Robusztus vgy robosztus? törülköző vgy törülközű? Robusztusság 1 Tényleg végén és tényleg úgy kell végezni robusztusság-vizsgáltot? "The robustness/ruggedness of n nlyticl procedure is mesure of its cpcity to remin unffected by smll, but deliberte vritions in method prmeters nd provides n indiction of its relibility during norml usge" ICH Hrmonised Triprtite Guideline Q(R1) Vlidtion of Anlyticl Procedures: Text nd Methodology (The Addendum dted November 1996 hs been incorported into the core guideline in November 005). Robusztusság
Igen jó nyg: Y. Vnder Heyden, A.Nijhuis, J. Smeyers- Verbeke, B.G.M. Vndeginste nd D.L. Mssrt: Guidnce for Robustness/Ruggedness Tests in Method Vlidtion, J Phrm Biomed Anl. 001 Mr;4(5-6):73-53 http://www.vub.c.be/fbi/tutoril/robust/guideline.doc), bár nem minden részével értek egyet Régebben: vlidálás egyik utolsó lépése lbortóriumok közötti módszerátdás problémáink megelőzésére H módszer nem bizonyult robusztusnk, vissz kellett lépni módszerfejlesztésbe. Ezt elkerülendő: robusztusság-vizsgált megfelelő helye módszerfejlesztés végén, vlidálás előtt vn. Robusztusság 3 Amiről szó lesz: 1. Azt szeretnénk kimondni, hogy módszer robusztus, vgyis vizsgált fktorok (z dott változttási trtománybn) nem befolyásolják mérési eredményt.. Tudomásul vesszük, hogy módszer érzékeny bizonyos fktorokr, ezt z érzékenységet számszerűsítjük, és megdjuk, hogy z illető fktort milyen ( szokásosnál szűkebb) trtománybn kell trtnunk, h zt krjuk, hogy befolyás ne legyen zvró. + (3.) Robusztussá tétel (Tguchi módszere) Robusztusság 4
1. péld 4-1 terv centrumponttl kolonntér hőmérséklete névleges érték körül C, z eluens szerves oldószer trtlm névleges értéke körül 1 térfogt %-kl, z eluens névleges ph értéke körül 0,, z eluens KHPO4 névleges koncentrációj körül 1 mm Kísérlet Hőmérséklet (C) Az eluens MeOHtrtlm (V/V %) K HPO 4 mm z eluensben eluens ph 1 3 14 16 6.8 8 16 14 7. 3 3 14 14 7. 4 30 15 15 7.0 5 8 14 16 7. 6 3 16 16 7. 7 3 16 14 6.8 8 8 16 16 6.8 9 30 15 15 7.0 10 8 14 14 6.8 Robusztusság 5 Hipotézisvizsgált: H 0 : j 0 s s bj y y t sb 0 j s x ji N b j i Effect Estimtes; Vr.:y; R-sqr=.4169; Adj:.1939 **(4-1) design; MS Residul=.193651 DV: y Effect Std.Err. t(1) p -95.% +95.% Fctor Cnf.Limt Cnf.Limt Men/Interc. 101.050 0.095604 1056.698 0.000000 100.86 101.38 Curvtr. 0.1500 0.47556 0.351 0.7910-0.739 1.039 (1)T -0.1500 0.19109-0.784 0.441517-0.5476 0.476 ()MeOH -0.1833 0.19109-0.959 0.348563-0.5810 0.143 (3)KHPO4-0.667 0.19109-1.395 0.177705-0.6643 0.1310 (4)pH -0.3000 0.19109-1.569 0.13160-0.6976 0.0976 1 by 0.4167 0.19109.179 0.040855 0.0190 0.8143 1 by 3-0.1333 0.19109-0.697 0.49353-0.5310 0.643 1 by 4 0.3667 0.19109 1.918 0.068861-0.0310 0.7643 x x... y mért htónygtrtlom H elfogdjuk: nem tudjuk elutsítni, z dtok nem mondnk ellent, htás nem mgslik ki véletlen ingdozásból Biztos, hogy ezt krjuk kérdezni? Y = 0 1 1 Robusztusság 6 p x p
H ngy szórás, nem észleljük htást! Robusztusság 7 1. Azt szeretnénk kimondni, hogy módszer robusztus, vgyis vizsgált fktorok (z dott változttási trtománybn) nem befolyásolják mérési eredményt. Biztos? Inkább zt, hogy vizsgált fktorok nem befolyásolják mérési eredményt jobbn, mint Ehhez ki kell számolnunk, hogy mekkor változást okoznk z összefüggés becslése szükséges: Y = 0 1 1 x x... p x p Robusztusság 8
