PDGFR β- A fibroblast aktiváció korai markere myelofibrosisban BedekovicsJudit, Szeghalmi Szilvia, Fazekas Attila, Károlyi Katalin, Kiss Attila, Méhes Gábor Debreceni Egyetem, Orvos- és Egészségtudományi Centrum Debreceni Egyetem, Informatikai Kar
Bevezetés Reticulin szaporulat Kollagén szaporulat Osteomyelofibrosis III-as típusú kollagén Ezüst impregnáció I-es típusú kollagén Ezüst Impregnáció, Trichrome festés Csont újdonképzés Hematoxilin-eosin Rostok kimutatása Nincs információ a fibroblastokról
Bevezetés Sebgyógyulás Máj cirrhosis Tüdő fibrózis Vese mesangialis fibrózis Scleroderma PDGF Fibroblast proliferáció TGF-β Rosttermelés Fibrosis Myelofibrosis?
Bevezetés PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR (PDGF) PDGF-A, -B, -C, -D ligand alegységek. Megakaryocyta, macrophag, endothel, simaizom, fibroblast, cytotrophoblast sejtek termelik. PDGFR-α és -β receptor alegységek. Különböző sejteken eltérő megoszlás. PDGFRβ PDGFRα Ligand kötés dimerizáció autofoszforiláció aktiváció Tirozin-kináz receptor család imatinib mesyláttal blokkolható
Célkitűzések PDGF ÉS PDGFR SZEREPÉNEK VIZSGÁLATA MYELOFIBROSISBAN Jelen tanulmány célja: PDGFR-α és -β expresszió vizsgálata a csontvelői stroma sejteken A PDGFR expressziómértéke és az ezüst impregnációvalmeghatározott myelofibrosis grádus (MF) közötti korreláció PDGFR expresszió képanalitikai vizsgálata
Anyagok és módszerek Kérdés: PDGFR-α és -β expresszió vizsgálata a csontvelői stroma sejteken. Módszer: Kettős immunhisztokémiai vizsgálatok.
Anyagok és módszerek A/1, Silver reticulin A/2, PDGFR β - DAB CD34 - VIP B/1, PDGFR β - DAB SMA - VIP B/3, PDGFR β - DAB A/3, PDGFR β - DAB SMA - VIP A/4, PDGFR β - DAB PDGFR α- VIP B/2, PDGFR β - DAB CD34- VIP C, PDGFR β - DAB
Eredmények PDGFR αés βalegység EXPRESSZIÓ CSONTVELŐI MESENCHYMALIS SEJTEKEN Sejttípus Aktivált fibroblaszt Adventitialis fibroblaszt Perisinusoideali spericyta Pericapillaris pericyta PDGFRβ PDGFRα SMA CD34 + +/- - - + - - - + - + - + - + - Endothel - + - + Endostealis sejt + + - - Adipocyta - - - -
Anyagok és módszerek Kérdés: A PDGFR expressziómértéke és az ezüst impregnációvalmeghatározott myelofibrosis grádus (MF) közötti korreláció Módszer: A PDGFR β expresszión alapuló gradálási rendszer kialakítása. 89 eset vizsgálata. 20 kontrol 32 MPN 12 MDS 4 MPN/MDS 21 egyéb (AML, HCL, Apl.an., met., LCH) A goldstandard MF grádus és az új PDGFR βgrádus meghatározása.
Anyagok és módszerek PDGFR β 0: pozitív sejtek nem/ elvétve láthatók, kereszteződések nem láthatók PDGFR β 1: izolált pozitív sejtek és/ vagy ezek vékony nyúlványai, helyenként kereszteződések előfordulhatnak, de nem alkotnak diffúz hálózatot PDGFR β 2: pozitív sejtek, illetve ezek nyúlványai diffúz, laza hálózatot alkotnak, a nyúlványok között számos kereszteződés PDGFR β 3: pozitív sejtek és nyúlványaik, diffúz, dens hálózatot alkotnak, sejtekből és nyúlványaikból álló kötegekkel
Eredmények A/1, MF 0 A/2, MF 1 A/3, MF 2 A/4, MF 3 PDGFR β RETICULIN (MF) B/1,PDGFR β 0 B/2,PDGFR β 1 B/3,PDGFR β 2 B/4,PDGFR β 3
Eredmények r=0,86 7 10 56/89 megegyező grádus 1/89 MF grádus magasabb 2 11 13 1 32/89 PDGFRβ grádus magasabb 12 14 Pre-fibrotikus stádium diagnózisa 19 - követéses vizsgálatok - PDGF Fibrosis TGFβ
Anyagok és módszerek Kérdés: PDGFR expresszió képanalitikai vizsgálata Módszer: 40 digitalizált metszet képanalitikiai feldolgozása.
Anyagok és módszerek 40 CSONTVELŐ BIOPSZIA PDGFR β immunhisztokémia 40 DIGITÁLIS METSZET Scan Digitális metszet Csempe
Anyagok és módszerek Hasznos terület= parenchyma Barna terület= PDGFRβ+ terület
VIZSGÁLT PARAMÉTEREK Név Definíció Eredmények Hasznos Terület Barna Terület DB MaxKerület SumKerület wkerület SumSkeleton Top50Area Top50Ker Top50Skel /Hasznos T. A csontvelői parenchyma összterülete, zsír- és a csontszövet kivételével. A PDGFR β pozitív, barna objektumok összterülete, A PDGFR β pozitív, barna objektumok száma. A legnagyobb PDGFR β pozitív, barna objektum kerülete. A PDGFR β pozitív, barna objektumok kerületeinek összege. A kerület súlyozás a kereszteződések és a végpontok számával. A PDGFR β pozitív, barna objektumok vázainak összege. A metszeten belül az 50 legnagyobb barna objektum területének összege. A metszeten belül az 50 legnagyobb barna objektum kerületének összege. A metszeten belül az 50 legnagyobb barna objektum vázának összege. Minden paramétert a hasznos területtel normalizálva is vizsgáltunk.
Eredmények
Összefoglalás A PDGFR-β és -α alegységek számos stroma sejten kifejeződnek. Az aktivált fibroblastoka PDGFR-β alegységet minden esetben, míg a PDGR-α alegységet csak részlegesen expresszálják. A PDGFR-βalegység expresszióés a myelofibrosisgradus(mf) között szoros összefüggés van.
Köszönöm a figyelmet!