I. Cholnoky László Szakkollégiumi Szimpózium

Átírás

1 I. Cholnoky László Szakkollégiumi Szimpózium Időpont: április 24. péntek Helyszín: PTE ÁOK Dékáni Tanácsterem 10:00 10:30 Regisztráció 10:30 10:45 Megnyitó Meghívott előadók: 10:45 11:05 Dr. Fittler András: Internetes gyógyszerforgalmazás biztonsága: A kockázatokról és a mellékhatásokról kérdezze meg online gyógyszerészét? 11:05 11:25 Dr. Kvell Krisztián: A tímusz öregedésért felelős molekuláris mechanizmusok 11:25 11:45 Dr. Poór Miklós: Mikotoxinok molekuláris interakcióinak vizsgálata 11:45 12:30 Ebéd Hallgatói előadások I: 12:30 12:45 Andreidesz Kitti: Studies of benzosuberone cytotoxic properties in lung adenocarcinoma cell line and primary human fibroblasts 12:45 13:00 Diós Péter: Hidrofil mátrixképző polimerek alkalmazhatósága efferveszcens úszó készítményekben 13:00 13:15 Kardos Dorottya Virág: Perifériás vér naiv és memória B-sejt alcsoportjainak vizsgálata szisztémás sclerosisban 13:15 13:30 Majoros Andrea Kinga: A SALS-Pro-WH2 rendezetlen fehérje régió szerepe a szarkomerikus aktin filamentumok kialakulásában 13:30 13:50 Kávészünet

2 Hallgatói előadások II: 13:50 14:05 Eichertné Andresz Violetta: Az orvosi somkóró (Melilotus officinalis L.) virágzatának karotinoid-analízise 14:05 14:20 Kurdi Csilla: Development of 3D tissue culturing method for investigation of circulating tumor cells 14:20 14:35 Tigyi Bettina Mariann: Illóolajok mikrobiológiai aktivitásának vizsgálata vékonyréteg kromatográfiával és bioautográfiával 14:35 14:50 Szabó Petra Lujza: A lép-fejlődés genetikai szabályozásának változása Nkx2-3 transzkripciós faktor hiányában 14:50 15:00 Oklevelek átadása, zárszó A Szimpózium célja: az előadások lehetőséget nyu jtanak a gyógyszertudományok és biotechnológia szakteru letén dolgozó fiatal kutatók, PhD és TDK hallgatók számára eredményeik megismertetésére, elősegítve ezzel az egyes tudományteru letek ko zo tti tudományos egyu ttmu ko dést. A szimpózium két nyelven, angolul és magyarul zajlik. A szimpózium honlapja: cholnoky.pte.hu

3 Absztraktok Internetes gyógyszerforgalmazás biztonsága: A kockázatokról és a mellékhatásokról kérdezze meg online gyógyszerészét? Fittler András PTE ÁOK Gyógyszerészeti Intézet A gyógyszer egy olyan speciális áru, amely termék és információ is egyben, így forgalmazása és rendelése szigorú személyi és tárgyi feltételekhez kötött. Ennek ellenére napjainkban Magyarországon sem elhanyagolható a gyógyhatású készítmények és gyógyszerek szabadabb beszerzése és laikus alkalmazása és az internetes kereskedelmének előretörése. A gyógyszerellátás korábbi évtizedeiben megszokott gyógyszerbiztonságot szavatoló feltételrendszerével ellentétben, jellemzően hiányos, vagy akár egyáltalán nem biztosított a beteg- és gyógyszerbiztonság az online gyógyszerek piacán. Saját vizsgálataink és nemzetközi szakirodalmi adatok is alátámasztják, hogy szerte a világon számtalan, akár több tízezer illegális honlap üzemel. A hamis gyógyszerek Magyarországra kerülésének egyik legvalószínűbb és egyben legfenyegetőbb formája az internetes kereskedelem révén valósulhat meg, hiszen számtalan külföldi és hazai honlap hirdet és árul törvénysértő módon gyógyszert vagy gyógyhatású készítményt. Az online gyógyszerforgalmazás kapcsán legtöbbször csak a hamis gyógyszerekről és azok veszélyeiről beszélnek, pedig ez nem feltétlenül elegendő, hiszen a gyógyszerészet jövője szempontjából is előbb-útóbb meghatározó lesz majd az online kereskedelem. Az Egyesült Államokban például a lakossági gyógyszerforgalmazás közel negyedét a gyógyszerek csomagküldés útján történő kiszolgáltatása képezi. Angliában, Németországban és Hollandiában is egyre meghatározóbb szerep jut az internetes gyógyszertáraknak, sőt ezen országokban receptköteles gyógyszerek is rendelhetőek online. Fontos megismernünk az online gyógyszerrendelésre nyitott személyek motivációit és érdemes átgondolnunk az internetes gyógyszer-rendelés előnyeit és természetesen annak veszélyeit is. A megfelelő lakossági tájékoztatás érdekében szem előtt kell tartanunk, hogy a gyógyszerek interneten keresztüli árusítása még a legális források esetén is új kihívásokat rejt magában, így a beteg- és gyógyszerbiztonságot érintő hátrányokat és veszélyeket ismernünk és megfelelő módon kommunikálnunk kell a fogyasztók/betegek számára. A folyamatosan formálódó európai közösségi szintű és hazai szabályozás reményeink szerint képes lesz majd kezelni ennek a forgalmazásnak az újszerűségét és egyedi jellemzőit. Mindezt természetesen úgy, hogy közben indokolatlanul nem korlátozza ezen a területen sem az egyének elvárt szabadságát, de mégis képes lesz ismét szavatolni a korábbi évtizedekben megszokott európai gyógyszerbiztonságot.

