Az NO-cGMP-PKG-rendszer gyógyszeres befolyásolása szívinfarktus állatkísérletes modelljében

Eredeti közlemény Cardiologia Hungarica 2012; 42 : 6 13 2012 Locksley Hall Media Az NO-cGMP-PKG-rendszer gyógyszeres befolyásolása szívinfarktus állatkísérletes modelljében Barnucz Enikő 1,2, Korkmaz Sevil 2, Radovits Tamás 1,2, Veres Gábor 1,2,3, Hirschberg Kristóf 1,2, Hegedűs Péter 1,2, Páli Szabolcs 2, Merkely Béla 1, Szabó Gábor 2 1 Semmelweis Egyetem, Kardiológiai Központ, Budapest 2 Heidelbergi Egyetem, Szívsebészeti Kutató Laboratórium, Heidelberg 3 Semmelweis Egyetem, Szívsebészeti Klinika, Budapest Levelezési cím: Barnucz Enikő 69120, Heidelberg Im Neuenheimer Feld 326. 2.OG, Tel.: +49 6221 566246 E-mail: ebarnucz@gmail.com Kulcsszavak: miokardiális infarktus, nitrogén-monoxid, cinaciguat, szolubilis guanilát-cikláz aktiváció Keywords: myocardial infarction, nitric oxide, cinaciguat, soluble guanylate cyclase activation Bevezetés: Az NO-cGMP-cGMP-dependens protein-kináz-g útvonal szo - lu bilis guanilát-cikláz aktivátorral (cinaciguat) történő aktiválása és ennek kö - vetkeztében az intracelluláris cgmp-szint emelkedése kardioprotektív hatással rendelkezik. Kísérleteink során a cinaciguat kezelés hatásait vizsgáltuk izo - proterenol által indukált miokardiális infarktus kísérletes patkánymodelljén. Módszerek: SD-patkányokat napi két alkalommal négy napon át kezeltünk cinaciguattal, a kontrollállatokat ennek vivőanyagával (metilcellulóz-oldat). 85 mg/kg izoproterenol kétszeri (egymást követő napokon adott) szubkután in - jekciójával szívinfarktust idéztünk elő. 17 óra elteltével a szív pumpafunkcióját bal kamrai nyomás térfogat-analízis során regisztráltuk konduktancia-katéter segítségével. A hemodinamikai mérést követően a vizsgált szívek hisztopato - lógiai és molekuláris biológiai vizsgálatok céljából konzerválásra kerültek. A relatív génexpresszió meghatározása kvantitatív real-time PCR-rel történt. Eredmények: A cinaciguat előkezelés hatására javult a szív pumpafunciója és relaxációs képessége, mérséklődött a nekroenzimek felszabadulása, továbbá csökkentek a vizsgált hisztopatológiai elváltozások, az oxidatív stressz mértéke, valamint a ciklooxigenáz-2, TGFß és béta-aktin mrns expressziója a mio - kardiális infarktust elszenvedett állatokon. Konklúzió: A szolubilis guanilát-cikláz gyógyszeres aktiválása új terápiás alternatívát jelenthet az iszkémiás szívbetegségek megelőzésében és kezelésében. Pharmacological modulation of the NO-cGMP-PKG pathway in a rat model of myocardial infarction Background: Activation of the nitric oxide/cgmp/cgmp-dependent protein kinase G pathway exerts cardioprotective effects. The novel soluble guanylate cyclase activator cinaciguat has been reported to elevate intracellular cgmp levels and activate the nitric oxide/cgmp/cgmp-dependent protein kinase G pathway in vivo. We investigated the effects of cinaciguat on myocardial infarction induced by isoproterenol in rats. Methods: SD rats were treated orally twice a day for 4 days with methyl-cellulose vehicle or cinaciguat. Isoproterenol (85 mg/kg) was injected subcutaneously 2 days after the first treatment at an interval of 24 hours for 2 days to produce myocardial infarction. After 17 hours, left ventricular pressure-volume analysis was performed with a conductance catheter to assess cardiac function. Myocardial tissue samples were collected for histopathological and molecular biological measurements. Gene expression analysis was performed by quantitative real-time PCR. Results: Cinaciguat pretreatment improved cardiac performance, ameliorated intracellular enzyme release and histopathological lesions, reduced oxidative stress, and decreased cyclooxygenase-2, transforming growth factor-ß, and ß-actin mrna expression in experimentally induced myocardial infarction in rats. Conclusion: Pharmacological soluble guanylate cyclase activation could be a novel concept for the prevention and treatment of ischemic heart disease. Cardiologia Hungarica 2012; 42 : 6

