ANATOMIA, KENETVÉTEL, FESTÉS

Átírás

1 ANATOMIA, KENETVÉTEL, FESTÉS

2 Jacques Jenny

3 Jacques Jenny

4 Jacques Jenny

5 Jacques Jenny

6

7

8 Mag. hematoxylin Citoplazma kontraszt festése: Orange G,/ EA. Orange G Savanyu protein festék, mely egyéb festékekkel competitiv reakciót ad a cytoplazmában Kis méretű, könnyen festi a vvt-ket, vastag kenetrészeket Savanyításra került a festősorba, eosinnal van csak versenyben, de csupán ph 6,5 3,0 körül. ( Optimálisan ph1-nél fest, ph 3 körül már csak fele intenzitással. ) EA: Eosin, Fényzöld, ( PTA ) Eosin: Nagyobb mint az Orange G, kisebb mint a fényzöld (Light Green)... mindkettővel vetélkedik Magvacska vörös színe, amit a Hematoxylin fém komponense erősít! Light Green ( Fényzöld ) : amphoterikus festék, festési csúcsa ph 2 körül van. intermedier, metaplastikus ill. endocervikális sejteket festi PTA

9 A kompetitiv festés eredménye: Orange G és Eosin: elszarusodó sejtek színe: narancs sárga Fényzöld és Eosin: ál - versenyben a monomer forma: keveredés nincsen, a szín vagy vörös, vagy zöld ( sakktábla minta egy sejten belül szabálytalan elszarusodás mellett, pl. HPV infekcióban ) Valós kompetició az intermedier sejtekben van Szélek zölden festődnek ha vastag a kenet ( nagy molekula ), fixálatlan sejtek Eosin festődése kifejezett ( fényzöld helyett ). PTA szerepe: nem láthatóan kötődik az eosinnal versenyezve a cytoplazma fehérjékhez. Ha ez a hatás erős, a cytoplazma kék lesz ( nem látható PTA + hematoxylin! ).

10 Intermedier sejtek zöld színe A citoplazma kék színe Vastag centrum: vörös Vvt.-k vörös színe

11 A CITOPLAZMA KÉK SZÍNE

12

13 INTERMEDIER SEJTEK ZÖLD SZÍNE

14 TRANSPARENCIA (Orange-G nélkül)

15 NARANCS SZÍN: PARAKERATOZIS

16 NARANCS SZÍN: LAPHÁMCC. NYAKI ÁTTÉTE

17 MIKROSZKÓP

18 Mechanikai alkotók l. állvány 2. tárgyasztal 3. tubus (cső) Az állítószerkezet részei 4. makrométer csavar 5. mikrométer csavar Az optikai rész alkotói A megvilágító rendszer részei 6. fényforrás 7. diafragma (fényrekesz) 8. kondenzor 9. színszűrő Az optikai nagyító rendszer részei A. okulár (B. objektívrevolver) C. objektív (tárgylencse)

19 STATISZTIKAI ÉRTÉKELÉS ALAPELEMEI

20 TESZT VÉGEREDMÉNY a b - c d A = VALÓDI POZITIV ( VP ) B = ál - POZITIV ( áp ) C = ál - Negativ ( án ) D = VALÓDI Negativ ( VN )

21 Szenzitivitás: VP VP+aN (összes pozitív) Mennyit ismerek fel betegségnek azok közül, akik valóban betegek X 100 Specificitás: VN VN+aP (összes negatív) Mennyit ismerek fel egészségesnek azok közül, akik valóban egészségesek

22 Pozitiv prediktiv érték: VP VP+aP Mennyire helyesen itéltem meg előre betegségnek azt, ami valóban betegség X 100 Negatív prediktiv érték : VN VN+aN Mennyire helyesen itéltem meg előre betegség hiányának azt, ami valóban nem betegség

23 SEJT TIPUSOK

24

25 Érett felszines laphámsejt Parabazális sejt V v t Leukocita lymphocita plazmasejt histiocita

