GEN-LAB 2014 II. szám Hírlevél
KINETEX BIPHENYL: a legújabb családtag Habár az elválasztási feladatok jelentős részét a jól bevált C18-as fázison meg tudjuk oldani, akad olyan kihívás, ahol érdemesebb 'alternatív' szelektivitású töltetek felé fordulni. A legújabb Kinetex Biphenyl ilyenkor szolgálhat mentőövként. Ez a fordított fázisú töltet ötvözi a core-shell technológia előnyeit, illetve egy olyan egyedi szelektivitást, amit egy C18-as kolonna nem tud nyújtani, különösképpen aromás vegyületek esetén. Megbízható, robusztus, és 100% víztűrő fázis. A Kinetex Biphenyl szelektivitása három fő kölcsönhatáson alapul: 1. Aromás π-π kölcsönhatás 2 Hidrofób kölcsönhatás (a biphenyl fázis kevésbé hidrofób, mint a C18, viszont a C8 és Phenyl-Hexyl tölteteknél magasabb a hidrofóbicitás) 3. Gyenge ionos és dipol-dipol kölcsönhatás a fenil gyűrűknek köszönhetően. Tökéletes választás, ha olyan mintánk van, amire a C18-as fázis szelektivitása nem megfelelő, illetve ha olyan poláris, bázikus anyagot kell elválasztanunk, ami nem kötődik meg a C18-as oszlopokon. Április 21-től Jelenleg 2.6u és 5u-os szemcsemérettel elérhető, de hamarosan érkezik 1.7u-os dimenzióban is. Szteroidok KINETEX BIPHENYL oszlopon Oszlop: Kinetex 2.6μm Biphenyl 100 Å, LC Column 50 x 4.6mm Kat.szám: 00B-4622-E0 Elúció: gradiens Eluens A: H 2 O Eluens B: ACN Gradiens Profil: Idő (min) Pct A Pct B 0 80 20 6 40 60 Áramlási seb: 1.85 ml/min Hőmérséklet: 30 C Detektálás: UV-Vis Abs.-Variable Wave.(UV) Minta: 1 Estriol 2 Hydrocortisone 3 Prednisone 4 Cortisone 5 Corticosterone 6 B-Estradiol 7 Cortisone Acetate 8 17-Hydroxyprogesterone 9 21-Hydroxyprogesterone 10 Deoxycorticosterone 1
Szteroidok különböző KINETEX fázisokon Oszlopok: Dimenziók: Eluens A: Kinetex 2.6μm Bipheny Kinetex 2.6μm C18 Kinetex 2.6μm XB-C18 Kinetex 2.6μm Phenyl-Hexyl 50 x 4.6mm H 2 O Eluens B: ACN Gradiens: 20%-->60% B 6perc alatt Áramlási seb: 1.85 ml/min Hőmérséklet: 30 C Detektálás: UV@220nm Minta: 1. Estriol 2. Hydrocortisone 3. Prednisone 4. Cortisone 5. Corticosterone 6. β-estradiol 7. Cortisone Acetate 8. 17-Hydroxyprogesterone 9. 21-Hydroxyprogesterone 10. Deoxycorticosterone Hatalmas akciókkal indulunk!!! Ha személyesen szeretne meggyőződni arról, hogyan tudná kihasználni a Kinetex Biphenyl előnyeit, kérjen tesztoszlopot! 2
Teljesítmény növelése HPLC oszlopokon Optimális teljesítmény elérése teljesen porózus oszlopon Egy hosszabb (250 mm), nagyobb szemcseméretű (5 mm) analitikai oszlopról egy rövidebb (150 mm), ugyanolyan átmérőjű (4,6 mm) kisebb szemcseméretű (3 mm) analitikai oszlopra való áttérés esetén: Optimális teljesítmény elérése Kinetex (core-shell) oszlopon Egy hosszabb (250 mm), nagyobb szemcseméretű (5 mm) teljesen porózus oszlopról egy rövidebb (150 mm), ugyanolyan átmérőjű (4,6 mm) kisebb szemcseméretű (2,6 mm) Kinetex héjszerkezetes oszlopra való áttérés esetén: 1. 2. 1. 2. 1. Teljesen porózus, 250*4,6 mm-es, 5 mm-os oszlop Rs=2,0 2. Teljesen porózus, 150*4,6 mm-es, 3 mm-os oszlop Rs=2,0 1. Teljesen porózus, 250*4,6 mm-es, 5 mm-os oszlop Rs=2,0 2. Kinetex, 150*4,6 mm-es, 2,6 mm-os oszlop Rs=2,65 2. oszlopon: Felbontás nem változik Teljesítmény 1,7-szeresére nő 2. oszlopon: Felbontás 1,3-szorosára nő Teljesítmény 1,7-szeresére nő Áramlási sebességet 3-szorosára növelve a teljesítmény 5-szörösére nő 3
