Kromat Kft. A megbízható partner

Átírás

1 Agilent Technologies magyarországi képviselője Piacvezető az analitikai műszerek értékesítésében Legnagyobb szervizháttér Több száz üzembe helyezett készülék Kromat Kft. A megbízható partner

2 Agilent megoldások az élelmiszeranalitikában Dr. Józsa Tibor Kromat Kft május 6. Hungalimentária 2015 Budapest

3 Agilent megoldások az élelmiszeranalitikában Hármas kvadrupol tömegspektrométerek az élelmiszerlaborokban: 1. GC-QQQ: 2. LC-QQQ: 3. ICP-QQQ: Agilent 7010 QQQ GC-MS/MS rendszer Agilent 6495 QQQ LC-MS/MS rendszer Agilent 8800 QQQ ICP-MS rendszer

4 1. Új felhasználási területek: Agilent 7010 QQQ GC-MS/MS rendszer

5 Az Agilent 7010 QQQ GC-MS/MS rendszer More Ions Than Ever Before Teljesen új fejlesztésű ionforrás 20-30X-or több ion = nagyobb érzékenység IDL (Instrument Detection Limit): 0.5 fg OFN 8X jobb, mint a 7000C 7000C: a legnagyobb darabszámban eladott GC/MS/MS rendszer 5

6 7010 GC-MS/MS: a 7000C alapjain Arany bevonatú monolitikus kvarc kvadrupol rudak hiperbolikus felülettel Triple Axis Detektor Új kialakítású ionforrás: fokozott ionizációs hatékonyság Kompakt ütközési cella tengelyirányú gyorsítással a gyors MRM váltások (800 MRM/sec) és He ütközési gáz a hatékony zajcsökkentés érdekében 6

7 Dioxin és dioxinhoz hasonló PCB-k Nyomnyi szennyezők vizsgálata élelmiszerekben és takarmányokban Fokozottan toxikus vegyületek, amelyek környezetszennyezők és maradandó szerves szennyezők (POPs) Ipari folyamatok melléktermékei, mint papír fehérítés, peszticid gyártás vagy hulladékégetés. Humán kockázat: főleg állati eredetű élelmiszerek fogyasztása Felhalmozódik a szervezetben. Szigorú előírások, állandó monitorozás: Élelmiszerbiztonsági Hivatalok, Környezetvédelmi Felügyelőségek Európai Bizottság (European Commission; EC), EPA, WHO, stb. Eddig: Dedikált, nagyon drága beszerzésű és üzemeltetésű műszerezettség (GC-HRMS). 7

8 A GC/MS/MS elfogadott technika Dioxin/Furan/PCB meghatározásra! Commission Regulation (EU) No 589/2014 (of 2 June 2014) laying down methods of sampling and analysis for the control of levels of dioxins, dioxin-like PCBs and non-dioxin-like PCBs in certain foodstuffs and repealing Regulation (EU) No 252/2012 Commission Regulation (EU) No 709/2014 (of 20 June 2014) amending Regulation (EC) No 152/2009 as regards the determination of the levels of dioxins and polychlorinated biphenyls in feed Except from EU No 589/2014 Agilent kezdeményezésre, aktív közreműködéssel! 8

9 Megoldás: Agilent Dioxin Analyzer Kulcsrakész megoldás a teljes munkafolyamatra: Az Európai Dioxin Referencia Laboratórium által kifejlesztett, optimált és validált módszeren alapul Multi Mode Inlet (MMI): injektálási technikák széles tárháza, nagytérfogatú injektálás a minél jobb kimutatási határ érdekében Ugyanazon GC módszer Dioxinokra és PCB-kre a hatékonyság növelése érdekében - RTL: Retention time locked - biztonságos és egyértelmű GC azonosítás MRM átmenetek: Az Európai Dioxin Referencia Laboratórium által kifejlesztett, optimált és validált módszer alapján Fokozott érzékenység a 7010 GC/MS/MS-nek köszönhetően! Kész, egységes riportformátum, amely egyben tartalmazza a Dioxinok és PCB-k eredményeit, valamint az EU szabályozás által megkövetelt komplex számításokat A piacon egyedi, kulcsrakész megoldás! Költséghatékony megoldás a GC-HRMS-sel szemben: Alacsonyabb beszerzési ár Alacsonyabb infrastruktúra költség (épület tömegbírás, rezgés) Alacsonyabb működtetési költség karbantartás, betanulás 9