4 Molecular mechanism of thymic senescence Kvell Krisztian, 1,2 Ernszt David, 1,2 Pap Attila, 3 Kovacs Tamas, 1,2 Pongracz Judit Erzsebet, 1,2 1 : Department of Pharmaceutical Biotechnology, Faculty of Medicine, University of Pecs, Hungary 2 : Szentagothai Research Center, University of Pecs, Hungary 3 : Department of Biochemistry and Molecular Biology, Faculty of Medicine, University of Debrecen, Hungary Human thymic senescence is precisely modeled in the mouse. It is known that increased PPARgamma activity promotes the process, but the immune senescence-delaying effect of PPARgamma loss-of- function has not been shown. Also, to date the source of thymic adipocytes has not been shown directly. Our current work prevails in these issues. PPARgamma KO mice escape thymic senescence: Thymic epithelial compartments withstand aging-induced erosion as shown by maintained EpCAM1 and Ly51 staining. Consequently naive T-cell production is enhanced as shown by elevated mtrec level from thymocytes and elevated CD62L(naive)/CD44(effector) T-cell ratio among splenocytes. Nevertheless, thymocyte distribution remains normal by CD4/CD8 ratio. The missing link of thymic senescence: Thymic epithelial cells co- stain for epithelial (EpCAM1) and adipocyte (PPARgamma) markers at 13 months of age, representing an intermediate state of differentiation during physiological senescence. Similarly, the TEP1 model cell line also represents such an intermediate state. TEP1 cells may be forced to express either epithelial markers (EpCAM1, FoxN1, Aire, IL7) by soluble Wnt4, or adipocyte markers (PPARgamma, neutral lipid deposits) by aging-equivalent steroid treatment. Of note, our soluble Wnt4 treatment acts upstream of cell-restricted FoxN1, proposed by others. In summary we provide proof-of-concept for immune senescence delay by targeting PPARgamma. We also present evidence that the thymic epithelium is the source of thymic adipose tissue, presenting the missing link of thymic senescence and provide an in vitro model system. Thymic senescence results in increased incidence of infections, cancers and autoimmune-disorders in the elderly. We provide molecular level strategy to prevent this.

