Gliceril-triheptanoát (GTH) jelzőanyag meghatározása feldolgozott állati melléktermékekben GC/MS módszerrel

Átírás

1 Gliceril-triheptanoát (GTH) jelzőanyag meghatározása feldolgozott állati melléktermékekben GC/MS módszerrel Lovász Csaba, Debreczeni Lajos NÉBIH ÉTbI Takarmányvizsgáló NRL Hungalimentária április

2 Tartalom Bevezetés - Jogszabályi háttér - Állati eredetű melléktermékek - felhasználásuk - GTH mint jelzőanyag GTH meghatározása - Minta-előkészítés - Extrakció bepárlási lépések - SPE minta tisztítási lépés - Műszeres analízis - Eredmények

3 Bevezetés Jogszabályi háttér: Az Európai Parlament 1774/2002/EK rendelete szabályozza az állati melléktermékek biztonságos használatát, felhasználásának feltételeit az állati takarmányozásban. A 1774/2002/EK rendelet növekvő kockázati megítélésük alapján három kategóriába sorolja ezeket az állati melléktermékeket: (amelyeket a begyűjtésük, a feldolgozásuk, a szállításuk, illetve felhasználásuk során már elkülönítve kell kezelni) 1. kategóriába tartozó anyag; 2. kategóriába tartozó anyag; 3. kategóriába tartozó anyag.

4 Bevezetés Jogszabályi háttér: 1. kategóriába tartozó anyagok: 999/2001/EK Rendeletnek megfelelően a TSE-fertőzésre gyanús állatok; TSE mentesítés során leölt állatok; betiltott anyagokkal kezelt állatok, kísérleti állatok; pl. cirkuszi állatok; 2. kategóriába tartozó anyagok: trágya, illetve az emésztő traktus tartalma; bizonyos vágóhídi melléktermékek, hulladékok; járványos állatbetegségek felszámolása során leölt állatok; 3. kategóriába tartozó anyagok: vágott állatok azon részei, amelyek emberi fogyasztásra alkalmatlanok; nyersbőr, irha, szarv, pata, sörte, toll; nem kérődző állatokból nyert vér, stb.

5 Bevezetés Jogszabályi háttér: A Rendelet előírja, hogy az 1. és a 2. kategóriába tartozó melléktermékeket az előállításuk során kémiailag is meg kell jelölni, hogy biztosítani lehessen egyrészt ezen termékek nyomon követhetőségét, másrészt hogy megakadályozzuk ezen állati melléktermékek takarmány- és élelmiszerláncba jutását. A DG-SANCO kérésére az Európai Bizottság kutató intézete (IRMM) tett javaslatot a marker anyagként alkalmazható vegyületekre. A kiválasztásnál fontos feltétel volt, hogy a marker ellenálljon az 1. és 2. kategóriába tartozó állati melléktermékek feldolgozásánál alkalmazott sterilizálási körülményeknek is. A melléktermékek előállítása, jelzése során alkalmazott jelzőanyag koncentráció olyan magas, hogy lehetővé teszi az összes pozitív minta azonosítását. A marker koncentráció: 250 mg GTH / 1 kg zsír.

6 Bevezetés GTH mint jelzőanyag: A marker vegyület a Glicerol-TriHeptanoát (GTH) egy triglicerid, három heptadekánsav glicerinnel alkotott észtere. A GTH kémiai tulajdonságaiban megegyezik az állati és a növényi eredetű zsiradékok fő alkotóival. A természetes zsírokban igen kis mennyiségben fordul elő (< 0,05 relatív %), mivel páratlan szénatomszámú zsírsavakat tartalmaz. Előállítása olcsó, nem toxikus. Jól oldódik zsiradékokban egyszerű bekeverés, homogén jelzett termék. Már kis koncentrációban is szelektíven meghatározható.

7 Forrásmunkák: Implementation study to evaluate glyceroltriheptanoate (GTH) as a marker for animal by-products in rendering systems Ana Boix, Federica Serano, Stefano Bellorini, Christoph von Holst Determination of glyceroltriheptanoate (GTH) in processed animal byproducts by gas chromatography C. Von Holst, A. Boix, S. Bellorini, S. Androni, F. Serano European Commission JRC Institute for Reference Material and Measurement

8 Minta-előkészítés lépései: - Darálás, homogenizálás, részminta képzése. A minta bemérése az extrakcióhoz.

9 Extrakció, extraktum bepárlása: Gyorsított oldószeres extrakció: (Accelerated Solvent Extraction) Oldószer: ciklo-hexán : aceton (1:1) Nyomás: 1500 psi Hőmérséklet: 100 C Statikus dinamikus oldószer lefúvatás Automatizált 12 férőhelyes berendezés (ASE 300 Dionex)

10 MultiVapor rendszer Nitrogén áramú bepárló

11 Minta tisztítás (SPE): Szilárd fázisú extrakció: (Solid Phase Extraction) SPE Oszlop: NH2, 500 mg 3 ml Mosás: 7,5 ml hexán Minta: 1g zsiradék 10ml hexán (200 ml) Elúció: 3 ml hexán - dietiléter 85:15 (v/v) Bepárlás végtérfogat 2 ml izo-oktán Injektálási standard: 5-a-Kolesztán

12 Műszeres analízis (GC-MS-SIM) Gázkromatográfiás körülmények: Oszlop: Rxi-5MS (30m x 0,25mm 0,25mm, Restek) Hőmérséklet program: 200 C (2 min) / 10 C/min / 300 C (10min) Injektálás: solvent vent mód (100 C), splitles idő: 1.8min Tömegspektrometriás körülmények: Ionforrás: EI (70eV), 230 C MS módszer: SIM (1+2 ion / komponens)

13 Műszeres analízis: Varian CP-3800 GC Varian 320-MS

14 Műszeres analízis: GTH Talajjavító minta kromatogramja 5-a-Kolesztán-IS GTH Standard oldat kromatogramja 5-a-Kolesztán-IS

15 Műszeres analízis: S/N : 99/1 0,096 mg/ml - ~10 mg/kg zsír R: 0,999 LOD: 1mg/kg zsír Ct: 250mg/kg zsír

16 Mérési eredmények: A GTH-tartalom meghatározásokat 2008-óta végzi a laboratórium. Eddig közel 100 db mintát vizsgáltunk. - ~ 50 % szerves talajjavító szer - ~ 50 % húsliszt, hús és csontliszt, zsíradék

17 Köszönöm figyelmüket!