KOAGULÁCIÓS FAKTOROK BIOTECHNOLÓGIAI ELŐÁLLÍTÁSA

Átírás

1 Az élettudományi-klinikai felsőoktatás gyakorlatorientált és hallgatóbarát korszerűsítése a vidéki képzőhelyek nemzetközi versenyképességének erősítésére TÁMOP C-13/1/KONV KOAGULÁCIÓS FAKTOROK BIOTECHNOLÓGIAI ELŐÁLLÍTÁSA 12. előadás PÉCSI TUDOMÁNYEGYETEM ÁLTALÁNOS ORVOSTUDOMÁNYI KAR GYÓGYSZERÉSZI BIOTECHNOLÓGIA TANSZÉK

2 KOAGULÁCIÓS FAKTOROKRÓL ÁLTALÁBAN Vérzés (hemorrhagia) vagy baleset vagy valamilyen patológiás folyamat következménye A véralvadást számos koagulációs faktor és fehérje befolyásolja, amelyek a fibrinek polimerizációját szabályozzák a hemosztázis fenntartása érdekében Hibás véralvadás: hemofília

3 KOAGULÁCIÓS FAKTOROK WHO LISTA WHO elnevezés Megnevezés Hiányállapot (vérzéssel járó betegség) I. fibrinogén * afibrinogenaemia II. protrombin * protrombinhiány (III.) trombokináz, tromboplasztin **, avagy szöveti faktort (TF) (IV.) Kalcium (Ca 2+ ) V. proakcelerin, Owren-faktor parahemofília, V. faktor hiány VII. szérum protrombin konverzió akcelerátor (SPCA), prokonvertin VII. faktor hiány (SPCA hiány) VIII. antihemofíliás faktor A hemofília A IX. Christmas-faktor, antihemofíliás faktor B, plazmatromboplasztin komponens (PTC) hemofília B (Christmas-betegség) X. Stuart Prower-faktor X. faktor hiány, (Stuart-faktor-betegség) XI. Plazmatromboplasztin antecedens (PTA), antihemofíliás faktor C hemofília C XII. Hageman-faktor (nincs véralvadási zavar) XIII. fibrinstabilizáló faktor, transzglutamináz Laki-Lóránt faktor XIII. faktor hiány

4 VÉRALVADÁSI FOLYAMATOK Aktivációs út Külső/belső út XIa XI Belső véralvadási út IX IXa Protombináz komplex: Xa-II-VA-PL-Ca 2+ II (protrombin) IIa (trombin) Belső tenáz komplex: IXa-X-VIIIa-PL-Ca 2+ Külső tenáz komplex: TF-VIIIa-X-Ca 2+ XIII Xa X Fibrin monomer Fibrinogén TF XIIIa Fibrin polimer VIIa VII Fibrin polimer hálózat (keresztkötött) Külső véralvadási út

5 KOAGULÁCIÓS FAKTROROK TRANDICIONÁLIS ELŐÁLLÍTÁSA TÁMOP C-13/1/KONV Vérplazmából Eredeti tisztítási procedúra: 1946 Cohn frakcionálási módszer A frakciók szeparálásához etil alkoholt, sókat és hűtést alkalmaztak, mely után a frakciókat centrifugálással választották el

6 KOAGULÁCIÓS FAKTOROK BIOTECHNOLÓGIAI ELŐÁLLÍTÁSA TÁMOP C-13/1/KONV Rekombináns humán koagulációs faktorok IX (rfix), VIII (rfviii), VIIa (rfviia) az USA-ban az 1990-es évek óta elérhetőek Expressziós rendszer: CHO sejtek rfviii stabilizálására pl. humán albumint használnak

7 KLÓNOZÁS ÖSSZEFOGLALÓ LÉPESEI: Plazmid DNS Beillesztett rekombináns koagulációs faktor DNS A plazmid a baktériumban felszaporodik A plazmid DNS szekvencia Felnyitása endonukleázzal A DNS szekvencia beillesztése, ligálása Baktérium transzformálás Baktérium kolóniák Expressziós rendszer! Számos DNS kópia

8 REKOMBINÁNS KOAGULÁCIÓS FAKTOROK Recombináns véralvadási faktorok jobban tisztíthatók és nem veszélyeztetik a beteget különféle virális fertőzéssel, ellentétben a vérből tisztított termékekkel Használatuk egyre az 1990-es évek óta egyre gyakoribb A jelenleg forgalomban lévő FVIII termékeket viszont kapcsolatba hozták inhibitor kialakulásával a súlyos A típusú hemofiliában szenvedő fiúknál (kiterjedt, több évtizedes klinikai vizsgálat 2013 összegzés) Az inhibitorok kialakulása a jelenlegi ismeretek alapján nem magyarázható

9 KOAGULÁCIÓS FAKTOROK ÉS GÉNTERÁPIA FVIII gén kiváló génterápiás alkalmazásra is, mivel egy génes (monogenic) betegség A beteg bőréből fibroblasztokat izolálnak, amelyekbe bejuttatják a FVIII-t hordozó plazmidot A rfviii-t termelő fibroblasztokat kiszelektálják, és a klónt karakterizálják A tesztelt fibroblasztokat bejuttatják a beteg hasi zsírrétegébe (omentum)

10 KÖSZÖNÖM A FIGYELMET JELEN MUNKA AZ EURÓPAI UNIÓ TÁMOGATÁSÁVAL, AZ EURÓPAI SZOCIÁLIS ALAP TÁRSFINANSZÍROZÁSÁVAL VALÓSUL MEG, AZ ÉLETTUDOMÁNYI-KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE CÍMŰ, TÁMOP C-13/1/KONV AZONOSÍTÓSZÁMÚ PROJEKT KERETÉBEN.