!HU00000684T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 84 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 749867 (22) A bejelentés napja: 03. 0. 06. (96) Az európai bejelentés bejelentési száma: EP 0749867 (97) Az európai bejelentés közzétételi adatai: EP 1774 A1 03. 11.. (97) Az európai szabadalom megadásának meghirdetési adatai: EP 1774 B1 09. 08. 12. (1) Int. Cl.: C07C 33/02 (06.01) A61K 31/04 (06.01) A61K 31/11 (06.01) A61P 29/00 (06.01) C07C 47/21 (06.01) A61P 39/06 (06.01) A61P 3/00 (06.01) C07C 69/24 (06.01) A61K 31/22 (06.01) (87) A nemzetközi közzétételi adatok: WO 093 PCT/EP 03/0047 () Elsõbbségi adatok: MI09 02. 0. 07. IT (72) Feltalálók: STRADI, Riccardo, I-133 Milano (IT); BERTELLI, Aldo, I-122 Milano (IT); PINI, Elena, I-133 Milano (IT) (73) Jogosult: Giuliani S.p.A., 129 Milano (IT) (74) Képviselõ: dr. Török Ferenc, DANUBIA Szabadalmi és Jogi Iroda Kft., Budapest (4) Többszörösen telítetlen lineáris aldehidek és azok gyökfogó aktivitású származékai HU 006 84 T2 A leírás terjedelme 6 oldal Az európai szabadalom ellen, megadásának az Európai Szabadalmi Közlönyben való meghirdetésétõl számított kilenc hónapon belül, felszólalást lehet benyújtani az Európai Szabadalmi Hivatalnál. (Európai Szabadalmi Egyezmény 99. cikk (1)) A fordítást a szabadalmas az 199. évi XXXIII. törvény 84/H. -a szerint nyújtotta be. A fordítás tartalmi helyességét a Magyar Szabadalmi Hivatal nem vizsgálta.
1 HU 006 84 T2 2 A jelen találmány többszörösen telítetlen lineáris aldehidekre és azoknak gyökfogó aktivitású származékaira vonatkozik. Közelebbrõl a találmány olyan többszörösen telítetlen lineáris aldehidekre vonatkozik, amelyek papagájtollból és ¹szövetbõl extrahálhatók, vagy szintetikus úton elõállíthatók, továbbá ezen aldehidek származékaira, amelyek az aldehidcsoport redukciójával kapott alkoholok zsírsav-észterei vagy az említett aldehideknek ciklodextrinekkel alkotott zárványkomplex-származékai, antioxidánsként és gyulladáscsökkentõ szerként. A jelen találmány vonatkozik továbbá az említett aldehidek új származékaira, mint az aldehidcsoport redukciójával kapott alkoholokra, az alkoholok zsírsavésztereire és az aldehideknek ciklodextrinekkel alkotott zárványkomplex-származékaira. Az említett többszörösen telítetlen aldehideket és azok származékait a továbbiakban parrodiének név alatt említjük általánosan. Azt találtuk, hogy a jelen találmány szerinti parrodiének antioxidáns és gyulladásgátló hatással bírnak, ennek megfelelõen szabad gyökök által okozott károsodás megelõzésére alkalmazhatók, különösen a bõr öregedése miatti elváltozások megelõzésében és kezelésében. Számos növényi eredetû természetes termék, amely különféle populációk táplálkozásának képezik a részét, preventív vagy gyógyító hatást mutat számos szervi rendellenességgel szemben, és megváltoztatja különféle betegség jellemzõit. Ezeket a gyógyászati tulajdonságokat általában a néphagyomány ismeri, és azok érvényességét modern