Cholnoky Scientific Student Society Opening Day

Átírás

1 Cholnoky Scientific Student Society Opening Day 19 th September 2014 Abstract book Sponsors

2 Illóolajok antimikrobás hatásának vizsgálata multidrog-rezisztens baktériumtörzseken Ács Kamilla 1, Bencsik Tímea 1, Böszörményi Andrea 2, Kocsis Béla 3, Horváth Györgyi 1 1 Pécsi Tudományegyetem, ÁOK, Farmakognóziai Tanszék, Pécs 2 Semmelweis Egyetem, GYTK, Farmakognóziai Intézet, Budapest 3 Pécsi Tudományegyetem, ÁOK, Orvosi Mikrobiológiai és Immunitástani Intézet, Pécs Az egyre nagyobb számban megjelenő gyógyszer-rezisztens baktériumok elleni küzdelem, az egészségügy nehéz, ugyanakkor fontos feladata. Bár az illóolajok fertőtlenítőként történő alkalmazása egészen az ókorig nyúlik vissza, az utóbbi évtizedekben számos in vitro vizsgálat is igazolta antimikrobás tulajdonságukat több mikroorganizmussal szemben. Előnyük, hogy komplex összetételüknek köszönhetően nehezebben alakul ki velük szemben rezisztencia, az illóolaj-komponensek eltérő hatásmechanizmusa pedig eredményesebb hatást tesz lehetővé. A fentiek alapján vizsgálataink során célul tűztük ki a fahéj-, kakukkfű-, szegfűszeg-, erdeifenyő- és eukaliptuszolaj antimikrobás hatásának értékelését multidrog-rezisztens baktériumokon, különböző in vitro módszerek alkalmazásával. A felhasznált illóolajok beszerzése hazai gyártótól (Aromax Zrt.), minőségi és mennyiségi összetételük meghatározása gázkromatográfiás eljárással történt. Az antibakteriális hatás vizsgálatához csőhígítást, direkt bioautográfiát és gőzteres módszereket alkalmaztunk, meticillin-rezisztens Staphylococcus aureus (MRSA 4262), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) és multidrog-rezisztens Pseudomonas aeruginosa (34205) törzsek bevonásával. A gőzteres vizsgálatok során az illékony komponensek által kialakított légtér antimikrobás hatásának értékelése történt. A kutatás eredményeként a minimális gátló- (MIC) valamint a minimális baktericid koncentrációkat (MBC), illetve a létrejött gátlási zónák átmérőit meghatároztuk meg. Pozitív kontrollként a mikroorganizmusoknak megfelelő antibiotikumokat alkalmaztunk (vankomicin, ciprofloxacin, polymyxin B). A fahéj-, szegfűszeg- valamint a kakukkfű illóolaja mindhárom baktériummal szemben erős antimikrobás hatást tanusított. MRSA esetén a szegfűszeg (MIC: 0,1 μg/ml), multidrogrezisztens Pseudomonas esetén pedig a fahéj olaja (30 mg/ml: 8 mm) bizonyult leghatásosabbnak. Az erdeifenyő valamint az eukaliptusz olaja gyengébb hatást mutatott az általunk vizsgált törzsekkel szemben. Az eddig elvégzett gőzteres vizsgálatok során a fahéj (125 μl/l) valamint a szegfűszeg olaját (250 μl/l) találtuk eredményesnek. További terveink között szerepel, jelenleg folyamatban levő gőzteres vizsgálataink mellett, más baktériumok és illóolajok bevonása kutatásunkba, valamint az antimikrobás hatás in vivo állatmodelleken történő megfigyelése is. Munkánkhoz támogatást az OTKA PD pályázat nyújtott. Felhasznált irodalom: M. K. Rai, K. V. Kon (2013) Fighting mutidrug resistance with herbal extracts, essential oils and their components. Academic Press - Elsevier, London

3 Studies of 2-(4-methoxyphenylmethylene)-1-benzosuberone cytotoxic properties in a lung adenocarcinoma cell line, A549 and in primary human fibroblasts Kitti Andreidesz 1, Edit Kiss 1, David Ernszt 1, Monika Avdicevic 1, Pal Perjesi 2, Judit E. Pongracz 1 1 Department of Pharmaceutical Biotechnology, 2 Department of Pharmaceutical Chemistry, The Medical School, University of Pécs Survival statistics indicate that lung cancer is the most aggressive form of cancers leading to more than 1 million deaths per year. Despite of several clinical treatments such as combination chemotherapy and chemo-radiation or chemo-monoclonal therapy, patient survival has hardly improved over the past few decades and the estimated five-year survival rates are still disappointing. Therefore more and more pharmaceutical researchers explore novel avenues and design new drugs to provide effective therapies for cancer patients. In a previous study it was revealed that 2-arylidene-1-benzosuberones are a group of compounds of useful cytotoxic agents tested on a panel of human tumour cell lines leading to cell cytotoxicity and inhibition of RNA and protein synthesis. The cytotoxic evaluation of these compounds showed that 2-(4-methoxyphenylmethylene)-1-benzosuberone had the greatest cytotoxicity against human malignant cells. During our experiments we tested the cytotoxic effect of this compound on A549 lung adenocarcinoma cell line and in co-cultures with normal human fibroblast (NHLF) in a conventional 2-dimensional monolayer cell culture system. To determine cell survival after drug treatment, cell suspensions of monolayers were prepared for flow cytometric analysis using 7-AAD staining. The drug-induced gene expression changes were measured by quantitative real-time PCR after 24 hour incubation period. Our results show a marked decrease of cyclin D1 proliferation marker expression in a dosedependent manner. Flow cytometric results revealed that human normal lung fibroblasts are more sensitive to the drug compared to human lung adenocarcinoma cells, A549. To investigate whether modifications of the above compound would be more effective cytotoxic agent in tumour cells, further studies are required and planned.

