Eredményeik alapján elmondhatjuk, hogy a rezveratrol az általunk alkalmazott 5 mg/ttkg-os dózisban még halmozott rizikófaktorok jelenléte esetén is



Hasonló dokumentumok
Részletes szakmai beszámoló a sz. OTKA pályázat támogatásával elvégzett munkáról és a kapott eredményekről

A peroxinitrit szerepe a késői prekondícionálással és posztkondícionálással kiváltott kardioprotekcióban. Pályázati téma összefoglalása

Apoptózis. 1. Bevezetés 2. Külső jelút 3. Belső jelút

A SZÍV VÉRELLÁTÁSI ZAVARAIT (ISZKÉMIA) KÖVETİ ELEKTROFIZIOLÓGIAI VÁLTOZÁSOK

Jelutak. Apoptózis. Apoptózis Bevezetés 2. Külső jelút 3. Belső jelút. apoptózis autofágia nekrózis. Sejtmag. Kondenzálódó sejtmag

A COPD keringésre kifejtett hatásai

Új terápiás lehetőségek (receptorok) a kardiológiában

Növényi eredető biológiailag aktív molekulastruktúrák hatásai iszkémia/reperfúzió-indukálta szívizom károsodásokkal szemben.

Fizikai aktivitás hatása a koronária betegségben kezelt és egészséges férfiak és nők körében

Zárójelentés. A) A cervix nyújthatóságának (rezisztencia) állatkísérletes meghatározása terhes és nem terhes patkányban.

Az akut simvastatin kezelés hatása az iszkémia/reperfúzió okozta kamrai aritmiákra altatott kutya modellben

Gynostemma. Kenneth Anderson: Az Ötlevelű gynostemma (Gynostemma pentahyllum) hatása:

A peroxinitrit és a capsaicin-szenzitív érző idegek szerepe a szívizom stressz adaptációjában

Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen

Programozott sejthalál formák és kulcsfehérjéinek kapcsolata - fókuszban a ferroptózis és az autofágia. V. MedInProt Konferencia November 19.

OTKA ZÁRÓJELENTÉS

A diabetes hatása a terhes patkány uterus működésére és farmakológiai reaktivitására

Hím, New Zealand nyulakat három csoportra osztottunk. Az első csoport (i) normál ún. kontroll tápot, másik (ii) csoport három hónapon át 2%-os

Zárójelentés. Gabonafélék stresszadaptációját befolyásoló jelátviteli folyamatok tanulmányozása. (K75584 sz. OTKA pályázat)

Szőlőmag extraktum hatása makrofág immunsejtek által indukált gyulladásos folyamatokra Radnai Balázs, Antus Csenge, Sümegi Balázs

A herpes simplex vírus és a rubeolavírus autofágiára gyakorolt in vitro hatásának vizsgálata

A harkányi gyógyvízzel végzett vizsgálataink eredményei psoriasisban között. Dr. Hortobágyi Judit

A troponin módszerek m analitikai bizonytalansága a diagnosztikus

A krónikus veseelégtelenség kardio-metabolikus kockázata

A TELJES SZÍV- ÉS ÉRRENDSZERI RIZIKÓ ÉS CSÖKKENTÉSÉNEK LEHETŐSÉGEI

Aktív életerő HU/KAR/0218/0001

Iszkémia/reperfúzió indukálta károsodások farmakológiai befolyásolási lehet ségei

Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen

Zárójelentés. A leukocita és trombocita funkció változások prediktív értékének vizsgálata intenzív betegellátást igénylı kórképekben

A szívizomsejt-fibroblaszt interakció szerepe a bal kamrai remodelling szabályozásában

Őssejtkezelés kardiovaszkuláris kórképekben

A KOLESZTERIN SZERKEZETE. (koleszterin v. koleszterol)

mi a cukorbetegség? DR. TSCHÜRTZ NÁNDOR, DR. HIDVÉGI TIBOR

Szakmai zárójelentés az F témaszámú OTKA pályázathoz

A szív és vázizom megbetegedések laboratóriumi diagnózisa. Dr. Miseta Attila Laboratórimi Medicina Inézet, 4624 Pécs, Ifjúság u. 13.