kémiai, biológiai, farmakológiai és klinikai technikai módszerekkel vizsgálják. A táplálkozásban sokkal kevesebb olyan állati eredetû természetes termék szerepel, amely terápiás vagy preventív tulajdonságokkal bír bizonyos rendellenességekkel vagy betegségekkel szemben. Ismert példák a következõk: halból extrahált többszörösen telítetlen zsírsavak (1, 2, 3), állatokból, például cápaporcból extrahált glikózaminoglikánok (3, 4,, 6, 8), tejbõl vagy elõtejbõl extrahált glikoproteinek, például laktoferrin (9, ), és lágytestûekbõl, például osztrigákból extrahált lipidek (11, 12). Azonban a papagájok tollaiban és szöveteiben jelen lévõ többszörösen telítetlen lineáris aldehidek biológiai aktivitása még teljesen feltáratlan. A brazíliai és venezuelai emberek népi hagyományai ismerik, hogy ezen madarak tollainak a belsõ alkalmazása bõrfertõzések, égések és mérgezõ rovarok harapásainál gyógyító hatásúak, és ezen állatok húsának fogyasztása gyógyítja a belsõ rendellenességeket, fertõzéseket és tumorokat. Ismert, hogy a madarak színes tollazata számos olyan karotenoidvegyületet tartalmaz, amely a táplálkozás során abszorbeálódik, és a tollakban közvetlenül kapcsolódik a keratinhoz, vagy komplex metabolikus átalakuláson megy át. A lutein, zeaxantin és béta-kriptoxantinok olyan karotenoidok, amelyek gyakorta elõfordulnak ételekben 1 2 3 4 0 (bogyókban, gyümölcsökben, magokban, virágokban és rovarokban), amelyeket abszorborbeálják a szövetek és tollak anélkül, hogy a szerkezetük metabolikus módosításon esne át, miközben egyéb vegyületek, mint a pikofulvinok molekulaszintû átalakulás eredményeként keletkeznek (13, 14, 1, 16). A pikofulvinok vagy parrodiének keverékei (említjük továbbá Parrodin néven is) metabolikus változások eredményeképpen keletkeznek, és ez tipikus számos papagájfajtánál (Poicephalus rufiventris, Ara macao, Ara manilata, Ara ararauna, Psittacus erithacus, Aratinga canicularis, Aratinga acuticaudata, Psittacula krameri stb.). A találmány szerinti parrodiének antioxidáns hatással rendelkeznek, és általánosságban védõhatást fejtenek ki szabad gyökök ellen, amely magyarázza ezen állatok kivételesen hosszú életét (0 évnél is tovább élnek), tanulási képességeit és azt, hogy ezeknél az állatoknál nem jelentkeznek betegségek, különösen nem tumorok. Az (I) általános képletû vegyületeket ahol n=2 7, R=CHO, CH 2 OH, CH 2 O CO R, ahol CO R egy 12 22 szénatomos zsírsavmaradék, elõször polién aldehidekként kapták (R=CHO), amelyeknek a szintézisét elõször Kuhn írta le 1937-ben (17, 18). A páratlan számú konjugált kettõs kötéssel rendelkezõ aldehideket a krotonaldehid autokondenzációjával kapták piridinium-acetát-katalizátor jelenlétében (1A reakcióvázlat). A páros számú kettõs kötéssel rendelkezõ aldehideket krotonaldehid és acetaldehid kondenzációs reakciójával kapták, szintén piperidinium-acetát-katalizátor jelenlétében (1B reakcióvázlat). 1A reakcióvázlat 1B reakcióvázlat n=2 7 A megfelelõ alkoholokat (R=CH 2 OH) az aldehideknek NaBH 4 -del végrehajtott redukciójával kapták; az észtereket pedig a kivált acil-halogenidekkel, különösen ¹kloridokkal végzett észterezéssel kapták. 2