10 Mintaelőkészítés Kölcsönös megállapodás az LCTech-el A manuális mintaelőkészítés nagyon időigényes (napok) és komplikált, több lépéses (hibalehetőség) LCTech Dioxin System Automatizált mintaelőkészítés Gyors és megbízható analízis Alkalmas bármilyen élelmiszer és takarmány mintához Megfelel az EU szabályozás kritériumainak 10

11 Mátrixok A rendszer alkalmas: bármilyen élelmiszer és takarmány mintára (hal, hús, halolaj, tojás, növényi olajok, állati eredetű takarmányok) növények (lucerna), fűszer- és gyógynövények (oregano) környezeti minták (talaj, iszap, szennyvíziszap, üledékek)

12 GC/MS/MS Dioxin Analizátor konfiguráció Az EU Dioxin laboratóriumai által tesztelt és elfogadott! Analizátor jellemzői: Új fejlesztésű 7010 MS/MS Megnövelt, 10x-es érzékenység Ugyanazon GC módszer mindkét frakcióra Megnövelt hatékonyság MMI injektor Flexibilitás az injektálási technikákban; nagytérfogatú injektálás GC oszlop Dioxin meghatározásra validált RT locked MRM átmenetek Az Európai Dioxin Referencia laboratórium által optimált és validált 12

13 Dioxinok/Furánok kromatográfiás elválasztás A kritikus hexa-dioxin/furán izomerek kitűnő elválasztása DB5MS UI (60m x 0.25mm x 0.25 µm) Resolution = 0.64 Peak to Peak Valley = 14.1% Resolution = 0.69 Peak to Peak Valley = 23.5% Level CS5 (TCDD = 2.0 ppb; 13 C 12 = 100 ppb) Tetra Penta Hexa Hepta Octa 13

14 PCB-k kromatográfiás elválasztás A kulcsfontosságú orto- szubsztituált 123 & 118 PCB-k hatékony elválasztása ugyanazon dioxin módszerrel, azonos oszlopon történik! DB 5MS UI (60m x 0.25mm x 0.25 µm) 123 & & 157 Level CS4 (PCB 123/118 = 10/50 ppb; 13 C 12 = 10 ppb) & 118 Resolution= &

15 Teljesítmény ellenőrző standard oldatok Izotóp jelzett komponensek Tartalmazza az EU szabályozásban felsorolt komponenseket Kulcsfontosságú komponensek elválasztásának ellenőrzése STD01 Hexa-dioxin/furan izomerek STD02 PCBs 123 & 118 Kromatogramok Kék PCB-k Fekete Dioxinok/Furánok Std 01 Dioxins/Furans & NO PCB 22 komponens Std 02 MO & NDL PCBs 14 komponens 15

16 Relative Response 7010 GC-MS/MS: Fokozott linearitás Dioxin/Furan R 2 PCB R TCDF PCB TCDD PeCDF PCB PCB Selected Hexa-Furan Calibrations PeCDF PeCDD HxCDF HxCDF PCB PCB PCB PCB , , , , ,0000 y = x R² = 1 y = x R² = HxCDF HxCDD PCB PCB ,0000 8,0000 y = 0,0112x + 0,0117 R² = HxCDD HxCDD HxCDF HpCDF PCB PCB PCB PCB ,0000 4,0000 2,0000 0,0000 y = 0,0112x + 0,0042 R² = HpCDD PCB Concentration (pg/µl) HpCDF OCDD OCDF PCB PCB PCB PCB HxCDF HxCDF HxCDF HxCDF 16

17 7010 MS/MS: megnövelt érzékenység! 10x-es érzékenység növekedés! 2,3,7,8-TCDD: 10 fg on column, 2mL-es injektálás 17

18 7010 MS/MS Instrument Detection Limit (IDL RSD ) in fg IDL RSD = t α,n-1 x RSD x c 100 t α,n-1 = t value (coefficient) at the level of α with the sample size of n-1 c = concentration of the std sample injected CMPD RRF 10 reps (5 fg/µl) %RSD IDL RSD (fg) 2378-TCDF TCDD PeCDF PeCDF PeCDD HxCDF HxCDF HxCDF HxCDD HxCDD HxCDD HxCDF HpCDF HpCDD HpCDF OCDD OCDF TCDD Average S/N =