4 Lycium (Goji) -termések és -termékek karotinoid-tartalmának vizsgálata Balogh Réka 1, Farkas Ágnes 2, Molnár Péter 2 1 PTE ÁOK Gógyszerésztudományi Szak V. évfolyam, 2 PTE ÁOK Farmakognóziai Tanszék Napjainkban egyre nagyobb népszerűségnek örvend a két Lycium faj, a L. barbarum L. és L. chinense Mill. termése, ismertebb néven Goji bogyó. Számos jótékony hatást tulajdonítanak a bogyótermésnek, amelyek a biológiailag aktív komponenseknek köszönhetőek. Fontos zeaxantin-forrásként tartják számon, amelyet főként fizálien (zeaxantindipalmitát) formájában tartalmaz [1]. A kutatómunka során célul tűztük ki 3 különböző Lycium-termésminta és 2 készítmény karotinoid-összetételének meghatározását. Az elkészített teljes extraktumokat fordított fázisú HPLC analízisnek vetettük alá kvalitatív meghatározás céljából, illetve UV/VIS spektroszkópia segítségével a benne lévő karotinoid-mennyiséget is meghatároztuk. A biztos minőségi azonosítás a komponensek UV/VIS spektruma alapján történt. A teljes extraktumokból kristályosítással nyert termék és anyalúgjának fent leírt vizsgálata is megtörtént. Az egyes kromatogramok vizsgálatakor fő komponensként ~91%-ban zeaxantint azonosítottunk. Minor komponensekként (~9 %) anteraxantint, ß-kriptoxantint, (13Z)- zeaxantint és ß-karotint mutattunk ki. Az anyalúgban 15 féle alkotót sikerült azonosítani, amelyek között a fent említett vegyületek különféle (Z)-izomerjei is megtalálhatóak. A minták között finom különbségeket lehetett tapasztalni, egy készítményben viszont várakozásainkkal ellentétben egyáltalán nem detektáltunk karotinoidokat. Az ismeretlen eredetű termésminta a karotinoid-összetétel alapján a L. chinense-hez állt közelebb. Vizsgálataink alátámasztják, hogy a Goji bogyó magas karotinoid-tartalmának köszönhetően szerepet játszhat az egészséges tápálkozásban. Felhasznált irodalom: [1] Molnár P., Pfander H., Oláh P., Deli J., Tóth Gy., Szabó L. Gy. (2003): Kínai és magyar származású közönséges ördögcérna (Lycium barbarum L.) terméseinek karotinoid-összetétele. Olaj, szappan, kozmetika 52:

5 The role of p53 protein in nitric oxide induced cell death of PC12 cells Judit Bátor, Judit Varga, Márton Péter, Marianna Pap, József Szeberényi Department of Medical Biology, University of Pécs, Medical School, Pécs, Hungary Abstract: Nitric oxide (NO) plays a role in signal transduction events through different forms of action: by activating soluble guanylate cyclase, by binding to different metal atoms of prostetic groups of proteins, or by causing posttranslational nitrosylation of several amino acids in proteins. At cytotoxic concentrations NO induces apoptotic cell death. The p53 tumor suppressor protein has a central role in the regulation of apoptosis. Therefore to find out whether p53 is also involved in NO-induced apoptosis the effects of nitric oxide were studied in wild-type PC12 rat phaeochromocytoma cells and in a PC12 subclone (p143p53pc12) expressing a dominant inhibitory p53 protein. Sodium nitroprusside (SNP) was used as a NO donor. p143p53pc12 cells were found even more sensitive to the cytotoxic effect of SNP than their wild-type counterparts. Apoptosis induced by SNP was accompanied by proteolytic cleavage of protein kinase R, increased phosphorylation of the translation initiation factor eif2α, decreased Akt phosphorylation and sustained activation of the stress kinases c-jun N- terminal kinase (JNK) and p38mapk in both wild-type PC12 and p143p53pc12 cells. These observations indicate that the intact function of the p53 protein is not essential for the apoptotic effect of NO. Expression of the dominant negative p53 protein even increases the sensitivity of PC12 cells to the cytotoxic effects of SNP. Although the exact molecular targets of NO are not known, several stress-activated pathways may contribute to its apoptotic effect.

6 Biotechnológiai kutatási eredmények kommercializálódása és hasznosulása Dr. Bognár Rita 1 1 PTE ÁOK Pályázati és Innovációs Iroda A biotechnológia, különös tekintettel a piros biotechnológia jelentős kutatásfejlesztési, innovációs és gazdasági jelentőséggel bír. A világ népességnövekedése, a migráció, az Európai Unióban az öregedő társadalom, mind olyan többek között egészségügyi, társadalmi, szociális és gazdasági kihívások elé állítják a kutatókat, amelyek ösztönzik a különböző tudományterületek közötti együttműködést. A magyarországi biotechnológiai kutatások esetében a vállalat és kutatóhely (egyetem, kutatóközpont) közötti együttműködést az eredmények hasznosulása szempontjából vizsgálhattam a Nemzeti Kiválóság Program támogatásával. Az eredmények azt mutatják, hogy a magyar biotechnológiai tudományos kutatás, termékképzés és alkalmazás láncban jelentős szerepe van a biotechnológiai mikro, kis- és közepes méretű vállalkozásoknak a hazai és nemzetközi gyógyszeripari vállalatok mellett. Elmondható, hogy a magyar orvosi- és gyógyszerészi biotechnológiai felsőoktatás megállja a helyét mind az európai, mind a világpiaci versenyben. A kutatási eredmények hasznosulása szempontjából a képzett kutatók, az infrastrukturális háttér mellett a kutatási támogatások mértéke, a tőke, valamint a befektetői háttér és az eredmények üzleti kommunikációja is döntő szereppel bír. Kulcsszavak: biotechnológia, vállalat és kutatóhely alkalmazó lánc A kutatás a TÁMOP A/ azonosító számú Nemzeti Kiválóság Program Hazai hallgatói, illetve kutatói személyi támogatást biztosító rendszer kidolgozása és működtetése országos program című kiemelt projekt keretében zajlott. A projekt az Európai Unió támogatásával, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával valósul meg.