Amiokardiális infarktus során a koszorúerek elzáródása következtében felborul az egyensúly a szív oxigénellátottsága és oxigénszükséglete között, amely a véráramlás helyreállásának hiányában a szívizomzat elhalásához vezet. Több, nemzetközi kutatás foglalkozik a szívizomzat iszkémia-reperfúziós károsodással szembeni megóvásának lehetőségeivel. A kardioprotek - ció egyik lehetséges módja a nitrogén-monoxid (NO)/ szolubilis guanilát-cikláz (sgc)/ciklikus GMP (cgmp)/ cgmp-dependens protein-kináz-g (PKG)-útvonal gyógy szeres befolyásolása. Az intakt érfalban az endo - theliális NO az sgc hem egységének ferro (Fe 2+ )-ionjához kötődve aktiválja az enzimet, amely fokozott cgmp-termelődéshez vezet. Az emelkedett intra cellu - láris cgmp szerteágazó hatásokat fejt ki, többek között: x vazodilatáció, x a trombocitaaggregáció-gátlás, x sejtproliferáció-gátlás (1). A kardiovaszkuláris rendszer betegségei mögött igen gyakran az NO-cGMP-cGMP-dependens protein-ki - náz-g útvonal károsodása áll. Fiziológiás körülmények között az sgc főként oxidált (hem-mentes), nem NOérzékeny sgc és redukált NO-érzékeny sgc formában van jelen, míg patofiziológiás körülmények között (pl. diabetes mellitus, iszkémiás szívbetegségek, atero - szklerózis) a nem NO-érzékeny sgc kerül túlsúlyba (2). A szerves nitrátok a koszorúér-betegségek terápiájában széles körben alkalmazott NO-donorok, azonban tartós használatuk tolerancia kialakulásához vezet, valamint nem képesek a nem NO-érzékeny sgc-t aktiválni (3, 4). Az újonnan kifejlesztett sgc-aktivátor cinaciguat képes az sgc NO-inszenzitív (hem-mentes), oxidált állapotának aktiválására, így cgmp-termelésen át vazodilatációt okoz preferenciálisan a beteg ereken (5). A cinaciguat vazodilatátor hatással bír in vitro izolált ereken, in vivo pedig trombocita aggre gá - ció-gátló, vérnyomáscsökkentő, valamint a szerves nitrátokhoz hasonló hemodinamikai hatásait figyelték meg (6). Az izoproterenol béta-adrenerg agonista szintetikus katekolamin, amelyet akut miokardiális infarktus in - du kálására alkalmaznak kísérletes patkánymodellben, főként mivel az általa kiváltott akut miokardiális nekrózis (szérum enzimelváltozások, EKG- és hisztológiai eltérések) dinamikája hasonló a humán esetekéhez. A fent említett miokardiális infarktus modell jól standardizálható, noninvazív eljárás különböző kardio pro - tektív terápiás eljárások vizsgálatára (7 9). Kísérleteink során a cinaciguat hatásait vizsgáltuk izo - proterenol-indukálta miokardiális infarktus modelljén patkányokban (10). Célparaméternek a szív funkciós, hisztológiai, biokémiai és génexpresszióbeli elváltozásokat tekintettük. Módszerek Akut miokardiális infarktus modell Izoproterenol szubkután injekciójával (85 mg/kg) ke - zel tünk hím Sprague Dawley-patkányokat (250-300 g) két egymást követő napon miokardiális infarktus ki - váltása céljából (7 9). Vizsgálatainkat a kísérleti állatok tartásáról és felhasználásáról szóló nemzetközi szabályoknak (Guide for the Care and Use of Labo ra tory Animals, US National Institutes of Health 1996; 85 23.) mindenben megfelelően, érvényes hatósági engedély birtokában végeztük. KÍSÉRLETI CSOPORTOK A patkányokat randomizáltan, 4 kísérleti csoportba so - roltuk be, a kísérleti csoportokba 9-14 kísérleti állat tartozott. A kontrollcsoportba tartozó állatok 4 napon át a cinaciguat vivőanyagát (metilcellulóz-oldat) kapták, a 3. és 4. napon pedig steril desztillált vizet (az izo - proterenol oldószerét) szubkután injekció formá jában. Az izoproterenol csoport 4 napon át metilcellulóz előkezelést, a 3. és 4. napon izoproterenolt kapott. A cinaciguat+izoproterenol csoport 4 napon át cinaci - guat előkezelésben részesült, majd a 3. és 4. napon izo - proterenolt kapott szubkután. A cinaciguat csoport 4 napon át cinaciguatot kapott és a 3. és 4. napon desztillált vizet szubkután. A cinaciguat és a metil cel lulóz kezelés gyomorszondán át történt, a cinaciguat dózisa 10 mg/kg volt. A hemodinamikai mérések 17-22 órával az utolsó kezelést követően történtek. Hemodinamikai mérések A bal kamrai nyomás térfogat-diagramokat Millarkon duktancia katéter segítségével regisztráltuk pen to - barbitállal (60 mg/kg) altatott állatokon (11). Biokémiai vizsgálatok A biokémiai mérésekhez vért vettünk az állatoktól (a vena cana inferiorból) majd a vérplazmát a későbbi vizsgálatokhoz 80 ºC-on tároltuk. A plazma cgmp és camp koncentrációját ELISA-módszer segítségével határoztuk meg (GE Healthcare, Buckinghamshire, UK). Az LDH (laktát-dehidrogenáz) és a TBARS (tio- barbitursav-reaktív anyagok, az oxidatív stressz mar - kere) aktivitást kereskedelmi forgalomban lévő kittel határoztuk meg (Biotrend Chemikalien GmbH, Co - logne, Germany; ZeptoMetrix Corp, Buffalo, NY). Kvantitatív real-time PCR A szívek apikális részéből a teljes RNS-t Rneasy Fib - rous Tissue Minikittel (Quiagen, Hilden, Germany) izoláltuk. Az RNS mennyiségét és minőségét fotometriás módszerrel határoztuk meg (260, 280 és 230 nm). A reverz transzkripcióhoz QuantiTect Reverse Trans - Cardiologia Hungarica 2012; 42 : 7

Kontroll Izoproterenol Cinaciguat+Izoproterenol Cinaciguat 1. ábra. A szívizom szövettani vizsgálata hematoxillin-eozin festéssel (100 ) cription Kitet (Quiagen) használtunk. A kvantitatív real-time PCR-t LightCycler480-nal végeztük. Hisztopatológiai eljárások A kísérleti állatok szívének bazális részét pufferelt 4%-os formalin oldatban, az apikális részét folyékony nitrogénben konzerváltuk. A hisztológiai vizsgálatokhoz a szívekből 5 µm-es szeleteket készítettünk. A metszetek morfológiai értékeléséhez hematoxillineozin (HE) festést végeztünk. A szívek 4 területéről készítettünk 100 -os nagyítással felvételt, amelyet azután a következő score rendszer szerint, szemi - kvantitatívan értékeltünk: x A: nincs patológiás eltérés, x +: kevesebb, mint a terület 10%-a érintett, x ++: a patológiás jelenség a terület 11-50%-án figyelhető meg, x +++: a sérülés több mint 50%. Statisztika Az értékeket átlag±átlag szórása (SEM) formában tüntettük fel. A csoportok összehasonlítása egyutas ANOVA-val és Bonferroni-teszt alkalmazásával tör - tént, a p 0,05 értékeket tekintettük statisztikailag szig nifikánsnak ( * p<0,05 vs. kontroll, # p<0,05 vs. izo - pro terenol). Eredmények Hisztopatológiai eredmények Az izoproterenollal kezelt patkányok myocardiumában miofibrilláris degenerációt figyeltünk meg gyulladásos jelekkel és intersticiális ödémával (1. ábra). Cinaciguat kezelés hatására szignifikánsan csökkent a nekrózis és gyulladás mértéke izoproterenol adását követően. A cinaciguattal kezelt csoportban a szívizom szerkezete szövettanilag ép maradt. Az 1. táblázatban a cinaciguat szövettani változásokra gyakorolt hatása látható a kü - lönböző csoportokban. Plazma LDH- és TBARS-aktivitás Izoproterenollal kezelt patkányokban emelkedett LDH-szintet figyeltünk meg, amely cinaciguat előkezelés hatására normalizálódott (2. A ábra). A plazma TBARS-szintje izoproterenol kezelés hatására megemelkedett, amelyet a cinaciguat kezelés szignifikánsan csökkentett (2. B ábra). A cinaciguat kezelés hatása a szív funkcionális paraméterekre akut miokardiális infarktust követően Az izoproterenollal kezelt patkányok szisztolés pumpafunkciója szignifikánsan csökkent a kontrollcso- 2. ábra. A cinaciguat hatásai a plazma laktát-dehidrogenáz (LDH; A) és TBARS (B) szintre izopro - terenol (Izo) indukálta szívinfarktus után patkányokban. Az értékek átlag±sem vannak ábrázolva * p<0,05 vs. kontroll, # p<0,05 vs. izoproterenol Cardiologia Hungarica 2012; 42 : 8