5 Mikotoxinok molekuláris interakcióinak vizsgálata Poór Miklós, 1 Peles-Lemli Beáta, 2 Matisz Gergely, 2 Sali Nikolett, 3 Kunsági-Máté Sándor 2 1 PTE ÁOK Farmakológiai és Farmakoterápiai Intézet, Toxikológia Tanszék 2 PTE TTK Kémiai Intézet, Általános és Fizikai Kémia Tanszék 3 PTE KK Laboratóriumi Medicina Intézet A mikotoxinok fonalas gombák szekunder anyagcseretermékei, melyek toxikus tulajdonsággal bírnak. Hatásmechanizmusuk rendkívül komplex, a fertőzött takarmányból/élelmiszerből a táplálékláncba jutva többféle haszonállatra és emberre is veszélyesek lehetnek. Eradikációjuk a jelenlegi módszerekkel lehetetlennek tűnik. Számos mikotoxin rendelkezik fluoreszcens sajátsággal (pl. aflatoxin, citrinin, ochratoxin, zearalenon), ami analitikájukban és molekuláris kölcsönhatásaik vizsgálatában rendkívül jól kiaknázható. Így a fluoreszcencia spektroszkópiai módszerek alkalmasak arra, hogy: - vizsgáljuk fizikokémiai tulajdonságaikat (pl. protonálódás-deprotonálódás, pka), - olyan interakciókat azonosítsunk, amelyek a toxin fluoreszcencia intenzitását fokozzák (analitikai alkalmazás, pl. magasabb érzékenységű HPLC-FLD módszer kifejlesztése), - farmakológiailag jelentős kölcsönhatásokat tanulmányozzunk (pl. kötődés peptidekhez, fehérjékhez), - olyan interakciókat keressünk, amelyek in vitro vagy in vivo dekontaminációs/detoxikációs stratégiák kidolgozására alkalmasak (pl. élelmiszerek toxinmentesítése, mikotoxinok felszívódásának gátlása vagy eliminációjának fokozása). Legújabb kísérleteinkben mikotoxinok kölcsönhatásait vizsgáljuk különböző natív és kémiailag módosított β-ciklodextrinekkel. A ciklodextrinek (CD) glükopiranóz egységekből felépülő gyűrű alakú molekulák. Külső részük hidrofil, míg a belső üreg lipofil, így képesek apoláros sajátságú molekulák vagy molekularészek befogadására. A natív CD-ek kémiai módosításával az interakciók stabilitása és specificitása jelentősen fokozható. Eredményeink bemutatják, hogy a CD-ek több esetben képesek a mikotoxinok fluoreszcenciáját jelentős mértékben növelni. Emellett azt is demonstráljuk, hogy ha biológiai alkalmazást tervezünk, egyáltalán nem elegendő a mikotoxin-cd komplexek stabilitásának ismerete, ahhoz, hogy megjósoljuk a várható biológiai hatást.

6 Studies of 2-(4-methoxybenzylidene)-1-benzosuberone and 2-(4-methylbenzylidene)-1- benzosuberone cytotoxic properties in a lung adenocarcinoma cell line, A549 and in primary human fibroblasts Kitti Andreidesz 1, Edit Kiss 1, David Ernszt 1, Monika Avdicevic 1, Pal Perjesi 2, Judit E. Pongracz 1 1 Department of Pharmaceutical Biotechnology 2 Department of Pharmaceutical Chemistry, Medical School, University of Pécs Chalcones are polyphenolic compounds synthesized in plants as flavonoid precursors. According to literature their following beneficial biological effects are known: antiinflammatory, antioxidant, chemo-preventive (anti-proliferative and cytotoxic in certain cancer cell lines). Modified chalcone analogues could be promising for therapeutic purposes. In a previous study it was revealed that 2-arylidene-1-benzosuberones are a group of compounds with cytotoxic properties tested on P388, L1210, Molt 4/C8 and CEM cells as well as a panel of human tumour cell lines (Jurkat T cells) leading to cell cytotoxicity and inhibition of RNA and protein synthesis. The cytotoxic evaluation of these compounds showed that 2-(4-methoxybenzylidene)-1-benzosuberone had the greatest cytotoxicity against human malignant cells. During our experiments we tested the cytotoxic effect of this compound and the less toxic 2- (4-methylbenzylidene)-1-benzosuberone on A549 lung adenocarcinoma cell line in cocultures with normal human fibroblast (NHLF) in a conventional 2-dimensional monolayer cell culture system. To determine cell survival after drug treatment, cell suspensions of monolayers were prepared for flow cytometric analysis using 7-AAD staining. The druginduced gene expression changes were measured by quantitative real-time PCR after 24 hour incubation period. Our results show a marked decrease of cyclin D1 proliferation marker expression in a dosedependent manner. Flow cytometric results revealed that human normal lung fibroblasts are more sensitive to the drug compared to human lung adenocarcinoma cells, A549. To investigate whether modifications of the above compound would be more effective cytotoxic agent in tumour cells, further studies are required and planned.

