GEN-LAB Kft. 2008, VIII. évfolyam 3. szám Választható töltetek ÚJ GENERÁCIÓS PREPARATÍV OSZLOPOK megnövelt oszlop élettartam nagyobb hatékonyság nagy áramlási sebesség tűrés megnövelt terhelhetőség élesebb csúcsok reprodukálhatóság Az AXIA TM egy töltési technikát és részben ebből következően egy új kolonna megjelenési formát (hardvert) jelent. Ezek együttesen egy homogén és megfelelő sűrűségű, tehát nagy és állandó kolonna hatékonyságot (N) biztosító töltetágyat eredményeznek. Luna - világszerte elismert töltetek, 99,99%-os tisztaságú szilika, állófázis: C18, C18(2), C8(2), Phenyl-hexyl, Pentafluorophenyl Propyl (PFP), szilika és amino, nagy fajlagos felület: 400 (C18: 440) m 2 /g; pórusátmérő: 100 Å Gemini - nagy ph (1-12!) stabilitás, hosszú élettartam - TWIN technológia, állófázis: C18, C6-Phenyl, nagy fajlagos felület: 375 m 2 /g; pórusátmérő: 110 Å Gemini - NX nagy ph(1-12!) stabilitás, megnövelt élettartam TWIN-NX technológia (etilén keresztkötésekkel védett szilika), állófázis: C18, nagy fajlagos felület: 375 m 2 /g; pórusátmérő: 110 Å Synergi - Synergi MAX-RP (C12), Synergi Polar-RP (fenil-éter / poláris endcapping ), Synergi Hydro-RP (C18 / poláris endcapping ) Jupiter 300 fehérjék elválasztásához ( > 10,000 MW), állófázis: C4, C5, C18 www.axiaprep.com Jupiter Proteo kis molekulatömegű ( < 10,000 MW) fehérjék és peptidek elválasztásához, állófázis: C12 Gen-Lab Kft. H-1119 Budapest, Hadak útja 41. Telefon: (36-1)206-2455 Fax: (36-1)206-2451 Email: info@gen-lab.hu Web: www.gen-lab.hu
1 2 3 ÚJ GENERÁCIÓS PREPARATÍV OSZLOPOK ÚJ TÖLTÉSI TECHNOLÓGIA Az egyéb töltési technikákkal ellentétben az AXIA kolonnáknál nem szükséges az utókomprimálás. 1. A töltet belekerül egy hüvelyen keresztül az oszlopba. 2. A hidraulikus dugattyúval a megfelelő nyomással beletömörítik a töltetet az oszlopba. 3. A töltet homogén, a dugattyú a helyén marad (p=áll.). 4. A dugattyú még mindig az oszlopban (p=áll.) és ekkor megtörténik az oszlop lezárása. 5. A fedél ráhelyezése és a dugattyú szárának leválasztása (p=áll.). 6. a nyomás még mindig állandó, a töltet homogén maradt. 1. injektálás = 1000. injektálás 4 5 6 Hagyományos töltési eljárás A hagyományos töltési technikáknál a töltés befejeztével eltávolítják a dugattyút és a nyomóerő megszűnésével az összepréselt töltet kitágul. A kitágulás hatására kisebb sűrűségű helyek keletkeznek. A használat során az áramló fázis a kolonnatöltetet átrendezi, amelynek eredményeképpen a kolonna elején lyuk keletkezik (holttér), ezért az elméleti tányérszám (N) jelentős mértékben csökkenhet. 1. oszlop = 2. oszlop reprodukálhatóság www.axiaprep.com 2. oldal
