INZUNREZISZTENCIA KEZELÉSÉRE SZÁNT NÖVÉNYI HATÓANYAGTARTALMÚ KÉSZÍTMÉNY PREFORMULÁCIÓS VIZSGÁLATA

Átírás

1 INZUNREZISZTENCIA KEZELÉSÉRE SZÁNT NÖVÉNYI HATÓANYAGTARTALMÚ KÉSZÍTMÉNY PREFORMULÁCIÓS VIZSGÁLATA Témavezető: Dr. Bácskay lldikó Konzulens: dr. Sinka Dávid Zsolt Szendi Nóra V. éves gyógyszerész hallgató 1

2 BEVEZETÉS I: INZULINREZISZTENCIA Vázizom, máj, zsírszövet sejteinek glükóz felvétele csökken Oka: inzulin receptor tirozinkináz aktivitása csökken Szerin foszforiláció GLUT-4 csatorna transzlokációja gátolt Inzulin szekréció fokozódása, majd a β-sejtek kimerülnek 2-es típusú diabetes mellitus és metabolikus szindróma kialakulása PREVENCIÓ! 2

3 BEVEZETÉS II: /International Diabetes Federation/ 3

4 CÉLKITŰZÉSEK Görögszénamag- és paprikakivonat felszívódásának vizsgálata Caco-2 sejtvonalon keresztül Labrazol és ciklodextrin abszorpcióra kifejtett hatásának tanulmányozása MTT vizsgálat: a kivonatok bélhámsejtekre való ártalmatlanságának bizonyítása SMEEDS formulálása, transzport elvégzése Kioldódás vizsgálat indirekt módszerrel, DPPH reagens segítésével 4

5 ANYAG I: GÖRÖGSZÉNAMAG 4-OH-izoleucin Antidiabetikus hatás: inzulinszekréció fokozása, glükóz perifériás hasznosulását növeli Koleszterinszint csökkentő PMS tüneteit enyhíti Fő komponensek: Poliszacharidok: galaktomannán 4-OH-izoleucin * Trigonellin * Szapogeninek: dioszgenin * /*antioxidáns hatású vegyületek/ 5

6 Belsőleg: emésztést javító, savhiány esetén Külsőleg: reuma, diabeteses neuropathia ANYAG II: PAPRIKA Kapszaicin: Inzulinszekréciót stimulál Szérum leptin szintet csökkenti Glükóztolerancia javítása Fő komponensek: Kapszaicin Karotinoidok: kapszantin és kapszorubin Flavonoidok: apigenin, kvercetin, luteolin * C- és E-vitamin * /*antioxidáns hatású vegyületek/ 6

7 ANYAG III: HIDROXI-PROPIL-β-CIKLODEXTRIN Oligoszacharid Membránmoduláló hatás Membránpermeabilitás fokozása Biohasznosulás javítása Komplexképző Vízoldhatóság javítása: lipofil hatóanyagok esetén Belső üreg: hordozómolekulák Biztonságos per os és IV 7

8 ANYAG IV: SMEEDS SMEEDS: Self-microemulsifying drug delivery systems Terner-diagram Önemulgeáló rendszerek Igen magas tenzid koncentráció Spontán képződik Hatóanyagok stabilitása fokozódik OLAJ EMULGENS SEGÉDEMULGENS +hatóanyag SMEEDS Hígulás a GI traktusban O/V TÍPUSÚ MIKROEMULZIÓ 8

9 ANYAG IV: SMEEDSHEZ FELHASZNÁLT ANYAGOK FELÜLETAKTÍV ANYAG NEVE LABRASOL TRANSCUTOL HP IZOPROPIL- MIRISZTÁT SZERKEZET Kapril- és kaprinsav PEG-8 és gliceridek mono- és diészterei Nagy tisztaságú dietilén-glikol monoetil éter Mirisztinsav izopropil-alkoholos zsírsav-észtere SZEREPE O/V felületaktív anyag mikremulzió képzésére, szolubilizálószer Koszolvens SMEEDS képzésére Szintetikus olaj O/V mikremulzió képzésére, külsőleg bőrpuhító HLB ÉRTÉK 12-11,5 A labrasol komponensei 9