7 Mikroökológiai változások makroszkópos hatások? Budán Ferenc 1, Horváth Lívia Ildikó 1, Andreidesz Kitti 2, Gyöngyi Zoltán 1 és Kocsis Béla 2 Pécsi Tudományegyetem, ÁOK, 1 Orvosi Népegészségtani Intézet; 2 Orvosi Mikrobiológiai Intézet A bennünk élő a szomatikus sejteknél kb. 10-szer több baktériumot felfoghatjuk egyetlen, de összetett szervrendszerként is, ami bizonyos szervekben (pl. emésztőszervek, bőr, hüvely, stb.), mint kompartmentekben különálló, de egymással közlekedő mikrobiocönózisokra osztható. Az ezeket alkotó több száz féle faj tagjai változatosak. Egy baktérium populációt befolyásolnak endogén, exogén hatások és a mikroflóra más tagjai az ökológia elvei szerint. Az eddigi irodalom főleg a patogén ártalmak csökkentésére és a hasznos biocönózis visszaállítására fókuszál. Vajon a klasszikus ökológiai zsákmány-ragadozó szerepek (zsákmány mint adott baktérium populáció és ragadozó mint az immunrendszer) megnyilvánulnak - e a makro-biológiai szervezeten belül, mint egy mikrobiomban illetve adott makroszkópos szervekben mint mikrobiotópokban? A Voltera-elv szerint lehetséges e, hogy bizonyos fertőzések hiánya hozzájárul az autoimmun- és allergiás betegségek egyre növekvő prevalenciájához? A (mikro)biológiai diverzitásnak juthat e oly kiemelt szerep a stabilitás megőrzésében, (pl a hüvelyflóra egészséges Lactobacillus fajok profiljának a fenntartásában) ahogyan az egy hagyományos ökológiai társulás esetén várható? Főleg ezen összefüggéseket és a paramétereiknek a változása esetén várható hatásokat vesszük górcső alá jelen in silico vizsgálatunk és összefoglaló jellegű munkánk során. Emellett a számszerűsíthető patológiai és genetikai alapú monitorozásra, valamint a prebiotikumokra mint intervenciós lehetőségre is felhívjuk a figyelmet.

8 Új távlatok technológiai áttöréseken keresztül: úszó efferveszcens tabletták in vivo hatóanyag kioldódás vizsgálata Röntgen-CT-vel 1,2 Budán Ferenc, 3 Diós Péter, 1 Horváth Lívia Ildikó, 4 Andreidesz Kitti, 5 Horváth Ildikó, 1 Gyöngyi Zoltán, 3 Pál Szilárd, 4 Kocsis Béla, 5 Szigeti Krisztián és 2 Máthé Domokos Pécsi Tudományegyetem, ÁOK, 1 Orvosi Népegészségtani Intézet; 2 CROmed kft; Pécsi Tudományegyetem, ÁOK, Mikrobiológiai Intézet, 5 SOTE Biofizikai Intézet 3 Gyógyszertechnológiai és Biofarmáciai Intézet, 4 Orvosi A Rtg-CT -vel (Röntgen computed tomography) mint módszerrel a Hounsfield féle relatív attenuációs skála (HU) alapján a vizsgált térrész (region of interest, azaz ROI) Rtg-sugár elnyelése kvantifikálható. Ezt a képalkotó modalitiást a fertőző betegségekkel kapcsolatban ritkán alkalmazzák, pedig jó felbontása miatt számos kihasználatlan lehetőség rejlik benne. A Helicobacter pylori fertőzése fekélyt, gyulladást, sőt rosszindulatú daganatos megbetegedést is okozhat a gyomorban. Szükséges terápiáját (eradikálását a célszervből) komoly erőfeszítésekkel fejlesztik, mert a gyógyszer-rezisztencia nehezíti azt. A tabletta, jó adagolást, relatív kellemes használatot és reprodukálhatóságot biztosító gyógyszerforma. A nátrium-alginát alapú és nátrium-hidrogénkarbonátot tartalmazó tabletta a gyomornedvvel érintkezve duzzadni kezd, széd-dioxidot fejleszt, ami a gélszerkezetbe záródik, sűrűséget csökkent és így megindítja az úszás folyamatát. Ezért az említett betegségben kiváló választásnak tűnik az alkalmazása. Kutatócsoportjaink összefogásával gyomorban úszó és potenciálisan nyújtott hatóanyag leadású tablettát fejlesztettünk és monitoroztunk. In vivo, patkány gyomrában kiviteleztük a tesztelést. Legjobb tudomásunk szerint elsőként alkalmaztunk Rtg-CT-t (NanoSPECT/CT PLUS (Mediso Kft., Magyarország) a lebegő tabletták szétesésének időbeni lefutás vizsgálatára, kvantifikálható módon. Eredményeink alapján a kifejlesztett tabletta új távlatokat nyithat a H. pylori fertőzés gyógyításában. Továbbá módszerünkkel más összetételű tabletták is monitorozhatók.

9 POSZTER Nátrium-alginát alapú efferveszcens úszótabletták in vitro és in vivo gyógyszertechnológiai és biofarmáciai vizsgálata és optimalizálása 1 Diós Péter, 2,3 Budán Ferenc, 4 Horváth Ildikó, 4 Szigeti Krisztián, 2 Máthé Domokos, 1 Dévay Attila PTE, ÁOK, GYOSZ, 1 Gyógyszertechnológiai és Biofarmáciai Intézet; PTE, ÁOK, 3 Orvosi Népegészségtani Intézet; 2 CROmed kft; 4 SOTE, Biofizikai Intézet A módosított hatóanyag-leadású készítmények azon terápiás rendszerek, melyekben a hatóanyagfelszabadulásának idejét, helyét, típusát, mechanizmusát módosították a megfelelő biohasznosulás érdekében, egy meghatározott terápiás cél elérése. Ilyenek a gasztroretentív készítmények, melyek a gyomorban nyújtott tartózkodási idejűek. Ennek elérése érdekében számos gyógyszertechnológiai megoldást fejlesztettek ki: úszó-, expanzív-, nagysűrűségű- és mukoadhéziós rendszereket. Azon készítményeket nevezzük úszó hatóanyag-leadó rendszereknek, melyek adagolásukat követően, a gyomorban bizonyos idő elteltével (a csökkent sűrűségük miatt) a gyomornedv felszínén képesek úszni. Az úszó rendszerek hosszú gyomor retenciós ideje lehetőséget adhat egy szabályozott, nyújtott hatóanyag-leadású készítmény fejlesztésére. Felhasználása irányulhat a gyomor lokális terápiájára, vagy a bélrendszer elérését megelőzően történő, nyújtott hatóanyag kioldódás is cél lehet. In vitro kísérleteinkben metronidazol hatóanyagot tartalmazó úszó és dezintegrálódó készítmény optimalizálását végeztük el. A megfelelő úszási kinetikájú tablettából, közel egy óra alatt szabadult fel a teljes hatóanyag-tartalom. Az összetételeket háromfaktoros központi kompozíciós kísérletterv alkalmazásával határoztuk meg. Az optimális összetételű készítményt az arányok megtartása mellett bárium-szulfát kontrasztanyag hozzáadásával patkányban in vivo röntgen/ct-s (NanoSPECT/CT PLUS (Mediso Kft., Magyarország) képalkotással vizsgáltuk. Kooperációnk keretében további kísérleteket tervezünk, melyek a gasztrointesztinális betegségek gyulladások, daganatok, sőt fertőzések diagnosztikájában és terápiájában is jelentős eredményeket hozhatnak.

