BACTEC S.I.R.E. Drug Kit PP118JAA 2007/06 Magyar HASZNÁLATI JAVASLAT A BACTEC S.I.R.E. Drug Kit a Mycobacterium tuberculosis tesztelése során a BACTEC 12B Medium-mal való használathoz szükséges antimikrobiotikumokat tartalmazza. Elsõsorban a BACTEC 460TB készülékkel használandó. A BACTEC S.I.R.E. Drugs (Streptomycin, Isoniazid, Rifampin és Ethambutol) készítmény javasolt adaléka az M. tuberculosis tenyészetbõl való antibiotikum érzékenységi tesztjéhez használt BACTEC 12B Culture Medium-nak. ÖSSZEGZÉS ÉS MAGYARÁZAT A BACTEC eljárás a mycobacteriumok gyógyszerekkel szembeni érzékenységének vizsgálatára ugyanazon az alapeljáráson alapszik, mint a hagyományos módszerek, azzal a kivétellel, hogy folyékony tápoldatot használ, és ahelyett, hogy kb. 3 hét elteltével számlálná meg a telepeket, a növekedést radiometrikusan figyeli, és az eredményeket már 4 12 nap múlva értékelni lehet. A BACTEC gyógyszerérzékenységi vizsgálat a hagyományos arányossági módszer módosított változata. 1 A kritikus arányt rezisztencia szemontjából minden antituberculotikum esetében 1%-nak veszi. Ez azt jelenti, hogy amennyiben a teszt mycobacterium pouplációnak legalább 1%-a rezisztens, úgy laboratóriumi szempontból az egész tenyészet rezisztensnek tekintendõ. A rezisztenciát a kontroll palackokban és a tesztelendõ gyógyszert tartalmazó, 12B Medium-os palackokban tapasztalt növekedési ráta összehasonlításával határozza meg. AZ ELJÁRÁS MÛKÖDÉSI ELVE A mycobacteriumok BACTEC radiometrikus gyógyszerérzékenységi vizsgálatának alapelve hasonló az elsõdleges izolációs eljárásnál alkalmazottéhoz. Amikor a mycobacteriumok 14 C-jelölt szubsztrátú 7H12 táptalajon nõnek, elhasználják a szubsztrátot és 14 CO 2 képzõdik. A detektált 14 CO 2 mennyisége mutatja az edényben a növekedés rátáját és mennyiségét, ami a Növekedési Index (NI) kifejezéssel határozható meg. Ha a tápoldathoz antituberculotikumot ad, akkor a a növekedés gátlódik, amennyiben a teszt mikroorganizmus érzékeny. A gátlást a kontrollhoz képest csökkenõ vagy csak igen kis mértékben növekedõ napi NI alapján lehet kimutatni. Ha azonban a mikroorganizmus rezisztens, a növekedése alig, vagy egyáltalán nem gátolt. A rezisztencia 1%-os arányának meghatározásához a kontroll palackban használt bakteriális inokulum százszor hígabb, mint a gyógyszertartalmú palackban használt. A gyógyszeres és a kontroll palackot inoklulálás után naponta kell tesztelni. Az NI növekedési rátáját, ill. az elõzõ napi állapothoz képest mért változást, melyet delta (Δ) NI-nek neveznek, hasonlítják össze a kontroll palack és a gyógyszert tartalmazó palackok esetében. Amennyiben a gyógyszert tartalmazó palackokban mért NI-növekedés a kontroll palackban tapasztalt növekedéssel megegyezõ mértékû, vagy azt meghaladó, akkor a teszt mikroorganizmust a gyógyszerre rezisztensnek kell tekinteni. Az érzékeny populációk esetében a kontroll napi NI-növekedése meghaladja a gyógyszeres palackban mért növekedést. Ha például a mycobacterium populáció 1%-a rezisztens az isoniazid-ra nézve (INH), akkor az INH a populáció 99%-át gátolná és csupán 1% növekedne