1. feladat Ismertesse a gyakorlaton lévő szakasszisztens hallgatóknak a PCR termékek elválasztása céljából végzett analitikai agaróz gélelektroforézis során használt puffert! Az ismertetés során az alábbi szempontokra térjen ki: - a puffer összetétele - készítése - tárolása - hibalehetőségek 2. feladat A laboratóriumba új munkatárs érkezik, aki nem dolgozott még DNS szintű munkahelyen. Magyarázza el munkatársának azokat a különleges követelményeket, amelyek a nukleinsavlaboratórium specialitásai! - ruházat és védőeszköz használat - kontamináció megelőzése - a molekuláris genetikai laboratórium tagolt felépítése 3. feladat Főiskolai hallgatók vesznek részt laboratóriumi gyakorlaton. Ismertesse meg őket a DNS izolálás hagyományos (kisózásos módszer, fenol-kloroform extrakciós módszer) metódusaival! Magyarázza el, mi a kiindulási mintaanyag, milyen oldatokkal és milyen sorrendben kezeli! - a leggyakoribb minta a rutin molekuláris genetikai gyakorlatban - az izolálás kivitelezése - a hagyományos módszerek előnyei és hátrányai 1
4. feladat Laboratóriumi gyakorlatra főiskolai hallgatók érkeztek. Magyarázza el a hallgatóknak a DNS izolálás modern (szilika membrános centrifugációs mikrooszlop, mágneses gyöngyök) metódusait! - a kiindulási mintaanyag, oldatok, kezelés sorrendje - a leggyakoribb minta a rutin molekuláris genetikai gyakorlatban - az izolálás kivitelezése - a modern módszerek előnyei és hátrányai 5. feladat Új munkatárs érkezett a laboratóriumba. Feladata lesz a DNS izolálás és tárolás. Ismertesse meg munkatársával a DNS koncentráció mérés spektrofotometriás módszerét! Az ismertetés során az alábbi szempontokra térjen ki: - a mérés elve és kivitelezése - az alkalmazott hullámhosszokra, ismertesse a DNS és a fehérjék elnyelési maximumát - az abszorbanciákból képzett hányadosra, és annak értelmezésére - a DNS koncentrációjának kifejezésére szolgáló mértékegység 6. feladat Főiskolai hallgatók vesznek részt laboratóriumi gyakorlaton. Ismertesse meg őket az RNS izolálás különböző (szilika membrános centrifugációs mikrooszlop, TRIZOL) metódusaival! Az ismertetés során az alábbi szempontokra térjen ki: - a kiindulási mintaanyag - oldatok fajtái és használatuk sorrendje - a leggyakoribb minta fajta a rutin molekuláris genetikai gyakorlatban - az izolálás kivitelezése - speciálisan az RNS izolálásra vonatkozó elvárások 2
7. feladat Tartson előadást szakasszisztens hallgatóknak az oligonukleotidok alapvető tulajdonságairól! - az oligonukleotidok felhasználási területei - az oligonukleotidok szerepe egy PCR reakcióban - a PCR primerek fő tulajdonságai - az olvadáspont meghatározása 8. feladat Tartson előadást belső továbbképzésen az oligonukleotidok alapvető tulajdonságairól! - az oligonukleotidok felhasználási területei - a szintetizált oligonukleotidok tisztítási módjai - a PCR primerek tervezésének szempontjai - a PCR primereknél alkalmazott jelölések 9. feladat Tartson előadást szakasszisztens hallgatóknak az oligonukleotidok alapvető tulajdonságairól! - az oligonukleotidok mutáció detektálásban történő felhasználási területei - az oligonukleotid próbák jelölési módjai - a próbák tervezésénél követendő szempontok - alapvető allél diszkriminációs technikáknál használható jelölt oligonukleotidok sajátosságai 10. feladat A laboratóriumba új kolléganő érkezik. Tájékoztassa munkatársát, hogyan kell összeállítani egy PCR reakciót! A tájékoztató során az alábbi szempontokra térjen ki: - az alap PCR komponensei, szerepük - a PCR reakció lépéseire és ismertesse, melyiket lehet optimalizálni - speciális munkavédelmi előírások - kontrollok használata 3
11. feladat A laboratóriumba új kolléganő érkezik. Magyarázza el kolléganőjének egy speciális PCR reakció összeállítását! - PCR reakciók típusai (pl. multiplex, allélspecifikus) - speciális PCR reakciók, amelyek során utólagos munkafolyamatok nélkül nyílik lehetőség pontmutáció kimutatására 12. feladat A laboratóriumba főiskolai hallgatói csoport érkezik. Tájékoztassa a hallgatókat hogyan kell összeállítani egy restrikciós emésztéses reakciót! A tájékoztató során az alábbi szempontokra térjen ki: - a restrikciós enzimek nevezéktana, eredete, eredeti funkciójuk - az endonukleáz fogalom jelentése - a restrikciós enzim allélek közötti diszkriminációs képessége - a szükséges inkubációs idő és hőmérséklet meghatározásának alapjai 13. feladat Új munkatárs kerül felvételre a laboratóriumba. Tájékoztassa munkatársát az Önök által használt PCR detektálási módszerekről! A tájékoztató során az alábbi szempontokra térjen ki: - azon alapelvekre, amelyek szerint PCR terméket kimutatni lehet (jelenlét-hiány, nagyság) - a PCR termékek elválasztásának és detektálásnak különböző módszerei (elválasztás technika, fluoreszcencia) - a valós idejű PCR reakció esetében használt detektálási módszerek 4
