Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.8.2.-1 07/2014:20427 2.4.27. VIZSGÁLAT NEHÉZFÉMEKRE NÖVÉNYI DROGOKBAN ÉS NÖVÉNYI DROGKÉSZÍTMÉNYEKBEN Figyelmeztetés: a zárt, nagynyomású roncsolóedények és a mikrohullámú laboratóriumi eszközök használata megköveteli a gyártó által mellékelt, biztonsági előírások és a használati utasítás alapos ismeretét. KÉSZÜLÉK A készülék általában a következő részekből áll: a politetrafluoretilén (PTFE), prefluoralkoxi (PFA)-polimer, kvarcüveg vagy üveg, 20 150 ml térfogatú roncsolóedények, légmentes zárást biztosító záróelemmel, a tartály belsejében uralkodó nyomás szabályozására szolgáló szeleppel, valamint a gáz kiengedésére alkalmas politetrafluoretilén-csővel, olyan rendszer, amely biztosítja valamennyi lombik azonos torziós erővel történő, légmentes lezárását, programozható mikrohullámú sütő (pl. 2450 MHz magnetronfrekvenciás, 1%-os fokozatonként 0 W és 1500±70 W között változtatható kimenő teljesítményű), valamint egy szabályozható sebességű szívóventillátorral, forgatható lemeztányér-rendszerrel és füstelszívó vezetékrendszerrel ellátott, politetrafluoretilén-borítású, mikrohullámú tér, atomabszorpciós spektrométer (2.2.23), induktív csatolású plazma atom atomemissziós-spektrométer (2.2.57), vagy induktív csatolású plazma-tömegspektrométer (2.2.58). VIZSGÁLAT A vizsgálatot atomabszorpciós spektrometriás (AAS) (2.2.23), induktív csatolású plazma atomemissziósspektrometriás (ICP-AES) (2.2.57), vagy induktív csatolású plazma-tömegspektrometriás (2.2.58) módszerrel végezzük. Az alább leírt mintaelőkészítési és mérési paraméterektől való eltérés megengedett, amennyiben azok megfelelnek a validálási követelményeknek, továbbá ha a mérés napján a rendszeralkalmassági vizsgálat is megfelelő. Mintaelőkészítés Használat előtt minden üvegárut és laboratóriumi eszközt R tömény salétromsav 10 g/l töménységű oldatával tisztítunk. Vizsgálati oldat. A vizsgálandó anyag előírt mennyiségét (kb. 0,50 g porított növényi drogot (1400) (2.9.12) roncsolólombikba mérjük, majd 4 ml R nehézfémmentes tömény sósavat és 6 ml R nehézfémmentes tömény salétromsavat adunk hozzá. A lombikot légmentesen lezárjuk. Hét roncsolólombikot a vizsgálati oldattal mikrohullámú sütőbe helyezünk. A roncsolást 3 lépésben hajtjuk végre, a következő program szerint: 15 percig 80%-os, 5 percig 100%-os, 20 percig 80%-os teljesítmény. Ezután a lombikokat levegőn, vagy vízben hagyjuk lehűlni. A lehűlt roncsolólombikokat kinyitjuk és a kapott tiszta, színtelen oldatokat 50 ml-es mérőlombikokba visszük át. A roncsolólombikokat 2 15 ml R nehézfémmmentes tömény salétromsavval átmossuk és a mosófolyadékokat is a mérőlombikokba öntjük, majd a mérőlombikokat R vízzel jelretöltjük. Szükség esetén alkalmazhatunk módosító szereket (pl. elektrotermikus atomizáció esetében R magnézium-nitrát 10 g/ml koncentrációjú oldatának 1,0 ml-ét és R ammónium-dihidrogén-foszfát 100 g/l töménységű oldatának 1,0 ml-ét.) Vak oldat. 4 ml R nehézfémmentes tömény sósav és 6 ml R nehézfémmentes tömény salétromsav és elegyét roncsolólombikban a vizsgálati oldattal azonos módon kezeljük.
Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.8.2.-2 ARZÉN, KADMIUM, RÉZ, NIKKEL ÉS ÓLOM MEGHATÁROZÁSA ELEKTROTERMIKUS ATOMIZÁCIÓS AAS (2.2.23) Az arzén-, kadmium-, réz-, nikkel- és ólomtartalmat közvetlen kalibrációs módszerrel (2.2.23/I. módszer), vagy standard addiciós módszerrel (2.2.23, II. módszer) határozzuk meg, melyhez az egyes nehézfémek összehasonlító oldatait és a 2.4.27.-1. táblázatban feltüntetett műszerparamétereket alkalmazzuk. A vak oldat abszorbanciáját kivonjuk a vizsgálati oldatra kapott értékből. 2.4.27.-1. Táblázat elektrotermikus atomizáziós AAS műszerparaméterek As Cd Cu Ni Pb hullámhossz nm 193,7 228,8 324,8 232 283,5 résszélesség nm 0,5 0,5 0,5 0,2 0,5 lámpaáram ma 10 6 7 10 5 fűtési hőmérséklet atomizálás hőmérséklete gázáramlási sebesség C 1400 800 800 800 800 C 2600 1800 2300 2500 2200 l/perc 3 3 3 3 3 ARZÉN ÉS HIGANY MEGHATÁROZÁSA HIDEGGŐZ VAGY HIDRID ATOMZÁCIÓS (2.2.23) Az arzén- és higany-tartalmat közvetlen kalibrációs módszerrel (2.2.23/I. módszer), vagy standard addiciós módszerrel (2.2.23, II. módszer) határozzuk meg, melyhez arzén- vagy higany-összehasonlító oldatokat és folyamatos áramlási rendszerű, automata hidrid-generátort használunk. A vak oldat abszorbanciáját levonjuk a vizsgálati oldatra kapott értékből. Arzén Mintaoldat. A vizsgálati oldat, illetve a fentebb leírtak szerint készített vak oldat 19,0 ml-éhez R káliumjodid 200 g/l töménységű oldatának 1 ml-ét adjuk. Az oldatot szobahőmérsékleten kb. 50 percig, vagy 70 Con kb. 4 percig állni hagyjuk. Savas reagens. R nehézfémmentes tömény sósav. Redukáló reagens. R nátrium-[tetrahidro-borát(iii)] 6 g/l-es oldata, mely R nátrium-hidroxid 5 g/l töménységű oldatával készült. A 2.4.27.-2. táblázatban feltüntetett műszerparamétereket alkalmazhatjuk. Higany Mintaoldat. A vizsgálati oldat, illetve a vak oldat, melyek készítését ld. fent. Savas reagens. R nehézfémmentes tömény sósav 515 g/l töménységű oldata. Redukáló reagens. R ón(ii)-klorid 10 g/l töménységű oldata, amelyet R nehézfémmentes hígított sósavval készítünk. A 2.4.27.-2. táblázatban feltüntetett műszerparamétereket alkalmazhatjuk.
Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.8.2.-3 2.4.27.-2. Táblázat hideggőz vagy hidrid atomizációs AAS műszerparaméterek hullámhossz nm 193,7 253,7 résszélesség nm 0,2 0,5 lámpaáram ma 10 4 savas reagens áramlási sebessége ml/perc 1,0 1,0 redukáló reagens áramlási sebessége ml/perc 1,0 1,0 abszorpciós cella As kvarc (fűtött) Hg kvarc (nem fűtött) N2-gáz áramlási sebessége l/perc 0,1 0,1 ARZÉN, KADMIUM, RÉZ, HIGANY, NIKKEL ÉS ÓLOM MEGHATÁROZÁSA ICP-AES (2.2.57) Az arzén-, kadmium-, réz-, higany-, nikkel- és ólomtartalmat közvetlen kalibrációs módszerrel (2.2.23/I. módszer) határozzuk meg, melyhez az egyes nehézfémek összehasonlító oldatait, vagy az összes meghatározandó fémiont együttesen tartalmazó oldatot és a 2.4.27.-3. táblázatban feltüntetett műszerparamétereket alkalmazzuk. A vak oldat emisszióját levonjuk a vizsgálati oldatra kapott értékből. ARZÉN, KADMIUM, RÉZ, HIGANY, NIKKEL ÉS ÓLOM MEGHATÁROZÁSA ICP-MS (2.2.58) Az arzén-, kadmium-, réz-, higany-, nikkel- és ólomtartalmat közvetlen kalibrációs módszerrel (2.2.23/I. módszer) határozzuk meg, melyhez az egyes nehézfémek összehasonlító oldatait, vagy a 2.4.27.-4. táblázatban javasolt analitikai izotópokat és egyéb tömegeket alkalmazzuk. A vak oldat emisszióját levonjuk a vizsgálati oldatra kapott értékből. RENDSZERALKALMASSÁG A mérés napján rendszeralkalmassági vizsgálatot kell végezni, hogy bebizonyítsuk a mintaelőkészítés és a mérőrendszer megfelelőségét. A mintaoldat megfelelőségének elfogadási követelménye: a kapott oldat tiszta legyen. A mérőrendszer megfelelőségének elfogadási követelménye: a kalibrációs görbe által meghatározott koncentráció-tartományon belüli standard oldat mért koncentrációja az adott fémre legfeljebb 20%-ban térhet el az elméleti értéktől. VALIDÁLÁSI KÖVETELMÉNYEK Az alkalmazott analitikai eljárást a megfelelő általános fejezetben (AAS (2.2.23), ICP-AES (2.2.57), ICP- MS (2.2.58)) leírt módszerrel kell validálni. Ezen felül az alább leírt követelményeknek is meg teljesülniük kell. SPECIFIKUSSÁG
Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.8.2.-4 A módszer specifikussága annak bizonyítását jelenti, hogy a mintaelőkészítés és a mérési módszer a mérendő fém(ek) megbízható meghatározását teszi lehetővé, az elvárhatóan jelen levő egyéb komponensek (pl. vivőgáz, szennyezők, mátrix) mellett. Elfogadási követelmény: az eljárásnak képesnek kell lennie minden mérendő nehézfém egyértelmű meghatározására a várhatóan jelenlevő komponenesek mellett (beleértve egyéb nehézfémeket, mátrixkomponenseket és egyéb, interferenciót okozó anyagokat); a specifikusság igazolható legyen a meghatározandó fémre vonatkozó pontossági (accuracy) követelményeknek való megfeleléssel. KALIBRÁCIÓS TARTOMÁNY A módszer linearitási tartományába essen mindegyik vizsgált fémion kalibrációs tartománya; a kalibrációs tartományon kívül eső fémkoncentrációjú oldatokat úgy kell hígítani, hogy a végső koncentráció a kalibrációs tartományba essen. Elfogadási követelmény: a visszanyerési követelményeknek való megfeleltetéssel adjuk meg a kalibrációs tartományt. TORZÍTÁSMENTESSÉG (ACCURACY) A torzítatlanságot bizonylattal ellátott referenciaanyag (CRM), vagy visszanyerési vizsgálat segítségével ellenőrizzük. Visszanyerési vizsgálat. A visszanyerés megadható a vizsgálati mintához ismert mennyiségű referenciaanyag hozzáadásával (a célkoncentráció 50 150%-os tartományában, legalább három koncentráció értéknél, még akkor is, ha a referencia anyag eredeti koncentrációja a várt értékkel egyezik); három párhuzamos mérést végzünk. Elfogadási követelmény. A hozzáadott standard visszanyerése mindegyik mért koncentrációnál, a mérések átlagára vonatkoztatva, 70 150% közé essen. ISMÉTELHETŐSÉG Vizsgálati minták: 6 független vizsgálandó minta egy megfelelő referenciaanyag hozzáadásával a megfelelő koncentrációban, vagy 3 eltérő koncentrációban, 3 3 párhuzamost mérve. Elfogadási követelmény: A relatív szórás (RSD) mindkét esetben nem lehet nagyobb a 2.4.27.-5. táblázatban feltüntetett értéknél. KÖZTES PONTOSSÁG Vizsgálni kell a véletlenszerű események (laboratóriumon belüli) hatását az analitika módszer pontosságára. A köztes pontosság bizonyításához elegendő az alábbi három kísérlet valamelyikének való megfelelés: ismételt mérés eltérő napokon, eltérő műszereken, vagy különböző analitikusok által végrehajtva. A háromból egy paraméter végrehajtása elegendő a köztes pontosság ellenőrzésére. Elfogadási követelmény: A relatív szórás (RSD) nem lehet nagyobb a 2.4.27.-5. táblázatban feltüntetett értéknél. MAGHATÁROZÁSI HATÁR
Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.8.2.-5 Határozzuk meg a legkisebb koncentrációt az elfogadási követelményeknek megfelelve. Használjuk a visszanyerés vizsgálat eredményeit. Elfogadási követelmény: a maghatározási határértéknek a specifikációs határ alatt kell lennie. hullámhossz nm 193,696/ 167,197/ 189,042 2.4.27.-3. Táblázat ICP-AES műszerparaméterek As Cd Cu Hg Ni Pb 214,438/ 226,502/ 228,802 324,754/ 327,396/ 224,700 184,950/ 253,652/ 435,835 231,604/ 231,997/ 352,454 220,351/ 283,306/ 168,215 Ar, Monitorline nm 430,010 430,010 430,010 430,010 430,010 430,010 Plazmaenergia W 1200 1200 1200 1200 1200 1200 Csúcsalgoritmus háttérkorrekcióval igen igen igen igen igen igen 2.4.27.-4. Táblázat ICP-MS mérésekhez javasolt analitikai izotópok és egyéb tömegek Izotóp Elem 75 Arzén 106, 108, 111, 114 Kadmium 63, 65 Réz 202 Higany 60, 62 Nikkel 206, 207, 208 Ólom A mérendő fém koncentrációtartománya (mg/kg) 2.4.27.-5. Táblázat Ismételhetőség (RSD) (%) Köztes pontosság (RSD) (%) 0,01 1 20 32 >1 10 16 KIMUTATÁSI HATÁR (HATÁRÉRTÉKVIZSGÁLATOK ESETÉN ALKALMAZANDÓ) Meghatározzuk azt a legkisebb koncentrációt, amelyhez tartozó jel egyértelműen különbözik az "üres" oldat jelétől. Elfogadási követelmény: a kimutatási határ nem lehet nagyobb, mint a specifikációs határhoz tartozó koncentráció 0,1-szerese.