Platelia CMV IgG AVIDITY

Átírás

1 Platelia CMV IgG AVIDITY ANTI-CITOMEGALOVÍRUS IgG - AVIDITÁS MEGHATÁROZÁSA HUMÁN SZÉRUMBAN ENZIM-IMMUNOASSAY TECHNIKÁVAL /01

2 TARTALOMJEGYZÉK 1. FELHASZNÁLÁS 2. KLINIKAI JELENTŐSÉG 3. ALAPELV 4. TERMÉKINFORMÁCIÓK 5. FIGYELMEZTETÉSEK ÉS ÓVINTÉZKEDÉSEK 6. MINTÁK 7. A VIZSGÁLAT MENETE 8. AZ EREDMÉNYEK KIÉRTÉKELÉSE 9. TELJESÍTMÉNYJELLEMZŐK 10. AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI 11. GYÁRTÓI MINŐSÉGELLENŐRZÉS 12. IRODALOM 2 [HU]

3 1. FELHASZNÁLÁS A Platelia CMV IgG AVIDITY az anti-citomegalovírus IgG antitestek aviditásának humán szérumból történő meghatározására szolgáló enzim-immunoassay KIT. A Platelia CMV IgG AVIDITY próbát a Platelia CMV IgG készlettel együtt (ref ) kell használni. 2. KLINIKAI JELENTŐSÉG A humán citomegalovírusok (CMV) igen elterjedtek az emberi mépességben. A CMV a herpeszvírus-család tagja, és közvetlen kontaktussal terjed (vizelet, nyál, anyatej, vér, könnyek, sperma és hüvelyváladék). A fertőződést követően a CMV több évig is lappanghat a fertőzött beteg szervezetében, majd reaktiválódva újra és újra megjelenő fertőzéseket okoz, melyek során fennáll a lehetősége a másokra való továbbterjedésnek is. A gazdaszervezet többféle módon és különböző életszakaszokban fertőződhet meg (congenitális, post-natalis fertőzések). Egy bizonyos lappangási fázist követően másodlagos fertőzés alakulhat ki exogén vírus okozta reinfekció vagy a lappangó vírus reaktiválódása útján is. A lakosság 50-85%-a a felnőttkor előtt fertőződik meg, de a fertőzések többsége tünetmentes marad; mindössze a betegek 2%-ánál jelentkeznek atípusos tünetek, például láz, gyengeség, izom- vagy ízületi fájdalom. A CMV-fertőzés azonban súlyos kimenetelű is lehet, ha terhes nőket, újszülötteket vagy legyengült immunrendszerű egyéneket érint. Terhesség alatt a nők 1-3%-a fertőződik CMV-vel, és a betegek 40-50%-ánál figyelhető meg magzati fertőződés a placentán keresztül. A magzati fertőzések 95%- a tünetmentes, de 5% esetén a szövődmények rendkívül súlyosak: hepatosplenomegalia, microcephalia, hydrocephalia, koraszülés, pszichomotoros retardáció és magzatelhalás. A tünetmentes fertőzések 10%-ában az újszülötteknél késleltetve jelennek meg a szövődmények, mint például a részleges vagy teljes süketség vagy vakság. Immunszuppresszált egyéneknél (AIDS-es betegekben, transzplantáción átesett egyéneknél, limphoproliferatív vagy rákos betegségben szenvedőknél) a súlyos szövődmények a disszeminált és/vagy viscerális fertőzéssel vannak összefüggésben: splenomegalia, chorioretinitis, hepatitis, pneumonia, myocarditis, encephalitis. Ilyen betegeknél a fertőzés akár fatális kimenetelű is lehet. A CMV-fertőzés után néhány héttel az immunválasz következtében megjelennek a specifikus IgM antitestek, majd néhány nappal később a specifikus IgG antitestek. A CMV szerológiai diagnózisa szerokonverzióval vagy az IgG titer jelentős növekedésével igazolható. A nemrégiben kialakult és a már lezajlott fertőzések differenciáldiagnosztikája azonban nehéz az anti-cmv IgM antitestek perzisztálása, valamint az anti-cmv IgM reinfekció, a lappangó fertőzés reaktiválódása vagy az immunrendszer nemspecifikus stimulációja következtében történő ismételt megjelenése miatt. Ilyen esetekben egy enzimatikus immunológiai módszerrel elvégzett IgG-aviditás vizsgálat segíthet megkülönböztetni az akut és a már lezajlott fertőzést. Ez a meghatározás az immunválasz előrehaladottságának megállapításán alapul, mivel az elsődleges fertőzések során alacsony aviditású IgG antitestek képződnek, míg a régebbi fertőzések esetén jelen lévő IgG antitestek magas aviditásúak. 3 [HU]

