Takarmányokba kevert állatgyógyászati szerek laboratóriumi vizsgálata.

Átírás

1 Debreczeni L., Keresztúri J., Marthné Schill J. Nemzeti Élelmiszerlánc biztonsági Hivatal Élelmiszer- és Takarmánybiztonsági Igazgatóság Takarmányvizsgáló Nemzeti Referencia Laboratórium Budapest Takarmányokba kevert állatgyógyászati szerek laboratóriumi vizsgálata.

2 Gyógyszeres takarmányok használata Állat állományok kezelésére: Fertőzések (pl. baktériumok, protozoák, paraziták) - megelőzése - gyógykezelése Hozamfokozóként -antibiotikumok szubterápiás alkalmazása- tiltott (178/2002/EK) [2006-tól kitiltott antibiotikumok] Gyógyszeres takarmányok laboratóriumi kontrolljának jelentősége: Nagy tömegű gyógyszer felhasználás Nem megfelelő felhasználás esetén fokozódó potenciális veszélyforrások: - toxicitás érzékeny állatfajok esetén - megjelenik állati termékekben (hús, tojás, tej stb.) - rezisztancia révén humán és állategészségügyi kockázatot növeli - trágyából átjutva talajba, felszíni vizekbe, növényekre növeli a környezeti terhelést

3 Gyógyszeres takarmányok előállítása Csak engedélyezett hatóanyagokat tartalmazó, engedélyezett gyógyszeres premixekből, készíthető gyógyszeres takarmány Csak engedélyezett keverő üzemben állíthatóak elő Engedélyezés: takarmány adalékanyagként (2003/1831/EK): kokcidiosztatikumok és hisztomonosztatikumok. Jelenleg 11 db hatóanyag engedélyezett Szabályozás takarmányokban: - megengedett eltérés - jelölési értékhez képest (767/2009/EK rendelet) - MRL értékek, nemkívánatos anyagokként (2002/32/EK irányelv; 44/2003. (IV. 26.) FVM rendelet) állatgyógyászati készítményként (128/2009. (X. 6.) FVM rendelet): Szabályozás takarmányokban: - nincs megengedett eltérés deklarált értéktől - nincs számszerű MRL eltérő szabályozás EU tagállamokban (HU: 65/2012.(VII.4.) VM rendelet vizsgálati módszer LOD - vitás kérdés)

4 Laboratóriumi analitikai feladatok gyógyszeres takarmányokkal kapcsolatosan Üzem engedélyezéshez kapcsolódó vizsgálatok Terápiás célú gyógyszeres takarmányok hatóanyag szintjének vizsgálata Keresztszennyezés (átmosódás) vizsgálata Tiltott hatóanyagok vizsgálata

5 Takarmányok rendszere

6 Néhány specialitás gyógyszerek takarmányokban való analízisével kapcsolatosan Néhány takarmány analitikai specialitás gyógyszerek vizsgálatával kapcsolatosan: a mátrix nagy variabilitása: - azonos fajra, azonos korcsoportra szolgáló táp, de gyártónként eltérő összetétel(alapanyagok, adalékanyagok, premixek) védett, formulázott (mikrokapszulázott) gyógyszer: - védőanyagba ágyazva - oldhatóság extrakció során? - spikolás std porral vagy oldattal? amoxicillin szabad amoxicillin védett granulálás - darálás nagyon fontos (zárványok) - intenzív extrakció

7 Üzem engedélyezéshez kapcsolódó vizsgálatok Legkisebb és legnagyobb koncentrációban bekevert gyógyszer hatóanyagok vizsgálata Homogenizáló képesség vizsgálata Gyártási (keverési) tételenként a késztermékekből egyenletes elosztásban db mintát kell venni laboratóriumi vizsgálatok céljára. - átlag és variációs koefficiens (CV) számítása (takarmánycsoportok maximális CV%- a szabályozott) Átszennyeződési vizsgálatok Az átöblítő mosató anyagból meghatározott helyeken maximum 5 db mintát kell venni. A legyártott új tételből 5- max. 10 db mintát kell venni. Mintánként meg kell mérni a hatóanyag maradék szintjét (MRL vagy LOD)

8 Terápiás célú gyógyszeres takamányok hatóanyag szintjének vizsgálata Cél: a garantált terápiás szint ellenőrzése - magasabb: - mérgező lehet - alacsonyabb: - várható hatás elmaradása - rezisztenciát okozhat - vegyületcsere Széles koncentráció tartomány vizsgálata - pl. premixeknél OTC mg/kg diclazuril 20 mg/kg - takarmány keverékben OTC 3000 mg/kg diclazuril 1 mg/kg Vizsgálati módszerek: - általában egyedi HPLC módszerek UV/VIS, DAD, FLD, MS, MS/MS detektálással [hatósági (152/2009/EK), szabvány, szakirodalmi, házi módszerek]

9 Keresztszennyezés (átmosódás) vizsgálata nem céltakarmányban Honnan származhat keresztszennyezés összetett takarmányok esetén: - Premixek, előkeverékek előállítása során - Alapanyagokból (pl. DDGS, halliszt stb.) - takarmány keverékek előállítása során - szállítás, tárolás, etetőkbe történő kiadagolás stb. során Lehetséges hatások: - nem célzott állatfajoknál toxicitás - mikrobiális rezisztancia - takarmányokból hatóanyag átjuthat állati eredetű élelmiszerbe (pl. befejező táp - nincs állategészségügyi várakozási idő, tojótáp, tejelő takarmány) Ahol nincs MRL- ellentmondás (milyen érzékenységű módszerrel, milyen célérték?- szabályozási probléma EU szabályozás készül Vizsgálati módszerek: - általában egyedi HPLC módszerek, de van HPLC-MS/MS csoportos és multimódszer is. - hatósági módszer nincs, szabványok most készülnek, szakirodalmi és házi módszerek.