26 SEJT TIPUSOK

27 SEJT TIPUSOK

28 SEJT TIPUSOK

29 SEJT TIPUSOK

30 SEJT TIPUSOK

31 SEJT TIPUSOK

32 POST PARTUM KENET

33 BAKTÉRIUMOK egysejtűek karyoplazma (membrán nélkül) és citoplazma (membránnal); tokjuk is lehet táplálékuk és túlélésük környezetük függvénye PATOGÉN FAKULTATIV PATOGÉN mindig betegséget okoz meghatározott körülmények között okoz betegséget mennyisége sok; gazdaszervezet gyenge; környezet kedvezővé válik; védelmet nyújtó hámréteg sérül; stb..

34 DÖDERLEIN FLÓRA 1. intermedier sejtek membránját feloldják - citolizis 2. a citoplazmában található glykogénből tejsavat produkálnak ( hüvely ph 3,5-) 3. ugyanezen glikogén a fő táplálékuk 4. fenti folyamat biztosítja az optimális savi környezetet

35

36 endocervix ectocervix

37 GYAKORI: ciklus második fele terhesség alatt cukorbetegségben progeszteron dominanciájú fogamzásgátlás esetén menopauzában Döderlein flóra jelenlétében egyéb kórokozók nem viselkednek patogén módon; Döderlein hiányában fakultatív kórokozók patogen módon viselkedhetnek ( egyéb kórokozók által okozott fertőzésben Döderlein flóra nincsen jelen )

38 LEPTOTHRYX ( nem patogén ) Feltüntetése a leleten nem kötelező, de. JÓ, HA ÉSZREVESSZÜK, MIVEL Trichomonas gyakori Leptotrix mellett!

39

40 KÓROS BAKTÉRIUM FLÓRA nem Döderlein coccusok és pálcák Gardnerella ( hemophylus ) vaginalis

41 vörös sejtek a háttérben irritált sejtkép külső fertőzés következménye

42

43

44 Clue ( kulcs) sejt

45 ACTINOMYCES ÉS IUD ACTINOMYCES: baktérium, fonalszerű csoportokat alkot gyakori IUD mellett Gram pozitiv kismedencei szövődménye lehet

46

47

48

49

50 Ágyu-golyó

51 TRICHOMONAS VAGINALIS OSTOROS PARAZITA (FLAGELLATA ) Jellemzői: mérete?? formája!! festődése?? elhelyezkedése?? magja!!!!! indirekt jelek a kenetben Differeciál diagnosztika: enyhe dysplázia HPV Indirekt jelek a kenetben: cannonballs orangofilia autolizis a citoplazmában mag nélküli laphámsejtek kettős magvú alakok mag enyhén nagyobb hyperkromatikus mag mag körül udvar csupasz magvak Gardnerella vagy/és Leptorix kisérője

52

53

54

55 CANDIDA GOMBA Megjelenése a hüvelyflóra változásához kötött Ha csak fonalak: Geotrichum Ha csak ( és nagy ) spórák: Torulopsis Indirekt jelek a kenetben: mag nagyobb, de nem hyperkrom, kromatin szabályos hyperkeratosis, enyhe neutrophil leukocyták lysise ( elkülönitendő Trichomonastól! )

56

57

58

59 FÉREGPETE Gyermek vagy idős korban leggyakrabban Enterobius vermiculáris

60

61

62 EGYÉB bőrgomba szennyezés, ami kórokozót utánoz

63

64 MŰTERMÉKEK, TECHNIKAI HIBÁK, IDEGEN ANYAGOK alternária talkum fixálási műtermék ondó / spermium ( post coitális kenet ) haematoidin (?) radiális kristály (?) corn flakes