4 3. ALAPELV A tesztet Platelia CMV IgG AVIDITY (ref ) és Platelia CMV IgG (ref ) próbák segítségével végezzük. A módszer alapelve a CMV ellen termelődött IgG antitestek aviditásának mérése. Egy adott vegyület (például karbamid) alkalmazása megszünteti az antigén/antitestkapcsolatot az IgG antitestek mérésére szolgáló technikával párhuzamosan, így összehasonlítható az optikai denzitás (OD) a disszociálószer alkalmazása után és előtt. Az aviditást akkor tekintjük alacsonynak, ha az antigén/antitest kötés könnyen disszociál. Az aviditást akkor tekintjük magasnak, ha az antigén/antitest kötés nehezen disszociál. Ezt a tesztet kizárólag olyan pozitív mintákon végezzük, amelyek anti-cmv IgGkoncentrációja a Platelia CMV IgG (ref ) próbával 0,5 AE/ml-nél magasabb lett. 1. lépés A 0,5-1,5 AE/ml anti-cmv IgG koncentrációjú aviditás kontrollokat és betegektől származó szérumokat 1:21 arányban kell hígítani. A 1,5 AE/ml anti-cmv IgG koncentrációjú betegektől származó szérumokat 1:101 arányban kell hígítani. Ezt követően a hígított mintákat két-két párhuzamosban be kell mérni a mikrolemez CMV-antigénnel bevont mélyedéseibe. Az egyórás, 37 C-os inkubálás alatt a mintában jelen lévő CMV elleni IgG antitestek kötődnek a mikrolemez mélyedéseiben megkötött CMV-antigénhez. Inkubálás után a nem kötött, nem specifikus antitesteket és egyéb szérumfehérjéket mosással el kell távolítani. 2. lépés Valamennyi aviditás kontrollt és betegtől származó szérumot dupla mélyedésbe mérünk: az egyik mélyedésbe kerül a kontroll oldat, a másikba pedig a disszociáló oldat. A szobahőmérsékleten ( C) történő 15 perces inkubálás alatt a disszociáló oldat megpróbálja bontani az antigén/antitest komplexeket. Inkubálás után az oldatokat és a disszociált IgG-t mosással el kell távolítani. 3. lépés Ezután a konjugátumot (humán γ-láncra specifikus, peroxidázzal jelzett poliklonális antitest) kell bemérni a mikrolemez mélyedéseibe. Az egyórás, 37 C-os inkubálás alatt a jelzett antitest kötődik a CMV-antigén által rögzített szérum IgG-hez. A kötetlenül maradó konjugátumot az inkubálás végén mosással el kell távolítani. 4. lépés Az immunkomplexek (CMV-antigén, CMV elleni IgG antitestek és anti-igg konjugátum) jelenlétét úgy mutatjuk ki, hogy minden mélyedésbe enzimes előhívó oldatot mérünk. 5. lépés A szobahőmérsékleten ( C) történő, 30 perces inkubálás után az enzimreakciót 1 N kénsavoldat hozzáadásával állítjuk le. A spektrofotométerrel, 450/620 nm hullámhosszon mért optikai denzitás arányos a mélyedésben jelen lévő CMV elleni IgG antitestek mennyiségével. 4 [HU]

