HER2-receptort célzó peptidek szerkezet-hatás összefüggésének vizsgálata emlőtumor sejtvonalakon

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "HER2-receptort célzó peptidek szerkezet-hatás összefüggésének vizsgálata emlőtumor sejtvonalakon"

Amanda Kisné
4 évvel ezelőtt
Látták:

1 HER2-recepor célzó pepidek szerkeze-haás összefüggésének vizsgálaa emlőumor sejvonalakon Biri-Kovács Beáa 1,2 *, Szabó Ildikó 2, Adorján Afrodié 2, Szeder Bálin 3, day László 3, Bősze Szilvia 2, Mező Gábor 2 1 ELTE TTK, Kémiai Inéze 2 MTA-ELTE Pepidkémiai Kuaócsopor 3 MTA TTK, Enzimológiai Inéze Balaonszemes, május 28.

2 A HER2 (ErbB2) szerepe Az emlőumorok 15-30%-ában úlexpresszálódik Alacsonyabb úlélési esély és a measzázis nagyobb kockázaa Számos mellrák elleni gyógyszer célponja Az EGF recepor család Természees ligand nélküli recepor Clasadone e al., Fron in Endocrin, 2011

3 A HER2 álal akivál jelávieli úvonalak Homo- és heerodimerek képződése Ras/Raf/MEK/ERK MAP kináz úvonal PI3K/Ak úvonal Pollock & Grandis, Clin Cancer Res, 2015 Proliferáció Migráció Measzázis

4 HER2 receporhoz köődő pepidek KCCYSL GYYNPT Fág pepid könyvárból kiválaszo pepid Variánsok lérehozása One-bead-one compound pepid könyvárból és molekula dinamikai modellezéssel kiválaszo pepidekből származao részle Kombinál pepidek Karasseva e al., J Pro Chem, 2002 Larimer e al., In J Pep Res Ther, 2015 Geng e al., Theranosics, 2015 Geng e al., Theranosics, 2016

5 A vizsgál pepidek KCCYSL-variánsok GYYNPT és kombinál pepidek Szekvencia Kód CF-KCCYSL-NH 2 P(CC) CF-KCGCYSL-NH 2 P(CGC) CF-KCGGCYSL-NH 2 P(CGGC) CF-KC (Acm) C (Acm) YSL-NH 2 P(C Acm C Acm ) CF-KCSYSL-NH 2 P(CS) CF-KSCYSL-NH 2 P(SC) CF-KSSYSL-NH 2 P(SS) CF-KAAYSL-NH 2 P(AA) Szekvencia CF-GYYNPT-NH 2 CF-KAAYSLGYYNPT-NH 2 CF-KSCYSLGYYNPT-NH 2 CF-YSLGYYNPT-NH 2 CF-TAKLYPGYANYS-NH 2 CF-GYYNPTKAAYSL-NH 2 Kód P(YY) cp(aa)_p(yy) cp(sc)_p(yy) P(shor)_P(YY) scr_p(aa_yy) cp(yy)_(aa) Szilárdfázisú pepidszinézis, CF-jelölés Acm: aceamido-meil védőcsopor

6 Célkiűzések Emlőumor sejkulúrák HER2 expressziós szinjének meghaározása CF-konjugál pepidek in viro sejfelvéeli vizsgálaa HER2 specifikus pepidek kiválaszása Expressziós szin sejfelvéel méréke Lokalizáció meghaározása konfokális mikroszkóppal Specificiás vizsgálaa jelölelen pepidek segíségével

7 A HER2 recepor mennyiségének meghaározása emlőumor sejkulúrákon MDA-MB-453 MDA-MB-435 Brain MCF-7 HCC1143 Erősen expresszáló Közepesen/gyengén expresszáló

8 Az első pepid-sze vizsgálaa KCCYSL-variánsok CF-KSCYSL CF-KAAYSL További vizsgálaok, kombinál pepidek Sejfelvéeli vizsgála áramlási cioméerrel, MDA-MB-453 sejek,100 µm, 1 óra

A második pepid és a kombinál pepidek vizsgálaa cp(aa)_(yy)

cp(aa)_p(yy) CF-KAAYSL-NH 2 P(AA) CF-KSCYSLGYYNPT-NH 2

P(shor)_P(YY) CF-GYYNPT-NH 2 P(YY) CF-TAKLYPGYANYS-NH 2

9 A második pepid és a kombinál pepidek vizsgálaa cp(aa)_(yy) scrp(aa_yy) Szekvencia Kód CF-KAAYSLGYYNPT-NH 2 cp(aa)_p(yy) CF-KAAYSL-NH 2 P(AA) CF-KSCYSLGYYNPT-NH 2 cp(sc)_p(yy) CF-KSCYSL-NH 2 P(SC) CF-YSLGYYNPT-NH 2 P(shor)_P(YY) CF-GYYNPT-NH 2 P(YY) CF-TAKLYPGYANYS-NH 2 scr_p(aa_yy) Sejfelvéeli vizsgála áramlási cioméerrel, MDA-MB-453 sejek, 12,5 µm, 3 óra

10 A pepidek lokalizációjának vizsgálaa ripszinezési idő növelése Tripszinezési idő 5 perc 15 perc

11 A pepidek lokalizációjának vizsgálaa mikroszkópos felvéelek CF HER2 Sejmag Kezelés: 25 µm, 90 perc Zeiss LSM 710 konfokális mikroszkóp HER2 jelölése ani-her2 aniesel (TRITC-jelöl másodlagos anies) vonalas mérék: 10 µm