Gönczi Márton. PhD Tézis. Szegedi Tudományegyetem Általános Orvostudományi Kar. Multidiszciplináris Orvostudományok Doktori Iskola

Iszkémia/reperfúzió indukálta károsodások farmakológiai befolyásolási lehet ségei

Kutatási beszámoló ( )

Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen

Miért jobb? Egyedülálló előnyök koronária betegek esetén

Táplálási végpontok: még mindig csak hiedelmek? Dr. Molnár Csilla DE-OEC AITT

A koenzim Q10 fél évszázados története

Intraoperatív és sürgıs endokrin vizsgálatok. Kıszegi Tamás Pécsi Tudományegyetem Laboratóriumi Medicina Intézet

Gránátalma - a világ egyik legegészségesebb gyümölcse

Kritikus kábítószerek hatóanyag-tartalmának fokozott monitorozása II. hírlevél

Angiológiai és immunológiai kutatások antifoszfolipid szindrómában

V. Jubileumi Népegészségügyi Konferencia évi eredmények, összefüggések. Dr.habil Barna István MAESZ Programbizottság

HOPPÁ! FEJET HAJTOTTAK A JAPÁN TITOK ELŐTT HOPPÁ! FEJET HAJTOTTAK A JAPÁN TITOK ELŐTT

A helyi érzéstelenítés szövődményei. Semmelweis Egyetem, Budapest Szájsebészeti és Fogászati Klinika

MAP kinázok és a PI3K-Akt útvonal szerepe inflammációban és oxidatív stresszben

Szívbetegségek hátterében álló folyamatok megismerése a ciklusosan változó szívélettani paraméterek elemzésén keresztül

Hús és hústermék, mint funkcionális élelmiszer

Glikolízis. emberi szervezet napi glukózigénye: kb. 160 g

Asztroglia Ca 2+ szignál szerepe az Alzheimer kórban FAZEKAS CSILLA LEA NOVEMBER

Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen

39. Elmeszesedés (calcificatio)

Szívünk egészsége. Olessák Ágnes anyaga

III. melléklet. Az Alkalmazási előírás és a Betegtájékoztató vonatkozó fejezeteiben szükséges módosítások

ZÁRÓJELENTÉS SZAKMAI BESZÁMOLÓ

Tények a Goji bogyóról:

Új szignalizációs utak a prodromális fázisban. Oláh Zita

MAGYOT évi Tudományos Szimpóziuma Május 5-6, Budapest

A D-Vitamin státusz korszerű diagnosztikája

A 0 64 éves férfiak és nők cerebrovascularis betegségek okozta halálozásának relatív kockázata Magyarországon az EU 15

ELEKTROLIT VIZSGÁLATOK 1. ELEKTROLITOK

Az anti-apoptózis mechanizmus vizsgálata agyi ischaemia/hypoxia modellekben

nyomelem, étrendi forrásainak vizsgálata Dr. Gergely Valéria Bükfürdő 2010.

Daganatos betegségek megelőzése, a szűrés szerepe. Juhász Balázs, Szántó János DEOEC Onkológiai Tanszék

TÁMOP-6.1.2/LHH/11-B A MAGAS VÉRNYOMÁS ÉS RIZIKÓFAKTORAI

Mikor kezdjük a hozzátáplálást és a gliadin bevitelét. Arató András Semmelweis Egyetem I. Gyermekklinika

Mit kell tudni az ASTAXANTHIN-ról? A TÖKÉLETES ANTIOXIDÁNS

A SZÍVIZOM ENDOGÉN ADAPTÁCIÓJA, SZIGNÁL MECHANIZMUSOK, TERÁPIÁS MEGFONTOLÁSOK: KÍSÉRLETES ÉS KLINIKAI VIZSGÁLATOK

A flavonoidok az emberi szervezet számára elengedhetetlenül szükségesek, akárcsak a vitaminok, vagy az ásványi anyagok.