1. táblázat. A cinaciguat kezelés hatása a szívizom szövettani képére izoproterenol indukálta szívinfarktus után (0: elváltozás nélkül; +: enyhe mértékű elváltozás; ++: közepes mértékű elváltozás; +++: súlyos mértékű elváltozás) Csoportok Nekrózis Ödéma Gyulladás Kontroll 0 0 0 Izoproterenol ++ ++ +++ Izoproterenol+ cinaciguat + + ++ Cinaciguat 0 0 0 porthoz képest. A bal kamrai végszisztolés nyo - más térfogat-diagram (ESPVR) egyenesének meredeksége (E max ) és az ún. preload recruitable stroke work jelentősen csökkent az izoproterenollal kezelt állatokban (12). A cinaciguat előkezelés jelentős növekedést eredményezett a fent említett paraméterekben (3. A és 3. B ábra). Az izoproterenol kezelés meredekebb egyeneseket eredményezett a végdiasztolés nyomás térfogat-diagramon (EDPVR), jelezvén a nagyobb végdiasztolés merevséget, míg a cinaciguat+izo pro - terenol csoport esetén nem különbözött a kontrollcsoporttól (3. C ábra). Az izoproterenol kezelés hatására csökkent relaxációs képességet figyeltünk meg (megnyúlt tau-g), amely cinaciguat előkezelés hatására normalizálódott (3. D). Az izoproterenol csoportban a szívfrekvencia szignifikánsan emelkedett, csökkent az ejekciós frakció és a kardiális munkavégzés (stroke work) (2. táblázat). SGC-aktivátorral való kezelés hatására a fenti paraméterek jelentősen javultak. Az infarktust elszenvedett csoportban a bal kamrai végdiasztolés nyomás emelkedett, csökkent a verőtérfogat és a relaxációs képesség (dp/dt min ); ezen paraméterek nem változtak cinaciguat előkezelés hatására. A cinaciguat+ izoproterenol csoportban csökkent artériás középnyomást és bal kamrai nyomást regisztráltunk; a cina - ciguat kezelés nem volt hatással a hemodinamikai paraméterekre ezen csoportban. 3. ábra. A cinaciguat kezelés hatásai. A: E max -ra (a bal kamrai végszisztolés nyomás-térfogat összefüggés meredeksége); B: az ún. preload-recruitable stroke workre (PRSW); C: végdiasztolés nyomás-térfogatösszefüggésre (EDPVR); D: a bal kamrai relaxáció időkonstansára (tau-g). Az értékek átlag±sem vannak ábrázolva. * p<0,05 vs. kontroll, # p<0,05 vs. izoproterenol Cardiologia Hungarica 2012; 42 : 9

2. táblázat. A cinaciguat kezelés hatása a szívfrekvenciára, artériás középnyomásra (MAP), bal kamrai szisztolés nyomásra, bal kamrai végdiasztolés nyomásra, ejekciós frakcióra, bal kamrai (LV) kont - raktilitásra (+dp/dt) és relaxációra ( dp/dt), végdiasztolés térfogatra, végszisztolés térfogatra, verőtérfogatra, hatékonyságra, teljes perifériás rezisztenciára (SVR), artériás tágulékonyságra (Ea), miokardiális munkavégzésre, végdiasztolés nyomás-térfogat összefüggésre (EDPVR) izoproterenol indukálta szívinfarktusban patkányokban. Az értékek átlag±sem vannak ábrázolva. * p<0,05 vs. kontroll, # p<0,05 vs. izoproterenol Kontroll Izoproterenol Cinaciguat+ Cinaciguat izoproterenol Szívfrekvencia (ütés/perc) 427±9 485±12 * 448±12 413±10 # MAP (Hgmm) 102±3 89±3 64±3 *# 115±7 # Bal kamrai szisztolés nyomás (Hgmm) 133±4 102±3 * 88±4 *# 138±4 # Bal kamrai végdiasztolés nyomás (Hgmm) 5,9±0,3 10,5±1,0 * 9,9±0,8 * 6,1±0,3 # Ejekciós frakció (%) 56±6 41±4 * 46±4 54±6 LV+dP/dt (Hgmm/s) 8372±389 7607±370 8660±548 8426±520 LV dp/dt (Hgmm/s) 12063±770 6474±457 * 6608±430 * 12087±545 # Végdiasztolés volumen (µl) 280±42 329±39 348±29 246±16 Végszisztolés volumen (µl) 213±26 270±33 230±21 171±10 # Verőtérfogat (µl) 192±12 137±16 * 165±15 155±12 Hatékonyság (%) 61,8±4,0 63,0±4,2 61,3±3,2 54,0±4,6 SVR (Hmmg min/ml) 1,75±0,22 1,85±0,17 1,17±0,22 # 1,79±0,13 Ea (Hgmm/µl) 0,92±0,12 1,02±0,10 0,69±0,09 # 1,07±0,09 Miokardiális munkavégzés (Hgmm µl) 16057±1172 9711±1211 * 10338±1141 * 13005±1345 +dp/dt-edv (Hgmm/s/µl) 46,6±6,4 35,7±2,9 42,0±9,9 43,7±3,4 A cinaciguat kezelés hatása az akut miokardiális infarktust követő mortalitásra A kontroll és a cinaciguat csoportokban nem fordult elő elhullás. A kísérletek során az elhullási arány 56% volt az izoproterenol csoportban, 33% a cina- ciguat+izoproterenol csoport esetében. A cinaciguat kezelés hatása a plazma cgmp-, camp-szintjére és a szívizomzat cgmp-szintjére A plazma cgmp-szint szignifikáns emelkedését fi - gyel tük meg az izoproterenol és a cina ciguat+izo - pro terenol csoportokban, ezzel szemben a kontroll és a cinaciguat csoportokban nem észleltünk változást (4. A ábra). A plazma camp-szint nem különbözött az egyes csoportokban (4. B ábra). A cinaciguattal előkezelt csoportban a miokardiális cgmp-szint szignifikánsan emelkedett a kontrollcsoporthoz képest (4. C ábra). A cinaciguat kezelés hatása a miokardiális génexpresszióra Az atriális nátriuretikus fehérje (ANP), ciklooxigenáz- 2 (COX-2), TGFß 1, ß-aktin mrns-expresszió az izo- proterenol csoportban szignifikánsan emelkedett volt a kontrollcsoporthoz viszonyítva, míg a ß-miozin ne - héz lánc és az endotheliális NOS mrns-expressziója nem változott. A cinaciguat kezelés megelőzte a COX-2, TGFß 1 és ß-aktin mrns-expresszió emelkedését, az ANP-expresszió nem különbözött az egyes csoportokban (5. ábra). Megbeszélés Kísérleteink során az NO- és hem-független sgc-ak - ti vátor cinaciguat hatásait vizsgáltuk izoproterenol által indukált akut szívinfarktus modellen. Eredmé nyeink alapján megállapíthatjuk, hogy a cinaciguat ke zelés hatására a szív pumpafunkciója javul, az oxidatív stressz, a hisztopatológiai elváltozások és a mio kar diális nekroenzim kiáramlás mértéke csökken. Cardiologia Hungarica 2012; 42 : 10

(EF) csökkenése is. Az EF-et az elő- és utóterhelés is befolyásolja, a kontraktilitás pontos jellemzésére nem alkalmas, ezért elő- és utóterheléstől független érzékeny kontraktilitás-paramétereket is számítottunk (a végszisztolés nyomás-térfogat összefüggés (ESPVR) meredeksége (E max ) és a verőmunka-végdiasztolés térfogat összefüggés meredeksége (az ún. preload recrui - table stroke work PRSW), amelyek jelentősen csökkentek az izoproterenol csoportban) (12). A PV-hurkokból számított dp/dt max -végdiasztolés térfogat összefüggés meredeksége is igen érzékeny, előterheléstől független kontraktilitás-paraméter, amely csökkent az izoproterenol-kezelt patkányokban. Továbbá romlott a bal kamrai relaxáció (csökkent dp/dt min, megnyúlt tau-g, megnövekedett bal kamrai végdiasztolés nyomás) és növekedett végdiasztolés merevség [növekedett EDPVR (végdiasztolés nyomás-térfogat összefüggés meredeksége)] az izoproterenol csoportban. A mio - kardiális relaxáció aktív folyamat, mely főleg a diasz - tole alatti szarkoplazmatikus Ca 2+ -visszavételtől függ, míg a végdiasztolés merevséget főleg a myo cardium szerkezeti elemei befolyásolják. A diasztolés diszfunkcióval összefüggésben a bal kamrai végdiasztolés nyomás is emelkedett az izoproterenol csoportban, en - nek megfelelően emelkedett előterhelést és fokozott vénás visszaáramlást regisztráltunk. A kardiális funkciót jellemző paraméterek (bal kamrai kontrak tilitás és pumpafunkció, relaxáció és a diasztolés me revség) ci - na ciguat kezelés