1 HU 006 84 T2 2 A találmány szerinti vegyületek elõállítására vonatkozó példákat az alábbiakban adjuk meg. 1A példa Páratlan számú kettõs kötéssel rendelkezõ aldehidek elõállítása (I) képlet, n=3: 2,4,6-oktatrienal n=: 2,4,6,8,-dodekapentaenal n=7: 2,4,6,8,,12,14-hexadekaheptaenal ml krotonaldehidet adagolunk egy 1 literes edénybe, és azt nitrogénatmoszféra alatt 1 percen át mágneses keverõvel keverjük. 2, ml piperidint és 2, ml ecetsavat csepegtetünk lassan (a reakció exoterm), és a keveréket mágneses keverés alatt tartjuk nitrogénatmoszférában 0 C¹on, percen át. A reakciókeveréket jeges hûtõn hûtjük, és 0 ml etil-étert adagolunk további mágneses keverés mellett. A kialakult barna csapadékot szûrjük és toluolból átkristályosítjuk: 1 mg 2,4,6,8,,12,14-hexadekaheptaenalt kaptunk. A vörös éteres oldatot 0 ml desztillált vízzel extraháljuk az el nem reagált feleslegben lévõ krotonaldehid eltávolítása céljából; a szerves fázist nátriumszulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson ( Hgmm) bepároljuk. A barnásvöröses maradékot ml 80%¹os metanolban felvesszük, és egész éjen át C¹on tartjuk egy hûtõszekrényben. Így kicsapatással elválasztjuk a 2,4,6,8,-dodekapentaenalt, és azt izopropanolból átkristályosítjuk (2, g). A metanolos oldatot bepároljuk és kis nyomáson (3 Hgmm) desztilláljuk: a 2,4,6-oktatrienal elválik C¹on, és szilikagélen flashkromatográfiás oszlopon tisztítjuk eluensként petroléter/etil-acetát keveréket alkalmazva (98:2 arányban). Így g 2,4,6-oktatrienalt kapunk. Vékonyréteg-kromatográfia (VRK): hexán 7/aceton 3. 1B példa Páros számú kettõs kötéssel rendelkezõ aldehidek elõállítása (I) képlet, n=2: 2,4-hexadienal n=4: 2,4,6,8-dekatetraenal n=6: 2,4,6,8,,12-tetradekahexaenal 190 ml acetaldehidet és 1 ml krotonaldehidet helyezünk egy 1 literes edénybe és mágneses keverés alatt tartunk percen át nitrogénáramlás mellett. 2 ml piperidint és 1,4 ml ecetsavat csepegtetünk lassan, és a 1 2 3 4 keveréket mágneses keverés alatt tartjuk nitrogénatmoszférában 18 órán át. 00 ml etil-étert adagolunk a vörös oldathoz; a csapadékot szûrjük, majd toluolból átkristályosítottuk. A kapott csapadék a 2,4,6,8,,12,14- hexadekaheptaenal (1 mg), ahol 2,4,6,8,,12-tetradekahexaenalt (2) izolálunk a lepárolt toluolos fázisban. A vörös színû éteroldatot 0 ml desztillált vízzel mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk és C¹on 12 órán át állni hagyjuk. Így kicsapatással elválasztjuk a 2,4,6,8,,12-tetradekahexaenalt, amit szûrünk és éterrel (0 mg) mosunk. A szerves fázis bepárlásával kapott maradékot frakcionált desztillálásnak vetjük alá: a nem reagált krotonaldehidet 21 C¹on ( Hgmm), a 2,4-hexadienalt 26 C¹on (3 Hgmm,,2 g) és a 2,4,6-oktatrienalt C¹on (3 Hgmm) kaptuk. A maradékot ml 80%¹os metanolban vesszük fel; a 2,4,6,8-dekatetraenalt kicsapatással választjuk el C¹on, majd szûrjük és hexánból átkristályosítjuk (4 mg). A 2,4,6-oktatrienalt tartalmazó desztillátumfrakciót szilikagélen tisztítjuk flashkromatográfiás oszlopon eluensként petroléter/etil-acetát keveréket alkalmazva (98:2 arány), és így 3 g 2,4,6-oktatrienalt kapunk. VRK: hexán 7/aceton 3. 