FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 Clone EP17/EP30 Ready-to-Use (Link) Kód: IR094 Felhasználási terület In vitro diagnosztikai alkalmazás. A FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30, Ready-to-Use (Link) az Autostainer Link készülékkel végzett immunhisztokémiai felhasználásra szolgál. A citokeratin 8/18 ellenes antitestek hasznosak lehetnek epithelialis eredető daganatok azonosításában (1). A festıdés, illetve a festıdés hiányának klinikai értékelését morfológiai vizsgálatokkal kell kiegészíteni megfelelı kontrollok alkalmazása mellett, és a páciens kórtörténetének és egyéb diagnosztikai vizsgálati eredményeinek figyelembevételével patológus szakorvosnak kell végeznie. Az antigén szinonimái Keratin 8/18 (K8/18) (1), CK8/18 (2). Összegzés és magyarázat A citokeratin 8/18 (CK8/18) az intermedier filamentumok családjába tartozik, amely heteropolimer fehérjék egy változatos csoportja, és 54 különbözı génbıl áll. A citokeratin polipeptidek (CK-k) savas (I. típusú) és neutrálisbázikus (II. típusú) alcsaládokba oszthatók. Az I. és II. típusú polipeptidek egy párt alkotva építik fel az érett tetramer heteropolimert. A CK18 egy 45 kda-os CK, amely a I. típusú, savas CK alcsaládhoz tartozik, amely jellemzıen az 54 kda-os, II. típusú CK8 citokeratinnal kapcsolódik. A CK8/18 együtt az alacsony molekulasúlyú citokeratinok egyikét (LMW-CK) építik fel. A CK8/18 az egyszerő, nem többrétegő epitheliumokban, az átmeneti epithelium bazális és felszíni sejtjeiben, az összetett epitheliumok luminalis/szekretoros sejtjeiben, valamint a mezotéliumban expresszálódik, illetve jelen lehet bizonyos mesenchymális sejttípusokban is (1). Egy adott sejtben egy citokeratincsalád több tagja is expresszálódhat, és azok a sejttípusra, valamint a differenciáltsági állapotra jellemzıek (1). Majdnem minden epithelialis eredető karcinóma és mezotelióma expresszál CK8/18-at (2), és így a CK8/18 ellenes antitestek hasznos segítséget nyújtanak az ismeretlen eredető tumorok és a gyengén differenciált karcinómák osztályozásában (1). A CK8/18 elleni antitestek citoplazma- és/vagy membránfestıdési mintázatot mutatnak. Gyenge fokális expresszió jelen lehet mesenchymalis tumorokban, beleértve a leiomiómákat, a rabdomioszarkómát, a malignus melanómát, a schwannómát, a Ewing szarkómát, a dezmoplasztikus kis kereksejtes tumort, a pikkelysejtes karcinómát és a limfómát (3, 4). Az alábbi témakörök áttekintéséhez lásd a Dako Általános útmutató az immunhisztokémiai festéshez c. kiadványát, vagy az IHC eljárás detektálórendszerének útmutatóját. Biztosított reagens Immunogének Specifitás Két monoklonális nyúl antitest keveréke, (sejtkultúra felülúszó) 0,015 mol/l nátrium-azidot tartalmazó 0,05 mol/l koncentrációjú Tris-HCl, ph 7,2 oldatban. Ez a termék stabilizáló fehérjét tartalmaz. Clone: EP17/EP30. Izotípus: Nyúl eredető IgG. CK8: egy szintetikus peptid, amely megfelel a humán citokeratin 8 fehérje C-terminális részén lévı aminosavaknak. CK18: HT-29 sejtekbıl izolált humán citokeratin 18 fehérje. A CK8/18 két monoklonális antitest koktélja. Az A431 sejtlizátum Western blot vizsgálata során az anti-ck8, EP17 klón egy 52 kda-ból álló nagyobb sávot ismer fel, amely a CK8 várható molekulatömegének felel meg; és az anti-ck18, EP30 klón egy 45 kda-os nagyobb sávot ismer fel, amely a CK18 várható molekulatömegének felel meg. (124422-002) P02832HU_02_IR094/2013.12 o. 1/5
Óvintézkedések 1. Professzionális felhasználóknak. 2. A termék nátrium-azidot (NaN 3) tartalmaz, amely tiszta formában nagyon mérgezı vegyület. Bár a termékben található koncentráció besorolása alapján nem veszélyes, a nátrium-azid reakcióba léphet az ólom és réz vízvezetékekkel, ami során rendkívül robbanékony fém-azid lerakódások alakulhatnak ki. Kiöntéskor, a fém-azidok vezetékekben történı lerakódását megelızendı, nagy mennyiségő vízzel kell leöblíteni. 3. A biológiai anyagokból elıállított egyéb termékekhez hasonlóan ennél is ügyelni kell a megfelelı kezelési eljárások betartására. 