65

66

67

68

69

70

71

72

73 LSIL és HSIL

74 Regressziv retroplázia Normál euplázia Progressziv proplázia Daganatos neoplázia J.K. FROST/JENNY

75

76 nagy sejtes, laphámcc Kis sejtes, CIS

77 A HPV fertőzés klasszikus citológiai jelei Koilocyta Dyskaryosis

78 A HPV fertőzés nem klasszikus citológiai jelei két-vagy többmagvúság orsó alakú sejtek és magok sejtmag -degenerációk többmagvú óriássejtek a citoszkeletális filamentumok kondenzációja keratohialin-és keratohialin -szerű granulumok megjelenése

79 HPV cytomorphological markers Bi or multinucleation Naib & Masukawa, 1961; Meisels & Fortin, 1976; Schneider et al., 1987 Karyorrhexis Naib & Masukawa, 1961; Takahashi, 1982 Cleared cytoplasm Schneider et al., 1987 Spindle cells Schneider et al., 1987 Multinucleated giant cells De Borges et al., 1989; Luzzatto et al.,1990 Condylomatous parabasal cells Meisels et al., 1988 Koilocytosis * Koss & Durfee, 1956; Meisels & Fortin, 1976 Mild koilocytosis Schneider et al., 1987 Condensation of filaments Schneider et al., 1987 Dyskeratocytes* Meisels & Fortin, 1976; Purola & Savia, 1977 Mild dyskeratosis Schneider et al., 1987 Perinuclear halos Naib & Masukawa, 1961; Meisels & Fortin, 1976; Schneider et al.,1987 Nuclear hyperchromatism Meisels & Fortin, 1976; Schneider et al., 1987 Keratohyalin and keratohyalin- like granules Schneider et al., 1987 Smudge chromatin Meisels et al., 1988 Spindle nuclei Shroyer et al., 1990

80 CIN. I. ( hpv ) DIAGNOSZTIKUS KÖVETELMÉNY SEJTMAG ELTÉRÉS és CITOPLAZMA ELTÉRÉS ( pl.perifériás megvastagodás, elszarusodás zavarai, stb.) CIN 1. és HPV jelek nem mindig megkülönböztethetőek

81 CIN. I.

82

83 HSIL/CIN2 sejt mérete kisebb mint a CIN1, nagyobb mint CIN3 ( kb. parabasalis, esetleg kisebb intermedier sejt-méret) mag méret nagyobb, minimálisan különböző kromatin: rögös, aktív sejtekéhez hasonló citoplazma mutathat érési jeleket, ez nem felel meg a mag méretének és érettségének sejtek egyesével vagy csoportokban, háttér tiszta vagy csupán lobos magvacska nincsen vagy nem jellemző a jellegzetes HPV ( koilocitotikus ) atypia már ritkább mint CIN1 esetén

84 HSIL/CIN2

85 HSIL/CIN3-CIS Tipusai: elszarusodó van citoplazma differenciáció, fiber/ebihal sejtek ( Papanicolaou inv. rákban írta le!) kp. differenciált nagysejtes kis sejtes anaplasticus ( harmadik sejt tipus, GRAHAM )

86 HSIL/CIN3

87 HSIL/CIN3-CIS

88 W. Schauenstein, 1908, GN Papanicolaou, 1942 R,M, Richart, 1967 TBS, 1988, 1991, 2001 DYSPLASIA I. DYSPLASIA II. CIN. I. CIN. II. HPV + CIN I. LOW GRADE SIL DYSPLASIA III. HIGH GRADE SIL CC. IN SITU CIN III. CIN II. + CIN III. + CC. IN SITU

89

90 CIN léziók természetes viselkedése ( K. Syrjänen et al. EUROGYN-WHO 1997.) CIN I. CIN II. Regrediál 57 % 43 % Perzisztál 32 % 35 % CIN II.-III. 11 % 22 % Invaziv cc. 1 % 5 %

91 HPV fertőzés és rák kialakulásának időbeli lefolyása Rate HPV Precancer 15 év 30 év 45 év Cancer életkor Lifetime incidence of genital HPV infection >80% in U.S.

