Agilent MassHunter szoftvercsalád A szoftver szerepe a tömegspektrometriában Tölgyesi László Applikációs mérnök Kromat Kft. HPLC/MS Szeminárium Hotel Hélia 2010. január 14.
Tartalom I. Rész MS Szoftver helye és szerepe II. Rész MassHunter Workstation III. Rész MassHunter Qualitative Analysis IV. Rész MassHunter Quantitative Analysis
Szoftver szerepe az analitikai munkafolyamatban Lépések Teljes időszükséglet Erőforrás elosztás Mintaelőkészítés Mérés Kiértékelés - riport készítés Eredmény Megbízható Pontos Teljes Hardver Érzékenység, dinamikus tartomány, felbontás, adatgyűjtési sebesség Szoftver Gyors módszerfejlesztés, megfelelő sebességű és inteligenciájú adatgyűjtés Algoritmusok, applikáció specifikus, hatékony adatvizualizáció és riportolás Automatizálható munkafolyamatok, könnyű használhatóság, egyetlen szoftver minden feladatra
Szoftveres kihívás MS felhasználóknak Könnyen tanulható Könnyen kezelhető Egyszerű adatbevitel Feladatok minimált ismétlése Stabilitás Teljesítmény Automatizálhatóság Munkafolyamatok támogatása (pl.: összegképlet és tisztaság ellenőrzés) Egyetlen szoftver minden készülékre és a legtöbb feladatra Mindig van hova tovább fejlődni, valamint bizonyos funkciók használata nem teljesen fájdalomentes!
Szoftveres kihívás MS forgalmazóknak Jó kapcsolat ápolása felhasználókkal Gyors reagálás a felhasználói kérdésekre Applikációs igények felmérése még korai stádiumban Egyensúly a szoftveres funkciók és a használhatóság között Növekvő felhasználói bázis, készülék és applikáció folyamatos támogatása
Tartalom I. Rész MS Szoftver helye és szerepe II. Rész MassHunter Workstation, új fejlesztések III. Rész MassHunter Qualitative Analysis IV. Rész MassHunter Quantitative Analysis
MassHunter Workstation Egyetlen szoftver az összes MS készülék vezérlésére Agilent 6000 series QQQ, TOF és Q-TOF rendszerek vezérlése A legtöbb 1100-as és 1200-as HPLC modul vezérlése (Chip- LCMS is!) + 1290 Infinity! LC/MS adatfeldolgozás: QQQ, TOF, QTOF és SQ GC/MS/MS rendszer vezérlése, valamint GC/MS és GC/MS/MS adatok feldolgozása Jövő: LC/SQ és GC/SQ vezérlése, valamint LC/Trap adatok értékelése
MassHunter Workstation Vezérlés Aktuális készülék paramétere (testreszabható) Rendszer diagram Valós idejű kromatogram és MS spektrum Minden információ egy felületen (At-A-Glance) LC MS módszer szerkesztő Worklist (Szekvencia)
MassHunter Workstation Autotune
Automatikus vagy manuális Tune Beépített pneumatikus rendszer a gyors tunolás érdékében 6460 QQQ 6230 TOF 6540 QTOF
Dinamikus MRM (Dynamic MRM) I 40 peszticid komponens elúciója 1 perces időablakban
Dinamikus MRM (Dynamic MRM) II Szegmentált MRM vs. Dinamikus MRM => 2x rövidebb ciklusidő >>> kisebb félértékszélességgel rendelkező csúcsok detektálhatósága >>> több komponens vagymagasabb dwell time érték
Dinamikus MRM (Dynamic MRM) III Az új applikációkkal esetenként 100 1000 komponenst kell meghatározni egyetlen MRM módszerrel. Élelmiszer és környezeti minták (pl. peszticidek) Proteomika Dinamikus MRM nékül Időszegmensek manuális definiálása a dwell time maximálásának érdekében Fáradságos módszer szerkesztés retenciós idő csúszásakor Dinamikus MRM használatával Az átlapoló MRM ablakok automatikus elrendezése Még kevesebb MRM átmenet adott idő alatt > nagyobb dwell time > nagyobb érzékenység Retenciós idők csúszása nem befolyásolja a mérést
Dinamikus MRM (Dynamic MRM) IV MRM átmenetek Idő >>>
MassHunter Optimizer Automatizált MRM módszer készítés Vegyület specifikus optimálás Prekurzor és fragmens ionok kiválasztása és optimálása Több módszer lehetősége (pozitív/negatív) Az eredmények adatbázisban való tárolása Lehetőségek: Infúziós, FIA, oszlopra Optimizer nélkül 500 komponens, komponensenként 2 db átmenettel >>> hetes munka Optimizer használatával Teljesen automatizálható >>> napok alatt
MassHunter Workstation B.03.01. (2010 eleje) Új funkciók DMRM nézegető (Viewer) Szegmentált MRM > DMRM, RT idők frissítése Osztott DMRM módszer
Tartalom I. Rész MS Szoftver helye és szerepe II. Rész MassHunter Workstation, új fejlesztések III. Rész MassHunter Qualitative Analysis IV. Rész MassHunter Quantitative Analysis
MassHunter Qualitative Analysis DataNavigator (kromatogram, spektrum, vegyület..) Teljes testreszabhatóság Kromatogramok (TIC, BPC, EIC, UV...) Tömegspektrum (MS, MS/MS) Módszerparaméterek Integrálási eredmények