14. feladat Magyarázza el a laboratóriumot meglátogató osztályos kollégáknak az agaróz gél főzés folyamatát! - munkafolyamatok felsorolása és sorrendje - futtató festékek fajtái - detektáló festék típusai - pufferek fajtái 15. feladat Magyarázza el a gyakorlaton lévő hallgatóknak az akrilamid gélt öntésének technikáját! - szükséges reagensek az akrilamid gél öntéshez - az agaróz- és akrilamid elfo közti fő különbségek - az akrilamid gél speciális felhasználási területei 16. feladat Ön új műszer beszerzését követő továbbképzésen vett részt. Hazajőve magyarázza el kollégáinak a kapilláris elektroforézis előnyeit a hagyományos elektroforetikus technikákkal szemben! - az elektroforézis sebessége - a felbontóképesség - a detektálási lehetőségek - az adatok kezelésében levő különbségek 5
17. feladat Laboratóriumi gyakorlaton főiskolai hallgatók vannak. Magyarázza el a hallgatóknak az önöknél használt módszerek értékelési szempontjait! - a különböző módszerek különböző eredmény típusai - fénykép restrikciós termékek elektroforézise - DNS szekvenálás elektroferogramja - valós idejű PCR reakció kinetikájának kinyomtatott eredménye 18. feladat A laboratóriumba klinikai dolgozó kollégák látogatásra érkeztek. Tartson kiselőadást a látogatóknak a laboratórium által vizsgált autoszomális recesszív öröklődésmenetet mutató család három generációs családfájáról! - az öröklődésmenet sajátosságai - a magzati minta - az ikergyermekeket - mutassa meg a már elhalálozott családtagokat 19. feladat A laboratóriumba klinikai dolgozó kollégák jöttek látogatásra. Tájékoztassa a klinikus kollégákat az Önök által vizsgált család három generációs családfájáról autoszomális domináns öröklődésmenetet mutató betegség esetén! A tájékoztató során az alábbi szempontokra térjen ki: - az öröklődésmenet sajátosságai - a magzati minta - az ikergyermekek - a már elhalálozott családtagok 6
20. feladat Magyarázza el, az Önök által vizsgált család három generációs családfáját X-hez kötött recesszív öröklődésmenetet mutató betegség esetén a laboratóriumot meglátogató klinikai dolgozó kollégáknak! - az öröklődésmenet sajátosságai - a magzati minta - az ikergyermekek - elhalálozott családtagok 21. feladat Tartson előadást humángenetikai szakasszisztens hallgatóknak a lánc terminációs DNS szekvenálás alapelveiről! - a dntp és ddntp közti különbségek - a radioaktív és fluoreszcens szekvenálás alapelve - a reakció komponensei 22. feladat Magyarázza el a gyakorlaton lévő szakasszisztens hallgatóknak kromoszómasávozási technikákat! - a G-sávozás lényege - a G-sávozás molekuláris alapjai - a módszer elterjedésének gyakorisága - az idiogram fogalma - a rutin citogenetikai diagnosztikában ideális felbontóképességre (sávszám). 7
23. feladat Tartson előadást humángenetikai szakasszisztens hallgatóknak a nemi kromoszómák szerepéről a nemek kialakulásában! - X kromoszóma meghatározás szükségességét indokló tényezők - az X kromomatin kimutatására használt korábbi módszerek - a ma alkalmazott módszerek előnyei, hátrányai 24. feladat Tartson előadást humángenetikai szakasszisztens hallgatóknak a nemi kromoszómák szerepéről a nemek kialakulásában! - az Y kromoszóma meghatározásának jelentősége fejlődési rendellenességekben - a mozaikosság fogalmának meghatározása - a hagyományos kromoszómaanalízis mellett használható más módszerek az Y kromoszóma meghatározására 25. feladat A laboratóriumban szakasszisztens hallgatók vannak gyakorlaton. A gyakorlat megkezdése előtt tartson kiselőadást a hallgatóknak az elektronikus kariotipizálás lényegéről, elvéről! - idiogram, kariogram, kariotípus, klonalitás fogalma - szerkezeti és számbeli rendellenességek leírására alkalmazott rövidítések - a kromoszómaanalízis szempontjai a kariotípus megadáskor 8
26. feladat Tartson előadást szakmai rendezvényen a rövid és hosszú idejű tenyésztési eljárásokról! - a sejttenyésztési technikák lényege, alkalmazási területe - a kromoszómapreparálás lépései - a kromoszómaanalízis szempontjai 27. feladat Ismertesse a gyakorlatra érkező szakasszisztens hallgatókkal a sejttenyésztések körülményeit! Az ismertetés során az alábbi szempontokra térjen ki: - a minta védelme - a vizsgálatot végző személy védelme - a biztonságos munkavégzés szabályai - egyszer használatos eszközök, lamináris boksz, védőfelszerelések használata - a citogenetikai laboratóriumi munkavégzés fázisai 28. feladat Tartson előadást szakmai rendezvényen a comparative genomic hybridization lényegéről, a vizsgálat kivitelezésének lépéseiről és indikációjáról! - a vizsgálati minta típusai - a módszer előnyei és hátrányai - a módszer elve, alkalmazási területei 9
29. feladat Ismertesse új kollégájával a fluorescens in situ hibridizáció lényegét, a vizsgálat kivitelezésének lépéseit, indikációját! Az ismertetés során az alábbi szempontokra térjen ki: - az alkalmazott próbatípusok felsorolása, indikációs területei, az értékelés szempontjai - a vizsgálati minták típusai - a fals pozitivitás és fals negativitás fogalma - értékelés (hány interfázisú sejtet ill. metafázist értékelünk a rutin vizsgálat során) 10