7 Hidrofil mátrixképző polimerek alkalmazhatósága efferveszcens úszó készítményekben Diós Péter, Nagy Sándor, Bognár Vivien, Pál Szilárd, Dévay Attila PTE ÁOK Gyógyszertechnológiai és Biofarmáciai Intézet Módosított hatóanyag-leadású készítmények alapos megtervezésével különböző biofarmáciai igényeknek megfelelő hatóanyag-felszabadulású rendszerek készíthetők. Ezen készítmények előállítása során a hatóanyag-leadás módosítását speciális segédanyagok és/vagy különleges technológiai eljárások segítségével érhetjük el. A gasztroretentív rendszerek alkalmazásának célja a készítmények gyomorban való tartózkodási idejének meghosszabbítása. A gasztroretentív rendszerek leggyakrabban alkalmazott technológiai megvalósítása az úszó hatóanyag-leadó rendszerek (FDDSs). Ezen úszó rendszerek gyomor retenciós idejének megnövelését azok lecsökkent átlagsűrűsége révén érhető el. A szakirodalom az úszó készítményeken belül élesen elkülöníti az efferveszcens és nem-efferveszcens úszó rendszereket. Az előadás célja, hogy bemutassa a gyógyszertechnológiai gyakorlatban, az iparban és magisztrálisan egyaránt leggyakrabban használt hét hidrofil mátrixképző polimer efferveszcens úszótablettákban való alkalmazhatóságát. Az elkészített tabletták összetételei csak az alkalmazott polimerekben különböznek. Alkalmazott hidrofil mátrixképzők: hidroxipropil-metilcellulóz (HPMC), metilcellulóz (MC), hidroxietil-cellulóz (HEC), karmellóz-nátrium (CMC-Na), kismértékben szubsztituált hidroxipropilcellulóz (L-HPC), nátrium-alginát, karbomer (Carbopol 934P). A kísérlet során elvégzett vizsgálatok: az úszás eléréséhez szükséges idő (t lag ) meghatározása és a hatóanyag 24 órás kioldódás vizsgálata. A vizsgálati minták eredményei között jelentős különbségek mutatkoztak. Egyes minták teljes hatóanyagtartalma 24 órás vizsgálat során sem tudott felszabadulni, míg több esetben már akár egy órát követően teljes hatóanyag kioldódás és gyors duzzadás volt tapasztalható.

8 Perifériás vér naiv és memória B-sejt alcsoportjainak vizsgálata szisztémás sclerosisban Kardos Dorottya Virág PTE KK Immunológiai ás Biotechnológiai Intézet PTE KK Immunológiai és Reumatológiai Klinika A szisztémás sclerosis (SSc), a bőr és bizonyos belső szervek fibrózisával, késői atrófiájával, valamint vaszkuláris károsodással járó szisztémás autoimmun betegség. Két formája a diffúz (dc) és limitált (lc) SSc, mely a klinikai tünetekben és a prognózisban is eltér egymástól. Irodalmi adatok szerint SSc-ben emelkedett a naiv és csökkent a memória B-sejtek aránya. Ezen B-sejt alcsoportok részletesebb vizsgálata segítséget nyújthat a két alcsoport elkülönítésében, a betegség aktivitásának és súlyosságának megítélésében. Célunk SSc betegek és egészséges kontrollok perifériás vérmintáiban a naiv és memória B- sejt alcsoportok arányának vizsgálata és klinikai jelentőségének meghatározása. A PTE KK Immunológiai és Reumatológiai Klinikán gondozott 28 SSc-s beteg és 15 kontroll perifériás vérmintájából ficoll grádiens centrifugálással mononukleáris sejteket szeparáltunk, majd anti-cd19 mágnesgyöngy-alapú szeparálással B-sejteket tisztítottunk. Az egyes B-sejt alcsoportok elkülönítését, mint a naiv (CD27 - ), memória (CD27 + ), nonswitched memória (IgD + CD27 + ), switched memória (IgD - CD27 + ) B-sejtek, valamint a sejtek aktivációs állapotának vizsgálatát (CD80+ és CD95+) áramlási citometriával végeztük. A statisztikai analízis során, normalítás vizsgálatot követően Mann-Whitney tesztet végeztünk, p<0,05 esetén tekintettük az eredményeket szignifikánsnak. SSc-ben szignifikánsan alacsonyabb a memória, azon belül a non-switched memória, és szignifikánsan magasabb a naiv B-sejtek aránya, mint a kontroll csoportban. Szignifikánsan magasabb switched memória B-sejt arányt találtunk dcssc-ben az lcssc csoporthoz képest, az anti-scl70+ betegekben, az anti-centromer antitestre pozitívakhoz képest; továbbá a tüdőfibrózisban szenvedő betegeknél. Szignifikásan magasabb volt CD95+ memória B- sejtek aránya dcssc-ben lcssc-hez képest valamint tüdőfibrózisos betegekben. Eredményeink alapján a switched memória és CD95+ memória B-sejtek emelkedett aránya a betegség súlyosságával mutat összefüggést.

