Aflatoxin szakmai nap

Aflatoxin szakmai nap A WESSLING Cégcsoport bemutatatása; Az aflatoxinok kémiája,toxikológiai jellemzése, mérési eredményeink Dr. Szigeti TamásJános értékesítési és üzletfejlesztési igazgató (WESSLING Hungary Kft.)

Aflatoxin vizsgálati igények 2006 2012 (db)

Aflatoxin vizsgálati igények 2012 (havi db)

Aflatoxin M1 vizsgálati igények db 2006 2012

Aflatoxinra vizsgált mintáink megoszlása (%)

Penészgombák Az elmúlt évezred utolsó évtizedeiben fordult a figyelem a mikroszkópikus gombák toxinjai felé. A takarmánynövényeket és élelmiszereket fertőző gombák közül több faj olyan biokémiai szisztémával rendelkezik, amely a gombára ható környezeti hatásokra adott válaszként toxikus vegyületet állít elő (Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Alternaria, Claviceps). Az élelmiszerbiztonsági RASFF riasztások között a legtöbb mikotoxinszennyezettség miatt történt:

RASFF riasztások 2006-ban (MÉBIH adat)

RASFF riasztás tejek: aflatoxin M1 tartalma Date Dátum 2012.10. 25 2012.10. 22 2012.01. 23 2012.01. 17 2007.09. 17 Distribution Kódszám 2012.1 499 2012.1 469 2012.0 116 2012.0 093 2007.0 645 Pro-duct type Termék típus food food food food food Reference Notification type Bejelent.tí pus information for followup information for attention information for followup information for attention alert Controll type Ellenőrz.tí pus company's own check company's own check company's own check company's own check company s own check Notified by Bejelentő Slovenia Italy Italy Italy Italy rigin Származá s Hungary Hungary Hungary Slovenia Hungary Slovakia Subject Category Week Tárgy Ért.helye Kategória Hét Aflatoxins (Tot. = 0,074 μg/kg - ppb) in raw chilled milk from Hungary Aflatoxins (Tot. = 0,095 μg/kg - ppb) in raw milk from Hungary Aflatoxins (M1: 0,072 μg/l) in raw milk from Hungary Aflatoxins (M1: 0,183 μg/kg - ppb) in raw milk from Slovenia Aflatoxins (M1 = 0,03; 0,45; 0,43 μg/kg ppb) in fresh raw milk from Hungary, via the Slovak Republic Slovenia Italy Italy Italy Italy Slovakia milk and milk products milk and milk products milk and milk products milk and milk products milk and milk products 43 43 4 3 38

1960: Anglia, pulykák X betegsége

Gerald Wogan és George Hermann Büchi 1960/1963 GB/USA Gerald Wogan: a vegyületet azonosította George H. Büchi: az A. flavus gombát ismerte fel >100 000 pulyka és kacsa pusztulása mogyorótól

Vizsgálatok (1960 1963) G. Wogan a brazíliai földimogyoróból UV-fényben fluoreszkáló vegyületet talált. Az erősen mérgező földimogyoróból G. H Büchi fonalas gombát is izolált, amely táptalajon termelte az ismeretlen anyagot: Aspergilus flavus (magyarul: kannapenész )

Aspergillus konidiumtartók 10 7 spóra/cm 2 Aspergillus sp.

Néhány nemzetség és faj Aspergillus (flavus, ochraceus, niger, viridicatum) toxinok: Aflatoxinok (B1, B2, G1, G2, M1, M2) chratoxin-a, ochratoxin-b, ochratoxin-c Patulin Penicillium (chrysogenum, brevicompactum) toxinok chratoxin-a Patulin Fusarium (graminearum, culmorum) toxinok Zearalenon (F-2 toxin) Nivalenol Deoxinivalenol (DN) T2-toxin Fusarium moniliforme toxinja Fumonizinek Alternaria alternata toxinok Alternariol Altertoxin 1

Mikotoxinok meghatározása A mikotoxinok a gombák, elsősorban a penészgombák extracellulárisan kiválasztódó másodlagos anyagcseretermékei. E vegyületek a melegvérűeket főként enterálisan károsítják. Némelyek közülük antibiotikus hatásúak. A kalaposgombák toxinjai nem tartoznak az ún. mikotoxinok közé!

