Programozott sejthalál formák és kulcsfehérjéinek kapcsolata - fókuszban a ferroptózis és az autofágia. V. MedInProt Konferencia November 19.

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Programozott sejthalál formák és kulcsfehérjéinek kapcsolata - fókuszban a ferroptózis és az autofágia. V. MedInProt Konferencia November 19."

Donát Lukács
5 évvel ezelőtt
Látták:

1 Programozott sejthalál formák és kulcsfehérjéinek kapcsolata - fókuszban a ferroptózis és az autofágia Dr. Szarka András Dr. Kapuy Orsolya V. MedInProt Konferencia November 19.

2 Bevezetés

3 Bevezetés Autofágia nemcsak a tumor-szupresszióban játszhat kulcsszerepet, de ugyancsak indukálhatja a tumorsejtek növekedését azáltal, hogy hipoxiás környezetben tápanyagokat tud biztosítani a sejt számára. A ferroptózist, illetve a ferroptózist kiváltó erasztint és RSL3-at (RSL: RAS-selective lethal) egy RAS mutáns tumor sejtek szelektív letalitását célzó vizsgálat során fedezték fel. A közelmúltban kiderült, hogy a p53 képes ROS indukálta oxidatív stressz esetén mind az apoptózis, mind a ferroptózis folyamatát iniciálni. A ferroptózis az autofágiához hasonlóan egyféle tumor-szupresszornak tekinthető, sőt, az sem kizárt, hogy a két folyamat együttesen vagy egymást követően aktiválódik, mintegy gátolva az apoptózist és a nekroptózist.

4 Célkitűzések 1. a ROS indukálta programozott sejthalál típusok időbeliségének, és az ezekben szerepet játszó kulcsfehérjék egymásra hatására vizsgálata 2. a ferroptózis szabályozásának és kapcsolatának vizsgálata az egyéb sejthalál mechanizmusokkal (autofágia, apoptózis, nekroptózis) Kapcsolódási pontok MedInProt fókuszpontokhoz 1. Jelátviteli fehérjék szerepe gyulladásos és daganatos megbetegedésekben 2. Szabályozó fehérjék szerepe az öregedési folyamat(ok)ban

Kísérleti módszerek ferroptózis kiváltása RAS onkogén vonalakon

acetaminofennel és erasztinnel a sejtek életképességének

fehérjeminták ellenőrzése autofágia (LC3II, p62, ULK-555P),

5 Kísérleti módszerek ferroptózis kiváltása RAS onkogén vonalakon (HepG2) erasztinnel, illetve primer hepatocitákon acetaminofennel és erasztinnel a sejtek életképességének folyamatosan nyomon követése CellTiterBlue reagenssel fehérjeminták ellenőrzése autofágia (LC3II, p62, ULK-555P), apoptózis (pro-caspase3, hasított PARP) és nekroptózis markerekre (RIP1,3, JNK) GSH szint mérése

6 Életképességi vizsgálat erasztin kezelési koncentráció beállítása 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 4 h 6 h 8 h 16 h 18 h 20 h 24 h mm erasztin

7 HepG2 sejtek GSH szintjének változása erasztin kezelés hatására

8 Életképességi vizsgálat primer hepatociták APAP kezelése

9 Relatív GSH szint [%] APAP és Ferrostatin-1 kezelés hatása primer hepatociták GSH szintjére 120,00 100,00 80,00 60,00 40,00 20,00 0,00 control APAP (20 mm) APAP (20 mm) + Fer-1 (1 µm) Fer-1 (1 µm)

Kulcsfehérjék szintjének nyomon követése HepG2 sejtekben K 2 4 6 8 10 12 h LC3 II Ulk555-p Ulk T Rip3

nekroptózis marker: 8 h után a nekroptózis bekapcsol apoptózis marker: 10 h után az apoptózis bekapcsol

10 Kulcsfehérjék szintjének nyomon követése HepG2 sejtekben K h LC3 II Ulk555-p Ulk T Rip3 procasp3 PARP Hasított PARP 4EBP1-p 4EBP1-T autofágia marker: tranziens aktiválódás, majd lecsengés nekroptózis marker: 8 h után a nekroptózis bekapcsol apoptózis marker: 10 h után az apoptózis bekapcsol mtor marker: mtor inakitváció nem figyelhető meg GapdH housekeeping fehérje AUTOFÁGIA APOPTÓZIS NEKROPTÓZIS

11 További tervek 1. Kombinált kezeléseket végrehajtása, melynek során ferroptózist váltunk ki RAS onkogén vonalakon (HepG2) erasztinnel, illetve primer hepatocitákon acetaminofennel és erasztinnel. A sejtek kezelését emellett következő ferroptózis gátlószerekkel (ferrostatin- 1, NAC, E-vitamin+C-vitamin), nekroptózis gátlószerekkel (necrostatin-1), autofágia induktorokkal (rapamycin, EGCG, rezveratrol) és autofágia gátlószerekkel (3-metiladenin, Wortmannin) egészítjük ki. 2. Egy egyszerű matematikai modell is készül, amely jól leírja a szabályozási hálózat dinamikai viselkedését ferroptózis esetén, és meg tudja jósolni a közös kutatás további irányát/irányait.

12 A megvalósításban résztvevő kutatók Holczer Mariann SE OVI Lőrincz Tamás BME ABÉT Nagy Ábel BME ABÉT Jemnitz Katalin MTA TTK Veres Zsuzsa MTA TTK

13 Köszönjük szépen a Támogatást és a Figyelmet!

Hasonló dokumentumok

Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen

Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0011 Az orvosi