10 Browning of thymic stromal network: changes in UCP1 expression level during ageing. Ernszt Dávid 1, Keller Zsófia 2, Kvell Krisztián 1 1: Department of Pharmaceutical Biotechnology, University of Pecs, Hungary 2: Master's Programme in Biomedicine and Biotechnology, University of Veterinary Medicine, Vienna Austria Introduction: in the middle of 2000 s there were significant debates about the UCP1 content of thymus. Some research groups supported the idea of the presence of UCP1 in the thymus, while others claimed that UCP1 is an exclusive marker of brown adipose tissue. Finally functional UCP1 has been demonstrated in thymocytes on mrna and protein level. However UCP1 content of thymic stromal cells like epithelia have not been studied up to today. Methods: in the investigation 1 month- and 9 month-old BalbC mice or dexamethasone- (Dx) treated and untreated Tep1 cell lines were used. Thymic sections were stained for EpCAM1 and UCP1molecules. Cytospin slides of Tep1 cells were stained for UCP1 with nuclear counter-stain. Expression level of UCP1 was measured by RT-PCR in Tep1 cells and isolated epithelial cells from mouse thymus. Results: The presence of UCP1 was shown in both the cell line and mouse thymic epithelial cells. An increased expression level was detected in 9 month-old mice compared to 1 monthold mice. This phenomenon was confirmed by immune-fluorescent staining, where the 9 month-old thymus sample showed a stronger staining for UCP1. Furthermore, Dx-treated Tep1 cells also showed increased UCP1 expression on both mrna and protein level. Conclusion: Tep1 is a thymic epithelium-derived cell line. Dx treatment of Tep1 cell is an in vitro model for thymic ageing. As UCP1 was found in this cell line and its expression is elevated by Dx treatment it motivated us to investigate the presence of UCP1 in thymic epithelial cells in old mice. As we expected UCP1 expression was detected in purified thymic epithelial cells. The age associated elevation of UCP1 expression has been observed. These results were confirmed at protein level by immune-fluorescent staining. The adipose involution of thymus is already proved. But it is still not clear, what type of adipose tissue the thymic epithelium differentiates into. UCP1 is a brown adipose tissue marker. From the age associated elevation of UCP1 we can conclude that the thymic epithelium differentiates into brown fat or brown fat-like tissue e.g.: beige adipose tissue.

11 Szeged - New Orleans - Debrecen - Miami - transzatlanti utazás a receptorok szárnyán Halmos Gábor Tanszékvezető egyetemi tanár, Debreceni Egyetem GYTK Biofarmácia Tanszék, Debrecen Research Professor, University of Miami/V.A. Medical Center, Miami, FL, USA Egyre több bizonyíték támasztja alá specifikus, nagy affinitású peptid hormon receptorok expresszióját humán daganatokban. Citotoxikus gyógyszermolekulákkal, illetve radioaktív izotópokkal konjugált peptid hormon analógok képesek kötődni a humán daganat sejteken található specifikus receptoraikhoz, ezzel a modern célzott kemo- és radioterápia, valamint a molekuláris képalkotó diagnosztika egyik alapját képezhetik. Kutatásaink célja a hipotalamikus peptid hormon receptorok tumorbiológiai és funkcionális jelentőségének vizsgálata. Elsősorban humán rosszindulatú daganatokban valamint kísérleti sejtvonalakon tanulmányozzuk, hogy milyen szignáltranszdukciós utakon keresztül valósul meg a különféle peptid hormon analógok tumornövekedést gátló hatása. Valamint a citotoxikus peptid hormon analógokkal történő kezelés által kiváltott sejtszintű változások vizsgálata RNS és fehérje szinten és radioaktívan jelzett analógok alkalmasak-e ezen daganatok in vivo diagnosztikai célú felhasználására. A hipotalamikus releasing hormon receptorokkal kapcsolatos kutatásainkból származó eredményeink hozzájárulnak a rosszindulatú daganatos megbetegedések, ezen belül elsősorban a humán emlő-, endometrium-, ovárium, tüdő-, vastagbél-, prosztata, vese, hólyag cc., uveális melanóma, neuroblasztoma, glioma ill vérképző szervi és egyéb rákos megbetegedések, valamint más humán daganatok patofiziológiájának pontosabb felderítéséhez, új terápiás targetek azonosításához, a daganat ellenes hatásokban szerepet játszó jelátviteli folyamatok tisztázásához és a rendelkezésünkre álló diagnosztikai módszerek továbbfejlesztéséhez, végső soron hazai és nemzetközi szinten is új típusú, korszerű molekuláris támadáspontú gyógyszerkészítmények és diagnosztikumok kifejlesztéséhez.

