BACTEC 12B Mycobacteria Culture Vials Middlebrook 7H12

Átírás

1 BACTEC 12B Mycobacteria Culture Vials Middlebrook 7H12 HASZNÁLATI JAVASLAT A kvalitatív BACTEC 12B Mycobacteria Medium tápközeg klinikai mintákból (úgymint köpet, gyomor-, vizelet- és szövetminták, mucopurulens minták, illetve más testnedvek és légúti váladékok) mikobaktériumok tenyésztésére és kimutatására, valamint a Mycobacterium tuberculosis komplexnek más mikobaktériumoktól való differenciálására és az M. tuberculosis gyógyszer-érzékenységi tesztjeihez használható. ÖSSZEGZÉS ÉS MAGYARÁZAT A BACTEC radiometrikus módszer széles körben elterjedt a mikobaktériumoknak köpetbõl és más klinikai mintákból való izolálására. 1-4 A klinikai minták minden típusa, legyen az tüdõgyógyászati vagy más minta, a hagyományos eljárásokhoz hasonlóan felhasználható a BACTEC elsõdleges izoláláshoz. 2,5-7 A részletek a CDC Manual-ban, a Procedure for the Isolation and Identification of Mycobacteria fejezetben alálhatók. 3 A gumi zárókupakot egy fecskendõvel átszúrva a tesztelendõ mintát egy vagy több 12B Mycobacteria Medium palackba kell inokulálni, majd inkubálni. A tenyésztõ palackokat tesztelésre idõszakosan be kell helyezni a BACTEC 460TB System készülékbe, amikor is a készülék a palackok légterébõl gázt szív ki és megvizsgálja annak radioaktív tartalmát. A pozitív leolvasási eredmény azt jelenti, hogy a palackban élõ mikroorganizmusok vannak. AZ ELJÁRÁS MÛKÖDÉSI ELVE A BACTEC 12B Mycobacteria Medium egy dúsított Middlebrook 7H9 alap tápleves. Amennyiben a mintával inokulált BACTEC palackban mikroorganizmusok voltak, azok felhasználják a tápközegben lévõ, 14 C-jelölt szubsztrátot (zsírsavat) és 14 CO 2 -t bocsátanak ki a tápközeg feletti légkörbe. Amikor a palackokat a BACTEC 460TB System készülékkel tesztelik, a készülék a kiszívott gáz 14 CO 2 radioaktivitását között terjedõ számokban fejezi ki. Ezek a számok adják a Szaporodási indexet (SzI). Az SzI szám megjelenik a BACTEC 460TB System készülék kijelzõjén, valamint nyomtatásra kerül a tálca és a palack számával együtt (100 SzI egység hozzávetõlegesen 0,025 µci). A naponkénti SzI növekedése egyenesen aránylik a tápközegben való szaporodás rátájával és mennyiségével. Amennyiben bármilyen gátlóanyag kerül a tápközegbe, a metabolizmus gátlása miatt a 14 CO 2 termelése kisebb mértékû lesz a gátlóanyagot nem tartalmazó kontrollhoz képest. Ez az alapja a gyógyszer-érzékenységi vizsgálatnak, valamint az M. tuberculosis komplexnek más mikobaktériumoktól való differenciálásának. Amennyiben a BACTEC 460TB System készüléket mikobakteriológiai célokra használják, szükség van egy speciális tuberkulotikus burára (TB hood) is. A bura belsejébõl HEPA-szûrõn át távozik a levegõ, és emellett a munkaterületen negatív nyomást is biztosít. A TB hood a munkaterületet megvilágító UV-fényforrással is fel van szerelve. A készüléket a palackok automatikus tesztelésére tervezték és nem használható fülke helyet inokulálásra vagy továbboltásra. REAGENSEK A BACTEC 12B Medium palack az eljárás kezdete elõtt a következõ aktív hatóanyagokat tartalmazza: Hozzáadott mennyiség 1 liter kezelt vízre vetítve 7H9 tápleves ,7 g Kazein hidrolizátum ,0 g Bovin szérum albumin ,0 g Kataláz egység 