Hús romlási folyamatból izolált Candida zeylanoides törzsek extracelluláris lipáz termelése és az enzim jellemzése

HTML
DOWNLOAD

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Hús romlási folyamatból izolált Candida zeylanoides törzsek extracelluláris lipáz termelése és az enzim jellemzése"

Géza Török
9 évvel ezelőtt
Látták:

1 Hús romlási folyamatból izolált Candida zeylanoides törzsek extracelluláris lipáz termelése és az enzim jellemzése Berkics Adrienn Bajcsi Nikolett, Kovács Mónika, Belák Ágnes, Renata Teparič, Vladimir Mrsa, Maráz Anna Budapesti Corvinus Egyetem, Élelmiszertudományi Kar, Mikrobiológia és Biotechnológia Tanszék Zágrábi Egyetem, Élelmiszertechnológiai is Biotechnológiai Kar, Biokémiai Laboratórium HUNGALIMENTARIA 3 Budapest, 3. április 7.

Anna Budapesti Corvinus Egyetem, Élelmiszertudományi Kar, Mikrobiológia és Biotechnológia Tanszék Zágrábi

Bevezetés A romlásban részt vevő mikroorganizmusok anyagcsere folyamataik során bontják az élelmiszerekben található mikro- és makromolekulákat Intra- és extracelluláris

lipázok, proteázok) A hűtve tárolt hús romlása során számos mikroba jelen van Baktériumok Élesztőgombák Azonosított élesztőgomba fajok Candida zeylanoides Rhodotorula

2 Bevezetés A romlásban részt vevő mikroorganizmusok anyagcsere folyamataik során bontják az élelmiszerekben található mikro- és makromolekulákat Intra- és extracelluláris enzimek termelése (pl. lipázok, proteázok) A hűtve tárolt hús romlása során számos mikroba jelen van Baktériumok Élesztőgombák Azonosított élesztőgomba fajok Candida zeylanoides Rhodotorula glutinis Debaryomyces hansenii Rhodotorula minuta Metschnikowia pulcherrima Rhodotorula mucilaginosa Cryptococcus mucoides Trichosporon asahii Cryptococcus curvatus Trichosporon montevideense Kiemelkedő jelentőségűek a lipázok Még nem jellemzett lipolitikus faj a Candida zeylanoides Belák Á., et al.: () Acta Alimentaria 4 (Suppl.):3-.;

3 Célkitűzések Hús romlásból származó élesztőgomba izolátumok szűrése lipáz és észteráz aktivitásra A Candida zeylanoides élesztőgomba fajhoz tartozó izolátumok lipáz enzim termelésének jellemzése, a legjobb aktivitású törzs(ek) kiválasztása A törzs enzimtermelését befolyásoló környezeti tényezők vizsgálata, az enzim termelés optimális feltételeinek meghatározása (központi elrendezésű kísérleti terv - CCD) A kiválasztott törzs által termelt extracelluláris lipáz(ok) tisztítása és jellemzése

törzs enzimtermelését befolyásoló környezeti tényezők vizsgálata, az enzim termelés optimális feltételeinek meghatározása

és tributyrin (PCATB) agar Beoltás: µl 8 sejt/ml szuszpenzió Inkubációs

4 Eredmények Hús romlásból származó élesztőgomba izolátumok szűrése lipáz és észteráz aktivitásra agardiffúziós módszerrel Táptalajok: Tween-8 (PAT-8) és tributyrin (PCATB) agar Beoltás: µl 8 sejt/ml szuszpenzió Inkubációs idő: 3 nap Kicsapódási és feltisztulási zónák átmérőjének meghatározása PAT-8 PCATB

Specifikus enzimaktivitás (U/mg) Candida zeylanoides törzsek szűrése lipáz aktivitásra Lipáz aktivitásmérés (Winkler és Stuckmann, 978): A oldat 3 mm para-nitrofenilpalmitát izopropanolban oldva B

5 Specifikus enzimaktivitás (U/mg) Candida zeylanoides törzsek szűrése lipáz aktivitásra Lipáz aktivitásmérés (Winkler és Stuckmann, 978): A oldat 3 mm para-nitrofenilpalmitát izopropanolban oldva B oldat, % gumi-arábikum,,44 %Triton-X, 5 mm Na-foszfát pufferoldat :9,5 pnpp tartalmú szubsztrát oldat, : arányban a mintával keverve,5 Inkubálás 3 percig, abszorbancia mérés 4 nm-en Enzimaktivitás: unitnak (U) felel meg az az enzimmennyiség, amely ml reakcióelegyben, perc alatt, µm p-nitrofenolt szabadít fel Specifikus enzimaktivitás:,5 CBS69 SZ/9 YC- YC-4 YM- YM-7 YS-7 Törzsek sejttömegre vonatkoztatott aktivitás (U/mg sza.) Tápközeg: YEPD (, g/l glükóz, g/l olivaolaj, 6 rpm, 3 C) Winkler, U.K., Stuckmann, M., (978) Journal of Bacteriology 38:

nm-en Enzimaktivitás: unitnak (U) felel meg az az enzimmennyiség, amely ml reakcióelegyben, perc alatt, µm p-nitrofenolt szabadít fel Specifikus enzimaktivitás:,5 CBS69 SZ/9 YC- YC-4 YM-

6 lgn Az YM-7 törzs szaporodásának és enzimtermelésének összefüggése 9,, 8,4,8 8,6 7,6,4 7,, lgn Specifikus aktivitás Tápközeg: YEPD (, g/l glükóz, g/l olivaolaj, 6 rpm, 3 C)

