Acidum folicum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.8-1 07/2010:0067 ACIDUM FOLICUM Folsav C 19 H 19 N 7 O 6 M r 441,4 [59-30-3] DEFINÍCIÓ (2S)-2-[[4-[[(2-Amino-4-oxo-1,4-dihidropteridin-6-il)metil]amino]benzoil]amino]pentándisav. Tartalom: 96,0 102,0% (vízmentes anyagra). SAJÁTSÁGOK Küllem: sárgás vagy narancsszínű, kristályos por. Oldékonyság: vízben és a legtöbb szerves oldószerben gyakorlatilag nem oldódik. Híg savak és alkálilúgok oldják. AZONOSÍTÁS Első azonosítás: A, B. Második azonosítás: A, C. A. Fajlagos optikai forgatóképesség (2.2.7): +18 és +22 között (vízmentes anyagra). Az anyag 0,25 g-ját 0,1 M nátrium-hidroxid oldattal 25,0 ml-re oldjuk. B. A Tartalmi meghatározás vizsgálatban nyert kromatogramokat értékeljük. Értékelés: a vizsgálati oldat kromatogramján a főcsúcs retenciós ideje egyezzék meg az a) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs retenciós idejével. C. Vékonyréteg-kromatográfia (2.2.27). Vizsgálati oldat. A vizsgálandó anyag 50 mg-ját 2 térfogatrész R tömény ammónia oldat és 9 térfogatrész R metanol elegyével 100 ml-re oldjuk.
Acidum folicum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.8-2 Összehasonlító oldat. 50 mg CRS folsavat 2 térfogatrész R tömény ammónia oldat és 9 térfogatrész R metanol elegyével 100 ml-re oldunk. Lemez: R VRK szilikagél G lemez. Kifejlesztőszer: R tömény ammónia oldat R 1-propanol R etanol (96%) (20+20+60 V/V). Felvitel: 2 μl. Kifejlesztés: a lemezmagasság háromnegyedéig. Szárítás: levegőn. Előhívás: 365 nm-es ultraibolya fényben. Értékelés: a vizsgálati oldat kromatogramjának főfoltja helyét, fluoreszcenciáját és méretét tekintve egyezzék meg az összehasonlító oldat kromatogramjának főfoltjával. VIZSGÁLATOK Rokon vegyületek. Folyadékkromatográfia (2.2.29). Vizsgálati oldat. A vizsgálandó anyag 0,100 g-ját R nátrium-karbonát 28,6 g/l töménységű oldatának 5 ml-ében oldjuk, majd az oldatot a mozgófázissal 100,0 ml-re hígítjuk. Az utóbbi oldat 2,0 ml-ét a mozgófázissal 10,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (a). 0,100 g CRS folsavat R nátrium-karbonát 28,6 g/l töménységű oldatának 5 ml-ében oldunk, majd az oldatot a mozgófázissal 100,0 ml-re hígítjuk. Az utóbbi oldat 2,0 ml-ét a mozgófázissal 10,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (b). 20 mg R folsav-d-szennyezőt R nátrium-karbonát 28,6 g/l töménységű oldatának 5 ml-ében oldunk, majd az oldatot a mozgófázissal 100,0 ml-re hígítjuk és teljes oldódásig keverjük. Az oldat 1,0 ml-ét 1,0 ml a) összehasonlító oldattal elegyítjük, majd a mozgófázissal 100,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (c). A vizsgálati oldat 2,0 ml-ét a mozgófázissal 20,0 ml-re hígítjuk. Az oldat 1,0 ml-ét a mozgófázissal 20,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (d). 10,0 mg CRS folsav-a-szennyezőt R nátrium-karbonát 28,6 g/l töménységű oldatának 1 ml-ében oldunk, majd az oldatot a mozgófázissal 100,0 ml-re hígítjuk. Az utóbbi oldat 1,0 ml-ét a mozgófázissal 100,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (e). 12,0 mg CRS folsav-d-szennyezőt R nátrium-karbonát 28,6 g/l töménységű oldatának 1 ml-ében oldunk, majd az oldatot a mozgófázissal 100,0 ml-re hígítjuk és teljes oldódásig keverjük. Az utóbbi oldat 1,0 ml-ét a mozgófázissal 100,0 ml-re hígítjuk. Oszlop: méretei: l = 0,25 m, Ø = 4,0 mm; állófázis: 350 m 2 /g fajlagos felületű és 10 nm pórusméretű, 12,5% szenet tartalmazó R kromatográfiás célra szánt oktilszililezett szilikagél (5 μm-es gömbök). Mozgófázis: 12 térfogatrész R metanolhoz literenként, 11,16 g R kálium-dihidrogén-foszfátot és 5,50 g R dikálium-hidrogén-foszfátot tartalmazó oldat 88 térfogatrészét elegyítjük.