14C-szubsztrát µci Az összetétel a specifikus teljesítménykritériumoknak megfelelõen eltérõen beállított is lehet. PP116JAA 2007/06 Magyar Figyelmeztetés: In vitro diagnosztizáláshoz. A termék száraz természetes gumit tartalmaz. A klinikai mintákban patogén mikroorganizmusok, pl. Hepatitis és HIV vírusok lehetnek jelen. Minden vérrel, illetve más testnedvvel fertõzött tételt a Szokványos óvintézkedéseket 8-11 elõírásai szerint, illetve az intézet irányelvei szerint kell kezelni. Minden mûveletet, beleértve a minták elõkészítését, a kenet és az inokulum elkészítését, a hígítások elvégzését, a tápközegek inokulálását, a továbbtenyésztést stb., a CDC elõírásainak megfelelõen, megfelelõ biológiai biztonsági elszívó fülke alatt, megfelelõ szellõztetéssel rendelkezõ helyiségben kell elvégezni. 3 A potenciálisan fertõzõ mintákkal és tenyészetekkel végzett munka idõtartamára vegyen fel a célnak megfelelõ köpenyt, maszkot és kesztyût. Kövesse a CDC és az OSHA elõírásait. Használat elõtt, minden palackot meg kell vizsgálni, hogy nem található-e rajta sérülésre, kiszáradásra, illetve befertõzõdésre (zavarosság, a gumikupak kidudorodása, illetve beszívódása) utaló nyom. A befertõzõdés jeleit

2 mutató palackokat NE HASZNÁLJA. A fertõzött palackban túlnyomás uralkodhat. A palack fertõzöttsége nem mindig nyilvánvaló. A turbiditást, fertõzöttséget, vagy elszínezõdést (sötétebb szín) mutató palackokat ne használja fel. A nyilvánvalóan károsodott palackokat még inokulálás elõtt dobja ki. Bizonyos esetekben elõfordulhat, hogy az üvegpalack megreped, illetve a nyaka a kupak megbontása vagy munka közben letörik. Ezenkívül - igen ritkán - elõfordulhat, hogy a palackok nem lettek kellõen lezárva. Mindkét esetben a palackok tartalma kifröccsenhet, illetve szivároghat, különösen akkor, ha a palackokat felfordítják. Ha a palackokat már inokulálta, a csepegõ és szivárgó üvegekkel bánjon óvatosan, mivel azok fertõzõ organizmusokat vagy anyagokat tartalmazhatnak. Kidobás elõtt minden inokulált palackot autoklávozással sterilizáljon. Pozitív tenyészeti palackok továbboltása, festése stb. esetében: A mintavétel elõtt ki kell engedni a gázt, ami a mikrobiális metabolizmus során keletkezett. Az inokulálást és a mintavételt fülke alatt, megfelelõ öltözékben (beleértve a kesztyût és a maszkot is) kell elvégezni. A továbboltásról további információk az Eljárás címû szakaszban találhatók. Hogy a tenyésztõ palackok inokulálása alatt minimálisra csökkentse a szivárgás lehetõségét, használjon rögzített tûjû fecskendõket, illetve biztonságosan rögzített Luer-Lok hegyeket. Minden alkalommal, amikor beleszúrnak a palackba, a gumikupakot fertõtleníteni kell. Minden palack tetejét tisztítsa le fertõtlenítõszerrel, majd 70%-os alkohollal. A munkafelületeknek, a palackok nyakának és más felületeknek a fertõtlenítéséhez használjon arra alkalmas fertõtlenítõszert. A CDC nyilatkozata: Ennyiféle kapható fertõtlenítõszer mellett, annak érdekében, hogy meggyõzõdjön arról, az adott fertõtlenítõszernek van-e baktericid hatása mikobaktériumokkal szemben is, fontos hogy a fertõtlenítõszer használati útmutatóját gondosan elolvassa. 