Q1 Q10 Vital kapszula és spray

Nano cink-oxid toxicitása stimulált UV sugárzás alatt és az N-acetilcisztein toxicitás csökkentő hatása a Panagrellus redivivus fonálféreg fajra

Dr. Galajda Zoltán DE OEC Szívsebészeti Központ

Tények a magas vérnyomásról

Újabb ismeretek a Graves-ophthalmopathia kórisméjében

Juhász Péter Prokisch József-Csorvási Éva-Petes Kata-Nemes Ildikó- Bársony Péter-Stündl László Debreceni Egyetem AGTC

A tápláléknövények legfontosabb biológiai hatásai; az optimális étrend jellemzői tápláléknövények bevitele szempontjából.

Dózis-válasz görbe A dózis válasz kapcsolat ábrázolása a legáltalánosabb módja annak, hogy bemutassunk eredményeket a tudományban vagy a klinikai

ECHOCARDIOGRAPHIÁS VIZSGÁLATOK II. Az ischaemiás történések időbeni sorrendje. Az ischaemia lehetséges kimenetele

Hiperbár oxigénkezelés a toxikológiában. dr. Ágoston Viktor Antal Péterfy Sándor utcai Kórház Toxikológia

HYPERTONIAS BETEGEK ELLÁTÁSÁNAK MINŐSÉGE

ÖREGEDÉS ÉLETTARTAM, EGÉSZSÉGES ÖREGEDÉS

A légzési lánc és az oxidatív foszforiláció

Gyógyszertári asszisztens gyógyszerellátással kapcsolatos feladatai követelménymodul szóbeli vizsgafeladatai

ZÁRÓJELENTÉS OTKA AZ ÉP ÉS KÓROS PORCSZÖVET VÁLTOZÁSA IN VITRO KÍSÉRLETEKBEN

bemutatja: BetaVuSan Orvosilag tesztelt Táplálékkiegészítő Beta vulgaris

Az onkológia alapjai. Szántó János DE OEC Onkológiai Tanszék ÁNTSZ február

A farnezol és a vörös pálmaolaj szerepe az iszkémiás/reperfúziós károsodás elleni védelemben

Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen

A nád (Phragmites australis) vizsgálata enzimes bonthatóság és bioetanol termelés szempontjából. Dr. Kálmán Gergely

Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen

2. Biotranszformáció. 3. Kiválasztás A koncentráció csökkenése, az. A biotranszformáció fıbb mechanizmusai. anyagmennyiség kiválasztása nélkül

Elektrolit kölcsönhatások tőzzománc iszapokban Peggy L. Damewood; Pemco Corporation The Vitreous Enameller 2009,60,4

Új orális véralvadásgátlók

Új, sejthalált befolyásoló tumor-asszociált fehérjék azonosítása. Dr. Szigeti András. PhD tézis. Programvezető: Dr. Balázs Sümegi, egyetemi tanár

Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen

Citrátkör, terminális oxidáció, oxidatív foszforiláció

Átírás:

A szív és érrendszeri betegségek világszerte vezetı halálokot képeznek. Jelenleg Európában, hazánkban is, és az Egyesült Államokban a szív- és érrendszeri betegségek az összhalálozás több mint 51 %-t teszik ki. A világ földrajzi régióit tekintve, a legtöbb fejlett országban a halálozás jelentısen csökkent, ugyanakkor a kelet-európai országokban, köztük hazánkban is, ez idı alatt a mortalitás drámaian emelkedett. Becslések szerint 2020-ra a fejlıdı országokban is a lakosság jelentıs részét fogja érinteni ez a betegség. A kardiovaszkuláris betegségek kétszer annyi áldozatot szednek, mint a rák. A leggyakoribb betegségek között is az elsı három helyen szerepelnek az ilyen típusú kórképek, melyeknek számos megjelenési formája létezik: szívinfarktus, angina pectoris, szívelégtelenség, ritmuszavar, érelmeszesedés. Hazánkban 2005-ben közel 80000 beteg hunyt el keringési betegségben. Magyarországon jelenleg évente ~400 milliárd Ft-ot költünk a különbözı kardiovaszkuláris megbetegedésben szenvedık (~2 millió fı) kezelésére, ezért szükségszerő ezzel a problémával törıdnünk. A diabetes szövıdményeként kialakuló kardiovaszkuláris betegségek egyre jelentısebb népegészségügyi problémát jelentenek világszerte. Éppen ezért nagyon fontos a cukorbetegség illetve a szív-, és érrendszeri betegségek közti kapcsolat felderítése, a molekuláris genetikai mechanizmusok vizsgálata a jobb és hatékonyabb terápiás lehetıségek felismerése, és kialakítása érdekében. A betegségcsoport népegészségügyi jelentıségére való tekintettel fontos azok molekuláris mechanizmusinak felderítése, a farmakológiai befolyásolási lehetıségek kutatása, amely tudományos jelentıségén túl új terápiás lehetıségeket is teremthet. Bár a rezveratrol kardioprotektív hatása jól ismert, csak kevés adattal rendelkezünk cukorbetegséggel összefüggı, kardiovaszkuláris kórképekben kifejtett hatásáról. Ezért kísérleteink során halmozott rizikófaktorral rendelkezı, elhízott és diabéteszes patkánymodellen kívántuk vizsgálni a rezveratrol hatásait. Megvizsgáltuk a rezveratrol hatását a: a vércukor-, és inzulinszintre, valamint a testtömegre a postischaemiás szívfunkciók felépülésére (kamrafibrillációk kialakulásának gyakorisága, szív frekvencia, coronaria átáramlás, aorta kiáramlás, kifejlıdı bal kamrai nyomás, infarktusos terület nagysága) a GLUT-4 glükóztranszporterek transzlokációjára az endothelin expresszióra

Eredményeik alapján elmondhatjuk, hogy a rezveratrol az általunk alkalmazott 5 mg/ttkg-os dózisban még halmozott rizikófaktorok jelenléte esetén is jótékony hatással van a szívre, sıt a diabetes, illetve a metabolikus szindróma tüneteit is enyhíti. A rezveratrol hatására ugyanis az emelkedett vércukor szint értékek csökkentek, amelyben valószínőleg az játszik szerepet, hogy fokozódik a GLUT-4 glükóztranszporterek expressziója, illetve szintézise és ezáltal növekszik a sejtek glükóz felvétele a vérbıl. Azt tapasztaltuk, hogy csökkent a túlsúlyos állatok testtömege is, amely szintén elınyös, mivel így csökken a szív terhelése. Rezveratrol hatására jelentısen javult a szív postischaemiás felépülése, csökkent a szívfrekvencia, nıtt a kifejlıdı bal kamrai nyomás, fokozódott az aorta kiáramlás, és a coronária átáramlás. Mivel a rezveratrol csökkenti az endothelin-1 expresszióját, javul a szívszövet perfúziója, és csökken az infarktusos terület nagysága. A rezveratrol az arrythmogén szabadgyököket megköti, így a reperfúzió kezdeti szakaszában kialakuló arrythmiák valószínősége is csökken. További kísérleteinkben összehasonlítottuk a Coenzyme Q10 (CoQ10) és Q9 (CoQ9) kardioprotektív hatásit iszkémia/reperfúziónek kitett izolált, dolgozó tengerimalac szív preparátumokon. Az állatokat 3 csoportba osztottuk: kontrol, CoQ10-el kezelt, CoQ9-el kezelt 30 napon keresztül. A kezelések végén a szíveket kimetszettük és dolgozó perfúziós készülékkel perfundáltuk. Vizsgáltuk a kezelések hatásait a posztiszkémiás szívfunkciók felépülésére, a reperfúzió-indukálta arrhythmiák elıfordulására az infarktusos terület nagyságára, valamint a kardiomiociták apoptózisára. Meghatároztuk továbbá a szívek CoQ9 és CoQ10 tartalmát egyaránt mőszeres analitikai technikával (HPLC, MS). Eredményeink alapján elmondhatjuk, hogy a CoQ9 és CoQ10 azonos kardioprotektív hatással rendelkeznek, ami megmutatkozott a szívfunkciók felépülésében, az arrhythmiák elıfordulásának, az infarktusos terület nagyságának és az apoptótikus sejtek számának csökkenésében. A szívek Q9 és Q10 tartalmának meghatározása rámutatott, hogy jelentıs mennyiségő CoQ9 konvertálódott CoQ10-é. Ezen eredmény alapján elmondható, hogy a CoQ9 önmagában és CoQ10-é történı konvertálódás után is csökkentheti a szívizom iszkémia/reperfúzió-indukálta károsodásokat megelızve így a sejtelhalást. A közelmúltban a mitokondriális glutaredoxin-2-rıl (Glrx2) kimutatták, hogy nagyon fontos redox regulátor az emlıs szervekben, így a szívben is. Tudomásunk szerint ez idáig nem végeztek olyan kísérleteket, melyekben a Glrx2 potenciális szerepét vizsgálták különbözı kardiovaszkuláris megbetegedésekben. Ezért megvizsgáltuk, hogy a Glrx2 overexprsssziója képes e megvédeni a szívszövetet az iszkémia/reperfúzió-indukálta apoptózissal és nekrózissal szemben. Glrx2 transzgenikus és vad típusú egerekbıl izolált szíveket 30 perc iszkémiának és 120 perc reperfúziónak vetettük alá. A transzgenikus