2. példa 2,4,6,8,,12-Tetradekahexaenol elõállítása 2,2 mmol 2,4,6,8,,12-tetradekahexaenalt ml vízmentes etanolban oldunk egy edényben nitrogénáramlás alatt; 3,3 mmol NaBH 4 ¹et szolubilizálunk ml vízmentes etanolban, majd az oldathoz csepegtetjük. A keveréket szobahõmérsékleten állni hagyjuk és mágnesesen keverjük nitrogénatmoszférában, idõszakonként VRK-val ellenõrizve (etil-acetát). órás reagáltatást követõen ml desztillált vizet adagolunk, és a keveréket dietil-éterrel extraháljuk; az egyesített szerves fázisokat vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson ( Hgmm) bepároljuk. A kapott nyersterméket kristályosítással tisztítjuk etilacetátból, és így kapjuk a 2,4,6,8,,12-tetradekahexaenolt %¹os kitermeléssel. Az alábbi táblázatban megadott alkoholokat a fentiekben leírt eljárásokkal összhangban állítottuk elõ. Szám Név Reakcióidõ Tisztítás Kitermelés (%) 2. 2,4-hexadienol (19) 1 óra 84 3. 2,4,6-oktatienol (19) 11/2 óra petroléterbõl átkristályosítás 70 4. 2,4,6,8-dekatetraenol (19) 2 óra etanolból átkristályosítás 70. 2,4,6,8,-dodekapentaenol (, 21) 3 óra etil-acetátból átkristályosítás 78 6. 2,4,6,8,,12,14- hexadekaheptaenol óra oszlopkromatografálás, ahol az eluens etil-acetát 3. példa 2,4,6-Oktatrien-palmitát elõállítása 2 mmol 2,4,6-oktatrienolt nitrogénáramban szolubilizálunk vízmentes CHCl 3 -ban, amit nem stabilizáltunk etanollal; 2 mmol vízmentes trietil-amint csepegtetünk az oldatba. Az edényt mágneses keverés alatt jeges hûtõben tartjuk, és 3 mmol palmitoil-kloridot adagolunk 3
1 HU 006 84 T2 2 lassan csepegtetve ml CHCl 3 ¹ba. Az adagolás végeztével a reakciókeveréket szobahõmérsékletre hozzuk és idõszakosan VRK-val ellenõrizzük (etil-acetát). A reakció kb. óra múlva válik teljessé. A reakcióelegyet desztillált vízzel, majd telített vizes NaHCO 3 -tal extraháljuk, vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk ( Hgmm). A következõ spektroszkópiai jellemzõkkel rendelkezõ 2,4,6-oktatrienil-palmitátot kapjuk (91%¹os kitermelés): IR (KBr): 29, 280, 17, 1, 1264, 996. 1 H NMR (CDCl 3 ): ppm 6,372 6,0 (4H, m, H 3 6 );,791,99 (2H, m, H 2, H 7 ); 4,634 (2H, d, J 1,2 =,64, CH 2 O); 2,326 (2H, t, J,6 =7,3, CH 2 CO); 1,816 (3H, d, J 8,7 =7,3, CH 3 CH ); 1,4 1,17 (26H, m, CH 2 ); 0,928 (3H, t, J=6,23, CH 3 ). 13 C (CDCl 3 ): ppm 173,648 COO; 134,687 C 4 ; 134,44 C 3 ; 134,44 C 2 ; 134,44 C ; 134,44 C 6 ; 134,44 C 7 ; 64,709 CH 2 O; 34,4 22,738 CH 2 ; 18,9 CH 3 CH ; 14,134 CH 3. Az alábbi táblázatban megadott észtereket a fentiekben leírt eljárásokkal összhangban állítottuk elõ. 2. 2,4-hexadienilpalmitát 3. 2,4,6,8-dekatetraenilpalmitát 4. 