92 HPV FERTŐZÉSI CIKLUSA (LEEGYSZERÜSÍTVE) HPV FERTŐZÉS Sejtmagban zajlik LAPPANGÓ FERTŐZÉS Nem okoz betegséget! HPV SZŰRÉS AKTIV FERTŐZÉS Betegséget okoz INTEGRÁCIÓ Virus DNS gazdasejt genetikai állományának részévé válik Sejt elpusztul virus exit malignus sejtek virus capsid protein Virus DNS replikációja + Capsid protein képzése viral DNA Sejt érés Virus termelés kezdődik Sejtmag: chromosomalis DNS Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein

93 Humán Papillomavirus Testing for Triage of Women With Cytologic Evidence of Low-Grade Squamous Intraepithelial Lesions: Baseline Data From a Randomized Trial. The ASCUS/LSIL Study (ALTS) Group, Journal of the National Cancer Institute, Mar 1, 2000: 92 (5): LSIL diagnozis nyomán az esetek 82,8%- ban HG HPV jelen van.( 30 éves kor felett ez csökken) LSIL esetében a HPV meghatározás a követés módjának megválasztásában nem informatív

94 HPV FERTŐZÉSI CIKLUSA (LEEGYSZERÜSÍTVE) HPV FERTŐZÉS Sejtmagban zajlik HPV SZŰRÉS LAPPANGÓ FERTŐZÉS Nem okoz betegséget! CITOLOGIA INTEGRÁCIÓ Virus DNS gazdasejt AKTIV FERTŐZÉS genetikai állományának Betegséget okoz részévé válik virus exit malignus sejtek Sejt elpusztul virus capsid protein Virus DNS replikációja + Capsid protein képzése viral DNA Sejt érés Virus termelés kezdődik Sejtmag: chromosomalis DNS Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein

95 HPV FERTŐZÉSI CIKLUSA (LEEGYSZERÜSÍTVE) HPV FERTŐZÉS Sejtmagban zajlik HPV SZŰRÉS LAPPANGÓ FERTŐZÉS Nem okoz betegséget! CITOLOGIA INTEGRÁCIÓ Virus DNS gazdasejt AKTIV FERTŐZÉS genetikai állományának Betegséget okoz részévé válik virus exit malignus sejtek Sejt elpusztul virus capsid protein Virus DNS replikációja + Capsid protein képzése viral DNA Sejt érés Virus termelés kezdődik Sejtmag: chromosomalis DNS Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein

96 L 3 antitest

97 H. Griesser, H. Sander, R. Hilfrich LSIL L1+ HSIL L1+ LSIL L1- HSIL L1- perzisztál remissióba kerül CIN CIN rosszabb mint CIN

98 Schmidt, D., Bergeron, C., Denton, KJ., Ridder, R., European CINtec Cytology Study Group p16/ki-67 dual-stain cytology in the triage of ASCUS and LSIL papanicolaou cytology: results from the European equivocal or mildly abnormal Papanicolaou cytology study. Cancer Cytopathol.2011 Jun 25;119(3): A p16/ki-67 dual-stain cytologia senzitivitása CIN2-nél súlyosabb léziók felismerésére 92.2% (ASCUS) and 94.2%(LSIL), specificitása 80.6%(ASCUS) and 68.0%(LSIL) esetén. Az eredmények nem különböznek 30 éves kor alatt vagy felett.

99 HPV FERTŐZÉSI CIKLUSA (LEEGYSZERÜSÍTVE LEEGYSZERÜSÍTVE) HPV FERTŐZÉS Sejtmagban zajlik HPV SZŰRÉS LAPPANGÓ FERTŐZÉS Nem okoz betegséget! AKTIV FERTŐZÉS Betegséget okoz CITOLOGIA INTEGRÁCIÓ Virus DNS gazdasejt genetikai állományának részévé válik virus exit malignus sejtek Sejt elpusztul virus capsid protein Virus DNS replikációja + Capsid protein képzése viral DNA Sejt érés Virus termelés kezdődik HPV-E7...Rb: E2F aktiválja mind osztódást (Ki 67) mind p16ink (cyclin dependens kináz, Chr9p21) aktivitását Sejtmag: chromosomalis DNS Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein p16ink/ki 67 dual festés!