19 Speciális riport formátum Mindkét frakció kombinált megjelenítése egyetlen riportban! Beépített, automatizált számítások a szoftverben Részletes, az EU szabályozásnak megfelelő információk 19

20 Agilent 7010 GC-MS/MS Dioxin Analizátor Főbb jellemzői: Megfelel az EU Bizottság 589/2014 és 709/2014 Dioxin szabályozásának A 7010 GC/MS/MS detektor érzékenysége teljesíti az EU szabályozás követelményeit és 10x érzékenyebb Kulcsrakész és teljes megoldás módszerrel, oszloppal, standardekkel, amely az Európai Dioxin Referencia laboratórium által kifejlesztett, optimált és validált alkalmazáson alapul Speciális jegyzőkönyv, mely egyben tartalmazza a Dioxin és PCB eredményeket és elvégzi az EU szabályozásban előírt komplex számításokat GC-HRMS rendszerek költséghatékony alternatívája 20

21 2. Új dimenziók a kimutatási határban: Agilent 6495 QQQ LC-MS/MS rendszer

22 Agilent 6400 QQQ család Kutatói 6495 QQQ LC-MS/MS Prémium teljesítmény, legjobb érzékenység Rutin 6460 QQQ LC-MS/MS Robusztusság, megbízhatóság, nagy mérésszám Belépő 6420 QQQ LC-MS/MS Célfeladatok célkészüléke Széles portfolió a legváltozatosabb igényekre; feladathoz igazítható ár/érték arány

23 ifunnel technológia Agilent Jet Stream Hexabore Capillary Dual Ion Funnel Termikus gradiens fókuszálás Hatékony deszolvatálás Ionokban gazdag zóna Hatfuratú kapilláris 10x-es ionkapacitás Hatékony semleges eltávolítás Hatékony ion fókuszálás

24 6495 QQQ - Folyamatos fejlesztés ifunnel Agilent Jet Stream Hexabore Capillary Dual Ion Funnel Új Q1 Ionoptika Megnövelt iontranszmisszió Új, elkeskenyedő Hexapole ütközési cella Hatékony ionfókuszálás és továbbítás Új detektor nagy energiájú konverziós dinódával Megnövelt negatív ion detektálás

25 6495 QQQ LC/MS Prémium teljesítmény Megnövelt érzékenység és alacsonyabb LLOQs 3-5x növekedés az S/N és IDL specifikációkban Megnövelt pontosság és kitűnő precizitás nyomnyi mennyiségeknél 3-5x növekedés az IDL specifikációban Bizonyított 6 nagyságrendű lineáris dinamikus tartomány Bizonyított robusztusság komplex mátrixokban Élelmiszer és biológiai (plazma) minták Megnövelt tömegtartomány, gyors szkennelési és MRM gyűjtési sebesség

26 Megnövelt érzékenység és precizitás 6495 QQQ IDL IDL for the Agilent 6495 QQQ LC/MS System 6495 QQQ IDL Amount measured Replicates Area %RSD t (99%) IDL Reserpine (+) 1 fg n = fg Chloramphenicol (-) 1 fg n = fg 1 fg of reserpine used to measure IDL (+) 1 fg of chloramphenicol used to measure IDL (-) 1 x IDL = t x (%RSD / 100) x Amount measured = x (7.2 / 100) x 1 fg = 0.20 fg 1 x IDL = t x (%RSD / 100) x Amount measured = x (9.7 / 100) x 1 fg = 0.27 fg Acquisition Time (min) Acquisition Time (min)

27 6 nagyságrendű lineáris dinamikus tartomány LVNEVTEFAK 6 Orders of Linear Dynamic Range R 2 = Zoom-in 5 30 amol Levels %RSD (n = 10) % Accuracy 5 amol amol amol amol fmol fmol fmol fmol pmol pmol RT %RSD (n = 100) /6/

28 6495: Alkalmazási területek Biomarkerek Peptid Quan Nagy érzékenység Komplex mátrix D Vitamin Endogén szteroidok Peszticidek Mikotoxinok Antibiotikumok Allergének Mintahígítás Víz Hormonok Szennyezők Közvetlen injektálás Protein mennyiségi Klinikai kutatás Élelmiszerbiztonság Környezet- védelem Kutatás Nagy érzékenység Gyógyszerkutatás ADME/PK Bioanalízis Mikrodózis Teljes metodikai csomag tmrm Kábítószerek Designer drogok Orális folyadékok Akadémia Gyógyszer- ipar Szermaradék Toxikológia 5/6/