12 Szomatosztatin receptorok, mint molekuláris célpontok vizsgálata humán uvealis melanomában Harda Kristóf Debreceni Egyetem GYTK Biofarmácia Tanszék Az uvealis melanoma a szem leggyakoribb primer daganatos megbetegedése. Agresszív viselkedését bizonyítja, hogy a diagnózis felállításakor a betegek közel 50%-ánál már kimutatható áttét. Függetlenül a jelenlegi szisztémás terápiától, a metasztázisos betegek átlagos túlélése 2-7 hónap. A szomatosztatin (SST) mint hormonális neuropeptid, a szervezetben számos helyen termelődő, sokféle szabályozási folyamatban szerepet játszó anyag. Részt vesz az endokrin funkciók szabályozásában, a neurotranszmisszióban, de befolyásolja a sejtproliferációt is. Kimutatták, hogy a szomatosztatin igen hatékony analógjai alkalmasak tumornövekedés gátlására is. A SST hatását specifikus SST receptorokon (SSTR) keresztül fejti ki, melyből eddig öt altípust (SSTR1-5) izoláltak és karakterizáltak. Ezek közül a terápia szempontjából legfontosabb kettes és ötös receptorok bizonyítottan megtalálhatóak számos neuroendokrin és nem-neuroendokrin daganatban, de expressziójukat humán uvealis melanomában még nem (SSTR5) vagy csak nagyon kis mintaszámon (SSTR2) vizsgálták. Kísérleteink során a Debreceni Egyetem OEC Szemklinikáján műtétileg eltávolított 46 humán uvealis melanomán és 3 normál uvea szövetmintán végeztünk a SST receptoriális vizsgálatokat mrns szinten RT-PCR módszerrel. Ennek során szövetmintából teljes RNS-t izoláltunk, majd reverz transzkripciót követő polimeráz láncreakciót (RT-PCR) alkalmazva specifikus oligonukleotid primerek segítségével mutattuk ki a SSTR2 és SSTR5 mrns szintű expresszióját. Eredményeink szerint az uvealis melanomák jelentős része (67,5%) expresszálja az SSTR2 mrns-ét, míg a SSTR5 az eddig vizsgált minták 66,6%-ában volt detektálható. A normál uvea mintákból izolált RNS-eken végzett vizsgálatok eredménye szerint mindössze egy mintában SSTR2 expresszió kimutatható volt. A peptid hormon analógok könnyű előállíthatósága, gyors internalizációja és clearence-e, valamint megfelelő tumorszövet penetrációja miatt előnyös alternatívát jelentenek a célzott daganatterápia számára. A vizsgált daganatszövetekben megfigyelt jelentős SSTR expresszió pedig felveti az altípus specifikus SST-analógok klinikai alkalmazásának lehetőségét ennél a tumortípusnál, és azok radionuklid vagy citotoxikus konjugált származékainak célzott terápiás vagy diagnosztikai alkalmazását. Kutatási támogatás: TÁMOP A-11/1/KONV , OTKA K81596

13 Title: Career opportunities for pharmacy graduates: thinking outside the (pill) box Abstract: The career choice for pharmacy graduates seems clear; work as a pharmacist in the community or in a hospital. However, a degree in pharmacy offers many more career opportunities, ranging from general graduate careers (accountancy, management, teaching etc) to those where you can make more use of your pharmacy background (work in the pharmaceutical industry, academic research, science writer etc). This presentation will explore the skills and attributes that you will develop during your studies and how these could be off use in a wide range of careers. Professor Mary Keen Pharmacy and Therapeutics School of Clinical and Experimental Medicine College of Medical and Dental Science University of Birmingham Birmingham B15 2TT

14 A száraz szem gyógyszerészi gondozása- megéri? Oláh Gábor Debreceni Egyetem GYTK Biofarmácia Tanszék A keratoconjuktivitis sicca az egyik leggyakrabban felállított diagnózis a szemészeti szakrendeléseken. A 40 év feletti népesség 12-20%-a érintett a betegséggel, ami a korral fokozatosan nő. A kezeletlen vagy rosszul kezelt betegség nagymértékben rontja a beteg életminőségét és élethosszig tartó szemfelszíni károsodásokat eredményezhet. Megfigyeléseink alapján a száraz szem szindróma tüneteitől szenvedők túlnyomó többsége közvetlenül a gyógyszertárakban keres megoldást betegségére. A Magyarországon rendelkezésünkre álló több mint 30 féle műkönny túlnyomó többsége nem gyógyszerként kerül forgalomba, emiatt meglehetősen nehezített a gyógyszerészek és orvosok megfelelő minőségű informálása ebben a témakörben. Korábbi törekvéseink eredményeként gyógyszerész szakmai szempontok alapján csoportosítottuk a műkönnyeket és ajánlást készítettünk a hazai forgalmi adatok alapján a hatékonyabb terápiás megoldásokra. Az eredmények alapján a gyógyszerészi gondozás aktív és szakszerű alkalmazása egyértelmű egészségnyereséget jelent a betegek számára és meglehetősen költséghatékony az egészségügyi rendszer részére. A gyógyszertárak számára pedig bizonyos esetekben már középtávon jövedelmező tevékenység lehet. Ugyanakkor ezen előnyök elérése fokozott figyelmet, nagy felkészültséget, pártatlanságot és sok időt is igényel, ami a gyógyszertárak jelenlegi humán erőforrási, bérügyi és jogszabályi környezetben csak az elvárhatón túli erőfeszítésekkel teljesíthető. Gyógyszertárakban rejlő legnagyobb érték a gyógyszerészek szaktudása, mindent el kell követnünk azért, hogy ezt az értéket a betegek számára minél egyszerűbben elérhetővé tegyük.