Teljesítmény növelése HPLC oszlopokon (folyt II.) Optimális teljesítmény elérése Kinetex (core-shell) oszlopon Egy hosszabb (250 mm), nagyobb szemcseméretű (5 mm) teljesen porózus oszlopról egy rövidebb (100 mm), ugyanolyan átmérőjű (4,6 mm) kisebb szemcseméretű (2,6 mm) Kinetex héjszerkezetes oszlopra való áttérés esetén: Optimális teljesítmény elérése Kinetex (core-shell) oszlopon Egy hosszabb (250 mm), nagyobb szemcseméretű (5 mm) teljesen porózus oszlopról egy rövidebb (50 mm), ugyanolyan átmérőjű (4,6 mm) kisebb szemcseméretű (2,6 mm) Kinetex héjszerkezetes oszlopra való áttérés esetén: 1. 1. 2. 2. 1. Teljesen porózus, 250*4,6 mm-es, 5 mm-os oszlop Rs=2,0 2. Kinetex, 100*4,6 mm-es, 2,6 mm-os oszlop Rs=2,17 1. Teljesen porózus, 250*4,6 mm-es, 5 mm-os oszlop Rs=2,0 2. Kinetex, 50*4,6 mm-es, 2,6 mm-os oszlop Rs=1,53 2.oszlopon: Felbontás 1,1-szeresére nő Teljesítmény 2,5-szörösére nő Áramlási sebességet 3-szorosára növelve a teljesítmény 7,5-szörösére nő 2.oszlopon: Felbontás 0,77-szeresére nő Teljesítmény 5-szörösére nő Áramlási sebességet 3-szorosára növelve a teljesítmény 15-szörösére nő 4
Teljesítmény növelése HPLC oszlopokon (folyt III.) Hogyan hozzuk ki a maximumot az elválasztásunknál? Kolonna: Teljesen porózus C18(2) 250*4,6 mm, 5 mm Elúció típusa: Gradiens A eluens: 0,1 % hangyasav/víz B eluens: 0,1 % hangyasav/acetonitril Gradiens profil: Lépés Idő (perc) A B 1. 0 95 5 2. 2,79 95 5 3. 36,15 5 95 4. 36,38 95 5 5. 50,93 95 5 Áramlási sebesség: 1 ml/perc Oszlop hőmérséklet: 45 C Detektálás: UV - 254 nm (25 C) Nyomás: 106 bar 16-szoros teljesítmény növekedés Komponensek: 1. Pyridine 2. Acetaminophen 3. Quinine 4. Acebutolol 5. Chlorpheniramine 6. Triprolidine 7. Prednisolone 8. 4-Chlorobenzoic acid 9. 4-Chlorocinnamic acid 10. Diazepam 11. Diflunisal 12. Hexanophenone Kolonna: Kinetex C18 50*4,6 mm, 2,6 mm Part No: 00B-4462-E0 Elúció típusa: Gradiens A eluens: 0,1 % hangyasav/víz B eluens: 0,1 % hangyasav/acetonitril Gradiens profil: Lépés Idő (perc) A B 1. 0 95 5 2. 0,20 95 5 3. 2,47 5 95 4. 2,48 95 5 5. 3,47 95 5 Áramlási sebesség: 2,94 ml/perc Oszlop hőmérséklet: 45 C Detektálás: UV - 254 nm (25 C) Nyomás: 300 bar Komponensek: 1. Pyridine 2. Acetaminophen 3. Quinine 4. Acebutolol 5. Chlorpheniramine 6. Triprolidine 7. Prednisolone 8. 4-Chlorobenzoic acid 9. 4-Chlorocinnamic acid 10. Diazepam 11. Diflunisal 12. Hexanophenone 5