10 Egy példa: HPLC-MS/MS multimódszer kokcidiosztatikumok keresztszennyezésének meghatározására Cél : az engedélyezett 11 féle kokcidiosztatikum egymás melletti meghatározása keresztszennyezés szintjén Az engedélyezett kokcidiosztatikumok hatóanyagai és legkisebb megengedett MRL szintje (44/2003. (IV. 26.) FVM rendelet): hatóanyag min. MRL mg/kg Dekokvinát 0,40 Diklazuril 0,01 Halofuginon-hidrobromid 0,03 Lazalocid-A-nátrium 1,25 Maduramicin-ammóniumalfa 0,05 Monenzin-nátrium 1,25 Narazin 0,70 Nikarbazin 1,25 Robenidin-hidroklorid 0,70 Szalinomicin-nátrium 0,70 Szemduramicin-nátrium 0,25

11 Egy példa: HPLC-MS/MS multimódszer kokcidiosztatikumok keresztszennyezésének meghatározására - minta előkészítés extrakció 5g minta bemérése 50 ml-es centrifugacsőbe +10 ml 10%- os Na 2 CO 3 átnedvesítés +15 ml Acn Rázatás 30 perc 3x 5 ml bepárlás 50 o C, N 2 extraktum összegyűjtése 50 ml-es mérőlombikba centrifugálás 20 perc, 2000 ford/perc, 5 o C Maradék feloldása 5 ml Acn/H2O=80/20 szűrés 1. oldat: szűrlet 2. oldat: szűrlet 50x hígítva - injektálás

12 Egy példa: HPLC-MS/MS multimódszer kokcidiosztatikumok keresztszennyezésének meghatározására mérési paraméterek HPLC Agilent 1200 oszlop: GROM-Sil 120 ODS-5 ST, 250x4,6 mm, 5 µm oszlop 35 o C hőmérséklet: áramlás: 0,7 ml/perc injektálás: eluens: 25 ml A: víz+0,1%(v/v) hangyasav B: metanol+0,1%(v/v) hangyasav gradiens elúció: 0 perc 50% A 50% B lineáris 5 perc 50% A 50% B 15 perc 5% A 95% B 40 perc 5% A 95% B 41 perc 50% A 50% B 48 perc 50% A 50% B MS-MS Agilent 6410 gáz hőmérséklet 300 C gáz áramlás 7 l/perc porlasztó kapilláris feszültség 35 psi 2500 V

13 Egy példa: HPLC-MS/MS multimódszer kokcidiosztatikumok keresztszennyezésének meghatározására kromatogram

14 Egy példa: HPLC-MS/MS multimódszer kokcidiosztatikumok keresztszennyezésének meghatározására - kalibrációs egyenesek 2 nagyságrendet átölelő 6 pontos, nullán átmenő kalibrációs egyenesek illeszkedési koefficiense minden komponensre nagyobb nél. (R 2 >0,995)

15 Jártassági vizsgálat 2014 Tárgya: a 11 kokcidiosztatikum azonosítása, mennyiségi meghatározása Szervező: EURL-FEED ADDITIVE-CONTROL 4 db takarmány minta - 1 db. minta: diclazuril terápiás szint környékén - 3 db minta: lehetséges 11 komponens a keresztszennyezés (MRL) körüli szinteken.

16 Jártassági vizsgálat 2014 Eredmények összefoglalása:

17 Tiltott, nem engedélyezett hatóanyagok vizsgálata Hatósági ellenőrzési feladat Honnan származhatnak tiltott antibiotikumok: - harmadik országból származó alapanyagok, adalékanyagok (pl. kloramfenikol vitaminban) - harmadik országba szállító hazai keverőből keresztszennyezéssel (karbadox, avilamicin) - tiltott, szándékos hazai felhasználásból Néhány egyedi hatósági módszer, szakirodalmi, házi HPLC-MS/MS módszerek Multi- szűrőmódszerek (HPLC-MS technika) módszerek kifejlesztése a cél - tiltott és engedélyezett komponensek együttes vizsgálata minél nagyobb számban a keresztszennyezés szintjén (a terápiás szint 0,1-1%-a) - jelenlét esetén kvantitálás egyedi módszerrel - jelenleg a szűk műszerkapacitás a gátja a fejlesztéseknek.

18 Debreczeni L., Keresztúri J., Marthné Schill J. Nemzeti Élelmiszerlánc biztonsági Hivatal Élelmiszer- és Takarmánybiztonsági Igazgatóság Takarmányvizsgáló Nemzeti Referencia Laboratórium Budapest Köszönjük figyelmüket