egerekbıl izolált szívek posztiszkémiás felépülése jelentıs mértékben jobb volt a vad típusúakkal összehasonlítva. A transzgenikus állatokokból izolált szívben szignifikáns mértékben csökkent az infarktusos terület nagysága, az apoptótikus sejtek száma, valamint csökkent a citokróm C transzlokáció és a kaszpáz-3 és -9 aktivitás. Glrx2 overexpresszió következtében csökkent a mitokondriális kardiolipin vesztés, a ROS-ok aktivitása, valamint egyensúlyban maradt a kardiális GSH/GSSH arány. További kísérletekben megvizsgáltuk a szulfhidril (SH) csoportok peroxinitrit függı oxidációjának hozzájárulását a szívizomsejtek kontraktilitásának diszfunkciójához összehasonlítva a szintén SH-oxidáló tulajdonságú 2,2-dithiodipyridinnel (DTDP) permeabilizált bal kamrai humán kardiomiocitákon. A reverzibilitás vizsgálatára különbözı antioxidánsokat használtunk: dithiothreitolt (DTT), redukált glutathiont (GSH), valamint N- acetyl-l-cysteint (NAC). Mértük a maximális izometrikus aktív erı (F o ) kifejlıdését és a cross-bridge ciklus maximális turnover -t (k tr, max ). Az SH-csoportok oxidációját egy szemi-kvantitatív Ellman s assay-vel és SH-specifikus protein biotinilálással mértük. Mind a peroxinitrit, mind pedig a DTDP koncentrációfüggı módon, csökkentette az F o értékét. Az F o DTDP által okozott nullára csökkenésével párhuzamosan az SH csoportok teljes eliminációja történt, míg a peroxinitrit esetében a szabad SH-csoportok maximális csökkenése csak 56±6% volt a kontrolhoz (100%) viszonyítva. A 2,5 mm DTDP által kiváltott F o és szabad SHcsoport csökkenés teljes mértékben visszafordítható volt DTT alkalmazásával. Ezzel ellentétben DTT csak részben állította vissza az F o értékét a teljes protein SH tartalom visszaállítása ellenére, peroxinitrit kezelés után. Bár a DTT és a NAC egyformán hatásosnak bizonyult az F o értékének helyreállásában peroxinitrit kezelés után, a NAC és a GSH nem volt képes helyreállítani sem a F o sem a k tr, max értékét DTDP kezelést követıen. Kísérleteink további részében két növényi hatóanyag a rezveratrol és a γ-tokotrienol hatását vizsgáltuk iszkémiás/reperfundált szíveken. Az állatokat 4 csoportba osztottuk az elsı rezveratrol, a második γ-tokotrienol, a harmadik csoport pedig kombinált kezelésben részesült, a negyedik csoport kontrollként szolgált. A kezelések végén az állatok szívét izoláltuk és 30 perc iszkémiának és 120 perc reperfúziónak vetettük alá. Eredményeinkbıl kiderült, hogy mind a két hatóanyag védelmet nyújtott az I/R-indukálta károsodásokkal szemben. Együttes adagolásuk során szinergikus hatást tapasztaltunk és a szívszövetet jelentısebb mértékben védték meg az I/R-indukálta károsodásokkal szemben. Erre bizonyíték az, hogy a kettıs kezelésben részesült állatok posztiszkémiás szívfunkciója szignifikáns mértékben javult a monoterápiában részesültekhez képest. További vizsgálatainkból kiderült, hogy a két vegyület külön-külön is csökkentette az infarktusos terület méretét, valamint az