15 A hiánycikknek minősülő onkológiai gyógyszerek online beszerezhetősége Dr. Fittler András egyetemi adjunktus, Dr. Vida Róbert egyetemi gyakornok, Rádics Valter PTE ÁOK Gyógyszerészeti Intézet és Klinikai Központi Gyógyszertár Bevezetés: Az elmúlt években világszinten vált mindennapos problémává a gyógyszerhiány, különösen az onkológia területén. A gyógyszerellátási gondok által érintett betegeket és orvosaikat gyakran cselekvésre ösztönzik ezek a helyzetek, nem ritkán alternatív források útján kívánják megoldani a készítmények beszerzését. Magyarországon és világszerte több tízezer gyógyszert forgalmazó honlap üzemel, túlnyomó többségük illegális. Az interneten keresztül receptköteles készítmények és akár a hiánycikknek minősülő termékek is beszerezhetőek, azonban kevés a garancia ezek hatékonyságára és biztonságosságára. Módszer: Vizsgálatunkban a Magyarországon hiánycikké minősített gyógyszerkészítmények internetes beszerezhetőségét vizsgáltuk. A GYEMSZI-OGYI gyógyszer hiánycikk listában szereplő ATC L01 csoportba eső 43 onkológiai készítményt (16 hatóanyagot) vizsgáltuk a Google keresőmotor segítségével angol és magyar nyelven 2013 októberében. Eredmények: A 16 daganatellenes hatóanyag közül 15 (93,8%) beszerezhetőnek bizonyult. A találati listákon megjelenő 121 releváns web linket került értékelésre, melyek közt internetes gyógyszertárak, átirányító (linkgyűjtemény) oldalak (n=26) és közösségi oldalak (n=36) szerepeltek. Az onkológiai készítményeket összesen 31 internetes gyógyszertár forgalmazta, melyek közel felét (n=14, 45,2%) illegális gyógyszertárként tartanak nyilván. Számos online forgalmazó több onkológiai szert is árusít, a termékek árai közt olykor tízszeres nagyságrendű eltéréssel. Az internetes források 72,2%-nál recept nélkül elérhetőek voltak a keresett onkológiai termékek. A gyógyszerek adagolására, hatásaira és mellékhatásaira vonatkozó tájékoztatás legtöbb esetben hiányzott vagy hiányos volt. Felhasznált irodalom: International Journal of Pharmacy Practice 2013, 21, pp. 1 2, Gyógyszereink 62. évfolyam 6. szám, jop.ascopubs.org, Report on the ISPE Drug Shortages Survey, EAHP POLICY BRIEFINGS, Report of theinternational Summit on Medicines Shortage by fip

16 Kiegészítő termékek alkalmazása és hatása a terápiára Bolha vagy elefánt? Somogyi-Végh Anna PTE ÁOK Gyógyszerészeti Intézet A gyógyszeres terápia mellett gyakran kiegészítőként alkalmazott termékek (étrendkiegészítők, gyógynövények stb.) népszerűsége jelentősen megnőtt az elmúlt évtizedekben, új kihívások elé állítva ezzel az egészségügyi szakembereket. PhD munkám során elsősorban a káros gyógyszerinterakciók veszélyével foglalkozom. Ezen kölcsönhatásokra bár befolyásolhatják a kezelés biztonságosságát és hatékonyságát a terápia során legtöbbször nem derül fény es felmérésünkben a megkérdezett belgyógyászati betegek 85,5%-a alkalmazta az említett termékkört a felírt gyógyszereivel párhuzamosan, ennek következtében a betegek 45%-ánál azonosítottunk potenciálisan súlyos kölcsönhatást. Jóllehet a lehetséges interakciók száma nagy, a gyakorlatban ezek kis hányada bír csupán jelentőséggel. A kölcsönhatások többségének klinikai relevanciája a szakirodalomban is vitatott, ez az interakciós adatbázisok szintjén is megmutatkozik. Álláspontunk szerint a kölcsönhatások egységesebb, gyakorló szakember számára is hasznosabb értékelése a bizonyítékokon alapuló értékelés módszertanának adaptálásával valósítható meg, azaz egy-egy kölcsönhatás bizonyító erősségének képzésével a hátterében álló közlések, tanulmányok alapján. A legfontosabb figyelembe veendő szempontok a bizonyítékok típusa, mennyisége és minősége, az eredő nem kívánt hatás klinikai relevanciája, incidenciája, valamint a kockázatát módosító tényezők. Álláspontunk szerint ez a továbblépés a bizonyítékokon alapuló értékelés módszertanának adaptálásával valósítható meg. A gyógyszer-gyógynövény interakciók kapcsán felmerülő speciális szempont, hogy pontosan mire vonatkozik a bizonyíték: azonosítható-e melyik fajra, mely növényi részre és annak milyen termékére írták le a kölcsönhatást.

17 A tachykinin rendszer és a TRPV1 receptorok szerepe légúti és bélgyulladás modellben. Szitter István 1,2, Pintér Erika 1,2, Helyes Zsuzsanna 1,2 1 PTE ÁOK Farmakológiai és Farmakoterápiai Intézet 2 Szentágothai János Kutatóközpont A neurogén gyulladás koncepciója már évtizedek óta elfogadott elmélet. Ebben a folyamatban kulcsszerepet töltenek be a kapszaicin-érzékeny érzőideg végződésen található Tranziens Receptor Potenciál Vanilloid 1 (TRPV1) receptor és az aktivációja során felszabaduló különböző tachykininek. A tachykininek és receptoraik alkotják a tachykinin rendszert, amely test szerte fontos szerepet tölt be a gyulladásos folyamatok mediálásában. A légutak és a bélrendszer nagymértékben nyitott a külvilág felé, gyakori gyulladásos megbetegedéseik sok embert érintenek, ezért fontos a mechanizmusok pontos feltárása, új farmakológiai célpontok azonosítása. Előadásomban áttekintjük az általunk alkalmazott experimentális légúti és bélgyulladás modelleket. Genetikailag módosított egereken végzett kísérleteink során bizonyítékot nyertünk, hogy a TRPV1 receptorok aktivációja szerepet játszik a bélgyulladás folyamatában, míg a krónikus dohányfüst expozíció során kialakuló légúti gyulladásban protektív hatású. Dextrán-szulfáttal kiváltott colitisben a neurokinin 1 (NK1) receptorok gátlása csökkentette a gyulladás súlyosságát. Bakteriális lipopoliszacharid (LPS) kiváltotta akut légúti gyulladásban szintén kisebb mértékű gyulladást tapasztaltunk tachykinin 1 (TAC1) génhiányos egértörzsben. Ezek alapján a tachykinin rendszer és a TRPV1 receptorok kapcsolatát ígéretes farmakológiai célpontnak tekinthetjük.