Egyetlen szoftver minden rendszerhez GC, LC, CE vagy egyéb technika Egységnyi vagy nagyobb tömegpontosság Egyéb beépülő programok MS fragmentációs szint (MS<>MS/MS) Nem MS detektorok Tapasztalt felhasználóknak opció
Egyetlen szoftver minden rendszerhez A korábbi rendszerek (ChemStatiom, MSD ChemStation) rendszerek integráló algoritmusainak a beépítése Új MS/MS MS/MS (GC) Universal General ChemStation
Új help rendszer Struktúrált felépítés Munkafolyamatok Automatizálás Felhasználói grafikus felület Alapvető szoftveres műveletek Működési elv
Help: pl.: MFG algoritmus működése
MS Excel alapú riportgenerálás I MassHunter Értékelő MS Excel 2007 Prof MassHunter Excel modul Eredmény generáló motor XML scheme Riport sablon XML scheme Nyomtatás Excel létrehozása Eredmények Eredmények (*.xml) Grafikus elemek (*.emf, *.bmp) Excel dokumentum (*.xls vagy *.xlsx)
MS Excel alapú riportgenerálás II VBA makró alapú Táblák és grafikonok hozzáadása XML adatokból húzd és ejtsd módszerrel Excel alapú formázás Nyomtatási előnézet
Adat > Információ Adatgyűjtés LC/MS + GC/MS Vegyületek keresése Vegyületek összehasonlítása Vegyületek azonosítása TOF MS Q-TOF MS/MS QQQ MS/MS SQ MS Trap MS n GC/MS GC/MS/MS Vegyület keresés MFE Vegyület keresés LMFE (fehérjék) Vegyület keresés Auto MS/MS Vegyület keresés Target MS/MS Vegyület keresés Összegképlet Vegyületek minták között Metabolite ID Mass Profiler Vegyületek mintacsoportok között Mass Profiler PRO Mass Profiler Vegyületek >2 mintacsoport között Mass Profiler PRO Fehérje adatbázis keresés Spectrum Mill Mascot Egyéb (mzxml, mzdata) Pontos tömeg adatbázis keresés Endogén metabolitok (METLIN) Élelmiszer, igazságügyi, környezeti adatbázisok Spektrum könyvtárak LC/MS/MS NIST GC/EI-MS Fiehn GC/EI-MS Vegyület keresés AMDIS (GC/MS) Összegképlet generálás (pontostömeg MS és MS/MS) MS/MS szerkezet-spektrum korreláció (hamarosan) Teljesen mértékben automatizálható!
Workflow configuration 1. Ionkromatogram extrakciója 2. Kromatogram integrálása 3. Csúcs alatti MS spektrum extrakciója 4. Spektrum(ok) azonosítása (opcionális) 5. Összegképlet generálása az MS spektrumok felhasználásával 6. Riport elkészítése: PDF, nyomtatás
Pontos tömeg adatbázisok (TOF/Q-TOF) Accurate Mass Personal Compound Databases (AM-PCD) Monoizotópos tömeg Izotóp eloszlás Izotóp távolság TOF alapú szűrővizsgálatokra különböző könyvtárak (retenciós idő is definiálható!) METLIN endogén metabolit adatbázis (23000 db) Peszticid adatbázis (1600 db) Igazságügyi és toxikológiai adatbázis (7000 db) Egyedi, felhasználó által is létrehozható
Tömegspektrum alapú könyvtárak Fragmens spektrumok! GC/MS könyvtárak (elektron ionizáció) LC/MS/MS és GC/MS/MS könyvtárak ütközéses fragmentáció alapján Valós MS/MS (Q-TOF, QQQ, Trap és GC-QQQ), Eltérő ütközési energiák (CE) LC/MS forrásbeli fragmentáció: SQ, TOF, Q-TOF MS/MS könyvtárak Endogén metabolitok Igazságügy/Toxikológia (fejlesztés alatt) NIST LC/MS/MS és GC/MS könyvtárak
Tartalom I. Rész MS Szoftver helye és szerepe II. Rész MassHunter Workstation, új fejlesztések III. Rész MassHunter Qualitative Analysis IV. Rész MassHunter Quantitative Analysis
MassHunter Qualitative Analysis MRM infomráció Mintatábla Kromatogram Kalibráció
MassHunter Qualitative Analysis - előnyök Dinamikusan kapcsolt eredmények Minta ill. komponens alapú eredmény megjelenítés Több mint 20 paraméter kiugró értékének vizsgálata (Outlier criteria) Dinamikus MRM támogatása Paramétermentes MRM integrátor a gyors és hatékony értékeléshez SD Baseline Offset Paraméterek meghatárzása Elvetett csúcs Elfogadott csúcsok
Mennyiségi és minőségi analízis THC ISTD THC-D 3 THC konfirmációs ion - normált THC konfirmációs ion nem normált
Kalibráció
MS Excel alapú riportgenerálás VBA makró alapú Táblák és grafikonok hozzáadása XML adatokból húzd és ejtsd módszerrel Excel alapú formázás Nyomtatási előnézet Feltételed formázás
Összefoglalás Készülékvezérlés Mérés nyomonkövetése Módszer szerkesztés Optimálás Autotune Minőségi analízis Mérések megtekintése UV, MS kromatogramok UV, MS spektrumok Komponensek keresése Excel alapú riportolás Mennyiségi analízis Szűrhető eredmények Kalibráció Kiguró érték vizsgálat Excel alapú riportolás
Köszönöm a megtisztelő figyelmet!