipidaemia TG koncentráció>3,4 mmol/l szabad szemmel látható Következmény - fotometriás mérést zavarja - potenciometriát is zavarja Mit lehet tenni? - centrifugálás nagy fordulatszámon - lipoclear - ismétlés (beteg előkészítés?)

18 Minta minőségi eltérései Eltérés 3. Hyperbilirubinaemia Következmény - interferencia számos meghatározással - a vizuális megfigyelés gyakran nem elég szenzitív módszer a hiperbilirubinémia felismerésére (különösen ha a mintát egyidejűleg más anyag is pigmentálja pl. hemoglobin vagy származékai)

19 Minta minőségi eltérései Szérumindex alkalmazása Minden icterusos, lipémiás és hemolizált minta esetén automatikusan mérjük, bizonyos kémiai automatákon Gyors, minimális mintaigény, nincs reagensigény, költséghatékony A szérumindex-táblázat alkalmazásával lehetővé vált az interferáló tényezők objektív megítélése Az eredmények megbízhatóak a gyógyító orvos számára az interferáló tényezők esetén is

20 Mintatárolás Időfaktor -Vérgáz, ammónia 15 percen belül lemérendő -Liquor 1 órán belül -Vérkép, rutin véralvadási vizsgálatok 4 órán belül Hemosztázis: - Ha a minták csak a későbbiekben kerülnek felhasználásra, a plazmákat le kell fagyasztani. - Trombocitafunkciós vizsgálatok esetén a mintavételt követően azonnal meg kell kezdeni a mintafeldolgozást, majd mérést és két órán belül be kell fejezni!

21 Mintatárolás Hőfok - Szobahőmérsékleten a PI stabilabb, mint az APTI, de a hőfok emelkedésével mindkettő értéke kifejezetten csökken (%), illetve nő (sec). - A leglabilisabb faktor a FVIII. - Magas hőmérséklet (beleértve direkt napfény) mindenkor kerülendő. - Hűtőszekrényben (2-8 oc) való tárolás nem ajánlatos, mivel ez a FVII, valamint FXI, XII hidegaktivációjához, ezáltal a megfelelő szűrőtesztek rövidült alvadási idejéhez vezet.

22 Mintatárolás Ha a minta csak a későbbiekben kerül felhasználásra, a trombocita-mentes plazmát (PFP) a vérvétel után 1 órán belül leválasztjuk a sejtes elemekről és zárt csövekben fagyasztva tároljuk. Rövid ideig tartó (<2 hét) tárolásra elegendő a 20 oc, de hosszabb idő esetén (<6 hónap) legalább -70 oc a megfelelő tárolási hőmérséklet. A fagyasztott mintákat 37 oc-os vízfürdőben engedjük fel, majd alaposan összekeverjük. Ezután azonnal megkezdjük a mérést, mivel számtalan faktor stabilitása csökken felolvasztás után. Az újrafagyasztás és felengedés kerülendő.

23 Összefoglalás Preanalitikai szakban számos tényező befolyásolja a levett vérminta minőségét. A preanalitikai hibák kb.60%-a az elégtelen minta minőségre-mennyiségre, a fennmaradó 40% a beteg azonosítás v. felkészítés nem megfelelőségéből, a mintavétel nem megfelelő voltából, a minta kezelés, előkészítés, szeparálás, tárolás hibáiból ered. Odafigyeléssel és az előírások betartásával ezen hibák elkerülhetőek és korrekt, pontos eredményeket szolgáltathatunk.