18 Nitroxidokkal és elővegyületeikkel módosított PARP inhibitorok szintézise és vizsgálata Szuroczki Péter a, Kégl Tímea b,c, Kálai Tamás a,c, Sümegi Balázs d, Hideg Kálmán a a PTE ÁOK Szerves és Gyógyszerkémiai Intézet b PTE TTK Szervetlen Kémia Tanszék és MTA-PTE Szelektív Kémiai Szintézisek Kutatócsoport c Szentágothai János Kutatóközpont d PTE ÁOK Biokémiai és Orvosi Kémiai Intézet A poli(adp-ribóz) polimeráz-1 (PARP-1) valamennyi eukarióta sejtben megtalálható többfunkciós enzim, melyet a DNS száltörése aktivál. Az enzim nikotinamid-adenindinukleotid (NAD + ) hasításával képződő ADP-ribóz egységeket kapcsol a DNS-hez kötött fehérjékhez (hisztonok, topoizomerázok, DNS polimeráz, DNS ligáz és maga a PARP-1). Nagyfokú DNS károsodás esetén az enzim túlműködése a sejt NAD + és ATP készleteinek gyors feléléséhez vezet, melynek eredménye nekrotikus sejthalál lehet. Az utóbbi évtizedben számos PARP-inhibítort szintetizáltak, amelyek már klinikai tesztelés alatt állnak. 1 Intézetünkben olyan új benzimidazol- (I) és kinazolin-vázas (II) PARP-1 inhibitorokat fejlesztettünk ki, melyeket nitroxidokkal és elővegyületeikkel módosítottunk megnövelve azok hatékonyságát. 2,3 Előadásunkban a kutatás kiterjesztését mutatjuk be új kinolin- (III) 4 és kinoxalinvázas (IV) származékokra, ismertetve a kémiai szintéziseket, valamint a szerkezethatás összefüggéseket és a dokkolásos modellszámításokat. 1. Steffen, J. D.; Brody, J. R.; Armen, R. S.; Pascal, J. M. Frontiers in Oncol. 2013, 3, Article Bartha, É.; Kiss, Gy.; Kalman, E.; Kulcsár, Gy.; Kálai, T.; Hideg, K.; Habon, T. Sümegi, B.; Tóth, K.; Halmosi, R. J. Cardiovasc. Pharm. 2008, 52, Kálai, T.; Balog, M.; Szabó, A.;, Gulyás, G.; Jekő, J.; Sümegi, B.; Hideg, K. J. Med. Chem. 2009, 52, Lord, A M.; Mahon, M. F.; Lloyd, M. D.; Threadgill, M. D. J. Med. Chem. 2009, 52, 868.

19 Cadherin expression in 3D engineered human lung tissues following VEGF overexpression Kattia Ufión 1, Judit Rapp 1, Judit E. Pongrácz 1 1 University of Pécs, Medical School, Department of Pharmaceutical Biotechnology Cadherins are important players of cell adhesion. In order to maintain cell-cell junctions and solid tissues, constitutive expression of appropriate cadherins are required. The type of the expressed cadherin and its gene expression level define the nature of cell adhesion. There are three main types of cadherins, namely the E-, N- and VE- cadherin. E-cadherin is responsible for maintenance of epithelial cell-cell contact, N-cadherin is only expressed on neuronal cells, and thus VE-cadherin regulates endothelial junctions. Numerous molecules and processes have been proposed for regulation of their expression, leading to altered cellular contacts. Several growth factors behave as regulators; and they can cause dramatic alterations in adherent properties. VEGF is one of the key elements in angiogenic processes. It modulates vascular integrity and endothelial connections via adhesive molecules. Our primary aim was to investigate cadherin expression in three-dimensional lung cell cultures in the absence or presence of VEGF. 3-dimensional cell cultures were set up using the three major cell types of the lung, namely SAEC (small airway epithelial cell), F11 (fibroblast) and HMVEC (human microvascular endothelial cell). To gain VEGF excess, we used a stable transfected fibroblast cell line in the 3D cell cultures. After 72 hours of culturing, RNA isolation and cdna expression was performed. Gene expression levels were determined by qrt-pcr while protein levels of E- cadherin were confirmed by immunofluorescent microscopy using E-cadherin specific antibody. In the presence of VEGF, the expression of both E- and VE-cadherin increased in the 3D lung tissue cultures. Decreased N-cadherin expression was also observed. Interestingly, in the absence of VEGF, no VE-cadherin was detected. As VEGF is the key regulator of angiogenesis; it is not surprising that can modulate endothelial integrity via altered cadherin expression. Further studies are required, however, to reveal the precise mechanism of VEGF regulated angiogenesis.

20 Mikroglia in vitro primer tenyészet készítése Varga E., Dudás R., Pandur E., Sipos K. PTE ÁOK, Gyógyszerészi Biológia Tanszék A mezodermális eredetű mikrogliák az agy rezidens immunsejtjei, amelyek az egyedfejlődés folyamán lépnek be a központi idegrendszerbe. A mikrogliák felelősek az agy homeosztázisának fenntartásáért, részt vesznek a mielinizációban, a szinaptikus kapcsolatok létrehozásában és nem utolsó sorban az első védelmi vonalat képviselik a központi idegrendszert érő különböző patológiás elváltozások és fertőzések folyamán. Az agy teljes sejtpopulációjának 12%-a mikroglia sejt. Ezen sejtpopuláció izolálásával és sejtkultúrába vitelével számos, addig ismeretlen tulajdonságukat sikerült felderíteni. Kísérleteim célja újszülött egér agyszövetből izolált kevert glia kultúra létrehozása, illetve ezen sejttenyészet megfelelő körülmények között történő fenntartása, majd a mikrogliák sikeres izolációja a kevert sejtkultúrából. A mikroglia sejtek minőségi ellenőrzése áramlási citometriával történt. A kevert sejttenyészet különböző fejlődési időpontokban izolált mikroglia sejtek minőségi összehasonlítása PCR technika segítségével történt, a megfelelő izolálási időpont kiválasztására. A sejtek aktivációs képességének bizonyítására lipopoliszacharid (LPS) kezelést alkalmaztam. Eredményeim azt mutatják, hogy a kevert glia kultúrából izolált mikroglia sejtek valóban a megfelelő minőségű sejtek, amelyek képesek aktivációra LPS kezelés hatására. A jövőben tervezem ezen sejtkultúrán a mikrogliák vasanyagcseréjének vizsgálatát, hiszen ezek a sejtek fontos szerepet töltenek be az agy vashomeosztázisának szabályozásában.