12 Sejfelvéeli vizsgálaok az alacsonyabban expresszáló sejeken MDA-MB-453 MDA-MB- 435 Brain MCF-7 HCC1143

perc + 3 óra inkubáció Konfokális mikroszkóp: 30

13 Specificiás vizsgála gálás jelölelen pepidekkel CF HER2 Sejmag MDA-MB-453 sejek Áramlási cioméer: 30 perc + 3 óra inkubáció Konfokális mikroszkóp: 30 perc (65 µm) + 90 perc (12,5 µm), vonalas mérék: 10 µm

14 A fordío kombinál pepid vizsgálaa CF-KAAYSLGYYNPT-NH 2 CF-GYYNPTKAAYSL-NH 2 cp(aa)_p(yy) cp(yy)_p(aa) MDA-MB-453 sejek Áramlási cioméer: 3 óra inkubáció, 12,5 µm Konfokális mikroszkóp: 90 perc inkubáció, 25 µm, vonalas mérék: 10 µm. CF HER2 Sejmag

15 Másodlagos szerkeze predikció helikaliás leheséges szerepe? HER2 Affibody (Z HER2:342 ) Eigenbro e al., PNAS, 2010 PEP-FOLD 3.5 (RCSB) Lamiable e al., Nucleic Acids Res, 2016

16 Összefoglalás A ciomeriai és konfokális mikroszkópos mérések alapján a kombinál pepid (CF-KAAYSLGYYNPT-NH 2 ) muaja a legmagasabb fluoreszcencia inenziás érékeke A CF-pepidek a sejek felszínén lokalizálódnak A fluoreszcencia inenziás egyezés mua a HER2 expressziós szinekkel A jelölelen pepidek csökkenik a sejfelszínen deekálhaó fluoreszcens szignál Leheséges felhasználás a jövőben: diagnoszikai (és erápiás) célok

17 Köszönenyilváníás Pályázai források: NKFIH K NVKP_ Európai Unió Horizon 2020: Marie Sklodowska-Curie A kuaás az ELTE Felsőokaási Inézményi Kiválósági Program (1783-3/2018/FEKUTSRAT) kereében valósul meg az Emberi Erőforrások Miniszériuma ámogaásával VEKOP , mely az Európai Unió, Magyarország és az Európai Regionális Fejleszési Alap kofinanszírozásával jö lére Köszönöm a figyelme!

19 KCCYSL ANALÓGOK SZINTÉZISE Rink Amid MBHA gyana (0,71 mmol/g) 3 ekv. -Aaa-OH, DIC, HOB Y S L Tr 3 ekv. -Aaa-OH, 5 ekv. Oxyma Pure, DIC Tr K A A Y S L K C G C Y S L Boc Acm Acm K C C Y S Boc L Boc K C Boc Tr G K G C C Y Tr S Y S S L L 1. hasíás 2. 5 ekv. 5,6-karboxifluoreszcein (CF), Oxyma Pure, DIC Boc Tr K S C Y S L Boc Tr K S S Y S L CF jelze származékok Boc

20 GYYNPT ANALÓGOK SZINTÉZISE Rink Amid MBHA gyana (0,71 mmol/g) N P T Tr 3 ekv. -Aaa-OH, DIC, HOB K A A Y S L G W W N P T Boc Tr K A A Y S L G Y Y N P T Boc Tr 1. hasíás 2. 5 ekv. 5,6-karboxifluoreszcein (CF), Oxyma Pure, DIC CF jelze származékok

21 a Knauer készülék; Phenomenex Aeris PEPTIDE 3,6 µm XB-C18; 250 4,6 mm gradiens elúció: 0%-90%B /50 perc A eluens: 0,1% TFA/deszillál víz, B eluens: 0,1% TFA/aceoniril+víz (80:20) áramlási sebesség: 1 ml/perc; deekálási hullámhossz: λ=220 nm b Bruker Dalonics Esquire ioncsapdás ESI-MS 50% aceoniril-víz elegy, 4 µl/perc; poziív üzemmód, m/z ANALÓGOK JELLEMZÉSE Szekvencia R (perc) a M számol / M mér (Da) b CF-KCCYSL-NH 2 29,9 1072,6 / 1072,8 CF-KAAYSL-NH 2 28,8 1008,7 / 1008,4 CF-KCGCYSL-NH 2 29,4 1129,7 / 1129,8 CF-KCGGCYSL-NH 2 31,7 1186,0 / 1186,0 CF-KC(Acm)C(Acm)YSL-NH 2 28,8 1214,5 / 1214,0 CF-KCSYSL-NH 2 29,7 1056,6 / 1056,4 CF-KSCYSL-NH 2 29,5 1056,6 / 1056,4 CF-KSSYSL-NH 2 27,6 1040,7 / 1040,5 CF-GYYNPT-NH 2 30,0 1070,6 / 1070,4 CF-KAAYSLGYYNPT-NH 2 29,7 1704,8 / 1704,4 CF-KAAYSLGWWNPT-NH 2 33,1 1750,9 / 1750,6

Hasonló dokumentumok

Hatóanyag-peptid konjugátumok szintézise, jellemzése és biológiai aktivitásának vizsgálata glióma kultúrákon

Hatóanyag-peptid konjugátumok szintézise, jellemzése és biológiai aktivitásának vizsgálata glióma kultúrákon Baranyai Zsuzsa 1, Martin Krátký 2, Jarmila Vinšová 2, Matkó János 3, Bősze Szilvia 1 1 MTA-ELTE