a gyógyszert tartalmazó palackban. A gyógyszeres palack növekedési rátája ebben az esetben megegyezne a kontroll palack növekedési rátájával, mivel abban a kiindulási bakteriális inokulum csupán 1/100-ad része a gyógyszeres palackéban levõnek. REAGENSEK A BACTEC S.I.R.E. Drug palack az eljárás kezdete elõtt a következõ aktív hatóanyagokat tartalmazza: Liofilizált antimikrobiotikumok, minden palackban: Streptomycin...1,2 mg Isoniazid...0,02 mg Rifampin...0,4 mg Ethambutol...1,5 mg Figyelmeztetés: In vitro diagnosztizáláshoz. A termék száraz természetes gumit tartalmaz. A klinikai mintákban patogén mikroorganizmusok, pl. Hepatitis B és HIV vírusok lehetnek jelen. Minden vérrel, ill. más testnedvvel fertõzött egységet a Standard Precautions 2-5 elõírásai szerint, ill. az intézet irányelvei szerint kell kezelni. Használat elõtt, minden palackot meg kell vizsgálni, hogy nem található-e rajta sérülésre, kiszáradásra, illetve befertõzõdésre utaló nyom. A befertõzõdés jeleit mutató palackokat NE HASZNÁLJA. A károsodott palckokat dobja ki. Bizonyos esetekben elõfordulhat, hogy az üvegpalack megreped, a nyaka a kupak megbontása, illetve munka közben letörik. Mielõtt a pozitív 12B Medium tenyészetekbõlt továbboltás vagy festés, stb. céljára mintát venne ki, ki kell engedni a mikrobiális metabolizmus során esetleg képzõdött gázt. A mikorbiológiai veszélyek miatt mindig dolgozzon aszeptikusan és a felállított biztonsági rendszabályoknak megfelelõen. A tesztet a CDC elõírásainak megfelelõen megfelelõ biológiai biztonsági elszívó fülke alatt, megfelelõ szellõztetéssel rendelkezõ helyiségben kell elvégezni. 6 A potenciálisan fertõzõ mintákkal és tenyészetekkel végzett munka idõtartamára vegyen fel a célnak megfelelõ köpenyt, maszkot és kesztyût. Kövesse a CDC és az OSHA elõírásait. Hogy az inokulálás alatt minimálisra csökkentse a szivárgás lehetõségét, használjon rögzített tûjû fecskendõket, illetve biztonságosan rögzített Luer-Lok hegyeket. A hagyományos gyógyszerérzékenységi tesztekhez használt hatóanyag-koncentráció laboratóriumról laboratóriumra változhat. Amennyiben két módszer eredményeit össze kívánja hasonlítani, rendkívül fontos, hogy a másik gyógyszerérzékenységi tesztnek megfelelõ gyógyszerkoncentrációt válasszon a BACTEC gyógyszerérzékenységi teszt elvégzéséhez. A gyógyszerérzékenységi tesztnek alapvetõ feltétele, hogy megfelelõ mennyiségû tesztelendõ hatóanyag kerüljön a tápfolyadékba. Tárolási feltételek A BACTEC S.I.R.E. Drug palackokat hûvös (2 8 C), száraz, a közvetlen napvénytõl védett helyen kell tárolni. Ha a palackok tartalmát már beoldották, 2 8 C-on legfeljebb 3 napig, illetve 20 C-on (vagy alasconyabb hõmérsékleten) legfeljebb hat hónapig tárolhatók. Kis adagokban fagyassza le. Ne fagyassza le és olvassza ki ismételten. A szavatossági idõ az elõírásoknak megfelelõen tárolt, bontatlan palackokra vonatkozik. MINTÁK GYÛJTÉSE A gyógyszerérzékenységi vizsgálatokhoz tiszta, friss tenyészeteket kell használni. A részletekért lásd a 12B Medium használati útmutatóját (PP116JAA) és a BACTEC 460TB System Kézikönyvét (MA-0029).