29 Kiemelt érzékenység növekedés Élelmiszerbiztonság - Peszticidek >250 nyomnyi mennyiségben levő peszticid elemzése élelmiszerekben (fekete tea) többszörös nagy hígításban Élelmiszerbiztonság - Ösztrogének Nyomnyi mennyiségű ösztrogének meghatározása tejtermékekben derivatizálás nélkül Környezetvédelem - Vízvizsgálatok Nyomnyi mennyiségű hormonok mennyiségi meghatározása ivóvízben közvetlen injektálással Peptidek Mennyiségi meghatározás Szintetikus peptidek mennyiségi meghatározása sub-attomól szinten nano és normál áramlású kromatográfiával

30 Bentazon (-) IDL fekete teában az LLOQ szinten mérve Amount measured Replicates %RSD t (99%) IDL 1 pg/ml, 2.0 fg (LLOQ) n = 7 injections pg/ml, 0.72 fg IDL = t x (%RSD/100) x Amount = x (11.4/100) x 2.0 fg = 0.72 fg Injection volume = 2 µl 1 pg/ml 1 pg/ml 1 pg/ml 1 pg/ml 1 pg/ml 1 pg/ml 1 pg/ml Inj # Peak Area S/N (Peak to peak) %RSD 11.4 Ave 16.1 Kitűnő csúcsterület szórás (precizitás -%RSD) mátrixban alacsony szinteken (LLOQ) 5/6/

31 A nagy érzékenység lehetővé teszi a nagyfokú hígítást 1:20 dilution of > 250 pesticides spiked into black tea at 10 µg/kg (MRL), 0.1 ng/ml Injection volume = 2 µl 1:100 dilution of pesticides in black tea at MRL, 20 pg/ml Multi-residue pesticide analysis in food products most demanding food safety applications Improved sensitivity and precision of the 6495 allows accurate quantitation of pesticides <Maximum Residue Limits (MRLs) imposed by EU, even with extensive sample dilution Sample dilution leads to less matrix effects and improved method robustness 5/6/

32 Nagyobb érzékenység nagyobb hígítás: ionszupresszió kiváltása Alanycarb, 10 µg/kg in Black Tea No Dilution 1 : 5 1 : 10 1 : 20 1 : 50 1 : 100 Oxamyl, 10 µg/kg in Black Tea No Dilution 1 : 5 1 : 10 1 : 20 1 : 50 1 : 100

33 Visszanyerés (%) fekete tea mátrixban, különböző hígításoknál Pesticides No dilution (n = 5) Dilution 1:5 (n = 5) Dilution 1:10 (n = 5) Dilution 1:20 (n = 5) Dilution 1:50 (n = 5) Dilution 1:100 (n = 5) Acetamiprid 29.4 ± ± ± ± ± ± 3.4 Alanycarb 10.4 ± ± ± ± ± ± 10.8 Aldicarb 36.9 ± ± ± ± ± ± 14.1 Carbaryl 56.9 ± ± ± ± ± ± 9.6 Dimethoate 33.9 ± ± ± ± ± ± 7.5 Diuron 79.7 ± ± ± ± ± ± 13.5 Flufenoxuron 95.4 ± ± ± ± ± ± 13.9 Monocrotophos 4.6 ± ± ± ± ± ± 5.7 Oxamyl 20.8 ± ± ± ± ± ± 5.2 Thiamethoxam 40.0 ± ± ± ± ± ± 2.0 Zölddel kiemelt cellák: visszanyerés %, ami megfelel a SANCO előírásainak. 1:100 hígítás mellett teljes visszanyerés és nincs számottevő ionszupresszió 1:100 hígítás esetén a tiszta oldatos kalibráció használható a peszticidek mennyiségi meghatározására

34 Kiemelt érzékenység növekedés Élelmiszerbiztonság - Peszticidek >250 nyomnyi mennyiségben levő peszticid elemzése élelmiszerekben (fekete tea) többszörös nagy hígításban Élelmiszerbiztonság - Ösztrogének Nyomnyi mennyiségű ösztrogének meghatározása tejtermékekben derivatizálás nélkül Környezetvédelem - Vízvizsgálatok Nyomnyi mennyiségű hormonok mennyiségi meghatározása ivóvízben közvetlen injektálással Peptidek Mennyiségi meghatározás Szintetikus peptidek mennyiségi meghatározása sub-attomól szinten nano és normál áramlású kromatográfiával