5 4. TERMÉKINFORMÁCIÓK A készletben található reagensek mennyisége 48, a Platelia CMV IgG készlettel (ref ) elvégzett teszthez elegendő. A reagensek kizárólag in vitro diagnosztikai célra használhatóak. Címke A reagens leírása Kiszerelés R5a Alacsony aviditású kontroll Alacsony aviditású kontroll A CMV elleni IgG antitestekkel reagáló, de HBs-antigénre, anti-hiv1, anti-hiv2 és anti-hcv antitestekre negatív humán szérum Tartósítószer: < 1,5% ProClin x 0,75 ml R5b Magas aviditású kontroll Magas aviditású kontroll A CMV elleni IgG antitestekkel reagáló, de HBs-antigénre, anti-hiv1, anti-hiv2 és anti-hcv antitestekre negatív humán szérum Tartósítószer: < 1,5% ProClin x 0,75 ml R12 Kontroll oldat Kontroll oldat TRIS-NaCl puffer (ph 7,6 ± 0,2), 0,1% Tween 20 és zöld festék Tartósítószer: < 1,5% ProClin x 28 ml R13 Disszociáló oldat Disszociáló oldat TRIS-NaCl puffer (ph 7,6 ± 0,2), karbamid, 0,1% Tween 20 és sárga festék Tartósítószer: 0,001% ProClin x 13 ml A tárolási feltételeket és a lejárati időt lásd a dobozon. 5. FIGYELMEZTETÉSEK ÉS ÓVINTÉZKEDÉSEK Az eredmények megbízhatósága az alábbi helyes laboratóriumi gyakorlat (GLP) irányelveinek megfelelő betartásától függ: Lejárt reagensek használata tilos! A különböző tételekből származó reagenseket nem szabad összekeverni, illetve egymással kombinálni. A felhasználás előtt várjon 30 percet, hogy a reagensek szobahőmérsékletre ( C) melegedjenek. Használjon alaposan elmosott és ioncserélt vízzel kiöblített üvegeszközöket. Az egyszerhasználatos eszközök használata ajánlott! Minden mintához külön pipettahegyet kell használni. Ellenőrizze a pipetták és egyéb eszközök pontosságát és megfelelő működését! Szigorúan kövesse a mérési eljárást. Lásd még a Platelia CMV IgG készlethez mellékelt termékismertetőt (ref ). 5 [HU]