ELJÁRÁS Szállított anyagok: BACTEC S.I.R.E. Drug Kit. Szükséges, de nem szállított anyagok: BACTEC 12B Medium, BACTEC 460TB Instrument, BACTEC Diluting Fluid, 5mL-es fecskendõ, desztillált / ioncserélt víz, tuberculin fecskendõ rögzített tûvel, fertõtlenítõ folyadék, 70%-os izopropil-alkohol. A teszt kivitelezése A BACTEC S.I.R.E. Drugs (Streptomycin, Isoniazid, Rifampin és Ethambutol) hatóanyagai liofilizált formában kerülnek kiszerelésre. Járjon el a standard eljárás szerint, a hatóanyagok koncentrációját tartsa be. A hatóanyagok koncentrációja 5 ml steril desztillált / ioncserélt vízzel való (megfelelo módon kivitelezett) beoldása után a következo: Hígítási 12B Medium-hoz Végsõ koncentráció 12B Hatóanyag Beoldott faktor Koncentráció/mL adott mennyiség Medium/mL egységben Streptomycin 5 ml 240 µg 0,1 ml 6,0 µg Streptomycin 5 ml 1:3 hígítás 80 µg 0,1 ml 2,0 µg* Isoniazid 5 ml 4 µg 0,1 ml 0,1 µg* Rifampin 5 ml 80 µg 0,1 ml 2,0 µg* Ethambutol 5 ml 300 µg 0,1 ml 7,5 µg Ethambutol 5 ml 1:3 hígítás 100 µg 0,1 ml 2,5 µg* *A CDC által elõírt kritikus koncentrációknak megfelelõen. Példákat az elsõdleges és másodlagos hatóanyagok hagyományos táptalajhoz használt koncentriációjának megfelelõjére a BACTEC 460TB termék használati útmutatójának IV. fejezetében talál. Amennyiben a kívánt koncentráció eléréséhez további hígítás szükséges (lásd fent), úgy a hatóanyagot aszeptikus módon, sterilizát desztillált/ioncserélt vízzel hígítsa. Az oldatot alaposan rázza össze. A gyógyszertartalmú táptalaj elkészítése: Frissen elkészített gyógyszeroldatot használjon, vagy olvasszon ki egy lefagyasztott gyógyszeroldatot tartalmazó csövet. Egy egyszer használatos 1 ml-es fecskendõ segítségével tegyen pontosan 0,1 ml oldatot a 4 ml-es BACTEC 12B Medium palackba. Minden hatóanyaghoz külön fecskendõt használjon. Ügyeljen arra, hogy a fecskendõben ne legyenek légbuborékok; a fecskendõben lévõ utolsó, 0,1 ml-es adagot már ne használja fel. Az összes, a teszthez felhasználni kívánt 12B Medium palackot elõ kell tesztelni a BACTEC 460TB gépben annak érdekében, hogy ki lehessen mutatni a CO 2 légkör-t a palackban és ki lehessen szûrni a 20-nál nagyobb NI-t mutató palckokat. A bakteriális inokulum elkészítése: A 12B Medium-ban vagy szilárd táptalajon folytatott gyógyszerérzékenységi tesztek elvégzéséhez friss M. tuberculosis tenyészeteket kell használni. Ha a BACTEC 12B palack 10 értéket mutat, inkubálja újra és naponta tesztelje. A gyógyszerérzékenységi teszt kezdetének idõpontját az alábbi táblázat alapján határozza meg. NAPONKÉNTI LEOLVASÁS TEENDÕ NI 300 499 Még egy további napig inkubálja, majd kezdje meg a tesztelést. NI 500 799 A tesztelést még aznap kezdje el. NI 800 Hígítsa 1:2 arányban 1 ml hígító folyadékkal; kezdje meg a tesztelést. Ha a gyógyszerérzékenységi vizsgálatot el kell halasztani, a 12B palackokat fagyassza le. Ehhez az idõponthoz képest a gyógyszerérzékenységi tesztet egy héten belül el kell kezdeni. Készítsen homogén bakteriális inokulumot, ehhez szívja fel a tápoldatot egy rögzített tûjû egyszerhasználatos fecskendõbe, majd anélkül, hogy a tût kihúzná a gumidugóból, ismételten fecskendezze az üvegbe és szívja vissza. Az inokulumot közvetlenül használhatja a gyógyszerérzékenységi teszthez. Szilárd táptalajú tenyészet: A szilárd táptalajon növõ néhány telepbõl készítsen homogén szuszpenziót. A tenyészet nem lehet 4 5 hétnél idõsebb. Állítsa be a szuszpenziót