35 Ösztrogének nagyérzékenységű meghatározása tehéntejből ID Compounds Nyolc ösztrogénnel spike-olt tehéntej 0.1 µg/kg; megfelel 0.1 ng/ml 1 Estriol (-) 2 17-α-Estradiol (-) ng/ml ösztrogén tehéntejben --- Milk vakminta Injection volume = 5 µl 7, β-Estradiol (-) 6 4 Ethynyl estradiol (-) 5 Estrone (-) 6 Diethylstilbestrol (-) 7 Hexestrol (-) Dienestrol (-) Az ösztrogén szint a tejtermékekben szigorúan szabályozott - 1 µg/kg Az új 6495 nagy érzékenysége és pontossága lehetővé teszi az ösztrogének meghatározását egyszerű QuEChERS mintaelőkészítéssel, derivatizáció és dúsítás nélkül. Bármely ösztrogén alsó méréshatára (LLOQs << 0.1 µg/kg) jóval alatta van szabályozási követelményeknek (1 µg/kg) 5/6/

36 Megbízható ösztrogén meghatározás tejből, µg/kg Estriol in milk, µg/kg ng/ml R 2 = Estradiol in milk, µg/kg ng/ml R 2 = Levels (µg/kg) %RSD (n = 7) %Accuracy Levels (µg/kg) %RSD (n = 7) %Accuracy Kitűnő linearitás (R ), pontosság és precizitás bármely kalibrációs szinten. 5/6/

37 Ösztrogén meghatározás tejből Kitűnő linearitás, pontosság, precizitás és visszanyerés Compounds R 2 Precision %RSD, n = 7 %Accuracy %Recovery 0.2 µg/kg 1 µg/kg 5 µg/kg Estriol α-Estradiol β-Estradiol Ethynyl estradiol Estrone Diethylstilbestrol Hexestrol Dienestrol /6/

38 Kiemelt érzékenység növekedés Élelmiszerbiztonság - Peszticidek >250 nyomnyi mennyiségben levő peszticid elemzése élelmiszerekben (fekete tea) többszörös nagy hígításban Élelmiszerbiztonság - Ösztrogének Nyomnyi mennyiségű ösztrogének meghatározása tejtermékekben derivatizálás nélkül Környezetvédelem - Vízvizsgálatok Nyomnyi mennyiségű hormonok mennyiségi meghatározása ivóvízben közvetlen injektálással Peptidek Mennyiségi meghatározás Szintetikus peptidek mennyiségi meghatározása sub-attomól szinten nano és normál áramlású kromatográfiával

39 Hormonok meghatározása ivóvízből Kitűnő linearitás, pontosság, precizitás és visszanyerés Compounds LLOQ (ng/l) IDL R (ng/l) 2 Precision (%RSD, n = 8) %Accuracy Estriol β-Estradiol < Testosterone < α-Ethynylestradiol Equilin < Estrone < Androstenedione < Ivóvíz szabályozási szint hormonokra: ng/l (ppt) szint A nagyérzékenységű 6495 lehetővé teszi hormonok meghatározását ng/l alatti szinten közvetlen injektálással. Nincs szükség az időigényes mintaelőkészítésre (offline SPE) vagy dúsításra. 5/6/

40 3. Egyedi megoldás a szelektivitásra és érzékenységre: Agilent 8800 QQQ ICP-MS rendszer

41 As és Se meghatározás referencia anyagokban ICP-MS/MS-el As: 75 As 16 O + Se: 80 Se 16 O + Target (ng/ml in Solution) As 75 -> 91 Se 78 -> 94 Sample Name As Se Conc. recovery Conc. recovery NIST 1573a Tomato NIST 1573a Tomato NIST 1575a Pine needles NIST 1575a Pine needles NIST 1515 apple NIST 1515 apple NIST 1643 e water NIST 1643 e water JSAC river water JSAC river water JSI sedimentary rock JSI sedimentary rock NIST 1566a oyster NIST 1566a oyster NCS zc hair NCS zc hair NIST 2976 mussel NIST 2976 mussel NIST 1646a sediment NIST 1646a sediment Kitűnő visszanyerés a legkülönbözőbb mátrixokban. Interferenciák és átlapolódások hatékony kiküszöbölése az O 2 reakciócella segítségével. 41 May 6, 2015

42 6495 Webinar 5/6/