apoptózist, a kontroll csoporthoz képest. A kombinált kezelésben részesült csoportban további csökkenést tapasztaltunk. Ezek mellett Western-blot segítségével vizsgáltuk a p-akt és Bcl-2 túlélési fehérjék szintjét. Eredményeink szerint az önálló kezelések is jelentıs mértékben emelték az említett fehérjék szintjét, azonban a kombinált kezelés további drasztikus növekedést eredményezett. Az apoptózis mellett vizsgáltuk az autofágia elıfordulását is. Vizsgáltuk a Beclin-1 fehérje szintjét valamint a LC3II/LC3I arányát, melyek jelentıs emelkedést mutattak a monoterápiás csoportokban a kontroll csoporthoz képest, és további jelentıs emelkedést tapasztaltunk a kombinált kezelés során is. Ezt követıen immunhisztokémiai festéssel vizsgáltuk az LC3II pozitív sejtek számát a szívszövetben I/R után, a kapott eredmények alátámasztották a Western-blottal kapott eredményeinket. Végül elektron mikroszkóp segítségével tanulmányoztuk az autofagoszómákat. A kapott eredményeket összegezve elmondhatjuk, hogy a rezveratrol és a γ-tokotrienol szinergikus hatást fejtenek ki a szívizomban. Ezen hatások részben a túlélési fehérjék, részben pedig az autofágia indukciójával magyarázhatóak. Következtetéseinket alátámasztják a Wortmaninnal (PI3 kináz inhibitor) kapott eredményeink is. Ugyanis Wortmanni kezelés hatására elmaradtak az észlelt pozitív hatások, ezzel összhangban csökkent a túlélési fehérjék valamint az autofágiás fehérjék szintje is. Korábban kísérleteket végeztünk a meggymag zsírtalanított, szilárd frakciójával iszkémia/reperfúziónak kitett izolált patkányszíveken (Bak I. et al., Am. J. Physiol., 2006.). A kísérletek során azt tapasztaltuk, hogy a meggymag extrakt, az alkalmazott dózisokban, jelentıs mértékben javította a posztiszkémiás szívfunkciókat, valamint szignifikáns mértékben csökkentette a kamrai aritmiák kialakulását és az infarktusos területek nagyságát. Az észlelt kardioprotektív hatások molekuláris mechanizmusainak pontos felderítése érdekében elvégeztük a meggymag egyes hatóanyag frakcióinak izolálását, az ezekben található vegyületek azonosítását különbözı mőszeres analitikai technikák segítségével, és meghatároztuk az izolált frakciók gyökfogó kapacitását is. Azért, hogy megtudjuk érdemes e tovább vizsgálódni a meggymaggal, toxicitási vizsgálatokat is végeztünk. Az állatok (n=6 csoportonként) 8 napon keresztül 0-3000 mg/kg közötti dózisban kapták a meggymag szilárd fázisát. Terminálás után megmértük a máj és vese tömegeket, illetve hisztológiai vizsgálatokat is végeztünk az említett szervek metszetein. A vesefunkciót a vér urea nitrogén és creatinin mérésével, míg a májfunkciókat szérum GOT, GPT és AlkPhos aktivitással határoztuk meg. Eredményeink alapján elmondható, hogy a meggymag az alkalmazott dózisokban nem mutatott toxikus hatásokat, így érdemes tovább foglalkozni vele, mivel korábban pozitív kardiovaszkuláris hatásokat tapasztaltunk. A továbbiakban megvizsgáltuk 3 további