6 Megjegyzés: A Platelia CMV IgG AVIDITY készlet használható különböző Platelia CMV IgG (ref ) tételekkel. Egészségügyi és biztonsági utasítások A reagensek elkészítéséhez használt humán eredetű anyagokat hepatitis B felületi antigénre (HBs Ag), hepatitis C vírus elleni (anti-hcv) és HIV elleni antitestekre (anti- HIV1 és anti-hiv2) vizsgálták, és negatívnak találták. Mivel nem létezik olyan módszer, amellyel teljes biztonsággal kizárható a fertőző ágensek jelenléte, a humán eredetű reagenseket és betegmintákat potenciális fertőzési forrásként kell kezelni. Bármely anyagot, beleértve a mosóoldatot is, amely közvetlen érintkezésbe kerül a mintákkal és a humán eredetű anyagokat tartalmazó reagensekkel, potenciális fertőzési forrásként kell kezelni. A mintákkal és reagensekkel való munka során viseljen egyszerhasználatos védőkesztyűt. Szájjal pipettázni tilos! Ügyeljen arra, hogy a minták, illetve a mintákat tartalmazó oldatok ne folyjanak ki. A kiömlött anyagokat 10%-os nátrium-hipoklorit oldattal kell lemosni. Ha sav ömlik ki, akkor azt először nátrium-bikarbonáttal semlegesíteni kell, majd 10%-os nátrium-hipoklorit oldattal kell lemosni, és a területet száraz papírtörlővel feltörölni. A tisztításhoz használt anyagokat a szennyezett maradékok tárolására szolgáló edénybe kell beledobni. A betegmintákat, humán eredetű anyagokat tartalmazó reagenseket, valamint a szennyezett anyagokat és termékeket kizárólag fertőtlenítés után lehet hulladékba helyezni. A kémiai és biológiai maradványokat a helyes laboratóriumi gyakorlat (GLP) előírásainak megfelelően kell kezelni és megsemmisíteni. A készletben lévő valamennyi reagens kizárólag in vitro diagnosztikai célra használható. Lásd még a Platelia CMV IgG készlethez mellékelt termékismertetőt (ref ). Preporuke o rizicima i sigurnosnim mjerama koje se odnose na neke kemičke proizvode u ovom kompletu mogu se naći u piktogramima na etiketama i u informacijama na kraju uputa za uporabu. Sigurnosni list je dostupan na internetskoj stranici 6. MINTÁK 1. Ehhez a méréshez kizárólag szérumminta javasolt. 2. A vérminták kezelése, feldolgozása és tárolása során tartsa be az alábbi ajánlásokat: Mindig a vénaszúrással kapcsolatos rutin óvintézkedések betartásával vegye le a vérmintákat. Centrifugálás előtt hagyja, hogy a minták teljesen megalvadjanak. A csöveket mindig tartsa lezárva. Centrifugálás után öntse le a szérumot az alvadékról vagy a vörösvérsejtekről egy tárolócsőbe, amelyet azután szorosan lezár. A minták +2-8 C-on tárolhatók, ha a vizsgálat 7 napon belül megtörténik. Amennyiben a vizsgálatot nem végzik el 7 napon belül, vagy a mintákat elszállítják, akkor fagyassza le azokat 20 C-ra, vagy annál alacsonyabb hőmérsékletre. 6 [HU]

7 Ne használjon olyan mintákat, amelyeket több mint öt alkalommal felolvasztottak. A lefagyasztott, majd felolvasztott mintákat a vizsgálat előtt alaposan össze kell keverni (Vortex). 3. A 90 g/l albumint vagy 100 mg/l konjugálatlan bilirubint, illetve 36 g/l triolein (triglicerid) ekvivalens lipémiás, vagy max. 10 g/l hemoglobintartalmú hemolizált minták az eredményeket nem befolyásolják. 4. A mintákat nem szabad melegíteni. 7. A VIZSGÁLAT MENETE 7.1 A méréshez szükséges, de a készletben nem szereplő anyagok Lásd a Platelia CMV IgG készlethez mellékelt termékismertetőt (ref ). 7.2 A reagensek feloldása R5a, R5b: Az alacsony aviditású kontrollt (R5a) és a magas aviditású kontrollt (R5b) 1:21 arányban kell hígítani a Platelia CMV IgG próba (ref ) készletben lévő R7 hígítószerrel. R12, R13: A kontroll oldat (R12) és a disszociáló oldat (R13) azonnal felhasználhatóak. A többi reagens elkészítését lásd a Platelia CMV IgG készlethez mellékelt termékismertetőben (ref ). 7.3 A felbontott és/vagy feloldott reagensek tárolása és eltarthatósága A készletet +2-8 C-on kell tárolni. Ha a készletet +2-8 C-on tartják felbontás előtt, akkor minden alkotórész a készlet külső címkéjén feltüntetett lejárati ideig használható. R5a, R5b: A reagensek felbontás után, +2-8 C-on tárolva, a szennyeződésektől megóvva max. 8 hétig őrzik meg minőségüket. R12, R13: A reagensek felbontás után, +2-8 C-on tárolva, a szennyeződésektől megóvva max. 8 hétig őrzik meg minőségüket. Lásd még a Platelia CMV IgG készlethez mellékelt termékismertetőt (ref ). 7.4 Eljárás Szigorúan kövesse a mérési eljárást és a helyes laboratóriumi gyakorlat (GLP) előírásait. A vizsgálat eredményeinek validálása érdekében minden méréskor tegyen a lemezre alacsony aviditású (R5a) és magas aviditású (R5b) kontrollt. A többi reagens (R1, R2, R6, R7, R9 és R10) a Platelia CMV IgG készletben (ref ) található. Megjegyzés: használat előtt hagyja, hogy a reagensek szobahőmérsékletre ( C) melegedjenek, különös tekintettel az R12 és R13 reagensekre. 7 [HU]