9 A SALS-Pro-WH2 rendezetlen fehérje régió szerepe a szarkomerikus aktin filamentumok kialakulásában Majoros Andrea, Tóth Mónika, Migh Ede, Mihály József, Nyitrai Miklós, Bugyi Beáta PTE ÁOK Biofizikai Intézet A harántcsíkolt izmok megfelelő működése alapvető feltétele az életnek. Ehhez az összehúzódásra képes alapegységek, a szarkomerek kontraktilitása szükséges. A szarkomerek fő alkotója három filamentális fehérjerendszer: az aktin és tropomiozin alapú vékony, a miozin alapú vastag, valamint a titin filamentumok. Bár a szarkomerek nagyfokú szerkezeti rendezettséget mutató felépítése jól ismert, e szabályos forma kialakulásáért felelős molekuláris folyamatok részleteiről kevesebbet tudunk. A SALS (sarcomere length short) fehérjét kódoló sals gént ecetmuslicában végzett RNS interferencia kísérletek során azonosították. A fehérje funkciójának sérülése a szarkomerikus aktin filamentumok rövidülését és rendezettségének megbomlását eredményezi. A SALS hiányában kialakult rendezetlenség az izom működésére is jelentős negatív hatással van, ami már embrionális korban letális. A SALS biológiai funkciójáért felelős mechanizmusok felderítéséhez a fehérje egy részét vizsgáltuk, amely két rendezetlen, aktin-kötő WH2 domént (Wiskott-Aldrich szindróma homológ régió 2), egy prolin-gazdag régiót, valamint potenciális tropomiozin-kötő helyeket tartalmaz (SALS-Pro-WH2). Fluoreszcencia spektroszkópiai és mikroszkópiai kísérletekben megmutattuk, hogy a SALS-Pro-WH2 gátolja az aktin monomerek filamentumba épülését (szekvesztráció), illetve elősegíti a filamentumok szétszerelődését (szevering) in vitro, tehát multifunkcionális sajátságokkal bír. Megmutattuk azt is, hogy más szarkomerikus fehérjék (profilin, tropomiozin) milyen hatással vannak a SALS ezen aktivitásaira. Együttműködő partnerünkkel végzett in vivo kísérleteink felderítették, hogy a SALS-Pro-WH2 túltermelése ecetmuslica modell rendszerben 100 %-os röpképtelenséget eredményez, aminek hátterében a szarkomerikus aktin filamentumok rövidülése áll. Következtetéseink szerint a SALS-Pro-WH2 mellett más régiók és/vagy más szarkomerikus fehérjék is fontos szerepet játszanak a SALS funkcionalitásában. Hogy megértsük a SALS működésének hátterében megbújó molekuláris eseményeket, további célom a fehérje többi régióinak funkcionális feltérképezése.