12 A fecskendõvel és az injekciós tûvel való munka figyelmet és óvatosságot igényel. Használjon rögzített tûjû fecskendõket, illetve biztonságosan rögzített Luer-Lok hegyeket. A fecskendõket a megfelelõ óvatossággal kezelje. Használat után ne tegye vissza a tûre annak kupakját. A fecskendõket egy arra szolgáló hulladékgyûjtõbe dobja ki, és azt kellõ gondossággal kezelje. Olvassa el az NCCLS Approved Guideline M29 vonatkozó, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections címû fejezetét. 8 Tárolási feltételek A BACTEC 12B Mycobacteria palackokat száraz helyen, 2 25 C-on kell tárolni. Az elõírások szerint tárolt tápközeges palackok a címkén feltüntetett lejárati idõ végéig megtartják várt aktivitásukat. Követendõ, bevált gyakorlat a radioaktív anyagokat elkülönítve, csak az arra illetékes személyzet által hozzáférhetõ szekrényben tárolni. A szekrényre a következõ feliratot kell elhelyezni: Vigyázat: Radioaktív anyagok. A tápközeget ne tegye ki erõs közvetlen napfénynek. A teszt elõtt, az 5 10%-os CO 2 atmoszféra elõállításához és a magas háttérértékû palackok kiszûrése érdekében minden 12B palackot helyezzen be a BACTEC 460TB System készülékbe. Amennyiben az elõszûrés alatt egy palack 20-nál magasabb SzI értéket ad, dobja ki azt. MINTÁK GYÛJTÉSE A minták gyûjtését és kezelését a CDC 3 kézikönyvben található standard módszereknek és a BACTEC 460TB System termékhasználati útmutatójának (MA-0029) megfelelõen kell végezni. ELJÁRÁS Szállított anyagok: BACTEC 12B Medium Szükséges, de nem szállított anyagok: BACTEC PANTA PLUS Kit BACTEC NAP Differentiation Kit BACTEC 460TB készülék Tuberkulin fecskendõ rögzített tûvel Fertõtlenítõoldat 70%-os izopropil-alkoholos tamponok Szûrõbetétes steril tûk A minták elõkészítése: Az emésztéshez és a dekontaminációhoz számos, a különbözõ laboratóriumokban használatos módszer áll rendelkezésre. Némely eljárás csak tojás alapú tápközegekkel használható, így nem alkalmas a BACTEC módszerrel való alkalmazásra. A BACTEC 460TB System rendszerhez a nátrium-hidroxidos (NaOH) és a N-acetil-L-cisztein-NaOH-os (NALC) eljárás ajánlott. Más módszerek ugyan kompatibilisek lehetnek a BACTEC eljárással, hatékonyságuk kimutatására azonban nem áll rendelkezésre elegendõ adat. Az aszeptikus módon vett mintákat nem szükséges dekontaminálni. A részletekért lásd a BACTEC 460TB System termék használati útmutatóját. A 12B tápközeg inokulálása: Inokulálás elõtt távolítsa el a BACTEC palack tetejérõl az alumíniumfület és vizsgálja meg az üveg nyakát repedések, befertõzõdés, nagymértékû zavarosság, valamint a mûanyag kupak beszívódása, illetve kidudorodása tekintetében. Ha bármilyen problémát észlel, NE HASZNÁLJA FEL a palackot. A magas háttérértékû (SzI = 20 vagy magasabb) palackok kiszûrésére és a CO 2 dús atmoszféra elõállítására minden 12B Medium palackot teszteljen elõ a BACTEC 460TB System készülékben. 2

