SZILÁRD FÁZISÚ EXTRAKCIÓ MINDIG UGYANÚGY

Átírás

1 SZILÁRD FÁZISÚ EXTRAKCIÓ MINDIG UGYANÚGY Szakács Tibor, Szepesi Ildikó ABL&E-JASCO Magyarország Kft Budapest, Fehérvári út 130.

2 SZILÁRD FÁZISÚ EXTRAKCIÓ SOLID PHASE EXTRACTION (SPE) - cél: a mérendő komponens dúsítása és/vagy tisztítása - lépései: - minta előkezelés - oszlop kondicionálás - mintafelvitel - mosás - elúció

3 SZILÁRD FÁZISÚ EXTRAKCIÓ - FOLYADÉK ÁRAMLÁS MEGVALÓSÍTÁSA vákuum rásegítés pozitív nyomás

4 BIOTAGE RAPIDTRACE+ - pozitív nyomás létrehozása fecskendőpumpával - 1, 3 és 6 ml-es standard méretű SPE oszlopok - modulonként 10 minta kémcső - egy rendszer max. 10 modul

5 BIOTAGE RAPIDTRACE+ - 8 reagens és oldószer - 4 szennylé elvezetés - frakciógyűjtés kémcsövekbe vagy vialokba - egy mintából több frakció

6 BIOTAGE RAPIDTRACE+ - minden lépés külön programozható - pontosan beállítható áramlási sebességek - rugalmas módszer futtatás: - minden mintához külön hozzárendelhető módszer - akár minden mintára más módszer vagy egy módszer minden mintára

7 - automata munkaállomás: - szilárd fázisú extrakció (SPE) - folyadék-folyadék extrakció (supported liquid extraction (SLE)) - fehérje és foszfolipid eltávolítás (PLD) - fehérje kicsapás (PPT) - 96 helyes mikroplatekhez - 1, 3 és 6 ml-es SPE oszlopokhoz

8 - kétszintes elrendezés - felső részen: pipettahegy tartó a mintának és az oldószereknek minta tartó extrakciós edény tartó 5 oldószertartály használt pipettahegy gyűjtő - alsó részen: négyhelyes karusszel a frakcióknak és a szennylének belső hely egy emelő, mely a pozícióban lévő edényt az extrakciós edényhez pozicionálja

9 - folyadékmozgatás pipettázófejjel 1 ml-es pipettázóhegyekkel - 1, 3 és 6 ml-es SPE oszlopokhoz 4 csatornás pipettázófej - 96 helyes mikroplatekhez 8 csatornás pipettázófej - folyadékáramoltatás pozitív nyomás inert gázzal a gáz nyomása lépésenként állítható, így szabályozható az áramlási sebesség

10 - vezérlés érintőképernyővel - előre definiált módszerek - felhasználó által szabadon írt módszerek - minden lépésre minden paraméter külön-külön beállítható

11 BIOTAGE RAPIDTRACE+ Melamin kimutatása tejből * - melamin - nitrogéntartalmú, heterociklusos, aromás szerves vegyület. - felhasználása: műtrágya, műanyag, ragasztó - vesekövet okoz - mintaelőkészítés: 1 ml tej higítása ammónium acetát pufferrel (1:1, v/v, 50 mm, ph 5) - Biotage EVOLUTE CX 100 mg/3 ml 50 μm part number: B; polimer-alapú mixed-mode szorbens * Biotage Application Note AN749 Extraction of Melamine from Milk (Infant Formula) using EVOLUTE CX Columns and RapidTrace+ Workstation

12 BIOTAGE RAPIDTRACE+ Melamin kimutatása tejből

13 BIOTAGE RAPIDTRACE+ Melamin kimutatása tejből - oldószer eltávolítás (Biotage TurboVap) - oldás acetonitril-víz 500 µl 90:10 elegyben - vizsgálat HPLC-MS rendszerrel - 3 párhuzamos vizsgálat, egy vizsgálat során 6 injektálás - RSD <10% - visszanyerés >88%

14 Pontosság és precizitás* - a precizitás és pontosság 50 µl, 100 µl, 500 µ és 1000 µl térfogatokra * Biotage Product Note PPS358, Product Note PPS360 Biotage ExtraheraTM Precision and accuracy Performance

15 vs. vákuum kád 25-OH D-vitamin extrakciója plazmából ISOLUTE SLE+ módszerrel * mintaelőkészítés: - plazma dúsítás 30 ng/ml koncentrációjú 25-OH D2- és D3-vitaminnal - belső standardként 25-OH D3-d6-vitamin 30 ng/ml koncentráció µl pipettázva a 96-os plate-be plate előkészítve a manuális és az Extrahera általi feldolgozáshoz µl víz-propanol 1:1 elegy hozzáadva * Biotage Technical Note PPS366 Comparison of Biotage Extrahera vs. Manual Sample Processing Using a Vacuum Manifold Extraction of 25-OH Vitamin D from Plasma Using ISOLUTE SLE+

16 vs. vákuum kád 25-OH D-vitamin extrakciója plazmából ISOLUTE SLE+ módszerrel - pipettahegy nedvesítés felszív/kinyom ciklussal - minta keverés felszív/kinyom ciklussal µl minta az ISOLUTE SLE+ plate-re pipettázva - minta átáramlás Extrahera készüléken pozitív nyomással, manuálisan vákuummal - 5 perc várakozás - elúció 2x750 µl heptánnal - az extraktum 2 ml-es 96-os platekbe gyűjtve - oldószer-elpárologtatás, majd oldás 30:70 (v/v) víz/metanol elegyben, keverés

17 vs. vákuum kád 25-OH D-vitamin extrakciója plazmából ISOLUTE SLE+ módszerrel - analízis HPLC/MS rendszerrel - oszlop: Restek Pinnacle DB BiPhenyl 50 mm x 2.1 mm 1.9 µm - eluens: 80:20 (v/v) 2 mm ammónium formiát 0,1% hangyasav / metanol 0,1%hangyasav - áramlás 0,4 ml/perc - injektálási térfogat: 5 µl

18 vs. vákuum kád 25-OH D-vitamin extrakciója plazmából ISOLUTE SLE+ módszerrel - az LC-MS készülékbe a minták a platekről felváltva lettek injektálva - az előkészítés során a mintákhoz ugyanabból az üvegből vagy sorozatból származó oldószerek, reagensek voltak használva - kiszámítva az átlagos csúcs alatti terület mindhárom komponensre - kiszámítva az átlagos csúcs alatti terület arány a belső standardhoz viszonyítva

19 vs. vákuum kád 25-OH D-vitamin extrakciója plazmából ISOLUTE SLE+ módszerrel

20 vs. vákuum kád 25-OH D-vitamin extrakciója plazmából ISOLUTE SLE+ módszerrel

21 vs. vákuum kád 25-OH D-vitamin extrakciója plazmából ISOLUTE SLE+ módszerrel - Extrahera esetében a csúcs alatti területek minden esetben nagyobbak - jobb visszanyerést jelent 5-7 %-al

22 ÖSSZEFOGLALÁS - szilárd fázisú extrakció manuális munka részének kiváltására Biotage RapidTrace+ és Extrahera - RapidTrace+ - SPE oszlopok - Extrahera SPE oszlopok és platek - pozitív nyomás biztosítja az állandó áramlási sebességet - egyszerű kezelhetőség, flexibilis programozhatóság - módszerfejlesztéstől a rutin munkáig

23 KÖSZÖNÖM A FIGYELMET!