Az eddig leírt nagyszámú toxin és gombafaj miatt nehéz a csoportosítás. Az egy nemzetségbe tartozó gombák különböző toxinokat termelnek, és fordítva, taxonómiailag távol álló fajok képesek azonos toxinokat előállítani. Rendszerezési lehetőségek: 1. Kémiai szerkezet alapján 2. Magasabbrendűekre gyakorolt farmakológiai hatás alapján 3. Bioszintézisük alapján (nem teljeskörű)

Furanofuránok - aflatoxinok Aflatoxin-csoport: szubsztituált kumarin-származékok - aflatoxin B1 - aflatoxin G1 - aflatoxin M1 - aflatoxin B2 - aflatoxin G2 - aflatoxin M2 - aflatoxin B3 Aspergillus flavus, Asp. parasiticus B1, G1, M1 : 7,8-dihidrofurano(2,3-b)furán B2, G2, M2: 2,3,7,8-tetrahidrofurano(2,3-b)furán

Kumarin régóta ismert íz- és aromaanyag Fahéj (ceyloni, cassiai) Szagos müge (szeszipari alkalmazás) Brazil tölgy Somkóró

Aflatoxin B1 Alattomos, kifejezetten toxikus vegyület CH 3

Aflatoxin B1 (szubsztituált kumarinok) Kumarin-váz CH 3

Aflatoxin B2 (szubsztituált kumarinok) Hiányzik egy kettőskötés CH 3

Aflatoxin G1 (szubsztituált kumarinok) CH 3

Aflatoxin G2 (szubsztituált kumarinok) CH 3

Aflatoxin M1 (szubsztituált kumarinok) Mitokondriális citokróm P450: AFB1 AFM1 (15-30 perc) AFM1 AFB1

Aflatoxin M1 (szubsztituált kumarinok) H CH 3

Az Aspergillus fajok toxintermelési jellemzői - Széles hőmérsékleti intervallumban szaporodnak - Toxintermelő törzsek előfordulási valószínűsége: 6-75 % (változó adatok) - Nem minden esetben szintetizálnak toxinokat - Fontos: hőmérséklet és vízaktivitás toxintermelési optimum: 20-30 o C között - 20 o C körül: aflatoxin G1-30 o C körül: aflatoxin B1 a hazai klíma kevéssé kedvező - Maximális toxinkoncentráció: 8 14 nap múlva várható - Toxintermelést segítő szubsztrátok: szacharóz, glükóz, (NH 4 ) 2 S 4 Zn,

Az aflatoxinok biológiai hatása (AFB1, AFM1) - Érzékenyek: kacsa, pulyka, egér, patkány, tengerimalac (hím>>nőstény) - Toleránsak: juhok - Kezdeti tünetek: étvágytalanság, tömegvesztés, elhullás - Kórbonctan: májkárosodások (elhalás, daganatok; egy kóreset: napi 100 g sózott mogyoró veszélyes lehet ) - Az FDA szerint a ADI értéke: 5 x 10-6 mg/ttkg/nap - LD 50 -érték (ip): 6 mg/ttkg hím, 18 mg/ttkg nőstény patkányoknál - Krónikus mérgeződés: karcinómát okoz

T.D.Phillips 1, E. Afriyie-Gyawu 1, J.Williams 2, H.Huebner 1, N.A. Ankrah 3, D.fori-Adjei 3, P.Jolly 4, N.Johnson 1, J.Taylor 1, A. Marroquin- Cardona 1, l.xu 5, l.tang 5, & J.S.Wang 5: : Reducing human exposure to aflatoxin through the use of clay: A review. Food Additives and Contaminants, February 2008; 25(2): 134 145 1 Department of VIBS-MS 4458, Texas A&M University, Veterinary Integrative Biosciences, College of Veterinary Medicine, College Station, TX 77843, USA, 2 Peanut Collaborative Research Support Program, University of Georgia,Griffin, GA, USA, 3 School of Public Health, Noguchi Memorial Institute for Medical Research, University of Ghana,Legon, Accra, Ghana, 4 Epidemiology, University of Alabama at Birmingham, Birmingham, AL, USA, and 5 Instituteof Environmental/Human Health, Texas Tech University, Box 41163, TTU/TIEHH, Lubbock, TX 79409-1163, USA A cikk az alábbi oldalon található: http://www.scribd.com/doc/61661206/36450378 (Food Additives and Contaminants, February 2008; 25(2): 133)

Az aflatoxinok elsődleges célszerve a máj Az aflatoxin B1 molekulái (középszürke színnel) a DNS-láncba interkalálódnak. Interkalálódott aflatoxin B1 [d(atc AFB GAT). d(atcgat) és d(at AFB G-CAT) 2 ]

Az aflatoxinok elsődleges célszerve a máj

Aspergilloma a tüdőben (a gomba belégzése) Az Aspergillus spóráinak belégzése következtében gombatelepek alakulhatnak ki a tüdő hörgőiben.