3 A 12B Medium tápközeg a mikobaktériumok kimutatására önálló tápközegként használható. A mikobaktériumok maximális mértékû kimutatása érdekében a 12B palack mellett egy csõnyi Löwenstein-Jensen (LJ) készítményt (vagy más LJ módosított tápközeget) vagy 7H10/7H11 táptalajt (hagyományos Petri-csészében, vagy osztott csészében) is tanácsos inokulálni. 13 Hogy csak 12B tápközeget használnak-e vagy alkalmaznak más kiegészítõ tápközeget is, minden laboratórium saját döntése, függõen a korábbi tapasztalataitól és felszereltségétõl, valamint a megjelent publikációk tanulmányozásától. 4-7,14,15 A befertõzõdés mértékét a tápközeghez inokulálás elõtt adandó antimikrobiotikum keverékkel lehet csökkenteni. 16 A PANTA Supplement, melynek tartalma polymixin B, amphotericin B, nalidixic sav, trimethoprim és azlocilin liofilizált alakban kapható (lásd a BACTEC 460TB System termék használati útmutatóját). Az inokulálást a PANTA 12B Medium palackokba való adagolása után 2 órán belül el kell végezni. A Reconstituting Fluid (RF; feloldó folyadék) szaporodást segítõ adalékként POES-t (polioxi-etilén-sztearát) tartalmaz. 17 Ezért, még a PANTA alkalmazása nélkül is ajánlott az inokulálás elõtt 0,1 ml RF-t a 12B Medium tápközeghez adni. Egy új rögzített tûjû fecskendõvel, illetve egy biztonságosan rögzített Luer-Lok heggyel a jól felkevert minta koncentrátumból fecskendezzen 0,5 ml-t minden 12B Medium palackba. Ennél nagyobb térfogat az inokulum magas ph-ja miatt megváltoztatná a tápközeg ph-ját. Az aszeptikus módon levett mintákat, melyeket nem kellett dekontaminálni, 1,0 ml-es térfogattal is lehet inokulálni. Az 1,0 ml-nél nagyobb térfogatú inokulum felhígítja a tápközeget és ezzel befolyásolhatja a szaporodást. A megfelelõ fertõtlenítõszerrel átitatott géztörlõvel, majd 70%-os alkoholos géztörlõvel törölje le az inokulált palackok tetejét és gumikupakját. Az inokulált palackokat 37 ± 1 C-on kell inkubálni rázás nélkül és azokat a BACTEC 460TB System készülékben kell tesztelni 5 10%-os légköri CO 2 -tartalom mellett. A palackokat az elsõ két hét folyamán 2-3 naponta tesztelje, majd hetente egyszer, összesen hat hétig. A tesztelés ütemezése függhet a laboratórium munkájának mennyiségétõl is. Ha egy minta feltételezhetõen egy nem 37 C-os inkubálási hõmérsékletet igénylõ mikobaktériumot tartalmaz (pl. az M. marinum és az M. chelonae 30 C-ot igényel), két sorozat tápközeget kell inokulálni, majd az egyiket 37 C-on, a másikat pedig az attól eltérõ optimális inkubációs hõmérsékleten kell inkubálni közötti értékû SZI esetén készítsen a BACTEC 12B Medium palackokból kenetet. Ha az AFB pozitív, a mintatenyésztés pozitívnak minõsül, függõben lévõ azonosítással. Oltsa tovább szilárd táptalajra. Inkubálja 37 ± 1 C-on. TB azonosítás: Ha egy 12B Medium palack eléri a SzI = 50 értéket, a következõk szerint végezze el a BACTEC NAP tesztet. Ez az eljárás elkülöníti a TB komplexet a nem tuberkulotikus mikobaktériumoktól (MOTT). A mikobaktériumok meghatározását a Centers for Disease Control and Prevention elõírásainak megfelelõen hagyományos módszerekkel kell elvégezni. 3 Tovább tenyésztés: Mintavétel, továbbtenyésztés vagy festés elõtt helyezze a palackot álló helyzetbe és tegyen a palack kupakjára egy alkoholos törlõt. A palackban uralkodó túlnyomás megszüntetéséhez szúrjon egy megfelelõ szûrõvel (vagy tamponnal) ellátott tût az alkoholos törlõn át a palack kupakjába. A tût a nyomás csökkentése után, a továbbtenyésztéshez való minta kivétele elõtt el kell távolítani. A tû beszúrását és kihúzását egyenletes, sima mozdulatokkal kell elvégezni, kerülni kell a tekerõ mozdulatokat. Antibiotikum-érzékenységi