hatására javultak. Szívinfarktus során a verőtérfogat gyakran csökkent a romló bal kamrai kontraktilitás miatt; az utóterhelés a vérnyomás fenntartása érdekében emelkedett. Külön - böző állatkísérletes modellekben és humán vizsgálatokban is kimutatták, hogy cinaciguat intravénás adása a szív elő- és utóterhelését csökkenti (13). Szívinfarktus indukciója izoproterenollal a szívfrekvencia emelkedését okozza, amelynek hatására csökken a diasztolés te - lődés ideje, ezáltal a myocardium vérellátása, és isz ké - mia alakul ki. A cinaciguat kezelés hatására a csökkenő utóterhelés és vazodilatáció miatt javul a myo cardium oxigénellátása és csökken az oxigénszükséglete. 4. ábra. A cinaciguat kezelés hatása a plazma cgmp (A), camp (B) és miokardiális cgmp (C) szintekre izoproterenol indukálta akut szívinfarktusra. Az értékek átlag±sem vannak ábrázolva. * p<0,05 vs. kontroll, # p<0,05 vs. izopro - terenol A cinaciguat előkezelés hatása a miokardiális infarktust követő kardiális diszfunkcióra Kimutattuk, hogy izoproterenollal indukált akut mio - kardiális infarktus során csökken a szív szisztolés teljesítménye, továbbá megfigyelhető az ejekciós frakció A CINACIGUAT ELŐKEZELÉS HATÁSA A MIOKARDIÁLIS INFARKTUST KÖVETŐ MIOKARDIÁLIS SZÖVETKÁROSODÁSRA A cinaciguat kezelés hatására az izoproterenol okozta szívizomzat-károsodás mérséklődött, amelyet a gyulladásos infiltráció és az intersticiális ödéma mértékének csökkenése bizonyít. Az elégtelen oxigén- és/vagy glü - kózellátottság miatt a cardiomyocyták sejtmembránja permeábilissá válik, amely a sérült területről nekro en - zim-felszabadulást eredményez a véráramba (14). A szív izomelhalás markereként vizsgált plazma LDHszint az izoproterenollal kezelt csoportban cinaciguat kezelés hatására mérséklődött. Kísérleteink során a ß-ak - Cardiologia Hungarica 2012; 42 : 11

5. ábra. A cinaciguat génexpressziókra kifejtett hatása izoproterenol indukálta szívinfarktus után patkányokban. ANP (A), COX-2 (B), TGFß 1 (C), ß-aktin (D) GAPDH-hoz viszonyított relatív expressziója. Az értékek átlag±sem vannak ábrázolva. * p<0,05 vs. kontroll, # p<0,05 vs. izoproterenol tin (a citoszkeleton egyik fő alkotóeleme) mrns-ex - pressziója jelentősen emelkedett az izoproterenol cso portban és jelentősen csökkent a cinaciguat előkezelés hatására. Ezen megfigyeléseink alapján arra kö - vetkeztetünk, hogy a ß-aktin mrns-expresszió változása fontos mediátora a sérült myocardium strukturális változásainak. Az sgc-kezelés kardioprotektív hatása iszkémiás károsodás során Miokardiális infarktus állatkísérletes modelljében az ANP génexpressziója emelkedett és erős korrelációt mutat a diasztolés falfeszüléssel (15 17). Kísérleteink során jelentős ANP mrns-emelkedést figyeltünk meg az izoproterenol és a cinaciguat plusz izoproterenol csoportnál, amelyből a végdiasztolés falfeszülés növekedésére következtethetünk. Az emelkedett ANPexpresszióval párhuzamosan változó plazma cgmpszintek hátterében az aktivált ANP-receptorok cgmptermelése állhat, amelynek állatkísérletes és humán vizsgálatokban is kardioprotektív hatása merült fel (18, 19). Szívelégtelenségben emelkedett cgmp-koncentráció mutatható ki az extracelluláris folyadékterekben (plazma, vizelet). A cgmp feltételezhetően a sejtmembránon át áramlik ki a plazmába, ha az intra cellu - láris cgmp-szint jelentősen megemelkedik (cina cigu - at), vagy a sejtmembrán integritása károsodik (isz - kémia, infarktus), s a plazma cgmp-szint e két té - nyező hatásainak eredőjeként értékelhető (20 22). A cinaciguat csoportban (intakt sejtmembrán) a szívizom emelkedett cgmp-szintjének jeleit mutattuk ki. Az sgc-enzim aktiválása kardioprotektív hatással rendelkezik, amely több