A BIZTTSÁG 165/2010/EU RENDELETE

Aflatoxin M1 határérték tejben: 0,05 µg/kg Aflatoxin M1 határérték tejben: 0,05 µg/kg

Sajtok, vajak, túrókészítmények Nincs külön határérték

Tejföl, kefír, joghurt

Aflatoxin M1 határérték: <0,025 µg/l

Mérési eredményeink 2006 óta 20 500 mérés

Amit mérni kell (egy a milliárdhoz = ppb) A nem kívánt komponensek vizsgálatát általában igen kis mennyiségek kimutatásával végezzük. Általában ppm-szinteket, de sokszor ppb (part pro billion) menyiségeket kell meghatároznunk. Ezért a mérési eredmények értelmezésénél (szakértői munka!) a nagy szórásból következő mérési bizonytalanságot figyelembe kell venni. Az ábrán a ppm arány látszik 1 ppm = 1 mg/kg, 1 mg/liter 1 ppb = 1 µg/kg, 1 µg/liter A mérési bizonytalanság minden fizikai alapon működő mérés természetes velejárója!

Méréstechnika, analitikai lépések 1. Mintaaprítás, extrakció 2. Immunkromatográfiás tisztítás 3. Származékképzés 4. Műszeres mérés: HPLC/FLD 5. Értékelés 6. Vizsgálati jegyzőkönyv Mindezek mellett: Kalibráció Visszanyerés vizsgálata Alsó méréshatár ellenőrzése

Aflatoxin M1 kalibrációs görbéje A fla to x in _ M 1, F L D 1 A A re a = 2 2.3 0 7 8 9 7 *A m t + 0 A re a R e l. R e s % (1 ): -1 8.9 9 8 200 5 150 4 100 50 3 1 2 0 C o rre la tio n : 0.9 9 9 6 2 0 2 4 6 8 A m o u n t[n g / m l]

Aflatoxin standardek kromatogramja B, G G1 B1 G2 B2 Aflatoxin standard, G1: 12,5 ng/ml, B1: 12,5 ng/ml, G2: 3,75 ng/ml, B2: 3,75 ng/ml

Minta extraktumának kromatogramja (B, G)

Aflatoxin M1 kromatogramok (tej vizsgálata) 6.984 - Aflatoxin_M1 7.010 7.013 15.055 FLD1 A, Ex=365, Em=450 (Z:\DATA\121108_TX 2012-11-08 13-16-13\022-2501.D) LU 4.8 4.6 4.4 4.2 4 3.8 3.6 3.4 3.2 3 0 2 4 6 8 10 12 14 FLD1 A, Ex=365, Em=450 (Z:\DATA\121108_TX 2012-11-08 13-16-13\036-3901.D) LU 4.8 4.6 4.4 4.2 4 3.8 3.6 3.4 3.2 3 0 2 4 6 8 10 12 14 FLD1 A, Ex=365, Em=450 (Z:\DATA\121108_TX 2012-11-08 13-16-13\037-4001.D) LU 4.8 4.6 4.4 4.2 4 0,02 µg/kg <0,02 µg/kg 0,02 µg/kg 3.8 3.6 3.4 3.2 3 0 2 4 6 8 10 12 14 Area: 18.9755 Area: 5.65423 Area: 9.95952 Aflatoxin M1 min min min

Mezőgazdasági termékek Σ aflatoxin µg/kg 1 5 9 13 17 21 25 29 33 37 41 45 49 53 57 61 65 69 73 77 81 85 89 93 97 101 105 109 113 117 121 125 129 133 137 141 10000 1000 100 20 µg/kg 10 1 0,1

Tejek aflatoxin M1 tartalma µg/l (2012) 0,05 µg/l = 50 ng/l

Köszönöm megtisztelő figyelmüket A biztonságos élelmiszerellátás érdekében folyamatosan kell mérni!

Aspergillus spórák

Aspergillus spórák 10 7 spóra/cm 2 Aspergillus sp. http://fungalgenomes.org/blog/wp-content/uploads/2009/01/aspergillusposse- 1024x768.jpg