teszt: M. tuberculosis esetében a gyógyszer-érzékenységi tesztet az SzI = 300 érték elérése + 1 nap múlva kell elvégezni, vagy pedig SzI 500 esetén. (A részletekért lásd a BACTEC 460TB System termék használati útmutatóját). MINÕSÉG-ELLENÕRZÉS A lejárati idõ után NE HASZNÁLJA FEL a palackokat. NE HASZNÁLJA FEL azokat a palackokat, melyeken sérülés bármilyen nyoma látszik. Az ilyen palackokat a megfelelõ módon dobja ki. A Quality Control Certificate (Minõség-ellenõrzési tanúsítvány) minden doboz tápközegben megtalálható. A Minõség-ellenõrzési tanúsítvány leírja a teszt mikroorganizmusokat, beleértve az NCCLS standard Quality Assurance for Commercially Prepared Microbiological Culture Media fejezetében leírt ATCC tenyészeteket is. 18 A napi karbantartási ütemterv részeként a BACTEC gépen Performance Test Vials (BACTEC Performance Test Kit) palackokat kell tesztelni. Amennyiben a leolvasott értékek alacsonyak, pedig a Performance Test Vials palackokat megfelelõen tesztelte, akkor zavar állhatott be a gép mûködésében (lásd BACTEC PTK haszálati útmutató, PP-046JAA). A minõség-ellenõrzési követelményeknek a helyi, állami és/vagy szövetségi szabályozásoknak és akkreditációs követelményeknek megfelelõen, illetve a laboratórium standard minõség-ellenõrzési módszereivel összhangban kell eleget tenni. A megfelelõ minõség-ellenõrzési gyakorlat kialakításánál tanácsos figyelembe venni az érvényes NCCLS-elõírásokat és a CLIA szabályzatot. EREDMÉNYEK A készülék az eredményt egy közötti szám, a Szaporodási index formájában adja meg. További számolások már nem szükségesek. A Szaporodási index az ionkamrába szívott 14 CO 2 radioaktivitásának értéke, mely egyenesen arányos a palackban aktívan szaporodó mikroorganizmusok mennyiségével. Az érvényben lévõ szövetségi szabályozás (CLIA '88) értelmében a kinyomtatott teszteredményeket párosítani kell a megfelelõ betegtõl származó mintával. Ezeket a kinyomtatott adatokat legkevesebb két évig meg kell tartani. A helyi vagy állami szabályozás olykor szigorúbb lehet, mint a szövetségi elõírások. A kiegészítõ követelmények kielégítéséhez tanulmányozza ezeket a szabályozásokat is. Ha az SzI értéke eléri, illetve meghaladja a 10-es értéket, a tenyészetet feltételezhetõen H pozitívnak kell tekinteni és a palackot naponta tesztelni kell. A mikobaktériumok jelenlétének kimutatását AFB (saválló bacilus) kenettel is meg kell erõsíteni. Amennyiben a pozitív palackból készített keneten saválló bacilusokat figyelt meg, a 3

4 mintát AFB tenyésztésre pozitívnak (azonosítás folyamatban) kell tekinteni. Egy tenyészet hat hetes inkubáció után tekinthetõ negatívnak. A pozitív tenyészet kimutatásának idõtartama erõsen függ számos faktortól. Ilyen például a minta fajtája, a mintában lévõ mikroorganizmusok száma, a beteg kezelési státusza és az inkubációs hõmérséklet. A különbözõ elõkészítési módok, különösen a dekontaminálás módja, fontos szerepet játszhatnak a felismeréshez szükséges idõ hosszában. A klinikai mintákból (kenet negatív és kenet pozitív) származó M. tuberculosis átlagos kimutatási ideje 7 12 nap. A MOTT bacilusokat általában 2 3 nappal hamarabb ki lehet mutatni, mint az M. tuberculosis-t. 4,6,7,14,15 A befertõzõdés gyakorisága függ a