Synoviális folyadékok laboratóriumi vizsgálata Brózik Márta, Böhm Ute, Háznagy Ágnes, Lelkes Gábor Ferencz Géza Országos Reumatológiai és Fizioterápi piás Intézet Központi Laboratórium rium
Synoviális folyadékok diagnosztikája -Hematológia -Patológia -Klinikai kémia -Immunológia, immunkémia
Normál (fiziológiás) synoviális folyadék: térfogata kicsi (< 3 ml) Fehérjék : -szérumból méret specifikus diffúzió által -lokális fehérje szintézis: hyaluronsav, lubricin, -kiáramlás: lymphatikus rendszer Synovitis: Synoviális folyadék felszaporodás, oka: csökkent lymphatikus folyadék kiáramlás Fehérjék: -szérumból, de fokozott membrán permeabilizáció, emelkedett se fehérje szint, nagy ms-ú fehérjék (Immunogl, fibrin)megjelenése -lokális fhérje szintézis: immunoglobulinok, RF, citokinek
Synoviáis folyadékok eredete kórképek szerint I (nem gyulladásos) Osteoarthritis Trauma Porc károsodás Osteochondritis dissecans Osteochondromatosis Charcot's arthropathy Subsiding inflam m ation Villonodular synovitis Hypertrophic osteoarthropathy Myxoedema Acromegaly Haemochromatosis Gaucher's disease Ochronosis Paget's disease II (gyulladásos) Rheumatoid arthritis Kristály indukálta synovitis Arthritis psoriatica Reaktiv arthritis (Reiter Syndroma) Whipple kór Autoimmune reumatikus betegségek Polymyalgia rheumatica Polychondritis Sarcoidosis Behçet's syndrome Spondylitis Ankylopathia Juvenile rheumatoid arthritis Rheumás láz Lyme kór Leukaemia
Synoviális folyadék mintavétel Diagnosztika Terápia
Synoviális folyadékmint kminták laboratóriumi riumi vizsgálata Mintavétel Heparinos Vízuális értékelés < 6,000/μl sejtszám >6,000/ μl > 50,000/μl Natív Mikroszkópos vizsgálat Ragocyták, kristályok Bakterológia Qualitatív sejtszám Gram festés Centrifugálás (10 perc 1-3,000 rpm ) Tenyésztés Virális, bacteriális DNS, RNS (PCR) üledék Qualitatív sejtszám Gram festés Felülúszó (+Hyaluronidáz) Klinikai kémiai Immunológiai vizsgálatok
Synoviális folyadékmunták vizuális értékelése F A. normál B: nem-gyulládos kórképből C. gyulladásos kórképből D: Septikus athritisből E: Hemorrhagiás SF, F. Rizsszem szerű aggregátumokat tartalmazó SF képe
Hematológiai vizsgálatok: -Sejtszám: manuális számlálás leukocyta/ μl SF norm: 50-100 nem -gyulladásos: 200-1.000 gyulladásos > 60.000 RA, Reiter, Kristály indukált ~350.000 -Sejtösszetétel: norm: 24% Ly 48% Mo PMN 7% gyulladásos: PMN > 70% septicus: PMN > 95% PMN leukocyták, kis lymfocyták, monocyták, eosinofilek, erythrociták macrophagok, synoviális, LE, csontvelő sejtek is előfordulhatnak
Synoviális folyadék kis lymfocitái
Reiter sejtek. PMN sejtet fagocitáló MN sejt
Gram festés
Kémiai és fizikai vizsgálatok I. - Viszkozitás, mucin próba A normál SF viszkózus folyadék, állagát hyaluronsav polimerek biztosítják Gyulladásos állapotokban a mucin polymerek fragmentálódnak Ecetsavas közegben a mucin polymerek és fragmentumok eltérő formában denaturáldnak, Kivitelezés: 4 rész 2%-os ecetsav + 1 rész SF Vizuális értékelés
Klinikai kémiai vizsgálatok Synoviális folyadékokban: -Összfehérje -Fehérje frakciók (electroforézis) -Glucose -Lactát -Hugysav -Enzimek: locális gyulladás, Ly-k fokozott glycolízise szérumból és a synovium sejtjeibőlerednek LDH gyulladásos SF (M isoenzym) ALP, ACP helyi szintézis is van SF minták előkezelése: hyaluronidáz enzimmel történő emésztés