7 3 Indukáló szénforrások hatása a specifikus enzim aktivitásra az YM-7 törzs esetében Palmitinsav hatása az enzimtermelésre,5,5,5 Indukáló anyagok Egyéb indukáló szénforrások hatása az enzimtermelésre 8 6 Tápközeg: YEPD (, g/l glükóz, indukálószerek, 6 rpm, 3 C) 4 Indukáló anyagok

anyagok Egyéb indukáló szénforrások hatása az enzimtermelésre 8 6

8 Olivaolaj koncentráció (g/l) A tápközeg összetételének hatása a specifikus aktivitásra ,5 4,5 6,5 8,5,5 ph Tápközeg: YEPD (, g/l glükóz, olivaolaj, 6 rpm, 3 C) CC központi pont: ph 6,5 és g/l olivaolaj L lépték: ± (L ph =, L olaj = g/l) Pontok meghatározása: CC ± L és CC ± L Kiértékelés: STATISTICA

olivaolaj, 6 rpm, 3 C) CC központi pont: ph 6,5 és g/l olivaolaj L lépték: ±

9 lgn lgn Különböző tenyésztési körülmények hatása az YM-7 törzs lipolitikus aktivitására Tenyésztés minimál táplevesben Tenyésztés YEPD levesben 9,3,4 9,3,4,, 8,3,8 8,3,8 7,8,6 7,8,6 7,3,4, 7,3,4, M lgn M lgn M Specifikus aktivitás M Specifikus aktivitás Y lgn Y lgn Y Specifikus aktivitás Y Specifikus aktivitás MM minimál tápleves,, % glükóz, % olivaolaj MM minimál tápleves,, % glükóz, % olivaolaj YEPD komplett tápleves,, % glükóz, % olivaolaj YEPD komplett tápleves,, % glükóz, % olivaolaj

Specifikus aktivitás 4 6 8 Y lgn Y lgn Y Specifikus aktivitás Y Specifikus aktivitás MM minimál tápleves,, % glükóz, %

10 lgn 9,3 Különböző olivaolaj koncentrációk hatása az YM-7 törzs szaporodására és lipolitikus aktivitására 8,3 7,8 7,3 g/l olivaolaj 7,5 g/l olivaolaj g/l oliaolaj 5 g/l olivaolaj 3 g/l olivaolaj 6 g/l olivaolaj ,5,5,5 g/l olivaolaj 7,5 g/l olivaolaj g/l oliaolaj 5 g/l olivaolaj 3 g/l olivaolaj 6 g/l olivaolaj -,

5 g/l olivaolaj 3 g/l olivaolaj 6 g/l olivaolaj 3 4 5 3,5,5,5 g/l olivaolaj 7,5

11 lgn lgn lgn lgn Olivaolaj pulzusokban történő adagolásának hatása az YM-7 törzs lipolitikus aktivitására A % olivaolaj B % olivaolaj, beoltáskor 8,3,5 8,3,5 7,8 7,8 7,3,5 7,3, A lgn A Specifikus aktivitás B lgn B Specifikus aktivitás C,5% olivaolaj - 6,, 4, 36 h D,5% olivaolaj - 6 és h, % olivaolaj hozzáadása 36 h után 8,3,5 8,3,5 7,8 7,8 7,3,5 7,3, C lgn C Specifikus aktivitás D lgn D Specifikus aktivitás

B lgn B Specifikus aktivitás C,5% olivaolaj - 6,, 4, 36 h D,5% olivaolaj - 6 és h, % olivaolaj hozzáadása 36

12 Specifikus enzim aktivitás (U/mg) Specifikus enzimaktivitás (U/mg) Hömérséklet ( C) Az YM-7 törzs által termelt extracelluláris lipáz működésének ph és hőmérséklet optimuma 3,5,5,5 ph 3,8pH 5,5 ph 6 ph 6,5 ph 7 ph 7,5 ph 8 ph 8,5 ph 9 ph,6,4,,8,6,4, 7 C 4 C C 8 C 35 C 4 C 49 C

működésének ph és hőmérséklet optimuma 3,5,5,5 ph 3,8pH 5,5 ph 6 ph

13 Az YM-7 törzs által termelt lipáz enzim Michaelis-Menten állandójának meghatározása (Kettős reciprok ábrázolás segítségével) Alkalmazott szubsztrát: paranitrofenil-palmitát,6 6 mm,6,5 y =,748x +,65 R² =,9737,4 /v,3,,,5,5 /S

14 Tenyésztés Sejtmentes felülúszó Az enzimtisztítás eredménye Koncentrált tápközeg Kisózás 5 % ammónium-szulfáttal Dialízis - 3 5% (NH 4 ) SO 4 (dializált) DEAE anioncserélő oszlop 4 meg nem kötődött frakció 5 5 mm NaCl alkalmazásával eluált frakció 6 M NaCl alkalmazásával eluált frakció M marker, B puffer

(dializált) DEAE anioncserélő oszlop 4 meg nem kötődött frakció 5 5 mm NaCl

15 Köszönöm Megtisztelő Figyelmüket! A kutatómunka TÁMOP-4...B-9/ és a TÁMOP-4../B- programok keretében valósult meg

Hasonló dokumentumok

Mareczky Zoltán. Témavezetők: dr. Réczey Istvánné dr. Barta Zsolt. PhD hallgató

Mareczky Zoltán. Témavezetők: dr. Réczey Istvánné dr. Barta Zsolt. PhD hallgató Mareczky Zoltán PhD hallgató Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Egyetem Alkalmazott Biotechnológia és Élelmiszertudományi Tanszék Témavezetők: dr. Réczey Istvánné dr. Barta Zsolt mareczky@mail.bme.hu