Zárójelentés Mivel az előző, 9. részfeladat teljesítésekor optimáltuk a mérőrendszer paramétereit, ezért most a korábbi optimált paraméterek mellett, a feladat teljesítéséhez el kellett végezni a módszer ISOMSZ 172 szerinti validálását. A korábbi paramétersereget felidézve, közöljük a validálás eredményeit. ICP-OES paraméterek elem S oszlop típus eluensek hullámhossz 182,37 nm plazma gázáram (L/min) 1 segéd gázáram (L/min),2 porlasztó gázáram (L/min),8 RF energia (watt) 13 Megfigyelési magasság 1 Plazma nézet axiális HPLC paraméterek Hamilton PRP-X1 anioncserés oszlop: 1 µm; 4.1 x 2 mm A: 1 mm ammóniumacetát B: 1 mm ammónium-acetát minta áramlási sebesség 2 ml/min ph 6, nyomás 3 bar injektált térfogat 1 µl program idő eluens -3 min 1% A 3-16 min 1% B 17-22 min 1% A 1
SO4 2- standard:, 1,, 1ppm 2
Bor minta HPLC-ICP-OES program: 3
A kidolgozott módszernél két alapvető kérdést kellett megvizsgálni: 1.Milyen paraméterekkel rendelkezik a validált analitikai eljárás? 2.Mennyire befolyásolja a mérési eredményeket a bor minta mint főkomponens és mivel a kén meghatározást tűztük ki célul, a kén koncentrációt befolyásoló paraméterek. 1.A validált módszer paraméterei: linearitás.1 ppm-1 ppm, nagyságrend, ami általában az ICP-OES technikát jellemzi reprodukálhatóság: gyakorlatilag az egész mérési tartományban ± 3 % kimutatási határ:.1 ppm robosztusság: 8-14 % alkohol illetve visszamaradt cukor 4- g/l között, minden esetben 1: arányban higítva a következő eredmények mutathatóak ki ppm-es addicionált értéknél: alkohol % cukor g/l visszanyerés % 8 4 99. 8 2 99.6 8 99.3 11 4 99.6 11 2 98.9 11 99.4 12. 4 98.9 12. 2 99.4 12. 99. 14 4 98. 14 2 99.2 14 98.9 Mint az eredmények igazolják, a módszer robosztus száraz, félszáraz és édes, kis és magas alkohol tartalmú borok esetén egyaránt, mivel a visszanyerési százalék elsősorban szórás jellegű és nincs benne tendencia. 2.Mennyire befolyásolja a mérési eredményeket a bor minta mint főkomponens és mivel a kén meghatározást tűztük ki célul, a kén koncentrációt befolyásoló paraméterek. A borok kéntartalma jelentős szerepet játszik a borok tartósításában és bár a felhasználók számára stabilnak tűnik, különböző komponensek befolyásolhatják koncentrációját. Közimert borbetegség a fokhagymaszag, melynek alapvető oka a borban lévő kén redukciója és fokhagymaszagú kénhidrogén keletkezése. a folyamat oka lehet a borélesztő, de kerülhetnek a borba szulfitredukáló Clostridium baktériumok, melyek redukciójának eredménye az illékony kénhidrogén keletkezése, és így í bor kén tartalmának csökkenése. Az elmélet igazolására hat bormintát (száraz fehér és édes, rozé fehér és édes, vörös fehér és édes) beoltottunk három Clostridium fajjal (Sordellii, Tertium, Perfingens) és, 3, és 1 ig mértük a kontroll illetve a beoltott minták baktérium szaporodását illetve kén tartalmának változását. A mérési eredményeket az alábbi ábrákon mutatjuk be. 4
cfu/ml cfu/ml Fehér bor, száraz, 2 nel 4 3 3 2 2 1 1 6 4 3 2 1 2 4 6 8 1 12 Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl.sordellii) Lineáris (Cl. Tertium) Lineáris (Cl.perfringens) Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl.sordellii) Lineáris (Cl. Tertium) Lineáris (Cl.perfringens) Fehér bor, száraz, 2 nel 4 3 3 2 2 1 1 6 4 3 2 1 2 4 6 8 1 12 Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl.sordellii) Lineáris (Cl. Tertium) Lineáris (Cl.perfringens) Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl.sordellii) Lineáris (Cl. Tertium) Lineáris (Cl.perfringens)
cfu/ml cfu/ml Rozébor, száraz, 48 nel 6 6 4 4 3 2 1 3 2 1 2 4 6 8 1 12 Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl. Tertium) Lineáris (Cl.perfringens) Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl. Tertium) Lineáris (Cl.perfringens) Rozébor, száraz, 48 nel 6 4 3 2 1 2 4 6 8 1 12 4 4 3 3 2 2 1 1 Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl.sordellii) Lineáris (Cl.sordellii) 6
cfu/ml cfu/ml 8 7 6 4 3 2 1 Rozébor, félédes, 4 nel 2 4 6 8 1 12 4 4 3 3 2 2 1 1 Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl. Tertium) Lineáris (Cl.perfringens) Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl. Tertium) Lineáris (Cl.perfringens) Rozébor, félédes, 4 nel 8 7 6 4 3 2 1 2 4 6 8 1 12 4 4 3 3 2 2 1 1 Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl.sordellii) Lineáris (Cl.sordellii) 7
cfu/ml cfu/ml Vörösbor, száraz, 3 nel 8 7 6 4 3 2 1 4 3 3 2 2 1 1 2 4 6 8 1 12 Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl.sordellii) Lineáris (Cl. Tertium) Lineáris (Cl.perfringens) Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl.sordellii) Lineáris (Cl. Tertium) Lineáris (Cl.perfringens) Vörösbor, édes, 3 nel 8 7 6 4 3 2 1 3 3 2 2 1 1 2 4 6 8 1 12 Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl.sordellii) Lineáris (Cl. Tertium) Lineáris (Cl.perfringens) Lineáris (kontroll) Lineáris (Cl.sordellii) Lineáris (Cl. Tertium) Lineáris (Cl.perfringens) Az Ábrák a következőket igazolják: a.) Minden bormintában a beoltott törzsek közel lineárisan szaporodtak az eltelt idő függvényében b.) Minden Clostridiumos bormintában a cfu növekedésével csökkent a kén tartalom, ami igazolta a keletkező kénhidrogén illékonyságát c.) A három Clostriudium körül a Perfringens eredményezte minden esetben a legnagyobb kénveszteséget d.) Az édes borokban nagyobb volt a szaporodás és így a kénveszteség is. 8
A kísérlet igazolta, hogy a kidolgozott módszer validálható, azonban a minták stabilitása mely az általános analitikai kémia alapkövetelménye, csak fertőzés mentes borokban (lásd kontroll minták) biztosítható. Budapest, 216.6.27. Dr. Fodor Péter témavezető 9