Acidum folicum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.8-3 Áramlási sebesség: 0,6 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 280 nm-en. Injektálás: 5 μl; a vizsgálati oldatot, valamint a b), c), d) és e) összehasonlító oldatot injektáljuk. Kromatografálási idő: a folsav retenciós idejének háromszorosa. Relatív retenciók a folsavra (retenciós ideje kb. 8,5 perc) vonatkoztatva: A-szennyező kb.0,5; B- szennyező kb. 0,6; C-szennyező kb. 0,9; E-szennyező kb. 1,27; D-szennyező kb. 1,33; F- szennyező kb. 2,2. Rendszeralkalmasság: b) összehasonlító oldat: csúcsfelbontás: legalább 4,0, a folsav és a D-szennyező között. Követelmények: D-szennyező: csúcsterülete nem lehet nagyobb, mint az e) összehasonlító oldat kromatogramján látható főcsúcs területe (0,6%). A-szennyező: csúcsterülete nem lehet nagyobb, mint a d) összehasonlító oldat kromatogramján látható főcsúcs területe (0,5%). egyéb szennyezők egyenként: csúcsterületük nem lehet nagyobb, mint a c) összehasonlító oldat kromatogramján látható főcsúcs területe (0,5%). egyéb szennyezők összesen: a csúcsok területének összege nem lehet nagyobb, mint a c) összehasonlító oldat kromatogramján látható főcsúcs területének kétszerese (1,0%). elhanyagolási határ: a c) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs területének tizedrésze (0,05%). Víztartalom (2.5.12): 5,0 8,5%. 0,150 g anyagot vizsgálunk. Szulfáthamu (2.4.14): legfeljebb 0,2%. 1,0 g anyagot vizsgálunk. TARTALMI MEGHATÁROZÁS Folyadékkromatográfiás vizsgálatot végzünk (2.2.29), a Rokon vegyületek vizsgálatban előírtak szerint, az alábbi módosításokkal. Injektálás: a vizsgálati oldat és az a) összehasonlító oldat. ELTARTÁS Fénytől védve. SZENNYEZŐK Egyedi határértékhez kötött (specifikált) szennyezők: A, B, C, D, E, F.
Acidum folicum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.8-4 A. (2S)-2-[(4-aminobenzoil)amino]pentándisav (N-(4-aminobenzoil)-L-glutaminsav), B. 2,5,6-triaminopirimidin-4(1H)-on, C. (2S)-2-[[4-[[(2-amino-4-oxo-1,4-dihidropteridin-7- il)metil]amino]benzoil]amino]pentándisav (izofólsav), D. 4-[[(2-amino-4-oxo-1,4-dihidropteridin-6-il)metil]amino]benzoesav (pteroinsav),
Acidum folicum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.8-5 E. (2S)-2-[[4-[bisz[(2-amino-4-oxo-1,4-dihidropteridin-6- il)metil]amino]benzoil]amino]pentándisav (6-pterinilfolsav), F. 2-amino-7-(klórmetil)pteridin-4(1H)-on.