dekontamináláshoz használt módszertõl, és laboratóriumonként változhat. A 12B izolációs palackokban a befertõzõdés általában ritkább, mint a hagyományos tápközegek esetében, ahol a befertõzõdés rátája 5%-ig elfogadható. A befertõzõdéseket tartsa nyilván és rendszeresen számolja ki a befertõzõdési rátát. Nézze át újra az eljárás leírását és ha szükséges, módosítsa az eljárást. A befertõzõdött 12B Medium palackokat újra lehet kezelni, ehhez lásd a BACTEC 460TB System termékhasználati útmutatóját AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI Ügyelni kell, hogy a mintavétel alatt és az inokulálás során a BACTEC palackokba kerülõ minták ne fertõzõdjenek be. A befertõzõdött minták ugyan pozitív eredményt adnak, mégsem számítanak releváns klinikai pozitív mintáknak. A döntést a felhasználónak kell meghoznia a kinyert mikroorganizmus, a mikroorganizmusnak a vegyes tenyészetekben mért gyakorisága, a beteg kórelõélete, a felszerelések megfelelõ ellenõrzése stb. függvényében. A befertõzõdés lehet még a BACTEC tûk és csövek nem megfelelõ kezelésének, a kupak nem megfelelõ tisztaságának vagy a BACTEC tûmelegítõ egység elégtelen mûködésének a következménye is (lásd a BACTEC 460TB System termékhasználati útmutatóját). Az SzI értéke mutatja ugyan a szaporodás rátáját és mennyiségét, de nem ad olyan pontos mennyiségi meghatározást, mint a szilárd táptalajon történõ telepszámlálás. A telepmorfológiát és a jellegzetes pigmentációt kizárólag szilárd táptalajon lehet vizsgálni. A tápoldatban képzõdõ biológiai anyagok és a mikroorganizmusok velejáró variabilitásának természete miatt a felhasználónak tudatában kell lennie annak, hogy az egyes mikroorganizmusokkal való tesztelés potenciálisan eltérõ eredményeket adhat. TELJESÍTMÉNYJELLEMZÕK A Tortoli et al. által kiadott tanulmányban a mikobaktériumok kimutatását két automatikus és egy manuális rendszerben hasonlították össze. A BACTEC 460 rendszer, mely a 12B Mycobacteria Medium tápközeget használta, 201 izolátumot eredményezett, szemben a BACTEC MGIT 960 rendszer 190 és a Löwenstein-Jensen tápközeg 167 izolátumával. A BACTEC 460 rendsdzernek a 12B Medium tápközeggel átlagosan 14,8 nap kellett a kimutatáshoz TÁBLÁZAT: Mikobaktériumok kimutatása önálló rendszerekkel és kombinált rendszerekkel a Összes (%) kimutatott Mikobaktérium vagy Összes BACTEC MGIT BACTEC 460 Lowenstein-Jensen BACTEC MGIT 960 BACTEC 460 minta tápközeg 960 rendszer rendszer tápközeg rendszer + rendszer + Lowenstein-Jensen Lowenstein-Jensen tápközeg tápközeg ÖSSZES (80) 201 (85) 167 (71) 212 (90) 225 (95) M. tuberculosis komplex (88) 153 (92) 124 (74) 158 (94) 160 (95) M. xenopi (54) 11 (46) 17 (71) 21 (87) 22 (92) M. avium komplex (95) 22 (100) 16 (73) 21 (95) 22 (100) Más MOTT b 21 7 (33) 15 (71) 10 (48) 12 (57) 21 (100) Kenet pozitív (53) 121 (53) 103 (45) 125 (55) 127 (56) Kenet negatív (63) 80 (74) 64 (59) 87 (80) 98 (91) a A leggyakrabban elõforduló fajok külön kerülnek taglalásra, mivel vannak kenet negatív és kenet pozitív minták. b MOTT: Nem M. tuberculosis mikobaktériumok (Mycobacteria Other Than M. tuberculosis) ELÉRHETÕSÉG Kat. sz. Leírás BACTEC 12B Medium, 4 ml, dobozonként 100 darab BACTEC PANTA Plus Kit, 5 ampulla liofilizált antimikrobiális szuplement (PANTA); 5 ampulla Reconstituting Fluid (Feloldó folyadék) 10 ml BACTEC NAP Differentiation Kit, 5 µg NAP / ampulla, 10 ampulla dobozonként BACTEC 460TB System készülék BACTEC SIRE Drug Kit (100 teszt) BACTEC Diluting Fluid (10 teszt) Isoniazid, 1 ampulla PZA Test Medium (5 Teszt) PZA Drug/Reconstituting Fluid (50 teszt) 4