Vizsgálat Térfogat (térd) Kórképek típusai és Synovialis Folyadékok Normal <1-3 ml Nem-gyuladásos kórképek >3 ml Gyulladásos kórképek >3 ml Septicus állapot >3 ml Viszkozitás Magas Magas Alacsony Változó Szín Színtelen, Szalma szín, sárgás Sárga Változó Tisztasága Átlátszó Átlátszó Áttetsző Opálos WBC (µl/sf) <200 50 1000 1000 75,000 >100,000+ PMN (µl/sf) <25% <25% >50% >85% Tenyésztés Negativ Negativ Negativ positiv Mucin próba +++ norm csapadék +++ norm csapadék ++ közepes precipitáció + finom szemcsés precip Glucose (éhgyomri) ~ szérum ~ szérum <50 mg/dl (kisebb, mint a szérum) 2.2mmol/L infectiv arthritis: 1.1mmol/L >50 mg/dl
Immunkémiai vizsgálatok synoviális folyadékokban Eredete -Reumatoid faktor: synovium plazma sejtjei termelik -Immunoglobulinok: synovium plasma sejtjei termelik -Komplement fehérjék : gyulladásos synovium sejtjei, és serum CH50, C3, C4, komplement aktiváció, fragmentek, Se-SF minták paralell vizsgálata infornatívabb. Sy membrán perfúzió korrigálására: Se/SF albumin arány alkalmas
Fehérje Normál Nem-gyulladásos Gyulladásos se SF se SF se SF Összfehérje (g/l) 69 9-22 71 32 66 44 Elfor frakciók (%) Albumin 56 57 42 α1-globulin 8 6 8 α2-globulin 7 8 11 β-globulin 11 12 14 γ-globulin 18 16 25
Mikroszkópos vizsgálatok -Fénymikroszkóp: ragociták (RA) PMN sejtek citoplazmájában oliva színű zárványok: (Igl, RF, fibrin) -Polarizációs mikroszkóp: kristályok elkülönítése (kettőstörés ) monosodium urát (MSU) tű szerű, 10-20 um hosszú, (fagocitált) Köszvén calcium pirofoszfát (CPPD) bot, romboid, prizmás formák Chondrocalcinozis -Fáziskontraszt mikroszkóp: Hydoxyapatit, PMN sejtekben intracellulárisan, (vagy extracell, korongok) koleszterin, steroid, calcium oxalát, lítium heparin, amyloid ( kongó vörös festés)
Monosodium urát kristály (MSU) kompenzált polarizált fényben
Immunkémiai vizsgálatok synoviális folyadékokban Eredete -Reumatoid faktor: synovium plazma sejtjei termelik -Immunoglobulinok: synovium plasma sejtjei termelik -Komplement fehérjék : gyulladásos synovium sejtjei, és serum CH50, C3, C4, komplement aktiváció, fragmentek, Se-SF minták paralell vizsgálata infornatívabb. Sy membrán perfúzió korrigálására: Se/SF albumin arány alkalmas
Fehérje Normál Nem-gyulladásos Gyulladásos se SF se SF se SF Összfehérje (g/l) 69 9-22 71 32 66 44 Elfor frakciók (%) Albumin 56 57 42 α1-globulin 8 6 8 α2-globulin 7 8 11 β-globulin 11 12 14 γ-globulin 18 16 25
Mikroszkópos vizsgálatok -Fénymikroszkóp: ragociták (RA) PMN sejtek citoplazmájában oliva színű zárványok: (Igl, RF, fibrin) -Polarizációs mikroszkóp: kristályok elkülönítése (kettőstörés ) monosodium urát (MSU) tű szerű, 10-20 um hosszú, (fagocitált) Köszvén calcium pirofoszfát (CPPD) bot, romboid, prizmás formák Chondrocalcinozis -Fáziskontraszt mikroszkóp: Hydoxyapatit, PMN sejtekben intracellulárisan, (vagy extracell, korongok) koleszterin, steroid, calcium oxalát, lítium heparin, amyloid ( kongó vörös festés)
Monosodium urát kristály (MSU) kompenzált polarizált fényben
Fagocitált MSU kristály
Fagocitált corticosteroid kristályok
Koleszterin kristályok
Koleszterin kristályok
Fagocitált CCPD kristály
Köszönöm a figyelmet