8 1. Gondosan tervezze meg a kontrollok és a betegminták elhelyezését és beazonosítását a lemezen. 2. Készítse el a hígított mosóoldatot (R2). 3. Vegye ki a tartótálcát és a sorokat (R1) a védőcsomagolásból. 4. Hígítsa 1:21 arányban az aviditás kontrollokat (R5a, R5b) és a 0,5-1,5 AE/ml anti- CMV IgG koncentrációjú betegmintákat (S1, S2 ) a hígítószerrel (R7) (25 µl minta és 0,5 ml hígítószer [R7]) megfelelő azonosítóval ellátott csövekben. A 1,5 AE/ml anti-cmv IgG koncentrációjú betegektől származó szérumokat 1:101 arányban kell hígítani (5 µl minta és 0,5 ml hígítószer [R7]). Homogenizálja a mintákat Vortex keverővel. 5. Szigorúan betartva az alábbi sorrendet, mérjen be µl-t a kontrollokból és a betegmintákból az egyes mélyedésekbe: A R5a R5a S7 S7 B R5b R5b C S1 S1 D S2 S2 E S3 S3 F S4 S4 G S5 S5 H S6 S6 6. Fedje le a mikrolemezt tapadófóliával, erősen rányomkodva azt a lemezre, ezzel biztosítva a megfelelő zárást. Azonnal kezdje meg a mikrolemez inkubálását 37 C ± 1 C-os, termosztáttal szabályozott vízfürdőben vagy száraz inkubátorban, és inkubálja 1 órán át (± 5 perc). 7. Az első inkubációs idő letelte után vegye le a tapadófóliát a lemezről. Szívja fel a mélyedések tartalmát, és helyezze (nátrium-hipokloritot tartalmazó) biológiai hulladéktartályba. 8. Gyorsan mérjen be µl kontrolloldatot (R12) a páratlan sorok mélyedéseibe.. Ezután gyorsan mérjen be µl disszociáló oldatot (R13) a páros sorok mélyedéseibe. 9. Inkubálja a lemezt szobahőmérsékleten ( C) 15 ± 2 percig. 10. Az inkubációs időszak vége előtt készítse el a konjugátum-munkaoldatot (R6 + R7). 11. Az inkubációs időszak leteltével szívja fel a mélyedések tartalmát, és helyezze (nátrium-hipokloritot tartalmazó) biológiai hulladéktartályba. Mossa le a mikrolemezt 2 alkalommal 350 µl mosóoldattal (R2). Fordítsa le a lemezt, és óvatosan ütögesse rá a papírtörlőre, ezzel eltávolítva a maradék folyadékot. 12. Rögtön mérjen bele minden mélyedésbe µl konjugátum-munkaoldatot (R6 + R7). Az oldatot használat előtt össze kell rázni. 13. Fedje le a mikrolemezt tapadófóliával erősen rányomkodva azt a lemezre, ezzel biztosítva a megfelelő zárást. Azonnal kezdje meg a mikrolemez inkubálását 37 C ± 1 C-os, termosztáttal szabályozott vízfürdőben vagy száraz inkubátorban, és inkubálja 1 órán át (± 5 perc). 8 [HU]