4. A szemmel és bırrel való érintkezés elkerülésére viseljen megfelelı személyi védıfelszerelést. 5. A fel nem használt oldatot a helyi és állami hatósági elıírásoknak megfelelıen kell megsemmisíteni. Tárolás 2-8 C hımérsékleten tárolandó. Az üvegen feltüntetett lejárati idı után nem használható fel. Ha a reagenseket a megadottól eltérı körülmények között tárolják, a felhasználónak ellenıriznie kell az adott körülmények megfelelı voltát. A termék instabilitásának nincsenek egyértelmő jelei. Ezért a páciens mintájával együttesen egy pozitív és egy negatív kontrollvizsgálatot is el kell végezni. Ha nem várt festıdés jelenik meg, amely nem magyarázható a laboratóriumi technikákban rejlı eltérésekkel, és antitesttel kapcsolatos probléma gyanítható, forduljon a Dako Mőszaki szolgálatához. Gyors útmutató Lépés Megjegyzések Fixálás Formalin N/A Elıkezelés EnVision FLEX, High ph (kód: K8000/ K8004) 20 perc HIER, 3 az 1-ben PT Link és PT Link Rinse Station használatakor Hígítás Használatra kész 20 perc inkubálás Hígítópuffer Elıre hígított N/A Negatív kontroll FLEX Negative Control, Rabbit (kód: IR600) 20 perc inkubálás Megjelenítés EnVision FLEX, High ph (kód: K8000) 20 perc inkubálás, 2x5 perc DAB+ inkubálás Kontrasztfestés EnVision FLEX Hematoxylin 5 perc inkubálás (kód: K8008/K8018) Kontroll szövet Normál máj Citoplazma/membránfestıdés Lemezek FLEX IHC Microscope Slides (kód: K8020) A szövetmetszetek tárgylemezhez való tapadásának elısegítéséhez javasolt. Rögzítés Nem vizes, tartós rögzítıszer szükséges A festést követıen a metszeteket dehidratálni kell, meg kell tisztítani, majd tartós rögzítıszer használatával fel kell vinni a tárgylemezre. Készülék Autostainer Link 48 Használja a készülékspecifikus üvegeket (kód: SK200-SK203) *A felhasználónak mindig el kell olvasnia a terméktájékoztatót a festési eljárásra és a termék kezelésére vonatkozó részletes utasításokért. Minta-elıkészítés Paraffinba ágyazott metszetek: Az antitest formalinban fixált, paraffinba ágyazott szövetmetszetek jelölésére alkalmazható. A szövetmintákból körülbelül 4 µm-es metszeteket kell készíteni. Elıkezelés: A formalinnal fixált, paraffinba ágyazott szövetmetszeteket elı kell kezelni hıindukált epitópfeltárási (HIER) technikával. A legjobb eredményeket a szövetek hígított EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (kód: K8000/K8004) reagenst alkalmazó HIER technikával történı elıkezelésével lehet elérni. A deparaffinálás, rehidratálás és epitópfeltárás végrehajtható a Dako PT Link (kód: PT100/PT101) használatával. A részleteket illetıen lásd a PT Link Használati útmutatóját. A PT Link készüléknél az alábbi paramétereket kell alkalmazni: Elıhevítési hımérséklet: 65 C; az epitóp feltáráshoz szükséges hımérséklet és idı: 97 C 20 (±1) percre; hőtés 65 C-ra. Vegye ki a tartóállványt a PT tartály ából, és azonnal merítse a tárgylemezeket hígított, szobahımérséklető EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (kód: K8007) pufferoldatot tartalmazó edénybe/tartályba (pl. a PT Link Rinse Station (kód: PT109) edénybe). Hagyja a metszeteket 1-5 percen át a Wash Buffer pufferben. A szövetmetszeteknek a kezelés, illetve az azt követı immunhisztokémiai festési eljárás során nem szabad kiszáradniuk. A szövetmetszetek tárgylemezhez való tapadásának elısegítésére ajánlott a FLEX IHC Microscope Slides (kód: K8020) tárgylemezek használata. A festést követıen a metszeteket vízmentesíteni kell, meg kell tisztítani a reagens maradványoktól, majd tartós rögzítıszer segítségével fel kell vinni tárgylemezre. (124422-002) P02832HU_02_IR094/2013.12 o. 2/5