jelátviteli úton valósul meg, az érhatások (vazodilatáció) mellett a cardiomyocyták cgmp jelátviteli útján is hat (5). A COX-2 mrns csak miokardiális stressz, mint például az iszkémia során expresszálódik a cardiomyocytákban és nem expresszá - lódik az egészséges szívizomzatban (23). Az izopro - terenol csoportban jelentősen emelkedett a COX-2 mrns-tartalom és cinaciguat előkezelés hatására csökkent, feltehetőleg mérsékli a proinflammatorikus cito - kinek felszabadulását és az iszkémiás gyulladás létrejöttét. A TGFß az iszkémia során, lokálisan termelődő citokin, amely miokardiális infarktust követően upre - gulálódik és részt vesz a károsodások kialakulásának közvetítésében (24). Kísérleteink során jelentősen Cardiologia Hungarica 2012; 42 : 12

emel kedett TGFß 1 -expressziót figyeltünk meg, mely cinaciguat kezelés hatására csökkent. Korábbi publikációkkal megegyezően feltételezzük, hogy a cgmp által aktivált útvonal hatással van a TGFß 1 -jelátvitelre, a cgmp által mediált TGFß expressziógátláson át (25). Miokardiális infarktus során nagy mennyiségben szabadulnak fel szabad gyökök, amelyek fokozott oxidatív stresszhez, így emelkedett TBARS-szinthez vezetnek. Izoproterenol okozta infarktust követően a plazma TBARS-szintje emelkedett, amely cinaciguat kezeléssel csökkent, bizonyítva az oxidatív stressz mértékének mérséklődését. Korábbi tanulmányok bizonyították, hogy a COX-2 képes reaktív oxigén gyökök termelésére (26). A cinaciguat kezelés a COX-2 ex - presszióját csökkentette, ezáltal is mérsékelhette a szabadgyök képződést. Oxidatív stresszel és szabadgyökfelszabadulással járó különböző kórállapotokban az intracelluláris cgmp-szint emelkedése a szövetkárosodás mértékét csökkentette (27). Következtetések Vizsgálataink alapján megállapíthatjuk, hogy az scgaktivátor cinaciguat kardioprotektív hatással rendelkezik izoproterenol által indukált akut miokardiális infarktus kísérletes patkánymodelljében. Kísérleteink során a cinaciguat kezelés javította a szívműködést, a hisztopatológiai elváltozásokat, mérsékelte az oxidatív stressz mértékét, a nekroenzim-felszabadulást, továbbá csökkentette a COX-2, TGFß és ß-aktin mrnsex pressziót. A szolubilis guanilát-ciklázt aktiváló gyógyszeres kezelés új terápiás lehetőséget jelenthet az isz kémiás szívbetegségek megelőzésében és kezelésében. Irodalom 1. Moro MA, Russel RJ, Cellek S, et al. cgmp mediates the vascular and platelet actions of nitric oxide: confirmation using an inhibitor of the soluble guanylyl cyclase. Proc Nat Acad Sci USA 1996; 93: 1480 1485. 2. Stasch JP, Schmidt PM, Nedvetsky PI, et al. Targeting the hemeoxidized nitric oxide receptor for selective vasodilatation of diseased blood vessels. J Clin Invest 2006; 116: 2552 2561. 3. Munzel T, Genth-Zotz S, Hink U. Targeting heme-oxidized soluble guanylate cyclase: solution for all cardiorenal problems in heart failure? Hypertension 2007; 49: 974 976. 4. Feelisch M. The use of nitric oxide donors in pharmacological stu - dies. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 1998; 358: 113 122. 5. Evgenov OV, Pacher P, Schmidt PM, et al. NO-independent stimulators and activators of soluble guanylate cyclase: discovery and therapeutic potential. Nat Rev Drug Discov 2006; 5: 755 768. 6. Stasch JP, Schmidt P, Alonso-Alija C, et al. NO- and haemindependent activation of soluble guanylyl cyclase: molecular basis and cardiovascular implications of a new pharmacological principle. Br J Pharmacol 2002; 136: 773 783. 7. Rona G. Catecholamine cardiotoxicity. J Mol Cell Cardiol 1985; 17: 291 306. 8. Wexler BC. Myocardial infarction in young vs. old male rats: pathophysiologic changes. Am Heart J 1978; 96: 70 80. 