9 14. Az inkubációs idő letelte után vegye le a tapadófóliát a lemezről. Szívja fel a mélyedsések tartalmát, és helyezze (nátrium-hipokloritot tartalmazó) biológiai hulladéktartályba. Mossa le a mikrolemezt 4 alkalommal 350 µl mosóoldattal (R2). Fordítsa le a lemezt, és óvatosan ütögesse rá a papírtörlőre, ezzel eltávolítva a maradék folyadékot. 15. Gyorsan mérjen bele minden mélyedésbe µl kromogén oldatot (R9) fénytől védett körülmények között. Hagyja végbemenni a reakciót sötétben, szobahőmérsékleten ( C) 30 ± 5 percig. Ezen inkubálás alatt ne fedje le a lemezt a tapadófóliával. 16. Mérjen be µl leállító oldatot (R10) minden mélyedésbe, leállítva az enzimreakciót. Ezt ugyanolyan sorrendben és sebességgel végezze, mint az előhívó oldat esetében tette. 17. Gondosan törölje le a lemez alját. A reakció leállításától számított 30 percen belül egy lemezleolvasó segítségével mérje meg az optikai denzitást 450/620 nm-en. A sorokat leolvasás előtt folyamatosan fénytől védve kell tárolni. 18. Az eredmények továbbítása előtt ellenőrizze a mért értékeket, a lemez kiosztási tervét és a mintákat. 8. AZ EREDMÉNYEK KIÉRTÉKELÉSE 8.1 Az aviditási index (AI) kiszámítása A minta aviditási indexe (AI) a disszociáló oldattal (R13) és a kontroll oldattal (R12) kapott optikai denzitások (OD) hányadosa: AI = OD minta R13 / OD minta R12 Az AI csak akkor számítható ki, ha a kontroll oldatot tartalmazó minta optikai denzitása nagyobb mint 0,2. Az 1:101 arányban hígított mintáknál, abban az esetben, ha a kontroll oldatot tartalmazó minta optikai denzitása 0,2, a mintát célszerű ismét megmérni 1:21 hígításban. Az 1:21 arányban hígított mintáknál, abban az esetben, ha a kontroll oldatot tartalmazó minta optikai denzitása 0,2, az anti-cmv IgG koncentráció túlságosan alacsony, így a minta IgG-aviditása nem mérhető. 8.2 Minőségellenőrzés Tegye fel az összes kontrollt minden egyes mikrolemezre minden méréshez, és elemezze a kapott eredményeket. A mérés akkor megfelelő, ha kielégíti az alábbi kritériumokat: Optikai denzitás-értékek a kontroll oldattal (R12): OD R5a 0,250 OD R5b 0,750 Aviditási indexek: AI R5a < 0,35 AI R5b 0,60 9 [HU]

10 Amennyiben a mérés nem felel meg a felsorolt minőségellenőrzési feltételeknek, meg kell ismételni. 8.3 Az eredmények értelmezése Aviditási index (AI) AI < 0,40 Értelmezés Alacsony aviditási zóna 0,40 AI < 0,55 Szürke aviditási zóna AI 0,55 Magas aviditási zóna A 0,40 alatti aviditási indexek esetén nagyobb a valószínűsége annak, hogy 3 hónapon belül kialakult elsődleges fertőzésről van szó. Ezek az eredmények azonban nem alkalmasak biztos diagnózis felállítására. A 0,55 aviditási indexek esetén nagyobb a valószínűsége annak, hogy 3 hónapnál régebbi fertőzésről van szó. Ezek az eredmények azonban nem alkalmasak arra, hogy teljes bizonyossággal kizárják a 3 hónapon belül kialakult elsődleges fertőzés lehetőségét. Nemrégiben kialakult fertőzés gyanúja esetén, illetve ha az aviditási index a szürke zónában van, új mintát kell venni és meg kell ismételni a vizsgálatot (a betegek kivizsgálásával kapcsolatban lásd a hatályos jogszabályokat). 8.4 Hibaelhárítási útmutató Az érvénytelen vagy nem reprodukálható reakciókat gyakran az alábbi tényezők okozzák: Nem megfelelő hőmérsékletű reagensek. A mikrolemez nem megfelelő mosása. Nem megfelelő mintahígítás. A negatív minták szennyeződése magas antitest titerű szérummal. Az előhívó oldat szennyeződése kémiai oxidálószerekkel (pl. fertőtlenítővel, fémionokkal stb.). A leállító oldat szennyeződése. 9. TELJESÍTMÉNYJELLEMZŐK 9.1 Klinikai vizsgálatok A Platelia CMV IgG AVIDITY teljesítményét 1 vizsgáló helyszínen határoztuk meg, összesen 366, terhes nőtől származó mintával. Prospektív vizsgálat történt 144 olyan mintával, amely az előzetesen elvégzett Platelia CMV IgG (72810) teszttel pozitívnak bizonyult. A Platelia CMV IgG AVIDITY eredményeit a referenciaként használt, kereskedelmi forgalomban lévő EIA IgG aviditási próbával kapott eredményekkel vetettük össze. A két teszt közötti konkordancia 98,6% volt (142/144). Két minta esetén mutatkoztak kisebb eltérések: közepes aviditás a Platelia CMV IgG AVIDITY teszttel és magas aviditás a kereskedelmi forgalomban lévő teszttel (n = 1), magas aviditás a Platelia CMV IgG 10 [HU]