HILIC ÚJDONSÁG térhálósított diolfázis Luna HILIC: A megfordított fordított fázis Új, keresztkötéssel védett HILIC oszlopok A HPLC-vel történő kromatográfiás elválasztások döntően fordított fázison történnek (C18, C8, fenil, ). Ilyen körülmények között a hidrofil (poláris) vegyületek kicsi (kedvezőtlen) visszatartással rendelkeznek, hiszen a hidrofób állófázison a poláris vegyületek esetében jelentősebb kölcsönhatásra nem számíthatunk. A minimálisan kialakulható kölcsönhatás létrejöttét még az is gátolja, hogy a hidrofób állófázist egy nagy szerves oldószertartalmú stagnáló réteg borítja be. A Luna HILIC (Hydrofil Interaction Liquid Chromatography) kolonna poláris vegyületek számára biztosít megnövekedett retenciót nagy szerves oldószertartalmú mozgófázisban. Az állófázis felületén egy (a mozgófázishoz képest) vízben gazdag réteg képződik, amely megkönnyíti a poláris vegyületeknek a poláris állófázishoz történő transzportját. A különböző komponensek elválasztását a kisebb víztartalmú mozgófázis és a szilika felületen lévő vízben gazdag folyadékréteg közötti megoszlás biztosítja. HILIC körülmények között minél polárosabb a vegyület, annál nagyobb retencióval rendelkezik, azaz közönséges fordított fázisú kromatográfiás rendszerben magas szerves oldószertartalom mellett a poláris állófázison normál fázisú retenciós mechanizmus alakul ki. A mozgófázis nagy organikus módosító tartalma ideális az MS-detektálkáshoz. Mozgófázis Térhálósított diolfázis Vízben gazdag réteg a szilika felületén SZILIKA www.gen-lab.hu 3. oldal
HILIC ÚJDONSÁG térhálósított diolfázis Az alábbi vitamin eleggyel megfelelően jellemezhetjük a HILIC kromatográfia képességeit: KÜLÖNFÉLE VITAMINOK ELVÁLASZTÁSA Luna HILIC OSZLOPON széles pka intervallum (pka: 1.5-5.6) széles logp intervallum (logp: -4.6 - +0.83) 9. folsav 1. p-amino-benzoesav 2. Nikotinamid 3. riboflavin 4. nikotinsav 5. piridoxin 6. tiamin 7. aszkorbinsav 8. cianokobalamin Oszlop Dimenzió Katalógus sz. Mozgó fázis Gradiens Luna 5 μm HILIC 150 x 4.6 mm 00F-4450-E0 A: Acetonitril B: Víz C: 100mM Ammónium acetát, ph=5.8 A/B/C (90:5:5) 2.5 percig majd A/B/C (50:45:5)-re (gardiens) 7.5 perc alatt, tartva 2.5 percig. Öblítés A/B/C (90:5:5) 7.5 percig Áramlási sebesség Detektálás Hőmérséklet Minták 2.0 ml/ perc UV, 260 nm-en szobahőmérséklet 1. p-amino-benzoesav 2. nikotinamid 3. riboflavin 4. nikotinsav 5. piridoxin 6. Tiamin 7. aszkorbinsav 8. cianokobalamin 9. folsav www.gen-lab.hu 4. oldal
1. Töltsük meg a fecskendőt a mintával. Engedjünk ~10% levegőt bejutni a fecskendőbe, ez segít, hogy a minta teljes térfogatát át tudjuk juttatni a szűrőn. 2. Válasszuk ki a megfelelő fecskendőszűrőt a lenti táblázatok 1 2 3 segítségével. 3. A luer lock segítségével rögzítsük a fecskendőszűrőt a mintánkat tartalmazó fecskendőre. A Phenex fecskendőszűrők használatának előnyei: Kevesebb gépleállás Reprodukálható eredmények Megnövelt oszlop élettartam 2008.12.31-ig 4. A szűrő kifolyó részét állítsuk a megfelelő gyűjtőedénybe és kis nyomás kifejtésével juttassuk át a mintánkat a szűrő felületén. 