2,4,6,8,- dodekapentaenilpalmitát. 2,4,6,8,,12- tetradekahexaenilpalmitát 6. 2,4,6,8,,12,14- hexadekaheptaenilpalmitát Szám Név Reakcióidõ Kitermelés (%) 4 óra 94 24 óra 86 24 óra 84 24 óra 24 óra 1 2 3 4 0 4. példa Az aldehidek ciklodextrinekkel képzett zárványkomplexeinek elõállítása Polién aldehid és ¹ vagy ¹ciklodextrin ekvimoláris mennyiségeit összekeverjük, és addig porítjuk egy mozsárban, míg homogén keveréket kapunk. A keveréket percen át pontjuk, 2 ml desztillált vizet adagolunk 2 egymást követõ idõpontban; az így kapott félig folyékony keveréket egy edénybe visszük, és nitrogénatmoszféra alatt egész éjen át állni hagyjuk, majd újraszuszpendáljuk 0 ml meleg desztillált vízben ( C). A színes szuszpenziót mágneses keverés alatt tartjuk C¹on percen át, majd vákuum alatt ( Hgmm) forrón szûrjük egy szinterezett üvegszûrõn. A sárga oldat egy kis mennyiségét 4 C¹on tároljuk, amely még néhány nap eltelte után sem tartalmaz semmiféle üledéket vagy csapadékot. A jellemzésre használt terméket a vizes oldat vákuum alatt ( Hgmm) végzett bepárlásával kapjuk. A 3, 4,, 6 és 7 konjugált kettõs kötést tartalmazó polién aldehideknek ¹ és ¹ciklodextrinekkel képzett zárványkomplexeit a fenti eljárással összhangban állítottuk elõ. Az összes kapott komplexet IR, Raman és UV/vis spektroszkópiával jellemeztük. 2,4,6-Oktatrienal, ami ¹ciklodextrinbe foglalt. IR (cm 1 ) 2929; 1680; 1641; 1413; 1384; 1298, 1244, 11; 78; ; 91. Raman (cm 1 ) 1633, 1611; 11; 1129. UV/vis H 2 O-ban: (nm): 277, (1 cm 1 mol 1 ): 70 2,4,6-Oktatrienal, amely ¹ciklodextrinbe foglalt. IR (cm 1 ) 2927; 1667; 1644; 1417; 1369; 12; 1247; 118; 80; 28; 947. Raman (cm 1 ) 1678; 1636; 1126. UV/vis H 2 O-ban: (nm): 276, cm 1 mol 1 ): 4 A találmány szerinti vegyületekkel végzett biokémiai és farmakológiai kísérletek azt mutatták be, hogy a találmány szerinti vegyületek potenciálisan szerepet játszhatnak számos ismert rendellenesség megelõzésében és kezelésében. A vegyületek izolált patkányhepatociták CCl 4 -dal indukált lipoperoxidációja elleni és a phaeochromocitoma sejtekben (PG 12) H 2 O 2 -dal indukált oxidatív jelenségek elleni aktivitásukat in vivo és in vitro tesztekben mutattuk be. A vegyületek hidroperoxid általi károsodás megelõzésében mutatott hatását bemutattuk továbbá hidrogén-peroxiddal érintkeztetett vörösvérsejt-szuszpenziókban. Ez a vizsgálat bemutatta, hogy a találmány szerinti vegyületek kiváló gátló kapacitással bírnak a hidrogénperoxidok által okozott károsodásokkal szemben. A kollagénindukált vérlemezke-aggregáció gátlását és még szignifikánsabban a patkányszívben tapasztalt reperfúziós károsodás csökkentését találtuk a szív-érrendszeri területen végzett kísérletek során. H 2 O 2 -indukált oxidáció elleni védelem 3 M sejt/ml phaechromocitoma sejt (PC 12) kultúrát alkalmaztunk a Nordman-féle módszer szerint [Nordman R., Free Rad. Biol. Med., 1227 (1996)], és azt 0,1 mm H 2 O 2 -nak tettük ki perc ideig. 