természetes hatóanyag (Gingko biloba extrakt, astaxantin és c vitamin) együttadásának hatásait asztmával összefüggı gyulladás kezelésében, tengerimalacban indukált asztma modellben és az eredményeket összehasonlítottuk az ibubrofénnel, mint az egyik leggyakrabban alkalmazott nem szteroid gyulladáscsökkentıvel. Az eredmények azt mutatják, hogy a 3 természetes hatóanyag alkalmazásával az ibuprofén kezelés kiváltható. Korábbi eredményeink és az irodalom alapján bizonyított, hogy a hemoxigenáz-1 (HO-1) enzim központi szerepet játszik az iszkémia/reperfúzió-indukálta károsodások kivédésében. Ezért kísérleteinkben megvizsgáltuk HO-1 transzgenikus Tg) és nemtranszgenikus (NTg) egerekbıl izolált szívek iszkémia/reperfúziós-károsodásokkal szembeni tolerabilitását. Azt tapasztaltuk, hogy a Tg állatokból izolált szívek posztiszkémiás szívfunkciói (koronária kiáramlás (CF), aorta átármlás (AF), aortanyomás (AOP) és az AOP elsı deriváltja) szignifikáns mértékben jobb volt a NTg csoporthoz viszonyítva. A Tg szíveknél tapasztalt pozitív hatásokat SnPPIX HO-1 inhibitor adása megszüntette. Mindhárom csoportban megfigyeltük a HO-1-hez kapcsolódó szénmonoxid (CO) termelést, amely jelentıs mértékben emelkedett Tg iszkémia/reperfúziónak (ISA/REP) kitett szívekben. Továbbá az ISA/REP következtében emelkedett Na + és Ca 2+ szintek csökkentek, míg a K + vesztés jelentıs mértékben csökkent a Tg csoportban, összehasonlítva a NTg és az SnPPIX-al kezelt csoporttal. A mért pozitív szívfunkciós eredmények hően tükrözıdtek az infarktusos területek nagyságának, valamint a reperfúzió-indukálta aritmiák (VF, VT) csökkenésében egyaránt. További kísérleteinkben megvizsgáltuk a glutaredoxin-1 génterápia hatását diabeteses egerekbıl izolált szívekben. A diabetest egy intarperitoneális sterptozotocin injekcióval váltottuk ki, a diabetes megerısítését követıen a hím C57B1/J6 egereket három csoportba osztottuk és mellkas mőtétet végeztünk. A mőtét során glutaredoxin-1-et, LacZ-t kódoló, illetve üres vírust injektáltunk közvetlen a szívizomba. A mőtét után négy nappal az állatok szívét izoláltuk és 30 perc iszkémiának és 120 perc reperfúziónak vetettük alá. Vizsgáltuk a balkamra funkciókat, az infarktusos területet és az apoptózis mértékét. A kísérletekben Western-blot és immunhisztokémiai módszerekkel vizsgáltuk a génterápia sikerességét. Eredményeink alapján elmondhatjuk, hogy a glutaredoxin-1 génterápiát követıen a szívek ellenállóbbak az iszkémia/reperfúzió-indukálta károsodásokkal szemben, erre bizonyíték az iszkémiá/reperfúziót követıen jobb bal kamra funkció, kisebb infarktusos terület, és csökkent apoptózis. Az apoptózisos eredményekkel egyetértésben magasabb prokaszpáz-3 szintet detektáltuk a glutaredoxin-1-el kezelt csoportban. Western-blot eredményeink alapján elmondhatjuk, hogy a glutaredoxin-1 génterápia megakadályozza az Ask-1, Jnk, p38 MAPK