A fktorok kétfélék: tipikusn mennyiségiek, melyeket módszerfejlesztésnél optimlizálunk tipikusn minőségiek, melyekkel nem fogllkozunk módszerfejlesztésnél A mennyiségi fktorok htásánk becsléséhez jobb, h szélesebb trtománybn változttunk. A módszerfejlesztésnél is hsznált fktorok htásár már vnnk kísérleteink! Robusztusság 9. Tudomásul vesszük, hogy módszer érzékeny bizonyos fktorokr, ezt z érzékenységet számszerűsítjük, és megdjuk, hogy z illető fktort milyen ( szokásosnál szűkebb) trtománybn kell trtnunk, h zt krjuk, hogy befolyás ne legyen zvró. ugynez technik Mguk kísérletek módszerfejlesztési kísérletek, széles változttási trtományokkl. Robusztusság 10
. péld J. S. Spce, A. M. Opio, B. Nickerson, H. Jing, M. Dumont, M. Berry: Vlidtion of dissolution method with HPLC nlysis for lsofoxifene trtrte low dose tblets, J. Phrmceuticl nd Biomedicl Anlysis 44 (007) 1064 1071 Robusztusság 11 Spce_JPBA_44_1064.st 1 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 13 14 15 16 5 Tempertu e (0C) 6 ph 7 Flow rte (ml/min) 8 Orgnic (cetonit rile) (%) 9 Retention time =.5 nd=4.5 (min) 10 Pek efficienc y =1000 11 Pek symmetry =.0 45.8 0.4 33 5.6 5180 1.1 45 3. 0.6 33 3.7 4879 1.1 45.8 0.4 37 3.1 590 1 45 3. 0.6 37. 461 1.1 35.8 0.4 33 6.5 5640 1 35.8 0.4 37 3.5 5117 1.1 35 3. 0.6 33 4.4 4780 1 35 3. 0.6 37.5 46 1.1 45.8 0.6 37.1 4579 1.1 45.8 0.6 33 3.7 4691 1.1 45 3. 0.4 33 5.7 5506 1.1 45 3. 0.4 37 3.3 554 1.1 35 3. 0.4 33 6.6 509 1.1 35 3. 0.4 37 3.6 519 1.1 35.8 0.6 33 4.4 4667 1 35.8 0.6 37.4 4453 1.1 Robusztusság 1
Fctor Men/Interc. (1)Temperture 0C) ( ()ph (3)Flow rte (ml/m in) (4)Orgnic (cetonitrile) (%) 1 by 1 by 3 1 by 4 by 3 by 4 3 by 4 1**3 1**4 1*3*4 *3*4 Effect Estimtes; Vr.:Retention time =.5 nd=4.5 (min); R-sqr=.99998; Adj:.9 **(4-0) design; MS Residul=.00065 DV: Retention time =.5 nd=4.5 (min) Effect Std.Err. t(1) p -95.% +95.% Coeff. Cnf.Limt Cnf.Limt 3.956 0.006 633.0 0.0010 3.877 4.036 3.956-0.56 0.015-45.0 0.0141-0.71-0.404-0.81 0.088 0.015 7.0 0.0903-0.071 0.46 0.044-1.563 0.015-15.0 0.0051-1.71-1.404-0.781 -.38 0.015-179.0 0.0036 -.396 -.079-1.119 0.01 0.015 1.0 0.5000-0.146 0.171 0.006 0.06 0.015 5.0 0.157-0.096 0.1 0.031 0.37 0.015 19.0 0.0335 0.079 0.396 0.119-0.037 0.015-3.0 0.048-0.196 0.11-0.019 0.037 0.015 3.0 0.048-0.11 0.196 0.019 0.487 0.015 39.0 0.0163 0.39 0.646 0.44-0.01 0.015-1.0 0.5000-0.171 0.146-0.006 0.01 0.015 1.0 0.5000-0.146 0.171 0.006-0.037 0.015-3.0 0.048-0.196 0.11-0.019 0.013 0.015 1.0 0.5000-0.146 0.171 0.006 Robusztusság 13 3.0 Probbility Plot; Vr.:Retention time =.5 nd=4.5 (min); R-sqr=.99998; Adj:.99971 **(4-0) design; MS Residul=.00065 DV: Retention time =.5 nd=4.5 (min) Expected Hlf-Norml Vlues (Hlf-Norml Plot).5.0 1.5 1.0 0.5 (1)Temperture 0C) ( 3by4 1by4 ()ph 1by3 1*3*4 by4 by3 1**3 1**4 *3*4 1by (3)Flow rte (ml/min) (4)Orgnic (cetonitrile) (%).95 0.0.05-0.5 0.0 0.5 1.0 1.5.0.5 - Interctions - Min effects nd other effects Effects (Absolute Vlues).99.85.75.65.45.5 Robusztusság 14