0 vagy 0 mcg/cm 3 parrodin ¹t [azaz olyan (I) képletû aldehidek keverékét, ahol R=CHO] adagoltunk a sejtkultúrába a kísérlet megkezdésekor. 24 órás inkubációt követõen azt figyeltük meg, hogy ah 2 O 2 -indukált peroxidáció esetén % volt a túlélési ráta, míg a parrodinnal és H 2 O 2 -dal inkubált sejteknél 0 mcg/cm 3 koncentrációban 0%¹os és 0 mcg/cm 3 koncentrációban 90%¹os volt a túlélés, ezzel bizonyítva, hogy a parrodin szignifikáns védõhatást fejt ki H 2 O 2 által okozott peroxidatív károsodás ellen. CCl 4 -indukált lipoperoxidáció vizsgálatai A CCl 4 -dal indukált (0 mg/l) lipoperoxidatív és toxikus hatását vizsgáltuk izolált patkányhepatocitákon, amelyet a Segler-féle technikával végeztünk [Segler P. 4
1 HU 006 84 T2 2 O., Methods Cell. Biol. Chem., 264, 4747 (1989)]. A CCl 4 -ról ismert, hogy sejtmembránokon lipoperoxidációt okoz, ami sejtnekrózishoz vezet [Slater T. F., Philos Trans. R. Soc. Lond. (Biol) 311, 633 (198); Berger M. L., Hepatology, 6, 36 (1996); Tribble D. L., Hepatology, 7, 377 (1987)]. A CCl 4 okozta sejtmembrán-károsító hatást és a védõhatást az alanin-amino-transzferáz (AlaAT) és aszpartát-amino-transzferáz (AspoAT) vizsgálatával mértük a sejtkultúra felülúszójában (Auto-biochemistry Assay System-Beeckman 700-Encore¹2). A hepatociták citológiai vizsgálatát optikai vagy elektronmikroszkóp alatt végeztük, miután azokat formalinnal vagy glutáraldehiddel fixáltuk. Ezen vizsgálatok eredményei azt mutatták, hogy a CCl 4 okozta AlaAT- és AspAT-koncentrációnövekedés csökkent a parrodin jelenlétében. A hisztológiai vizsgálatok szintén bemutatták a parrodin általi védelmet. A kontrollokkal szemben a kezelt hepatociták sejtmembránjai és sejtmagja majdnem érintetlennek tûnt, és mitokondrium és számos riboszóma szintén normálisnak tûnt. Hidrogén-peroxid-indukált lipoperoxidáció vizsgálata vörösvérsejteken A vörösvérsejteket egészséges önkéntesek vénás vérébõl extraháltuk és PBS-foszfátokkal (0,1 M, ph 7,4) pufferolt NaCl-oldattal mostuk, majd 3 M PBSazidot tartalmazó oldat cm 3 -ével hígítottuk, és a hemoglobinkoncentrációt Drabkin-reagenssel mértük. A lipid peroxidálását úgy indukáltuk, hogy egy olyan sejttenyészetet, amely cm 3 PBS-azidban volt, és végsõ hemoglobinkoncentrációja 3,7/ml volt, hidrogén-peroxidnak tettük ki ( mm hidrogén-peroxid minden egyes ampullában, amely cm 3 sejtszuszpenziót tartalmazott), és azt 37 C¹on 1 órán át inkubáltuk. A peroxidációt 1 órával késõbb határoztuk meg a Stocks és Dormandy módszerével [Stocks J., Dormandy T. L., Brit. J. Haematology, 29, 9 (1971)], amely a malonaldehidkeletkezést méri, amely tiobarbitursavval (TBA) együtt egy színes kromogént alakít ki, amely 32 nm¹en abszorbeál [Bird R. P., Methods Enzymol,, 299 (1984)]. A parrodin antilipoperoxidatív hatását úgy mértük, hogy azt 0 mcg/ml koncentrációban vittük be olyan csövekbe, amelyek eritrocitaszuszpenziót tartalmaztak. A hidrogén-peroxiddal végzett inkubációt 1 órával követõ MDA-mérés bemutatja, hogy az MDA-kialakulást