10 Az orvosi somkóró (Melilotus officinalis L.) virágzatának karotinoid-analízise Eichertné Andresz Violetta, Horváth Györgyi, Molnár Péter PTE ÁOK Farmakognóziai Tanszék A növényi hatóanyagok kutatása ma is fontos a gyógyszeripar számára. Az orvosi somkóró (virágos hajtása) a VIII. Magyar Gyógyszerkönyvben Meliloti herba néven hivatalos, amely legalább 0,3% kumarint tartalmaz. Azonban másik jellemző tartalmi anyagaira, a karotinoidokra eddig még nem történtek vizsgálatok. Humán klinikai bizonyítékok alapján a herbából készült kivonat, vénás elégtelenség következtében kialakuló panaszok enyhítésére hatásosnak bizonyult. Külsőleg fekélyek és visszérgyulladás kezelésére használják. A fentiek alapján célkitűzésünk volt a növény virágzatának fitokémiai jellemzése karotinoidösszetétel szempontjából. A begyűjtött növényi anyagot háromszor metanollal, majd egyszer dietil-éterrel extraháltuk. Az egyes metanolos kivonatok egyesítése után hexán-toluol illetőleg desztillált víz elegyével a szerves fázisba vittük át a karotinoidokat. Desztillált vizes mosást követően vízmentes nátrium-szulfáton keresztül leszűrtük a kivonatot. Az így nyert teljes extraktumot éteres oldatban, heterogén fázisban (30% KOH-CH 3 OH) elhidrolizáltuk. A hidrolizátum össz-karotinoid-tartalmát UV/VIS-spektroszkópiával határoztuk meg, amely 0,257 mg karotinoid/g növényi száraz anyagra vonatkoztatva; 0,035 mg/g nedves növényi anyagra vonatkoztatva. Ezt követően HPLC vizsgálattal és spektroszkópiai módszerekkel különböző karotinoidokat azonosítottunk. A karotinoid-izolálás során oszlopkromatográfia (CLC) módszerét is alkalmaztuk. A poláris és apoláris karotinoidokat benzol-hexán (1:5) oldószerpárból történt kristályosítással különítettük el. A minta három fő komponensét, az (all-e)-violaxantint, (all-e)-lutein-5,6-epoxidot és a luteint 100%-os tisztaságban izoláltuk és szerkezetüket 1 H-NMR-spektroszkópiával és tömegspektrometriával (MALDI-TOF) is igazoltuk. További terveink közé tartozik az izolált karotinoidok farmakológiai hatásainak vizsgálata in vitro modelleken.

11 Development of 3D tissue culturing method for investigation of circulating tumor cells Csilla Kurdi, Viktória Temesfői, Tamás Kőszegi University of Pécs, Medical School, Department of Laboratory Medicine, Pécs The appearance of circulating tumor cells in the blood vessels is an accentuated step during the metastasis formation. Based on the basic properties and the surface markers of the disseminated cells we can infer to the malignity of the primary tumor and monitor the disease state. However, the absence of proper molecular and immunological knowledge and the low number of isolable circulating tumor cells set back the method s clinical utility. To get to know the metastatic activity of the tumor cells we need more information about the genetical, epigenetical and immune phenotype changes taken place during the metastasis formation. Increasing evidences support that the surrounding stroma is not only a passive bystander, in the microenvironment around a tumor a diversified network is acting. Based on these considerations, the appropriate modeling of the in vivo tissue environment plays an important role in the course of in vitro investigation of the tumor spread. Aims: We planned to develop culturing methods with circulating tumor cells isolated from breast cancer patients and to investigate the growth characteristics, the phenotype of these cells by analyzing their surface markers, cytoskeleton and viability capabilities. Our long term aim is to find relationship between the number of circulating tumor cells, the state of the disease and the effectiveness of the applied therapy. Results: As pre-investigation of future samples from breast cancer patients we started to develop and test 3D fibrin matrices with tumorigenic and non-tumorigenic cell lines. We prepared fibrin matrix either from human plasma or using purified fibrinogen by addition of thrombin in calcium containing buffer and optimized the structure of the matrix to be suitable for cell culturing. By dint of fluorescent dyes and microscopic methods we observed the location and migration of the inoculated cells.