10 MÓDSZER I: CACO-2 SEJTVONAL Humán colon adenocarcinoma eredetű sejtvonal Nemzetközileg elfogadott in vitro modell Vékonybélből történő felszívódás modellezése TEER: Trans-epithelial electric resistence Ω*cm 2 transzport 10

11 Sárga MTT MÓDSZER II: MTT VIZSGÁLAT Caco-2 sejtek mitokondriális változásának mérése MITOKONDRIÁLIS DEHIDROGENÁZOK Lila formazán kristályok Abszorbancia mérés: 570 nm-en FLUOstar OPTIMA Microplate Readerrel /MTT=metil-tiazol-tetrazólium/ 11

12 MÓDSZER III: MÓDOSÍTOTT HATÓANYAG KIOLDÓDÁSI VIZSGÁLAT Indirekt módszerrel, DPPH szabadgyök segítségével Antioxidáns hatást a gátolt szabadgyök %-os mennyiségével fejeztük ki SMEEDS kioldódása zselatin és HPMC kapszulából Kevertetés mágneses keverővel, fordulatszám: 120 fordulat/perc Lila szabadgyök sárga oldat Abszorbancia mérés: 517 nm-en 12

13 EREDMÉNY I: DPPH HÍGÍTÁSI SOROZAT 13

14 EREDMÉNY II: SMEEDS - MÓDOSÍTOTT HATÓANYAG KIOLDÓDÁS VIZSGÁLAT SMEEDS összemérése Kapszulába töltés Mintavétel + 0,06 mm DPPH-o. Abszorbancia mérése Shimadzu UV spektrofotométer Λ= 517 nm FELHASZNÁLT ANYAGOK Görögszénamagkivonat Paprikakivonat Labrasol Transcutol HP Izopropil-mirisztát Összmennyiség: MENNYISÉG 2 ml 2 ml 0,666 ml 0,666 ml 0,666 ml 3 ml 14

15 EREDMÉNY III: MÓDOSÍTOTT HATÓANYAG KIOLDÓDÁS VIZSGÁLAT 15

16 EREDMÉNY V: MTT VIZSGÁLAT - PAPRIKA 16

17 EREDMÉNY VI: MTT VIZSGÁLAT - GÖRÖGSZÉNAMAG 17

18 ÖSSZEFOGLALÁS A paprika- és görögszénamagkivonatok Caco-2 sejtekre nézve bizonyítottan ártalmatlanok Olyan önemulgeáló rendszert hoztunk létre, mely zselatin és HPMC kapszulából kedvező kioldódási profillal rendelkezik HMPC kapszulával retard hatóanyag-leadást tudunk biztosítani A kivonatok antioxidáns hatását igazoltuk TOVÁBBI LEHETŐSÉGEK Transzportfolyamatok elvégzése koncentráltabb kivonatokkal HMPC kapszulából történő kioldódás vizsgálat elvégzése savas körülmények között 18

19 KÖSZÖNÖM A FIGYELMET! Köszönöm a Gyógyszertechnológiai Tanszék minden munkatársának a lehetőséget a kísérleti munkára. Köszönöm témavezetőmnek, Dr. Bácskay Ildikónak, valamint konzulensemnek, Dr. Sinka Dávidnak az értékes szakmai segítséget és a hasznos tanácsokat. 19

20 ÖNÁLLÓAN VÉGZETT MUNKA Caco-2 sejtvonal passzálása, inzertre helyezése TEER mérése, transzportkísérletek elvégzése MTT citotoxicitási vizsgálatok DPPH hígítási sorozat felvétele SMEEDS formulálása, zselatin és HPMC kapszulába töltése Módosított hatóanyag kioldódási vizsgálat elvégzése UV spektrofotometriás mérések TÉMAVEZETŐ SEGÍTSÉGÉVEL ELVÉGZETT FELADATOK Eredmények összesítése Következmények levonása 20