igen szignifikánsan csökkenti a parrodin, ennélfogva ez egy bizonyíték a lipoperoxidációs károsodás elleni védelemre. Vérlemezke-aggregációs vizsgálat A vérlemezke-aggregációt vérlemezkében gazdag plazmában (VGP) határoztuk meg; a vérlemezkék számát CH8 oh vérlemezke-számlálóval (Delcan) határoztuk meg, és 0 000 vérlemezke/ml értékre állítottuk be vérlemezkében szegény plazmával (VSzP). A vérlemezke-aggregációt kollagén adagolásával (2, ng/ml) indukáltuk és fotometriásan mértük egy 1 2 3 4 0 aggregométerrel a Born-féle technikával [Born G. V. R., Nature 194, 927 (1962)]. Parrodinnel végzett inkubálást perccel követõen (2,/ml és /ml) %¹os, illetve 7%¹os vérlemezkeaggregáció-gátlást figyeltünk meg. UV-indukált eritéma megelõzõ vizsgálatok UV-indukált eritémát (bõrpirosság) okoztunk UV lámpa alkalmazásával (Hanoivna Kramager) tengerimalac fülén percen át; a lámpa 0 0 mm hullámhosszon sugárzott, ennek megfelelõen UV¹B, UV¹C és UV¹A sugarakat bocsátott ki egy speciális szûrõn keresztül. Vagy csak hordozót, vagy egy olyan szuszpenziót, amely vagy % 2,4,6,8,,12,14-hexadekaheptaenol-palmitátot tartalmazott, vittünk fel a vizsgálati állatok fülére, és az UV¹indukált eritéma miatti hõmérséklet-növekedést mértük termoelektromos hõmérõvel kb. 3 óra elteltével a kontrollállatokban és a vizsgálati állatokban. Azt találtuk, hogy a %¹os szuszpenzió gátolta a melegedés és az eritéma megjelenését. *** A végrehajtott vizsgálati sorozat bemutatja, hogy a találmány szerinti többszörösen telítetlen lineáris vegyületek olyan biológiai jellemzõkkel rendelkeznek, amely a növényi vagy egyéb eredetû karotenoidokra jellemzõ, és különösen hidroperoxidok és szabad gyökök elleni védõaktivitást bizonyítanak. Ebbõl következõen a vegyületek különösen hasznosnak tûnnek minden olyan szervi eredetû változás megelõzésében és kezelésében, amelyet szabadgyöktermelõdés aktiválása okoz. Alkalmazhatók étrendi kiegészítõkként, gyógyszerekként és kozmetikumokként számos szövetöregedéssel kapcsolatos rendellenesség megelõzésében és kezelésében. Kozmetikai felhasználás esetén alkalmazhatók ultraviola sugárzás és bõröregedést okozó eljárások, gyulladások vagy degeneratív reakciók által okozott léziók kezelésére. A felhasználástól függõen a találmány szerinti vegyületeket alkalmazhatjuk önmagukban vagy egymással kombinációban vagy egyéb karotenoidokkal vagy egyéb hasonló, komplementer aktivitással rendelkezõ vegyületekkel, mint szerves vagy szervetlen antioxidánsokkal, vitaminokkal, aminosavakkal, enzimekkel vagy olyan termékekkel, amelyek táplálkozási vagy kozmetikában alkalmazható jellemzõkkel rendelkeznek. A találmány szerinti vegyületeket kiszerelhetjük topikális kozmetikai bõrre való alkalmazásra használható kenõcsökként, krémekként és oldatokként. A formulációkat elõállíthatjuk szokásos technikákkal, amelyekben gyógyszerészetileg vagy kozmetikailag megfelelõ segédanyagokat alkalmazunk. Néhány találmány szerinti készítményt ismertetünk az alábbiakban. 1. készítménypélda Topikális alkalmazásra (krém, kenõcs, oldatok) tartalom/cm 3 Parrodiének % ciklodextrin dodekapentaenal hexadekapentaenal komplex