11 AVIDITY teszttel és közepes aviditás a kereskedelmi forgalomban lévő készlettel (n = 1). Retrospektív vizsgálatot végeztünk 200, régebbi CMV-fertőzéses mintából álló panelen: 100 minta volt anti-cmv IgG pozitív és anti-cmv IgM negatív, valamint magas aviditási indexű a kereskedelmi forgalomban lévő EIA IgG aviditási teszttel. 100 minta volt anti-cmv IgG pozitív és anti-cmv IgM pozitív, valamint magas aviditási indexű a kereskedelmi forgalomban lévő EIA IgG aviditási teszttel. Minden olyan régi fertőzéses minta, amely anti-cmv IgM negatív volt (100/100), magas aviditási indexűnek mutatkozott a Platelia CMV IgG AVIDITY teszttel. Az anti-cmv IgM pozitív régi fertőzéses minták közül 97-nek volt magas az aviditási indexe, amelyet a kereskedelmi forgalomban lévő EIA IgG aviditási próba is igazolt. 3 másik minta esetén a Platelia CMV IgG AVIDITY készlet közepes aviditást mért. 22 primer CMV-fertőzéses köztük 4 szerokonverziós minta vizsgálatára is sor került. Közülük 21 aviditási indexe alacsony volt. Csak egy minta aviditási indexe volt közepes (AI = 0,41). Egy ugyanezen betegtől 48 nappal korábban levett minta alacsony aviditási indexű volt. 3 kereskedelmi forgalomban lévő szerokonverziós panelt is megvizsgáltunk (PTC901, RP003 és RP019). Az utolsó IgG negatív minta után 80 nappal levett minták alacsony aviditási indexűek voltak. 9.2 Pontosság A pontossági vizsgálatokat 3 anti-cmv IgG pozitív mintával végeztük 1:101 arányú hígításban, valamint 3 anti-cmv IgG pozitív mintával 1:21 arányú hígításban. Mérésen belüli pontosság (ismételhetőség): A mérésen belüli ismételhetőség meghatározásához hat mintát teszteltünk 30 alkalommal egyazon mérésen belül. Minden mintánál meghatároztuk az aviditási indexeket. Az egyes mintákhoz tartozó átlagos AI-t, szórást (SD) és variációs koefficienst (%CV) az alábbi táblázatban foglaltuk össze: Mérésen belüli pontosság (ismételhetőség) N = 30 Alacsony AI 1:101 Közepes AI 1:101 Magas AI 1:101 Alacsony AI 1:21 Közepes AI 1:21 Magas AI 1:21 Átlag 0,25 0,55 0,88 0,20 0,49 0,70 SD 0,018 0,015 0,037 0,008 0,020 0,015 %CV 7,3% 2,7% 4,3% 4,0% 4,1% 2,2% Mérések közötti pontosság (reprodukálhatóság): 11 [HU]