100 Immunomarkers in Gynecologic Cytology: The Search for the Ideal Biomolecular Papanicolaou Test Álvaro P. Pinto a Martin Degen b Luisa Lina Villa c Edmund S. Cibas Acta Cytologica 2012;56:

101

102 ( BETHESDA 2001 ) A cervico/vaginális cytologia a laphám rák és megelőző állapotainak szűrését szolgáló módszer. Nem eléggé pontos az endometriális elváltozások felismerésében, ezért endometrialis elváltozások és azok okainak felderítésére a használata nem javasolt

103 Mdkft/FFK 2003

104 III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelező) ( BETHESDA 2001 ) V. KIEGÉSZÍTŐ TESZT módszer rövid leírása és az eredmény közlése olyan módon, hogy az a klinikus számára könnyen érthető legyen

105 ? III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelező) Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy Epithelial Cell Abnormality: See Interpretation/Result (specify squamous or glandular as appropriate) Other: See Interpretation/Result (e.g. endometrial cells in a woman > 40 years of age)

106 III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelező) Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy Epithelial Cell Abnormality: See Interpretation/Result (specify squamous or glandular as appropriate) Other: See Interpretation/Result (e.g. endometrial cells in a woman > 40 years of age)

107 III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelező) Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy Epithelial Cell Abnormality: See Interpretation/Result (specify squamous or glandular as appropriate) Other: See Interpretation/Result (e.g. endometrial cells in a woman > 40 years of age)

108

109

110 Mdkft/FFK 2003

111 Mdkft/FFK 2003 FEJLÉC,LABOR ADATAI

112 Terminologia és minőségbiztosítás (Bethesda )

113 Mdkft/FFK 2003 TERMINOLOGIA ( Hawaii, 1997 ) U. Schenk, A. Herbert, D. Solomon, NS., A,,a. RJ Collins, SK Gupta, M. Jimenez-Ayala, J. Kobilkova, M. Nielsen, HZ. Suprun ÉRTÉKELHETŐSÉG SBLB: megfelelő, de értékelhetősége korlátozott azáltal, hogy:.. DE: dysplaticus sejt vagy daganatsejt jelenlétében a kenet nem lehet ÉRTÉKELHETETLEN ( BETHESDA 2001 ) Conventional Paps have less random sampling than liquid- Paps, so a slightly higher estimate (8,000-12,000) is suggested CONTROL: REFERENCE IMAGES ( BETHESDA 2001 ) Set a minimum limit of 5,000 wellvisualized/preserved squamous cells for LBP Preliminary studies show that reference images methods are quickly learned and have better interobserver reproducibility than the 10% cellularity criterion. FFK/MD-2001 Legalább 10 jól megítélhető strukturájú endocervikális vagy laphám metaplaziát mutató sejt kell ahhoz, hogy a transformációs zona jelenléte bizonyított legyen. Degenerált sejtek nyákban nem értékelendők. ( BETHESDA 2001 ) SQUAMOUS CELL ( BETHESDA 2001 ) ASCUS/AGUS nem lehet több mint: 3-5 % 1.Atypical squamous cells - of undetermined significance (ASC-US) - cannot exclude HSIL (ASC-H) 2. Low grade squamous intraepithelial lesion (LSIL) - HPV/mild dysplasia/cin 1 3. High grade squamous intraepithelial lesion (HSIL) - moderate and severe dysplasia, CIN 2 and CIN 3/ CIS - with features suspicious for invasion (if invasion is suspected) 4. Squamous cell carcinoma It is anticipated that ASC-H will comprise 5%-10% or less of total ASC. ASCUS/AGUS : LSIL/HSIL/CC = 3-4 : 1 Atypusos mirigyhámsejtek megjelölés aránya egy szokványos cytologiai laboratoriumban 1 % alatt kell, hogy legyen ( előfordulása az irodalomban 0,3-0,5 % ) Mdkft/FFK 2003

114 ?????

115