Teljesítmény növelése HPLC oszlopokon (folyt IV.) Hogyan hozzuk ki a maximumot az elválasztásunknál? Kolonna: Teljesen porózus C18(2) 250*4,6 mm, 5 mm Elúció típusa: Gradiens A eluens: 0,1 % hangyasav/víz B: 0,1 % hangyasav/acetonitril Gradiens profil: Lépés Idő (perc) A B 1. 0 95 5 2. 2,79 95 5 3. 36,15 5 95 4. 36,38 95 5 5. 50,93 95 5 Áramlási sebesség: 1 ml/perc Oszlop hőmérséklet: 45 C Detektálás: UV - 254 nm (25 C) Nyomás: 106 bar 25-szörös teljesítmény növekedés Komponensek: 1. Pyridine 2. Acetaminophen 3. Quinine 4. Acebutolol 5. Chlorpheniramine 6. Triprolidine 7. Prednisolone 8. 4-Chlorobenzoic acid 9. 4-Chlorocinnamic acid 10. Diazepam 11. Diflunisal 12. Hexanophenone Kolonna: Kinetex C18 50*4,6 mm, 2,6 mm Part No: 00B-4462-E0 Elúció típusa: Gradiens A eluens: 0,1 % hangyasav/víz B: 0,1 % hangyasav/acetonitril Gradiens profil: Lépés Idő (perc) A B 1. 0 95 5 2. 0,14 95 5 3. 1,59 5 95 4. 1,60 95 5 5. 2,23 95 5 Áramlási sebesség: 4,6 ml/perc Oszlop hőmérséklet: 45 C Detektálás: UV - 254 nm (25 C) Nyomás: 485 bar 6 Komponensek: 1. Pyridine 2. Acetaminophen 3. Quinine 4. Acebutolol 5. Chlorpheniramine 6. Triprolidine 7. Prednisolone 8. 4-Chlorobenzoic acid 9. 4-Chlorocinnamic acid 10. Diazepam 11. Diflunisal 12. Hexanophenone
Teljesítmény növelése HPLC oszlopokon (folyt V.) Használja a Kinetex 2,6 mm és a Kinetex 5 mm-os kalkulátort, amellyel egy teljesen porózus HPLC oszlopról tud módszert transzferálni egy Kinetex héjszerkezetes oszlopra Így növelhető a hatékonyság, felbontás, csökkenthető az analízis idő, ezáltal költséghatékonyabb módszert tud létrehozni Elérhetőség: www.phenomenex.com/kinetex/technicalresources 7
5 egyszerű lépés a kolonna minőségbiztosítási bizonylatok letöltéséhez 1. www.phenomenex.com bejelentkezés/regisztráció Jelentkezzen be a Phenomenex honlapjára! 2. MyDashboard Kattintson a MyDashboard ikonra! 3. My Support Válassza a lehetőségek közül a My Support fület! 4. HPLC/UHPLC CQA and CofA Keresse a kolonna minőségi bizonylatok lehetőséget! 5. Kat. szám Serial Lot. No. A megfelelő helyre írja be a kolonna cikkszámát és széria számát! 8
5 egyszerű lépés a roq QuEChERS minőségbiztosítási bizonylatok letöltéséhez 1. www.phenomenex.com bejelentkezés/regisztráció Jelentkezzen be a Phenomenex honlapjára! 2. MyDashboard Kattintson a MyDashboard ikonra! 3. My Support Válassza a lehetőségek közül a My Support fület! 4. roq QuEChERS Kits (CofA) Keresse a roq minőségi bizonylatok lehetőséget! 5. Kat. szám Serial Lot. No. A megfelelő helyre írja be a kolonna cikkszámát és széria számát! 9
A hónap HPLC alkalmazásai Organic acids on Synergi Hydro-RP 1 Oxalic acid 2 Tartaric acid 3 Glycolic acid 4 Formic acid 5 Pyruvic acid 6 Malonic acid 7 Acetic acid 8 Maleic acid 9 Citric acid Column: Synergi 4 µm Hydro-RP 80 Å, LC Column 250 x 4.6 mm, Ea Part No:00G-4375-E0 Dimensions:250 x 4.6 mm ID Elution Type:Isocratic Elution A:20mM Potassium phosphate ph 2.9 Gradient Profile: Step No. Time (min) Pct A 1 0 100 Flow Rate:0.7 ml/min Col. Temp: ambient Detection: UV-Vis Abs.-Variable Wave.