12 Illóolajok mikrobiológiai aktivitásának vizsgálata vékonyréteg kromatográfiával és bioautográfiával Tigyi Bettina Mariann, Horváth Györgyi PTE ÁOK Farmakognóziai Tanszék Az illóolajok biológiailag aktív növényi termékek, melyek terápiás használata napjainkban egyre nagyobb teret nyer. A felső légúti fertőzések kezelése, az antibiotikum rezisztencia terjedése miatt egyre nagyobb problémát jelent. Kutatásunk során, 4 a népi gyógyászatban is használatos és néhány a VIII. Magyar Gyógyszerkönyvben is hivatalos illóolajok (édeskömény, fodormenta, rozmaring, fahéjolaj) kémiai összetételének analízisét végeztük és mikrobiológiai aktivitásukat vizsgáltuk, Staphylococcus aureus, S. epidermidis, methicillin-rezisztens S. aureus (MRSA), Escherichia coli, Micrococcus luteus és Bacillus subtilis törzseken.az illóolajok összetételének vizsgálatát vékonyréteg kromatográfiával, gázkromatográfiával (GC) és gázkromatográfiával összekötött tömegspekrometriával(gc/ms) végeztük el. A mikrobiológiai aktivitás vizsgálatát előhívás nélküli vékonyréteg kromatográfiával és bioautográfiával végeztük. Az antimikrobás hatást, mind összillóolaj vizsgálattal és a főösszetevőkkel is teszteltük a bacterium törzsekkel szemben. Eredményeink alapján a legérzékenyebb törzs az Escherichia coli volt, míg a leggyengébb antimikrobás hatással a rozmaring olaj rendelkezett. A többi illóolaj változó aktivitással mutatott antimikrobás hatást a különböző törzsekkel szemben. Kutatásunkat egy felsőlégúti, egér inhalációs modellen szeretnénk folytatni a közeljövőben.

13 A lép-fejlődés genetikai szabályozásának változása Nkx2-3 transzkripciós faktor hiányában Szabó Petra Lujza, Balogh Péter PTE KK Immunológiai és Biotechnológiai Intézet A lép a legnagyobb másodlagos nyirokszervünk, mely a fejlődéséhez különböző transzkripciós faktorok megfelelő működését igényli. Ezek között egy hierarchikus szabályozó hálózatot állapítottak meg, melynek tagjai között nagy számban fordulnak elő az Nkx homeodomén transzkripciós faktor-család tagjai. Bizonyos faktorok hiányában a lép vagy nem fejlődik ki (Nkx2.5 és Nkx3.2), vagy aberráns szerkezetet mutat (Nkx2.3). Az Nkx2-3 gén az egér lép posztnatális szerkezeti fejlődésében játszik fontos szerepet, ugyanakkor pontos jelentősége nem ismert. Munkánk célja az Nkx2-3 transzkripciós faktornak a lép morfogenezisét szabályozó genetikai hálózatban betöltött szerepének vizsgálata volt. Célunk annak megállapítása, hogy az Nkx2-3 gén hiánya milyen hatással van a lép fejlődését irányító többi szabályozó gén kifejeződésére. A kísérleti rendszerünkben Nkx2-3-/- és BALB/c vad típusú újszülött egerek lépéből származó RNS mintákat használtunk. Az alkalmazható módszerek közül a kvantitatív valós idejű PCR technikát választottuk, amivel a lép morfogenetikai transzkripcionális irányítói közül az Nkx3.2, Nkx2.5, Sox11, Pbx1, Tlx1 és Wt1 mrns kifejeződést vizsgáltuk. A génkifejeződés változásának mértékét a referenciaként választott hipoxantin-guanin-foszforiboziltranszferáz enzim génhez viszonyítottuk. Vizsgálataink során megállapítottuk, hogy az Nkx2-3 transzkripciós faktor hiányában az Nkx3.2, az Nkx2.5, a Sox11, a Pbx1, a Tlx1 és a Wt1 gének kifejeződése eltérő mértékben változott. Legkisebb mértékben az Nkx3.2 csökkent, míg a többi faktor esetében közel azonos mértékű, de erőteljesebb csökkenést tapasztaltunk. Az Nkx2-3 gén által kódolt transzkripciós faktor tehát komplex módon megváltoztatja bizonyos morfogenetikai faktorok expresszióját, ugyanakkor ez a gátló hatás nem elégséges a lép-fejlődés teljes megakadályozásához.