A calprotectin és egyéb biomarkerek szerepe a gasztrointesztinális gyulladásos betegségek differenciál diagnosztikájában 1 Halmainé Kiss Ilona, 2 Rutka Mariann, 1 Földesi Imre Szegedi Tudományegyetem 1 Laboratóriumi Medicina Intézet, 2 I. Belgyógyászati Klinika MLDT 58. Nagygyűlése Szeged, 2016. augusztus 25-27.
Intesztinális betegségek Funkcionális elváltozás Organikus elváltozás IBS (Irritable Bowel Syndrome) IBD (Inflammatory Bowel Disease) Crohn betegség Colitis ulcerosa Mikroszkópos colitis: Kollagén colitis Limfocitás colitis
Crohn betegség vs. Colitis ulcerosa Crohn betegség: A tápcsatorna teljes hosszán előfordulhat Bélfal minden rétege érintett Colitis ulcerosa: A tápcsatorna egy részén fordul elő Csak a mucosa réteg érintett Remissziók/relapszusok váltakozása Remissziók/relapszusok váltakozása
Calprotectin Mátrix metalloproteináz-9 (MMP-9) S100A8/S100A9 heterodimer szerkezet (forrás: www.uscnk.com) Az MMP-9 szerkezeti felépítése (forrás: www.rcsb.org)
Anti-neutrofil citoplazmatikus antitest (ANCA) Kimutatás: ELISA és IIF módszerek ELISA alapján: anti-pr3 és anti-mpo antitestek IIF alapján: S. cerevisiae ellenes antitest (ASCA) c- ANCA p-anca atípusos p-anca (forrás: http://laboratory-manager.advanceweb.com/magazine/references/references-for-autoimmune) (forrás: microbewiki.kenyon.edu/index.php)
Célkitűzés Két POCT típusú calprotectin teszt összehasonlítása: Easy Card Calprotectin Quant, Sentinel Diagnostics, Milan, Italy Quantum Blue, Bühlmann Laboratories, Schönenbuch, Switzerland Calprotectin és MMP-9 vizsgálat székletből IBD gyanús betegek esetében A már differenciál diagnózissal rendelkező betegeknél a nyomonkövetés, monitorizálás lehetőségeinek felmérése (relapszus/remisszió) ANCA és ASCA markerek vizsgálata IBD gyanús betegek szérumából (első megjelenéskor)
Vizsgálati módszerek Easy Card Calprotectin Quant (Qualitatív mérés) Quantum Blue (Semi-quantitatív mérés)
MMP-9, ANCA, ASCA meghatározás Standardok (ng/ml) 0 0,3 0,6 1,25 2,5 5,0 10 20
Az IBD megoszlása a vizsgált betegek között 12 10 8 6 4 2 0 CD CU nibd Férfiak Nők CD CU nibd Összesen Átlag életkor (év) Férfi 10 1 3 14 33,6 Nő 11 4 11 26 32,4 Összesen 21 5 14 40 CD: Crohn-betegség CU: Colitis ulcerosa nibd: nem IBD
Eredmények Eltérések a két gyorsteszt értékelésében Összességében a vizsgált 40 eset közül 7 esetben (17,5%) találtunk eltérést a két teszt között. Mind a 7 alkalommal a Crohn betegek között volt a diagnosztikailag jelentős különbség. A 7 esetből kettőben a pozitív Easy Card teszthez negatív Quantum Blue eredmény társult. A maradék 5 esetben a negatív Easy Card teszthez pozitív Quantum Blue eredmény társult. Diagnózis Easy Calprotectin teszt Quantum Blue Cut off értékek 50 μg/g 200 μg/g 300 μg/g CD negatív negatív <30,0 CD negatív negatív <30,0 CD pozitív negatív 470 CD pozitív pozitív 33 CD pozitív pozitív 3000 CD negatív negatív <30,0 CD pozitív negatív 214 CD pozitív pozitív 500 CD negatív negatív 67 CD negatív negatív 49 CD pozitív negatív 246 CD negatív negatív <30 CD pozitív negatív 219 CD pozitív pozitív 266 CD pozitív negatív 800 CD negatív negatív <30 CD negatív negatív <30 CD pozitív pozitív 610 CD pozitív negatív 880 CD pozitív negatív 1690 CD pozitív negatív 1460 CU pozitív pozitív 610 CU pozitív pozitív 860 CU pozitív pozitív 850 CU pozitív negatív 138 CU pozitív pozitív 3000 nem igazolódott IBD negatív negatív <30,0 nem igazolódott IBD negatív negatív 76 nem igazolódott IBD negatív negatív 31 nem igazolódott IBD negatív negatív 38 nem igazolódott IBD negatív negatív 33 nem igazolódott IBD negatív negatív <30 nem igazolódott IBD negatív negatív 80 nem igazolódott IBD pozitív pozitív 840 nem igazolódott IBD negatív negatív <30 nem igazolódott IBD negatív negatív 41 nem igazolódott IBD negatív negatív <30 nem igazolódott IBD negatív negatív <30 nem igazolódott IBD pozitív negatív <30 nem igazolódott IBD negatív negatív <30
MMP-9 eredmények a bélbetegségek függvényében 18 16 14 12 10 8 17 14 6 4 4 5 2 0 0 Crohn betegség Colitis ulcerosa non-ibd MMP-9 negatív MMP-9 pozitív 0
Quantum Blue Calprotectin és MMP-9 eredmények összehasonlítása QB pozitív QB negatív QB határeset 13 12 8 6 0 1 MMP-9 pozitív MMP-9 negatív
Következtetések A CD betegségben szenvedők calprotectin eredménye 67 %-ban, CU betegség fennállásakor 100 %-ban azonos eredményt mutatott a két teszt összehasonlításakor. Az MMP-9 teszt CD esetében 76 %-ban, CU betegek esetében 80 %- ban mutatott összefüggést a calprotectin eredményekkel. Ugyanakkor nibd páciensek esetében mindvégig 0,5 ng/ml alatti MMP-9 értékeket kaptunk. A már differenciáldiagnózissal rendelkező és kezelésben részesülő betegek mintáinak eredményében mindkét calprotectin teszt alkalmasnak bizonyult a kezelés hatékonyságának követésére. Az ANCA és ASCA vizsgálatok, mint kiegészítő markerek, hasznosnak bizonyultak a diagnózis megerősítésében, mindamellett önmagukban nem elegendőek a differenciál diagnózis felállításához.
Köszönöm a figyelmet!