a napi ütemezés segítségével 1,0 McFarland sûrûségûre, illetve a nem hétvégi ütemezés esetén 0,5 McFarland sûrûségûre. Amennyiben a tenyészet kora, illetve életképessége felõl bizonytalan, készítsen szubkultúrát 12B Medium-ban. Inokulálás: Helyezze el a 12B Medium palackokat egy tartóállványba és címkézze fel õket gondosan (általában: kontroll, Streptomyvin, Isoniazid, Rifampin, Ethambutol). Az egyes gyógyszer-koncentrációkhoz és a kontrollhoz külön palackokra lesz szüksége. (Tartóállványként használhatja a szállításnál használt kartontálcát is). Gumikesztyûben és egy biológialag biztonságos fülke alatt minden gyógyszert tartalmazó BACTEC 12B Medium palackot inokuláljon a baktériumszuszpenzió 0,1 ml-ével. Az inokuláláshoz rögzített tûjû tuberculin fecskendõt használjon. A kontrol palackot ne inokulálja közvetlenül a szuszpenzióval, hanem azt hígítsa elsõször 1:100 arányban; ehhez a szuszpenzió 0,1 ml-ét tegye a speciális Diluting Fluid folyadék 9,9 ml-ébe. Alapos összekeverés után (legalább 10-szer fordítsa fel) ennek az oldatnak 0,1 ml-ével inokulálja a 12B Medium (gyógyszer nélküli) kontrollpalackot. A megfelõ fertõtlenítõszerrel átitatott géztörlõvel, majd 70%-os alkoholos géztörlõvel törölje le az inokulált palackok tetejét. Inkubálja a palackokat 37 C ± 1 C-on. Ütemezések értelmezése: Naponkénti tesztelési ütemezés: A palackokat naponta tesztelje (beleértve a hétvégét és a munkaszüneti napokat is), lehetõleg minden nap ugyanabban az idõpontban (± 2 óra) a BACTEC 460TB-vel, míg az a kontrol palackan nem mér 30-as, ill. annál magasabb NI-t. A teszt idõtartama legalább 4, legfeljebb 12 nap. Ezzel a tesztelési ütemezéssel a hét bármelyik napján el lehet kezdeni a gyógyszerérzékenységi tesztet. Nem hétvégi ütemezés: Az eljárás két kivételtõl eltekintve hasonló a fent ismertetett napi ütemezéshez: 7 (a) gyûjtse össze a pozitív tenyészeteket és a gyógyszerérzékenységi tesztet csak pénteken indítsa el. Járjon el a korábban leírtak szerint. (b) Ha egy pozitív BACTEC palackot használ, lásd a fenti táblázatot. Az inokulált palackok tesztelését a hétvége kihagyásával hétfõn kezdje el. A palackokat legalább hétfõn, kedden és szerdán (az inokulációtól számítva legalább 5, de legfeljebb 12 napig) lehetõleg mindig ugyanabban az idõpontban (± 2 óra) tesztelje. Közvetlen antibiotikum-érzékenységi teszt: Ha egy minta a kenet alapján AFB (mikroszkóposan saválló baktérium) pozitív, akkor általában elegendõ mycobacteriumot tartalmaz egy 12B Medium-mal elvégzett gyógyszerérzékenységi teszthez. Az eljárás alapjaiban megegyezik az indirekt érzékenységi teszttel. Az eljárás különbségei a következõk: A minta feldolgozása után inokulálja a táptalajt és készítsen egy kenetet az AFB-festéshez. A maradék koncentrált mintát fagyassza le. Vizsgálja meg az AFB kenetet. Ha az a Ziehl-Neelsen-festés, illetve a fluorokróm módszer alapján pozitív, indítsa el a gyógyszerérzékenységi tesztet még aznap. Adjon BACTEC PANTA terméket a gyógyszert tartalmazó és a gyógyszert nem tartalmazó (kontroll) palackokhoz egyaránt. Adjon 0,1 ml jól összekevert koncentrált mintát a gyógyszert tartalmazó palackokba. Hígítsa fel a koncentrált mintát 1:10 arányban és ennek a hígításnak 0,1 ml-ével inokulálja a kontroll palackot. Inkubálja a palackokat 37 C-on és tesztelje azokat a BACTEC 460TB System készülékkel minden 2 3. napon, de legfeljebb 21 napig. Az erõsen kenet-pozitív mintákat naponta tesztelje. 2