(UV) @ 220 nm (22 C) Note:SecurityGuard Guard Cartridge System extends column lifetime. - SecurityGuard Cartridges, AQ C18 4 x 3.0mm, 10/Pk Part No.: AJ0-7511 - Holder Part No.: KJ0-4282 Sugars and Organic Acids Juice on Rezex ROA Column: Rezex ROA-Organic Acid H+ (8%), LC Column 300 x 7.8 mm Part No:00H-0138-K0 Dimensions:300 x 7.8 mm ID Elution Type:Isocratic Elution A:1.6 mm Heptafluorobutyric acid in water Gradient Profile: Step No. Time (min) Pct A 1 0 100 Flow Rate:0.6 ml/min Col. Temp: ambient Detection: Conductivity @ (22 C) 1 Malic acid 2 Succinic 3 Lactic acid 4 Acetic acid 5 Propionic acid 6 i-butyric 7 Butyric acid 8 Glucose 9 Fructose 10 Erythritol 11 Glycerol 12 Ethanol 13 n-propanol 10
A hónap GC alkalmazásai BTEX in Under Six Minutes on ZB-WAX Column:Zebron ZB-WAX, GC Cap. Column 30 m x 0.32 mm x 0.50 µm Part No:7HM-G007-17 Phase:Polyethylene Glycol (PEG) Dimensions:30 meters x 0.32 mm x 0.5 µm Oven Profile:60 C to 75 C at 15 C/min to 90 C at 3 C/min for 3 min Carrier Gas:Constant Flow Helium, 2 ml/min Injection:split 20:1 0.2 µl @ 250 C Detection: Flame Ionization (FID) (300 C) 1 Pentane 2 Heptane 3 Methylene chloride 4 Benzene 5 Decane 6 Toluene 7 Ethylbenzene 8 p-xylene 9 m-xylene 10 Dodecane 11 o-xylene Amines on Zebron ZB-SemiVolatiles 1 N-Nitrosodimethylamine 2 Pyridine 3 2-Picoline 4 N-Nitrosomethylethylamine 5 N-Nitrosodiethylamine 6 Aniline 7 N-Nitrosopyrrolidine 8 N-Nitrosodi-n-propylamine 9 N-Nitrosomorpholine 10 o-toluidine 11 N-Nitrosopiperidine 12 alpha,alpha-dimethylphenethylamine 13 4-Chloroaniline 14 N-Nitrosodi-n-butylamine 15 p-phenylenediamine 16 2-Nitroaniline 17 3-Nitroaniline 18 1-Naphthylamine 19 2-Naphthylamine 20 4-Nitroaniline 21 Diphenylamine 22 4-Aminobiphenyl 23 Methapyrilene 24 Benzidine 25 o-tolidine 26 p-dimethylaminoazobenzene 27 2-Acetylaminofluorene 28 3,3'-Dichlorobenzidine Column:Zebron ZB-SV, GC Cap. Column 30 m x 0.25 mm x 0.25 µm Part No:7HG-G027-11 Phase:5% Phenyl-Arylene 95% Dimethylpolysiloxane (Enviro-Inert) Dimensions:30 meters x 0.25 mm x 0.25 µm Oven Profile:40 C for 0.5 min to 260 C @ 40 C/min to 295 C @ 6 C/min to 325 C @ 25 C/min for 2 min Carrier Gas:Constant Flow Helium, 1.4 ml/min Injection:Split 10:1 1 µl @ 280 C Detection: Mass Selective (MSD) (340 C) Note:Analytes @ 25ppm in Dichloromethane Pulsed Split injection @ 25 p.s.i. Liner: AG0-8499 (Single Taper with Wool) Septum: AG0-4697 (PhenoRed -400) Inlet Base Seal: AG0-8620 (Easy Seals ) 11
Fecskendők A fecskendők a kromatográfiás mérések kiindulási pontját képezik, lévén, hogy maga a tényleges elválasztási folyamat is a befecskendezéssel veszi kezdetét, ekkor jut be ugyanis a mintánk a kromatográfiás rendszerbe. Különösen nagy jelentőséggel bír ez a gyógyszeranalitikánál gyakran használt nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (UHPLC) mérések estében, ahol hosszú élettartamú és nagy teljesítőképességű fecskendőkre van szükség, különösképp ha az inertség alapkövetelménynek