9. Chagoya de Sanchez V, Hernandez-Munoz R, Lopez-Barrera F, et al. Sequential changes of energy metabolism and mito - chondrial function in myocardial infarction induced by iso - proterenol in rats: a long-term and integrative study. Can J Physiol Pharmacol 1997; 75: 1300 1311. 10. Korkmaz S, Radovits T, Barnucz E, et al. Pharmacological activation of soluble guanylate cyclase protects the heart against ischemic injury. Circulation 2009; 120: 677 686. 11. Szabo G, Soos P, Mandera S, et al. INO-1001 a novel poly(adpribose) polymerase (PARP) inhibitor improves cardiac and pulmonary function after crystalloid cardioplegia and extracorporal circulation. Shock 2004; 21: 426 432. 12. Kass DA, Maughan WL, Guo ZM, et al. Comparative influence of load versus inotropic states on indexes of ventricular contractility: experimental and theoretical analysis based on pressure-volume relationships. Circulation 1987; 76: 1422 1436. 13. Boerrigter G, Costello-Boerrigter LC, Cataliotti A, et al. Tar - geting heme-oxidized soluble guanylate cyclase in experimental heart failure. Hypertension 2007; 49: 1128 1133. 14. Sabeena Farvin KH, Anandan R, Kumar SH, et al. Effect of squalene on tissue defense system in isoproterenol-induced myo cardial infarction in rats. Pharmacol Res 2004; 50: 231 236. 15. Shimoike H, Iwai N, Kinoshita M. Differential regulation of natriuretic peptide genes in infarcted rat hearts. Clin Exp Pharmacol Physiol 1997; 24: 23 30. 16. Schultz JE, Witt SA, Nieman ML, et al. Fibroblast growth factor-2 mediates pressure-induced hypertrophic response. J Clin Invest 1999; 104: 709 719. 17. Buttrick PM, Kaplan M, Leinwand LA, et al. Alterations in gene expression in the rat heart after chronic pathological and physiological loads. J Mol Cell Cardiol 1994; 26: 61 67. 18. Yang XM, Philipp S, Downey JM, et al. Atrial natriuretic peptide administered just prior to reperfusion limits infarction in rabbit hearts. Basic Res Cardiol 2006; 101: 311 318. 19. Kitakaze M, Asakura M, Kim J, et al. Human atrial natriuretic peptide and nicorandil as adjuncts to reperfusion treatment for acute myocardial infarction (J-WIND): two randomised trials. Lancet 2007; 370: 1483 1493. 20. Fujio N, Ohashi M, Nawata H, et al. Relationship between atrial natriuretic polypeptide and cyclic 3'5'-guanosine monophosphate in human plasma. J Lab Clin Med 1987; 109: 706 710. 21. Michel JB, Mercadier JJ, Galen FX, et al. Urinary cyclic gua - nosine monophosphate as an indicator of experimental con - gestive heart failure in rats. Cardiovasc Res 1990; 24: 946 952. 22. Hamet P, Pang SC, Tremblay J. Atrial natriuretic factor-induced egression of cyclic guanosine 3':5'-monophosphate in cultured vascular smooth muscle and endothelial cells. J Biol Chem 1989; 264: 12364 12369. 23. Shinmura K, Xuan YT, Tang XL, et al. Inducible nitric oxide synthase modulates cyclooxygenase-2 activity in the heart of conscious rabbits during the late phase of ischemic precon - ditioning. Circ Res 2002; 90: 602 608. 24. Thompson NL, Bazoberry F, Speir EH, et al. Transforming growth factor beta-1 in acute myocardial infarction in rats. Growth Factors 1988; 1: 91 99. 25. Saura M, Zaragoza C, Herranz B, et al. Nitric oxide regulates transforming growth factor-beta signaling in endothelial cells. Circ Res 2005; 97: 1115 1123. 26. O'Banion MK. Cyclooxygenase-2: molecular biology, pharma - cology, and neurobiology. Crit Rev Neurobiol 1999; 13: 45 82. 27. Dias-Junior CA, Souza-Costa DC, Zerbini T, et al. The effect of sildenafil on pulmonary embolism-induced oxidative stress and pulmonary hypertension. Anesth Analg 2005; 101: 115 120, table of contents. Cardiologia Hungarica 2012; 42 : 13