21 A kapszaicin-érzékeny peptiderg érző idegsejtek protektív szerepe krónikus stressz-okozta fokozott fájdalomreakcióban egérmodellben P. Vincze 1,2, B. Scheich 1,2, V. Tékus 1,2, B. Gaszner 3, E. Pintér 1,2 és Zs. Helyes 1,2 PTE ÁOK Farmakológiai és Farmakoterápiai Intézet A krónikus distressz fájdalomküszöb-csökkenéshez és spontán fájdalom kialakulásához vezethet, valamint oki szerepet játszik számos klinikailag jelentős fájdalommal járó betegségben. Ennek mechanizmusa, főként a perifériás idegrendszerben alig ismert, így célunk a krónikus stressz nocicepcióra kifejtett hatásának, ill. ebben a peptidtartalmú érző idegsejtek szerepének vizsgálata volt. Hím CD1 egereket 4 héten keresztül krónikus immobilizációs stressznek (KIS) tettünk ki. A mechanonociceptív küszöböt dinamikus plantáris eszteziométerrel, a hideg toleranciát 0 C-os vízből való végtagkirántás látencia-méréssel, a termonociceptív küszöböt emelkedő hőmérsékletű forró lapon vizsgáltuk. A szorongást és depresszió-szerű viselkedést open field- (OFT), tail suspension- (TST) és sötét- világos doboz tesztekben (SVD), a szomatikus változásokat a testsúly, mellékvese és csecsemőmirigy tömeg-mérésével vizsgáltuk. A kapszaicin-érzékeny érző idegsejteket reziniferatoxinnal (RTX) inaktiváltuk. KIS hatására az első héttől átlagosan 20% mechanonociceptív küszöbcsökkenés és 50% hidegtolerancia-csökkenés alakult ki. A stressz szignifikánsan növelte a világos dobozfélben töltött időt, de nem befolyásolta az OFT-ben és TST ben mutatott viselkedést. RTXdeszenzibilizált egerekben a stressz-okozta mechanikai hiperalgézia szignifikánsan fokozódott. Mindkét csoportban egyformán csökkent KIS hatására a hideg allodínia, a testsúly és a csecsemőmirigy tömege, valamint növekedett a mellékvese-tömeg. Eredményeink az első bizonyítékai a kapszaicin-érzékeny érzőrendszer védő szerepére a stresszokozta fájdalomban és fokozott izgatottságban. A mediátorok és célmolekulák azonosítása áttörést jelenthet a stressz és fájdalom-pályák kapcsolatrendszereinek feltérképezésében. Felhasznált irodalom: Üceyler et al. Small fibre pathology in patients with fibromyalgia syndrome Brain 2013; Bardin et al. Chronic restraint stress induces mechanical and cold allodynia, and enhances inflammatory pain in rat: Relevance to human stress- associated painful pathologies Behavioural Brain Research 205 (2009) Khasar et al. Repeated sound stress enhances inflammatory pain in the rat Pain 116 (2005) Hong et al. Corticosterone Mediates Reciprocal Changes in CB1 and TRPV1 Receptors in Primary Sensory Neurons in the Chronically Stressed Rat Gastroenterology February 140(2): Imbe et al. Stress- induced hyperalgesia: animal models and putative mechanisms Frontiers in Bioscience 11, , September 1, 2006

22 Membrán nanocsövek, mint új kommunikációs útvonalak a sejtek között Zsolnai Dénes, Szabó-Meleg Edina, Nyitrai Miklós PTE ÁOK Biofizikai Intézet 2004-ben egy új kommunikációs struktúrákat fedeztek fel a sejtbiológia területén. Ezek olyan nanométeres nagyságrendű csövek, amelyeken keresztül információk, különböző anyagok és molekulák (pl.: vírusok, baktériumok, fehérjék és különböző sejtorganellumok) transzportálódhatnak egyik sejtből a másikba. Ez a folyamat a,,trogocytózis egyik fajtája. Ezek a nanotubulusok, másnéven membrán nanocső hidak viszonylag nagy távolságokat (10µm-150µm) összekötő sejt-sejt közötti kapcsolatot jelentenek. Extrém strukturáltságuk vékonyságukban rejlik. Megkülönböztetünk vastag 700nm-nél nagyobb átmérőjű és 700nmnél kisebb, azaz vékony nanocsöveket. Többféle sejttípus között leírták már a nanocsőképződés jelenségét, pl.: humán embrionális vesesejtek, makrofágok, humán NK (természetes ölő) és T sejtek. Ezen struktúrák megfigyelését a különböző mikroszkópok és mikroszkópiás módszerek fejlődése tette lehetővé. Munkánk során jelenleg kétféle sejttípussal dolgozunk, Cos-7 (African Green Monkey Cercopithecus Aethiops-ból származó) fibroblast-szerű vesesejtek és A20 (egér) B- lymphocyták. Ezeket a sejteket különféle mikroszkópos technikákkal vizsgáljuk mind élő, mind fixált állapotukban. Elsősorban egy Zeiss-típusú Elyra S1 SIM (Structured Illumination Microscopy) struktúrált megvilágításon alapuló, nagyfelbontású és egy lézer-pásztázó konfokális mikroszkóp segítségével tanulmányozzuk a sejteket, amely során a fő hangsúlyt a különféle transzportfolyamatokra helyezzük. Célunk a membrán nanocsövek kialakulásának, szerkezetének és funkciójának pontos megismerése. Annak ellenére, hogy világszerte sok vizsgálat és kutatás zajlott illetve zajlik napjainkban is ezen a területen, még mindig nem ismerjük pontosan a membrán nanocső képződés mechanizmusát. További kutatások tárgyát képezi a nanocsövek sejtek életében betöltött funkciója is. Felhasznált irodalom: 44. Membrán-Transzport Konferencia absztrakt füzete