Az eredményeket 20-as, vagy afölötti NI esetében értelmezze. Az eredményeket erõsítse meg indirekt gyógyszerérzékenységi teszttel. A végsõ eredményhez a M. tuberculosis identifikálását erõsítse meg a BACTEC NAP, vagy más teszttel. Minõség-ellenõrzés A lejárati idõ után ne NE HASZNÁLJA FEL a palackokat. NE HASZNÁLJA FEL azokat a palackokat, melyeken a sérülés bármilyen nyoma látszik; a palackot megfelelõ módon selejtezze ki. A Quality Control Certificate (Minõség-ellenõrzési tanúsítvány) minden S.I.R.E. Drug Kit mellett megtalálható. A Quality Control Certificate ismerteti az ilyen típusú termékkel használható teszt mikroorganizmusokat. A felhasználónak használat elõtt minden egyes palackot meg kell vizsgálnia minõség szempontjából. Azokat a palackokat, melyekben a folyadék zavaros, befertõzõdött, vagy elszínezõdött (sötétebb) ne használja fel. A benedvesedett (nem pelyhes tartalmú) S.I.R.E. Drug palackokat ne használja fel. A gyógyszerek hatékonyságát minden gyógyszerérzékenységi teszt elindításánál, egy vagy több minõség-ellenõrzési mikroorganizmus érzékenységének tesztelésével lehet ellenõrizni. ATCC SZ. Törzs 27294 M. tuberculosis, H37Rv érzékeny a S.I.R.E. Drugs-ra 35820 M. tuberculosis, H37Rv Streptomycin rezisztens 35822 M. tuberculosis, H37Rv Isoniazid rezisztens 35837 M. tuberculosis, H37Rv Ethambutol rezisztens 35838 M. tuberculosis, H37Rv Rifampin rezisztens Az ATCC 27294 H37Rv törzset minden alkalommal tesztelni kell és annak minden esetben érzékenynek kell bizonyulnia. Amennyiben ez a tenyészet bármelyik gyógyszerrel szemben rezisztens, illetve bármelyik tenyészet kontrollja nem növekszik (12 napon belül), úgy a teszt eredményeit ne vegye figyelembe. Ismételje meg a tesztet. A napi karbantartási ütemterv részeként a BACTEC gépen Performance Test Vials (BACTEC Performance Test Kit) palackokat kell tesztelni. Amennyiben a leolvasott értékek alacsonyak, pedig a Performance Test Vials palackokat megfelelõen tesztelte, akkor zavar állhatott be a gép mûködésében (lásd BACTEC PTK haszálati útmutató, PP046JAA). A minõség-ellenõrzési követelményeknek a helyi, állami és/vagy szövetségi szabályozásoknak és akkreditációs követelményeknek megfelelõen, illetve a laboratórium standard minõség-ellenõrzési módszereivel összhangban kell eleget tenni. A megfelelõ minõség-ellenõrzési gyakorlat kialakításánál tanácsos figyelembe venni az érvényes CLSI (eredetileg NCCLS) elõírásokat és a CLIA szabályzatot. AZ EREDMÉNYEK ÉRTELMEZÉSE Amikor a kontroll palackok NI értéke 30 vagy annál magasabb, az eredményeket a következõk szerint kell értelmezni: ha a ΔNI a gyógyszert tartalmazó palackokban alacsonyabb, mint a kontroll palackokban, a populáció érzékeny; ha magasabb, akkor rezisztens. ΔNI (kontroll) > ΔNI (gyógyszer) érzékeny ΔNI (kontroll) < ΔNI (gyógyszer) rezisztens ΔNI (kontroll) ΔNI (gyógyszer) határérték The following table represents data obtained from M. tuberculosis grown on solid medium and tested using the BACTEC susceptibility method. Similar data is obtained from M. tuberculosis initially grown in a 12B Medium. However, because of fewer cells in the inoculum, initial readings may be lower. Naponkénti GI leolvasás Nap Kontroll Streptomycin Isoniazid Rifampin Ethambutol 1 5 40 50 38 76 2 11 20 100 19 100 3 24 12 250 10 100 4 65 14 500 12 91 ΔNI +41 +2 +250 +2-9 Eredmények Érzékeny Rezisztens Érzékeny Érzékeny AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI Az inokulum nem mindig tökéletes elkészítése, különösen a nagy csomók jelenléte vagy a kontroll palackhoz való 1:100 arányú hígítás nem pontos kivitelezése befolyásolhatja az eredményeket. Amennyiben a kontroll palackban a növekedés nem kielégítõ, a tesztet meg kell ismételni. Befertõzõdés Ügyelni kell, hogy az inokulálás során a BACTEC 12B palackok ne fertõzõdjenek be. A bertõzõdött minták ugyan pozitív eredményt adnak, mégsem számítanak releváns klinikai mintáknak. A döntést a felhasználónak kell meghoznia a kinyert mikroorganizmus, ugyanannak a mikroorganizmusnak a vegyes tenyészetekben mért gyakoriságának, a beteg kórelõéletének, a felszerelések megfelelõ ellenõrzésének, stb. függvényében. A befertõzõdés lehet még a BACTEC tûk és csövek nem megfelelõ kezelésének, a kupak nem megfelelõ tisztaságának vagy a BACTEC tûmelegítõ egység elégtelen mûködésének következménye (lásd TB Hood kézikönyv). A tápoldatban képzõdõ biológiai anyagok és a mikroorganizmusok velejáró variabilitásának természete miatt a felhasználónak tudatában kell lennie annak, hogy az egyes mikroorganizmusokkal való tesztelés potenciálisan eltérõ eredméyneket adhat. VÁRT ÉRTÉKEK Rifampin, Streptomycin és Isoniazid esetében, amennyiben a populáció érzékeny, az NI erõs csökkenése már néhány napon belül megfigyelhetõ. Az Ethambutol-nál általában az NI értéke kezdetben valamelyest növekszik, és csak ezután kezd csökkenni. Az NI csökkenésének üteme a gyógyszer hatásának sebességétõl és a baktérium érzékenységétõl függ. Amennyiben a M. tuberculosis-nak egy rezisztens és érzékeny mikororganizmusokból álló vegyes tenyészetérõl van szó, úgy a ΔNI az idõ arányában, az érzékeny populáció százalékos aránynak változásának függvényében alakul. A direkt gyógyszerérzékenységi teszt esetében az általános siker és az ehhez szükséges idõtartam a kenet pozitivitásának függvénye. A szakirodalom szerint a hagyományos tesztek eredményeihez hasonló eredmények eléréséhez átlagosan 10 12 nap szükséges. 8,9 TELJESÍTMÉNY JELLEMZÕK Több megjelent tanulmány is beszámol arról, hogy a BACTEC gyógyszerérzékenységi vizsgálattal kapott eredmények jól összehasonlíthatók a (7H10/7H11 táptalajt használó) hagyományos arányossági módszerrel vagy a (Lowenstein-Jensen tojástáptalajt használó) rezisztenciahányados módszerrel kapott eredményekkel. 1,10-15 A BACTEC gyógyszerérzékenységi vizsgáló módszer pontosságát és reprodukálhatóságát szintén megvizsgálták, gyakran 4 6 napon belül kapott eredmények alapján. 16-20 3
A Huang és tsai által elvégzett összehasonlítás a BACTEC 460TB System és az arányossági módszer között a következõ eredményt adta: 21 1. táblázat: A BACTEC 460TB rendszerrel kapott antimikrobiális érzékenységi teszteredmények és a diagnosztikai teljesítményindexek összehasonlításban az agar hígításos módszerrel (47 M. tuberculosis izolátum alapján). Meghatározott eredményt adó izolátumok száma Diagnosztikai teljesítményindex Gyógyszer, módszer,és a Mindkettõ Mindkettõ Agar E Agar R Specifitás Érzékenység gyógyszer koncentrációja* E R BACTEC R BACTEC E (%) (%) STR BACTEC 2.0 µg/ml 36 9 0 2 100 81,8 INH BACTEC 0.1 µg/ml 16 29 1 1 94,1 96,7 RMP BACTEC 2.0 µg/ml 30 14 1 2 96,8 87,5 EMB BACTEC 2.0 µg/ml 35 2 4 6 89,7 25 *Az agar hígításos módszer során a gyógyszerek következõ koncentrációját tesztelték: STR, 2 µg/ml; INH, 0,2 µg/ml; RMP, 1,0 µg/ml; és EMB, 5 µg/ml. E = érzékeny; R = rezisztens. Bemer és tsai tanulmánya a BACTEC 460TB S.I.R.E. rendszert hasonlította össze a BACTEC MGIT 960 S.I.R.E. rendszerrel. Száztíz törzset teszteltek 93,5%-os általános egyezõség mellett. A BACTEC 460TB S.I.R.E. fordulási ideje 4,0 10,0 nap között volt, a medián 7,0 nap. 22 2. táblázat. Az M. tuberculosis klinikai törzseinek gyógyszerérzékenységi vizgálata a BACTEC MGIT 960 és a BACTEC 460TB rendszerrel. Különbözõ eredmények száma: Hatóanyag Tesztek száma E mindkét teszt R MGIT 960-nal; E by MGIT 960-nal; R mindkét teszt Egyezés (konc. µg/ml-ben) E 460TB-vel R 460TB-vel (%) INH (0,1) 110 81 4 25 96,4 INH (0,4) 29 5 3 21 89,7 RIF (2,0) 110 92 1 17 99,1 EMB (2,5) 110 93 3 1 13 96,4 EMB (7,5) 17 7 3 7 82,4 STR (2,0) 110 76 9 25 91,8 STR (6,0) 34 12 10 12 70,6 Összes teszt 520 366 33 1 120 93,5 E = érzékeny; R = rezisztens. Bergmann és Woods a BACTEC 460TB S.I.R.E. hatóanyagok közül az ethambutol-t és a streptomycin-t hasonlította össze az arányossági módszerrel. Az eredményeket a következõ táblázat foglalja össze: 23 3. táblázat. A kiindulási BACTEC ethambutol és streptomycin érzékenységi teszt, valamint az arányossági módszer eredményei. Különbözõ eredmények száma: Hatóanyag BACTEC system MOP Izolátumok száma Ethambutol E E 63 R R 8 E R 3 Streptomycin E E 59 R R 14 R E 1 Rövidítések MOP, arányossági módszer; E = érzékeny; R = rezisztens. Egy külön tanulmányban Bergmann és Woods a BACTEC 460TB S.I.R.E. hatóanyagok közül az isonizid-ot és a streptomycin-t is összehasonlította az arányossági módszerrel: 24 4
4. táblázat. Az M. tuberculosis lezárult gyógyszerérzékenységi vizsgálatának eredménye arányossági módszerrel, BACTEC 460 TB-t alkalmazva. Meghatározott eredményt adó izolátumok száma a : Gyógyszer és MOP BACTEC eredmény 460TB Isoniazid (alacsony b ) Érzékeny 16 16 Rezisztens 4 4 Isoniazid (magas c ) Érzékeny 19 18 Rezisztens 1 2 Rifampin Érzékeny 17 17 Rezisztens 3 3 a MOP, arányossági módszer. b alacsony, 0,2 µg/ml az arányossági módszernél és 0,1 µg/ml a BACTEC 460TB-nél. c magas, 1,0 µg/ml az arányossági módszernél és 0,4 µg/ml a BACTEC 460TB-nél. ELÉRHETÕSÉG Kat. sz. Leírás 442102 BACTEC S.I.R.E. Drug Kit, 2 palack liofilizált Streptomycin, 2 palack liofilizált Isoniazid, 2 palack liofilizált Rifampin, 2 palack lioflilzált Ethambutol. 442146 BACTEC Isoniazid, 1 palack liofilizált Isoniazid. 442004 BACTEC 12B Medium, 4 ml, dobozonként 100 darab. IRODALOMJEGYZÉK: 1. Canetti, G. et al. Advances in techniques of testing mycobacterial drug susceptibility, and the use of sensitivity test in tuberculosis programmes. Bull. W.H.O. 1969, 41:21-43. 2. National Commitee for Clinical Laboratory Standards. 2001. Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, PA. 3. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80. 4. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 5. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 6. Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology, a guide for the level III laboratory. Centers for Disease Control, Division of Laboratory Training and Consultation. Atlanta, GA, 1985. 7. Hawkins, J.E. Non-weekend schedule for BACTEC susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 23:934-937, 1986. 8. Libonati, J.P. et al. Identification and direct drug susceptibility testing of mycobacteria by the radiometric method. Abstract C300, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, 1984. 