A MINTATÁROL ROLÁSI KÖRÜLMÉNYEK HATÁSA EGYES ENDOKRIN PARAMÉTEREK EREDMÉNY NYÉRE Catomio Csilla, Mittli Ödönné és Szalay Sámuelné Vas Megyei Markusovszky Lajos Általános, Rehabilitáci ciós és s Gyógyf gyfürdı Kórház, Egyetemi Oktató Kórház Központi Laboratórium, rium, Szombathely
Bevezetés Az endokrin paraméterek többségére érkezı mintákat technikai és gazdaságossági okokból a feldolgozásig tárolni kell. A módszer leírások tartalmaznak ugyan minták tárolására vonatkozó adatokat, de ezek: - nem elég részletesek, - nem mindig illeszthetık a gyakorlathoz. Kevés az irodalmi adat az egyes analitok eltartására vonatkozólag.
Célkitőzés Adatokkal szolgálni saját mérési tapasztalataink alapján, az egyes endokrin paraméterek stabilitására vonatkozóan.
TSH Vizsgált paraméterek szabad pajzsmirigy hormonok (ft4, ft3) thyreoglobulin (Tg) thyreoglobulin ellenes antitest (TgAb) az adrenokortikotrop hormon (ACTH) prolactin (PRL) kvantitativ renin plazma renin aktivitás (PRA) parathormon intakt (PTHi)
Módszer Immunkémiai miai elvek immuno metrikus-assay (IMA) immuno-assay (IA) Kivitelezés Manuális: - RIA Automatizált: - Kemilumineszcens (CLMA, CLIA) - Elektrokemilumineszcens (ECLMA, ECLIA)
Alkalmazott immunkémiai miai automaták Architect i2000 (Abbott) Elecsys 2010 (Roche) Liaison (DiaSorin)
Vizsgált szérumok, mérésekm Rutin vizsgálatra érkezı egyedi szérum minta: N= 70 Mérések száma összesen : 652 10 endokrin biomarker Mérések: 1.) A vérvétel napján. 2.) Különbözı a gyakorlatunkhoz igazodó - tárolási idıszakok és tárolási körülmények között.
Eltartási idık és s körülmk lmények Kiindulási állapot Rövid távú eltartás Hosszú távú eltartás Feldolgozás a laborban érkezést követı 2 órán belül 4-12 óra 24-48 óra 1-8 hét Szobahımérsékleten, klíma nélkül Normál hőtıtérben 4-9 C Mélyhőtés ~ -20 C
Eredmények kiért rtékelése A biomolekulák stabilitását a kiindulási hormonszint változásának %-ában fejeztük ki Figyelembe vettük még: - a kísérletsorozat alatt mért inter-assay CV%, - a torzítás irányát, - eltérı koncentráció viszonyokat, Az eredményekben bemutatott koncentráció változás csak az eltartásnak tulajdonítható
Gyakoriság Eredmények A TSH : a két hónapos fagyasztásos tárolás során 0,014-0,6 mu/l szintő szérumokban 80% 60% 40% 20% N=65 64% 36% 0% Immunreaktivítás csökkent 60% Immunreaktivítás növekedett N=58 max: +45% 40% Gyakoriság 20% 0% -20% -23% 15% -40% -60% min: -58% Immunreaktivítás csökkent Immunreaktivítás növekedett
Egyedi változv ltozások a szérumok szabad pajzsmirigy hormon szintjeiben az 1 hétes tárolás s során 12,8 pmol/l -12-6 Mélyhőtıben 8,3 pmol/l 9 13 Normál hőtıtérben -15-10 -5 0 5 10 15 ft4 %-os koncentráció változás 14,8 pmol/l -0,9 4,6 pmol/l -3 4,4 pmol/l -3,2 2,5 pmol/l -2,8-4 0,2 1,4 3,9-15 -10-5 0 5 10 15 ft3 koncentrációk változása %
PTHi : rövid r távút eltartása plazmában és szérumban Szérum (N=11) Plazma (N=11) 32. 4-9 0 C Óra 24. 4. 20-25 0 C -13-10 -8-5 -3 0 3 5 8 10 PTHi szint változások átlaga (%)
PTHi hosszú távú eltartása eltérı koncentráci ciótartományú plazmában és s szérumban Plazmában 4.hét N.S. 3.hét 2.hét 1.hét PTHi szint változása (%) Szérumban < 50 pg/ml 50-100 pg/ml > 100 pg/ml N.S. 4.hét 3.hét 2.hét 1.hét -45-35 -25-15 -5 5 15
Rövid távút eltartás: Tg, TgAb Tg (N=13) TgAb (N=10) 48. * *** Óra 32. 28. 24. -*** -*** *** *** ** 4-9 C 8. 4. 20-25 C -30-20 -10 0 10 20 30 A Tg és TgAb szintek változása (%)
Eltérı koncentráci ció viszonyok: Tg hosszú távú eltartása <20 ng/ml N=5 >30 ng/ml N=5 S.E. NS 4.hét 3.hét 2.hét 1.hét -30-20 -10 0 10 A szérum Tg szint változása (%) a két koncentráció tartományban
Eltérı koncentráci ció viszonyok: Tg-Ab hosszú távú eltartása S.E. <50 IU/ml N=5 >100 IU/ml N=2 NS 4.hét 3.hét 2.hét 1.hét -70-60 -50-40 -30-20 -10 0 10 TgAb szint változások (%) a két koncentráció tartományban
ACTH szint (pg/ml) 30 25 20 15 10 5 Módszerfüggı változás: s: az az ACTH szintekben a fagyasztásos sos tárolt rolás s során N.S. p<0,05 Friss minta 2. hét 0 ECLMA CLMA CLMA p < 0,001 ECLMA -20-15 -10-5 0 5 10 15 20 immunreaktivitás változás %
A plazma renin aktivitás és s a renin szintek: fagyasztásos sos tárolt rolás 4,5 4 3,1 2,9* 2,6* 2,3* PRA (ng/ml/h) Renin (µiu/ml) 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 900 80 70 60 50 40 30 20 10 0 p<0,05 56,4 58,3 52,8 54,5 N.S. Friss plazma 2.hét 5.hét 7.hét
A plazma renin aktivitás és s a renin szintek: szignifikáns ns különbsk nbség az immunreaktivitásban PRA Renin -32* 7.hét -15,2* 5.hét -9,4* 2.hét -35-30 -25-20 -15-10 -5 0 5 10 koncentráció változás %
Következtetések I. Tároláskor az endokrin paraméterek szintje különbözı mértékben és irányban változik, melynek foka függ: Az egyedi szérumban mérhetı koncentráció tartománytól: alacsony szintek esetében kifejezettebb a degradáció. Az alkalmazott módszertıl ACTH A tárolás hıfokától és idıtartamától- PRA, ACTH, PTHi, Tg, TgAb, PRL, TSH. Az alkalmazott minta típusától - PTH intakt plazmában stabilabb. A kvantitatív renin a PRA-nál stabilabb.
Következtetések II. Ideális az lenne, ha a mintákból a hormonszinteket még a vérvétel napján megmérhetnénk. Mivel ez csak a teljesen automatizált módszereknél kivitelezhetı, ezért a lelet értelmezésénél az elıbb felsoroltakat figyelembe kell venni, mert különben hibás diagnózishoz juthatunk. A tudományos kutatásokhoz - ahol a mintákat néha hosszabb ideig is tárolni kell - mindezeket figyelembe kell venni, mert téves következtetésekhez vezethet.
Köszönöm m a figyelmet!