5 IRODALOMJEGYZÉK 1. Middlebrook, G. et al. Automated radiometric detection of growth of Mycobacterium tuberculosis in selective media. Am. Rev. Respir. Dis. 115: , Bannister, E.R. et al. Comparison of detection, identification and drug susceptibility testing of mycobacteria by using the BACTEC radiometric method and conventional methods. Abstract C260, A.S.M. Annual Meeting, Las Vegas, Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology, a guide for the level III laboratory. Centers for Disease Control, Division of Laboratory Training and Consultation. Atlanta, GA, Roberts, G.D. et al. Evaluation of BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens. J. Clin. Microbiol. 18: , Fadda, G. et al. Recovery and susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from extrapulmonary specimens by the BACTEC radiometric method. J. Clin. Microbiol. 19: , Morgan, M.A. et al. Comparison of a radiometric method (BACTEC) and conventional culture media for recovery of mycobacteria from smear-negative specimens. J. Clin. Microbiol. 18: , Takahashi, H. et al. Detection and recovery of mycobacteria by a radiometric procedure. J. Clin. Microbiol. 17: , National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, PA. 9. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 11. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology: Centrifugal efficiency and digestant toxicity. Abstract U-2. A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, Libonati, J.P. et al. The role of solid media in the BACTEC system for mycobacterial isolation and identification. Abstract U-71. A.S.M. Meeting, Atlanta, GA, Kirihara, J. M. et al. Improved detection times of Mycobacterium avium complex and M. tuberculosis with the BACTEC radiometric system. J. Clin. Microbiol. 22: , Park, C.H. et al. Rapid recovery of mycobacteria from clinical specimens using automated radiometric technique. Am. J. Clin. Path. 81: , Siddiqi, S.H. et al. A new antimicrobial mixture (polymyxin B, amphotericin B, nalidixic acid, trimethoprim and azlocillin) for effective suppression of non-mycobacterial contamination during primary isolation of mycobacteria. Abstract U-35. A.S.M. Meeting, Washington, D.C., Siddiqi, S.H. Studies to further enhance mycobacterial growth in radiometric 7H12 Medium. Abstract U-46. A.S.M. Annual Meeting, Las Vegas, NV, National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Standard M22-A2, Quality assurance for commercially prepared microbiological culture media, 2nd ed., NCCLS, Wayne, PA. 19. Tortoli, E., P. Cinchero, C. Piersimoni, M.T. Simonetti, G. Gesu, and D. Nista Use of BACTEC MGIT 960 for recovery of mycobacteria for clinical specimens: multicenter study. J. Clin Microbiol. 37:

6 6

7 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, Luer-Lok, MGIT and PANTA are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.