12 A mérések közötti reprodukálhatóság meghatározásához hat mintát teszteltünk kétkét párhuzamos vizsgálattal, naponta 2-2 mérést elvégezve 20 napon át. Minden mintánál meghatároztuk az aviditási indexeket. Az egyes mintákhoz tartozó átlagos AI-t, szórást (SD) és variációs koefficienst (%CV) az alábbi táblázatban foglaltuk össze: Mérések közötti pontosság (reprodukálhatóság) N = 80 Alacsony AI 1:101 Közepes AI 1:101 Magas AI 1:101 Alacsony AI 1:21 Közepes AI 1:21 Magas AI 1:21 Átlag 0,24 0,49 0,82 0,13 0,41 0,61 SD 0,026 0,032 0,045 0,015 0,029 0,035 %CV 10,6% 6,4% 5,5% 12,0% 6,9% 5,7% 10. AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI A CMV-fertőzés kizárólag a klinikai és a biológiai adatok együttes mérlegelése alapján diagnosztizálható. Egyetlen anti-cmv IgG antitest titer- és aviditás mérés eredménye nem elegendő a nemrégiben kialakult citomegalovírus-fertőzés diagnózisának felállításához. 11. GYÁRTÓI MINŐSÉGELLENŐRZÉS Az előállított reagensek minőségügyi rendszerünk előírásainak megfelelően készültek a nyersanyagok bevételezésétől kezdve a végtermék forgalomba kerüléséig. Minden egyes tétel minőségellenőrző vizsgálatokon esett át, és kizárólag a meghatározott jóváhagyási feltételeknek való megfelelés után kerül piacra. Az egyes tételek előállítása és ellenőrzése során készült jegyzőkönyveket a Bio-Rad őrzi. 12. IRODALOM 1. Alford C.A., Stagno S., Pass R.F., Britt W.J Congenital and perinatal cytomegalovirus infection. Rev. Infect. Dis. 12: S745-S Demmler G.J Summary of a workshop on surveillance for congenital cytomegalovirus disease. Rev. Infect. Dis. 13: Fowler K.B., Stagno S., Pass R.F., Britt W.J., Boll T.J., Alford C.A The outcome of congenital and cytomegalovirus in relation to maternal antibody status. N. Engl. J. Med. 326: Gaytant M.A., Rours I.G., Steegers E.A., Galama J.M., Semmekrot B.A Congenital cytomegalovirus infection after recurrent infection: case reports and review of the literature. Europ. J. Pediatr. 162: Grangeot-Keros L., Mayaux M.J., Lebon P., and al Value of cytomegalovirus (CMV) IgG avidity index for the diagnosis of primary CMV infection in pregnant women. J. Infect. Dis. 175: [HU]

13 6. Lazzarotto T., Guerra B., Spezzacatena P., Varani S., Gabrielli L., Pradelli P., Rumpianesi F., Banzi C., Bovicelli L., Landini M.P Prenatal diagnosis of congenital cytomegalovirus infection. J. Clin. Microbiol. 36: Macé M., Sissoef L., Rudent A., Grangeot-Keros L A serological testing algorithm for the diagnosis of primary CMV infection in pregnant women. Prenat. Diagn. 28: Munro S.C., Hall B., Whybin L.R., Leader L., Robertson P., Maine G.T., Rawlinson W.D Diagnosis of and screening for cytomegalovirus infection in pregnant women. J. Clin. Microbiol. 43: Revello M.L., Gerna G Diagnosis and management of human cytomegalovirus infection in the mother, fetus and newborn infant. Clin. Microbiol. Rev. 15: Stagno S., Pass R.F., Dworsky M.E., and al Congenital cytomegalovirus infection: the relative importance of primary and recurrent maternal infections. N. Engl. J. Med. 306: [HU]

14 14 [HU]

15 15 [HU]

16 16 [HU]

17 17 [HU]