9. Stager, C.E. et al. Identification and susceptibility testing of M. tuberculosis by direct inoculation of smear-positive specimens into BACTEC 12A media. Abstract, C301, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, 1984. 10. Bannister, E.R. et al. Comparison of detection, identification and drug susceptibility testing of mycobacteria by using the BACTEC radiometric method and conventional methods. Abstract C260, A.S.M. Annual Meeting, Las Vegas, 1985. 11. Roberts, G.D. et al. Evaluation of BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens. J. Clin. Microbiol. 18:689-696, 1983. 12. Siddiqi, S.H. et al. Evaluation of a rapid radiometric method for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1981, 13:908-912. 13. Siddiqi, S.H. et al. Interlaboratory drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by a radiometric procedure and two conventional methods. J. Clin. Microbiol. 1985, 22:919-923. 14. Vincke, G. et al. Rapid susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by a radiometric technique. J. Antimicrobiol. Chemother. 1982, 10:351-354. 15. Snider, Jr., D.E. et al. Rapid drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Am. Rev. Respir. Dis. 123:402-406, 1981. 16. Good, R.C. et al. Reproducibility of drug susceptibility tests with M. tuberculosis. Abstract U5, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, 1984. 17. Siddiqi, S.H. et al. Accuracy and reproducibility of the BACTEC drug susceptibility testing of M. tuberculosis. Abstract 1041, I.C.A.A.C. Annual Meeting, Las Vegas, NV, 1983. 18. Terrand, J.J. et al. Evaluation of the BACTEC radiometric method for detection of 1% resistant populations of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1985, 21:941-946. 19. Woodley, C.L. Evaluation of streptomycin and ethambutol concentrations for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by radiometric and conventional procedures. J. Clin. Microbiol. 1986, 23:385-386. 20. Heifets, L.B. "Drug susceptibility in the chemotherapy of mycobacterial infection." C.R.C. Press, Inc., Boca Raton, FL, 1991. 5
21. Huang, T., H. Tu, S. Lee, W. Huang and Y. Liu. 2002 Antimicrobial susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis to first-line drugs: comparisons of the MGIT 960 and BACTEC 460 systems. Ann. Clini. Lab. Sci. 32:142-147. 22. Bemer, P., F., Palicova, S., Rüsch-Gerdes, H., Drugeon, and G., Pfyffer, 2002. Multicenter evaluation of fully automated BACTEC Mycobacteria Growth Indicator Tube 960 System for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 40:150-154. 23. Bergmann, J.S., and G.L. Woods. 1997. Reliability of mycobacteria growth indicator tube for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to ethambutol and streptomycin. J. Clin. Microbiol. 35:3325-3327. 24. Bergmann, J.S., and G.L. Woods. 1998. Evaluation of the ESP culture system II for testing susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis isolates to four primary antituberculosis drugs. J. Clin. Microbiol. 36:2940-2943. 6
7
Becton, Dickinson and Company BENEX Limited 7 Loveton Circle Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Sparks, Maryland 21152 USA Shannon, County Clare, Ireland 800-638-8663 Tel: 353-61-47-29-20 Fax: 353-61-47-25-46 ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, MGIT, PANTA and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 2007 BD.