1 HU 006 84 T2 2 2. készítménypélda Orális adagolású parrodiénalapú komplexek Parrodin ciklodextrin komplex Likopén -Karotin E-vitamin C-vitamin Koenzim Q Szelén Parrodin ciklodextrin komplex Alfa-lipoinsav Koenzim Q C-vitamin E-vitamin B 1 -vitamin 1 mg 0 mg mg 0 mcg 0 mg mg 0 mg 3. készítménypélda Kozmetikai alkalmazású parrodiéneken alapuló komplex Krém, ami a következõket tartalmazza minden cm 3 -ében Parrodin ciklodextrin komplex Melatonin Alfa-lipoinsav E-vitamin mg 0 mg mg Hivatkozások 1. Brown J. E., Clin. Chim. Acta, 193, 147, 1990 2. Haglund O., J. Int. Med., 227, 347, 1990 3. Parks J. S., Atherosclerosis, 84, 83, 1990 4. Gross D., Therapie Woche, 33, 4238, 1984. Thico G., Schweiz. Rundschau Med. (Praxis), 66, 1696, 1977 6. Vaz A. L., Curr. Med. Res. Opin., 8, 14, 1982 7. Schwarz K., J. Biol. Chem., 26, 22 023, 1990 8. Theodosakis J., The Arthritis Cure St. Martin s Press. N. Y., 1997 9. Ferenc Levay P., Haematologica, 80, 22, 199. Playford R. J., Am. J. Nutr., 72,, 00 11. Whitheouse M. W., Inflam. pharmacol.,, 237, 1997 12. Rainsford K. D., Arzneimitt. Forschung,, 2128, 1980 13. Isler O., Carotenoids, Birkhauser Verlag Basel, 1971 14. Goodwin T. W., The Biochemistry of Carotenoids in plants, vol, 1 Chapman Hall London 1980 1 2 3 4 0 1. Goodwin T. W., The Biochemistry of Carotenoids, vol, 2 Animals Chapman Hall London 1984 16. Krinsky N. Ann. Rev. Nutr., 13, 61, 1993 17. Kuhn, R., and Grundmann, Chem. Ber., 70, 1318 (1937) 18. Blout, E. R., Fields, M., J. A. C. S., 70, 189 193 (1948) 19. Reichstein; Ammann; Trivelli, Helv. Chim. Acta 1, 263 267 (1937). Fischer; Hultzsch; Flaig, Chem. Ber. 70, 374 (1937) 21. Synder, Richard; Anridson, Eric; Foote, Caroline; Harrigan, Lynne; Christensen, Ronald L J. Amer. Chem. Soc. 7, 14, 4117 (198) SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Kozmetikai eljárás ultraibolya sugárzások és öregítõ folyamatok által okozott bõrkárosodások kezelésére, amelyben topikálisan alkalmazunk (I) általános képletû vegyületeket önmagukban vagy egymással képezett elegy formájában n=2,7 ahol n=2 7, R=CHO, CH 2 OH, CH 2 O CO R, ahol CO R egy 12 22 szénatomos zsírsavmaradék. 2. Az (I) képletû 2,4,6,8,,12-tetradekahexaenol, ahol n=6 és R=CH 2 OH. 3. Az (I) képletû 2,4,6,8,,12,14-hexadekaheptaenol, ahol n=7 és R=CH 2 OH. 4. Az (I) általános képletû vegyületek, ahol n=2, 3, 4, vagy 6 és R=CH 2 O CO R, ahol CO R jelentése egy palmitinsavmaradék.. Az (I) képletû vegyületeknek ciklodextrinekkel kialakított zárványkomplex-vegyületei n=2,7 ahol n=2 7 és R=CHO. 6. Az (I) képletû vegyületek alkalmazása n=2,7 olyan topikális készítmények elõállítására, amelyek antioxidáns és gyulladásgátló hatással bírnak. Kiadja a Magyar Szabadalmi Hivatal, Budapest Felelõs vezetõ: Szabó Richárd osztályvezetõ Windor Bt., Budapest