5. A fecskendőben lévő levegő segítségével átjuttathatjuk a mintánk teljes mennyiségét a szűrőn veszteség nélkül. A azonosításra szolgáló adatok B luer lock csatlakozó C minta eloszlató gyűrű D Medical grade (PP) polimer ház E ultraszonikus hegesztés A MEGFELELŐ SZŰRŐ KIVÁLASZTÁSA 3 EGYSZERŰ LÉPÉSBEN Ha a minta térfogata: < 2ml 2 10ml 10 100ml 4mm-es átmérő 15-17mm-es átmérő 25-28mm-es átmérő A szennyező makroszemcsék fennmaradnak a szűrőn 1 Szennyeződés mentes minta Minta membrán Vizes szövet kultúra CA fehérje analízishez/biológiai minták PES Oldószeres vizes oldószer elegyek (hidrofil) RC vízmentes oldószerek (hidrofób) PTFE Általános vizes vagy szerves fázis HPLC-s analízishez, ha az oszlop szemcsemérete >3цm Viszkózus vagy sok szemcsés szennyezőt tartalmazó minták számára Általános vizes vagy szerves fázis HPLC-s analízishez, ha az oszlop szemcsemérete <3цm Ahol még az apróbb szemcsék eltávolítása is fontos (UPLC,SFC,GC) Viszkózus minták esetén (pl.: vérplazma, biológiai, környezetvédelmi és élelmiszeripari minták) Sok durva szemcsét tartalmazó minták esetén 2 0.45μm 0.20μm 0.45μm Üvegszálas 3 www.gen-lab.hu 5. oldal
Gazdaságos alternatíva Analitikai és Preparatív méretben is Poliimid borítás Szilika -15% ESC TM technológia: Keresztkötésekkel stabilizált állófázis Új lépés a királis kromatográfiában. Lux Cellulose-1 és Lux Cellulose-2 kolonnák. HPLC/SFC-s elválasztások királis szelektorként poliszacharid-származékokat felhasználva: Cellulose tris (3, 5-dimethylphenylcarbamate) Cellulose tris (3-chloro-4-methylphenylcarbamate) ZB-Bioethanol Célspecifikusan a BioEtanol gyors, reprodukálható, pontos analízisére fejlesztett oszlop. Felére csökkenti a mérés idejét a hagyományos eljárásokhoz képest. Kimagasló szelektivitás metanolra és etanolra. Kitűnő felbontás egyéb alkoholokra is. UPLC-s teljesítmény akár már a hagyományos HPLC rendszereken is. Szub 3 μm szemcsemérettel kevesebb mint a fele nyomás és közel azonos felbontás mint a szub 2 μm szemcseméretű oszlopoknál. Luna C18(2), Synergi Max-RP, Synergi Polar-RP, Synergi Hydro-RP, Synergi Fusion-RP töltetekkel 300 és Proteo Analitikai és Preparatív méretben is HPLC GC KIEGÉSZÍTŐK A JUPITER oszlopok széles körű megoldást kínálnak a fehérje kutatás és gyártás minden területére. JUPITER 300 - fehérjék elválasztásához (>10,000 MW), fázisok: C4, C5, C18 JUPITER Proteo - kis molekulatömegű (<10,000 MW) fehérjék és peptidek elválasztásához, fázisok: C12 Rheodyne injektorok, oszlop fűtő/hűtő, oszlopváltók, in-line szűrők, szűrőmembránok, teflon csövek, csővágók, csatlakozók, töltetlen HPLC oszlopok, üvegeszközök, Hamilton fecskendők,... Ferrulok, GC csatlakozók, szeptumok, tömítések, üvegeszközök, O-ringek, csapdák (O 2 /nedvesség/ch) Cool Lock Nut, injektor tisztító kit,... Akcióinkról bővebben a www.gen-lab.hu oldalon tájékozódhat. Amennyiben bármely termékünk felkeltette érdeklődését, információra lenne szüksége, forduljon bizalommal termékfelelőseinkhez az info@gen-lab.hu email címen vagy telefonon a 06-1-206-2455-ös telefonszámon. Kérje ingyenes termékkatalógusunkat a fenti elérhetőségek bármelyikén. 6. oldal