Festési eljárás Festés értelmezése Teljesítményjellemzık Megjelenítés: Az ajánlott megjelenítı rendszer az EnVision FLEX, High ph (kód: K8000/K8010), 20 perces, szobahımérsékleten történı inkubációt használva. Kövesse a kiválasztott megjelenítırendszer(ek)hez mellékelt eljárási leírást. Program: A festési lépések és inkubálási idık az Autostainer Link szoftverében elıre be vannak programozva. A javasolt alkalmazandó reagenstérfogat tárgylemezenként 1 x 200 µl vagy 2 x 150 µl. Kérjük, a metszetek és a reagensek behelyezésével kapcsolatos részletes utasításokat illetıen tájékozódjon a megfelelı Autostainer Link készülék Használati útmutatójából. Amennyiben a protokollok nem állnak rendelkezésre az alkalmazott Autostainer Link platformon, kérjük, forduljon a Dako Mőszaki szolgálatához. Az Autostainer Link szoftvertelepítıt megtalálja az alábbi weboldalon: www.dako.com\installer. A telepítı frissíti a DakoLink szoftvert az Anti-Human CK8/18, Clone EP17/EP30 termékhez tartozó protokollal és reagensinformációval. Az antitest protokoll rövid neve: CK8/18. Valamennyi inkubálási lépést szobahımérsékleten kell végezni. Kontrasztfestés: A javasolt kontrasztfesték az EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (kódok: K8008/K8018). Az optimális eredmény elérése érdekében nem vizes alapú, tartós rögzítıszer használata ajánlott. Kontrollok: Egyidejőleg pozitív és negatív kontrollokat is vizsgálni kell, ugyanazt a protokollt alkalmazva, mint a páciensmintákhoz. A pozitív kontrollszövetnek tartalmaznia kell normál májszövetet, és a sejteknek/struktúráknak a Teljesítményjellemzık részben az adott szövettípusra vonatkozóan ismertetett reakciómintázatot kell mutatniuk. Az ajánlott negatív kontroll reagens a FLEX Negative Control, Rabbit (Link) (kód: IR600). A sejtfestıdési mintázat citoplazmatikus / membránhoz kötıdı. Normál szövetek: Az epithelium sejtek közepes erıs citoplazmatikus és/vagy membránhoz kötıdı festési reakciót mutatnak (5). Meg kell jegyezni, hogy a retikuláris sejtek festıdése elıfordulhat a limfoid szövetekben. Mellékvese 3/3 Hasnyálmirigy 3/3 Csontvelı 0/3 Mellékpajzsmirigy 3/3 Emlı 3/3 Agyalapi mirigy 1/3 Kisagy 0/3 Prosztata 3/3 Nagyagy 0/3 Nyálmirigy 3/3 Méhnyak 1/3 Vázizom 0/3 Vastagbél 3/3 Bır 3/3 Nyelıcsı 3/3 Vékonybél 3/3 Szív 0/3 Lép 3/3 Vese 3/3 Gyomor 3/3 Máj 3/3 Here 2/3 Tüdı 3/3 Csecsemımirigy 3/3 Mezoteliális sejtek 2/3 Pajzsmirigy 3/3 Perifériás ideg 0/3 Mandula 3/3 Petefészek 3/3 Méh 1/3 (124422-002) P02832HU_02_IR094/2013.12 o. 3/5
Abnormális szövetek: Az epithelium sejtek közepes erıs citoplazmatikus és/vagy membránhoz kötıdı festési reakciót mutatnak (41/56) (6). Hepatocelluláris karcinóma 3/3 Melanóma 0/3 Világossejtes 3/3 Differenciálatlan karcinóma 1/3 vesekarcinóma Papilláris vesekarcinóma 3/3 Leiomioszarkóma (1) 0/1 Tüdı adenokarcinóma (2) 2/2 Rabdomioszarkóma (1) 0/1 Tüdı pikkelysejtes 1/1 Intesztinális karcinoid (2) 2/2 karcinóma (1) Kissejtes tüdıkarcinóma 3/3 Ovarium karcinóma (2) 2/2 Gyomor adenokarcinóma 3/3 Fibrotikus szövet (2) 0/2 Hasnyálmirigy adenokarcinóma Pajzsmirigy papilláris karcinóma Emlı ductalis karcinómája Emlı lobuláris karcinómája Prosztata adenokarcinóma Vastagbél adenokarcinóma 3/3 Teratóma - érett (1) 0/1 3/3 Teratóma - éretlen (1) 0/1 3/3 Leiomióma (2) 1/2 3/3 Diffúz nagy B-sejtes limfóma 0/2 (2) 2/3 T-sejtes limfóma (2) 0/2 3/3 Follikuláris limfóma (2) 0/2 Irodalomjegyzék 1. Moll R, Divo M, Langbein L. The human keratins: biology and pathology. Histochem Cell Biol 2008;129: 705-33. 2. Dabbs DJ. Diagnostic Immunohistochemistry. Philadelphia,PA: Churchill Livingstone, 2002. 3. Adams H, Schmid P, Dirnhofer S, Tzankov A. Cytokeratin expression in hematological neoplasms: A tissue microarray study on 866 lymphoma and leukemia cases. Pathol Res Pract 2008;204:569-73. 4. Lane EB, Alexander CM. Use of keratin antibodies in tumor diagnosis (review). Semin Cancer Biol 1990; 1:165-79. 5. Yu J. Report of Normal Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30. 2013. Report on file, D19056. 6. Yu J. Report of Cancer Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30. 2013. Report on file, D19756. Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 (CK8/18), Clone EP17/EP30 has been created by Epitomics Inc., using Epitomics proprietary rabbit monoclonal antibody technology covered under Patent Nos 5,675,063 and 7,402,409. (124422-002) P02832HU_02_IR094/2013.12 o. 4/5
Kiadás dátuma: 14/04 (124422-002) P02832HU_02_IR094/2013.12 o. 5/5