számít. Az előbbiek mellett figyelembe véve, hogy rendkívül kis mennyiségek beméréséről van szó követelmény lehet a minimális mértékű minta áthordás és az alacsony szintű adszorpció. A Főbb technikai Paraméterek A hegy különböző típusai A gyártók számos különböző típusú tűvel ellátott fecskendőt kínálnak az alkalmazásoknak megfelelően. Néhány hasznos kitételt érdemes megemlíteni a kiválasztással kapcsolatban a felhasználásukat illetően. Manuális GC injektálás: Hagyományosan a 2-es típusú tű (Point Style 2) a legalkalmasabb a szeptumon való áthatolásra, úgy hogy az minimális letöredezést okozzon. Manuális HPLC injektálás: A legtöbb manuális injektorszelep a 22-es kaliberű, 3-as típusú tűvel felszerelt fecskendők méretéhez lett kialakítva. Felszívás: Bármely típus hatékony ebből a szempontból, de ha a legutolsó cseppet is szeretnénk elérni az üvegből, érdemes a 3- as, vagy az AS típusú tűt alkalmazni. 12
A fecskendő végződésének típusai Microliter fecskendők: Az ilyen típusú fecskendők kicsapódásra, kristályosodásra nem hajlamos, szerves, vagy üveggel nem kötődő minták esetén használhatók. Ideális körülmények között az elhasználódás minimális és az élettartam csaknem végtelen, de ha heterogén oldatokkal dolgozunk, minden egyes használat után alaposan mossuk ki a fecskendőt. Gastight (légmentes) fecskendők: A Gastight típusú fecskendők kiválóan alkalmazhatók mind folyadék, mind gázok esetében. A polimer tömítés szivárgásmentes használatot tesz lehetővé. Az anyaga általában véve PTFE, de más anyagból is előfordul a felhasználástól függően. Különösen a vizes és a kevésbé illékony minták esetében, mivel kisebb eséllyel keletkezik kicsapódás és keresztszennyeződés. A tűk méretei 13
Fotópályázat 2014 Kedves Olvasóink! Rengeteg fénykép érkezett a 2014.04.02-án véget érő kromatográfiás fotópályázatunkra. Ezúton szeretnénk megköszönni részvételüket és azt, hogy olyan odaadóan készítették el képeiket a Phenomenex plüss zebrával. Az első három helyezettet egy-egy digitális fényképkerettel díjazzuk, de a többiek se csüggedjenek, hiszen minden résztvevőnek küldünk egy kis meglepetést. Eredményhirdetés! Bemutatjuk a díjazott fotókat: I. helyezett II. helyezett Rendkívül igényes és kreatív fotók érkeztek az idei pályázatra. Gondolhatják milyen nehéz dolga volt a zsűrinek! A fotók olyan jól sikerültek, hogy szeretnénk megosztani Önökkel a többi képet is, honlapunkra résztvevőnként egy-egy fotót töltöttünk fel. különdíjas III. helyezett A többi szintén nagyon jól sikerült fotót honlapunkon (www.gen-lab.hu/hírek) megtekinthetik! I. helyezett: Suba János II. helyezett: Rácz Gergely Szilveszter III. helyezett: Polgár László Különdíjas: Dusa Péter Nagyon köszönjük megtisztelő részvételüket idei kromatográfiás fotópályázatunkon! 14 Reméljük sikerült egy kis jókedvet csempészni a kromatográfiás hétköznapokba, és ezúton biztatjuk Önöket, hogy következő fotópályázatunkra is nevezzenek!