útvonal aktiválódását és a c-src foszforilálódását, ezzel gátolja az iszkémia/reperfúzió indukálta halál útvonal beindulását még diabeteses körülmények között is. Ezek mellet a glutaredoxin-1 génterápia növelte az Akt/FoxO-1 túlélési útvonal aktivitását, valamint fokozta a hemoxygenáz-1 és az endoteliális nitrogén monoxid szintáz expresszióját. Összegzésként elmondhatjuk, hogy a glutaredoxin-1 génterápiában részesült szívek ellenállóbbak, mint a kontrolként szolgált szívek iszkémia/reperfúzió indukálta károsodásokkal szemben diabeteses körülmények között is. Bár a rezveratrol kardioprotektív hatása jól ismert, az alkalmazandó dózis, illetve biológiai hasznosíthatóság szempontjából nincs közös álláspont. Ezért további kísérletekben megvizsgáltuk egy rezveratrol tartalmú készítmény hatásait iszkémia/reperfúziónak kitett szívekben, mely a rezveratrolon kívül tartalmazott még 5% kvercetint és 5% rizskorpát (Longevinex ) is, melyek növelik a rezveratrol biológiai hozzáférhetıségét. Azt tapasztaltuk, hogy a kezelésen átesett állatokból izolált szívek sokkal ellenállóbbak voltak az iszkémia/reperfúziós károsodásokkal szemben, ami a jobb szívfunkciókban, illetve csökkent infarktusos területben jelentkezett, melynek hátterében túlélési jelátviteli útvonalak indukálódása áll. Ezt támasztja alá, hogy a Bcl2/Bax arány emelkedését és fokozott AKT foszforilációt mértünk. Újabb eredmények arra engednek következtetni, hogy a vaszkuláris kalcifikáció kapcsolatba hozható az atherosclerosis, diabetes, illetve krónikus vesebetegség kialakulásával. A humán vaszkuláris simaizomsejtek az emelkedett szervetlen foszfát koncentrációra válaszul mineralizáción mennek keresztül egy jól szabályozott folyamat során, ami emelkedett alkalikus fosztáz aktivitást és a core binding factor α-1 (CBF-α1) transzkripciós faktor emelkedett expresszióját és következésképpen az osteokalcin indukcióját foglalja magába. Már bizonyított, hogy a nagymértékő alkohol bevitel kapcsolatban van a koronária artériák nagyobb mértékő kalcifikációjával. Kísérleteinkben megvizsgáltuk, hogy az etanol megváltoztatja e a vaszkuláris simaizomsejtek magas szervetlen foszfát koncntráció által kiváltott mineralizációját. A sejtek etanollal történı kezelése dózis-függı módon növelte az extracelluláris mátrix kalcifikációját jelentıs mértékő kalcium lerakódást eredményezve. A sejtek kalcifikációja emelkedett alkalikus foszfatáz aktivitással párosult. Az etanol kezelés jelentıs mértékben fokozta az osteokalcin szintézisét is. Elmondható továbbá, hogy az etanolnak kitett sejtekben emelkedett a CBF-α1 expressziója. A leptinrıl közismert, hogy kardidepresszív hatása van, valamint, hogy balkamrai remodellinget indukál. Kísérleteinkben megvizsgáltuk az infarktust követı miokardiális leptin expresszió változását. Érzéstelenítést követıen az állatokban ideiglenes koronária okklúziót

idéztünk elı, majd 5 nappal a mőtétet követıen, az infarktusos terület határára intarmiokardiálisan leptin mrns elleni antisense oligodezoxinukleotidot (AS ODN) injektáltunk. Az állatok szívét 11 héten keresztül echokardiográffal monitoroztuk. A miokardiális leptin valamint különbözı citokinek (IL-1β és IL-6) mennyiségét ELISA-val határoztuk meg. Eredményeink azt mutatják, hogy a szív leptin koncentrációja az infarktust követı 7. napon a legmagasabb, valamint hogy az intramiokardiális leptin-as ODN injekció csökkenti az IL-1β és IL-6 expressziót, valamint jelentıs mértékben hozzájárul a szív kontraktilis funkciójának megırzéséhez. Ezek az eredmények egy új terápiás lehetıség alapját képezhetik a továbbiakban. Eredményeinket több hazai és nemzetközi konferencián mutattuk be, valamint számos nemzetközi folyóiratban publikáltuk. Az eredmények alapján 1 db szabadalmi bejelentés jelenleg folyamatban van. Ennek tárgyát egy új funkcionális élelmiszerként piacra vezethetı termék képezi, melynek kifejlesztése és OÉTI általi engedélyeztetése folyamatban van.