Fctor Men/Interc. (1)Temperture 0C) ( (3)Flow rte (ml/min) (4)Orgnic (cetonitrile) (%) 1 by 3 1 by 4 3 by 4 Regr. Coefficients; Vr.:Retention time =.5 nd=4.5 (m in); R-sqr=.99843; Adj:. **(4-0) design; MS Residul=.00565 DV: Retention time =.5 nd=4.5 (min) Regressn Std.Err. t(9) p -95.% +95.% Coeff. Cnf.Limt Cnf.Limt 68.894 3.0688 1.483 0.00000 61.639 76.148-0.503 0.06835-7.361 0.00004-0.658-0.348-5.969 3.617-14.66 0.00000-61.141-44.796-1.644 0.08894-18.48 0.00000-1.845-1.443 0.06 0.03750 1.667 0.1993-0.0 0.147 0.01 0.00187 6.333 0.00014 0.008 0.016 1.19 0.09375 13.000 0.00000 1.007 1.431 Yˆ 68.9 0.503T 5.97 flow 1.644org % 0.06T flow 0.01T org% 1.19 flow org% Hibterjedési törvény: nem új kísérlet, csk redukált modell Yˆ r j1 Yˆ x j x j Yˆ T 0.503 0.06 flow 0.01org% Robusztusság 15 GUM, Mesurementuncertinty egyenletes eloszlásr 3 0.577 háromszögű eloszlásr 6 0.408 normális eloszlásr 9 0.333 Robusztusság 16
Yˆ 68.9 0.503T 5.97 flow 1.644org % 0.06T flow 0.01T org% 1.19 flow org% H pl. hőmérsékletet 1 0 C pontossággl, z ármot 0.05mL/min pontossággl, z cetonitril-koncentrációt 0.5% pontossággl tudjuk trtni, T =0.5771=0.577 0 C, közepes beállításoknál: flow =0.5770.05=0.08mL/min T=40, flow=0.5, org%=35 org% =0.5770.5=0.8% Tr 0.503 0.060.5 0.0135 0.577 5.97 1.1935 0.08 1.644 0.0140 1.190.5 0.8 0.910 3 0.083 0.04 0.108 3 0.577 Tr 0.110 0.577 Robusztusság 17 0.57 Optimlizálás: Yˆ 68.9 0.503T 5.97 flow 1.644org % 0.06T flow 0.01T org% 1.19 flow org% Tr 0.503 0.06 flow 0.01org% 0.577 5.97 1.19 T 0.08 org% mx (de 41% ltt) 1.644 0.01T 1.19 flow 0.8 T mx (de 43 0 C ltt) T mx flow mx T: 45, flow: 0.6, org%: 40 4 3 0.014 Tr 1.7610.7810 0.011 0.014 Tr 0. 1 0.577 3.910 0.083 0.04 0.110 Tr 0. 57 Tr Robusztusság 18
+ Robusztussá tétel (Tguchi módszere) Zs. Romvári, J. Fekete, S. Kemény, G. Pokol, I. Gebefügi, A. Kettrup: Determintion of two metbolites of lbendzole, lbendzole-sulfoxide nd lbendzole-sulfone in cow`s milk using n HPLC method - A systemtic pproch to optimise extrction conditions. Chromtogrphi, 48 777-784 (1998) Zs. Romvári, S. Kemény, G. Pokol, J. Fekete: A new pproch for development of rugged smple preprtion of metbolites of lbendzole in cow milk. Mikrochim. Act 130 155-163 (1999) 144 kísérlet! Robusztusság 19 Tguchi trnzisztor-példáj: trnzisztor teljesítmény-tényezője függvényében z ármkör kimenő feszültsége: A kimenő feszültség előírt értéke 115V Nem z okot szüntettük meg, hnem következményét csökkentettük Robusztusság 0
kézbentrthtó fktorok A B C D E F G H I J K puffer mennyisége mintelőkészítés első lépésénél, ml puffer ph-j tejhez dott cetonitril mennyisége, ml z ultrhngozás ideje, perc centrifugálás ideje, perc centrifug fordultszám, 1/perc mint hűtése (igen/nem) másodszor hozzádott puffer mennyisége, ml z oszlop minősége (új, közepes, régi) z injektálás előtt hozzádott puffer mennyisége, ml mobil fázis ph-j b c d e f g zj-fktorok tej szármzási helye tejhez dott cetonitril beszállítój tejhez dott cetonitril mennyiségének hibáj, ml centrifug hőmérséklete mintelőkészítés késése (ór) z eluensként hsznált cetonitril beszállítój z cetonitril mennyiségének hibáj, ml 18*8=144 kísérlet Robusztusság 1 1.0 Plot of Mrginl Mens DV: RECOVA 7 -level fctors, 4 3-level fctors, 18 Runs 0.9 0.8 0.7 RECOVA 0.6 0.5 0.4 0.3 0...7 3. PUFF_PH 0.16 0.15 Plot of Mrginl Mens DV: STDEVA 7 -level fctors, 4 3-level fctors, 18 Runs 0.14 0.13 STDEVA 0.1 0.11 0.10 0.09 0.08..7 3. PUFF_PH Robusztusság